SERVICIO AGRICOLA Y GANADERO DEPARTAMENTO DE SEMILLAS ESTABLECE NORMAS ESPECIFICAS DE CERTIFICACION DE MATERIAL VEGETAL DE PROPAGACION DE CITRICOS.

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1 SERVICIO AGRICOLA Y GANADERO DEPARTAMENTO DE SEMILLAS ESTABLECE NORMAS ESPECIFICAS DE CERTIFICACION DE MATERIAL VEGETAL DE PROPAGACION DE CITRICOS./ SANTIAGO, 15 de enero de 1998 HOY SE RESOLVIO LO QUE SIGUE: Nº 134 / VISTOS : El decreto ley Nº 1764 de 28 de abril de 1977 sobre Investigación, Producción y comercio de Semillas : el Decreto de Agricultura Nº195 de 2 de julio de 1979; la Resolución Nº83 Exenta de 11 de enero de 1996 que delega funciones en el Director del Departamento de Semillas y ; CONSIDERANDO: 1.- Que según lo dispuesto en el Decreto ley 1764 y el Art. 37, inciso 2º del Decreto 195 que dispuso que la certificación será realizada por el Servicio Agrícola y Ganadero de acuerdo con las normas de este reglamento y con las normas generales o específicas que, para cada especie o cultivar, disponga el mismo Servicio. 2.- Que es necesario establecer normas específicas de certificación de material vegetal de propagación de cítricos, a objeto de poner a disposición de la fruticultura nacional materiales de multiplicación comprobadamente sanos y con garantía de genuidad varietal. 3.- Que de acuerdo a lo dispuesto en el art. 57 del Decreto 188 ya mencionado, el Servicio Agrícola y Ganadero será asesorado por un Comité Técnico Normativo. 4.- Que en reunión del Comité Frutal, celebrada el 5 de agosto de 1997, se aprobó la presente normativa. RESUELVO : propagación de cítricos : Apruébanse las siguientes Normas de Certificación de Material vegetal de

2 2 PROGRAMA DE CERTIFICACION DE CITRICOS Los interesados en certificar planta o semillas de las especies que se indican a continuación deben cumplir con las Normas Generales de Certificación y con las siguientes Normas específicas: Se consideran las siguientes especies: Nombre científico Nombre común Sigla Citrus aurantifolia (L) Swingle Lima Lm Citrus aurantium L. Naranjo amargo Nm Citrus jambhiri Lush Limón rugoso Lr Citrus latifolia Tanaka Citrus limon Limón Li Citrus sinensis Naranjo Na Citrus paradisi Pomelo Po Citrus reticulata Mandarina Md Citrus macrophyla Alemow Al Poncirus trifoliata Naranjo trifoliado Nt Citrus grandis Pumelo Pu P. trifoliata x C. sinensis Citrange Ci P. trifoliata x C. paradisi Citrumelo Ct P. trifoliata x C. reticulata Citrandarin Cr C. sinensis x C. reticulata Tangor Ta C. paradisi x C. reticulata Tangelo Tn Cl Además de las especies enumeradas anteriormente, estas normas se aplican a los híbridos intergenéricos, interespecíficos o intervarietales utilizados directa o indirectamente en la producción de frutos. SECCION 1 DEFINICIONES Para los efectos de la aplicación de esta norma se entenderá por: a) Material introducido certificado: Todo material de propagación importado (estacas o semillas) proveniente de un programa de certificación de cítricos equivalente u homologado y reconocido por el Servicio, con los certificados correspondiente que acrediten su condición. b) Material introducido corriente: Todo material de propagación importado (estacas o semillas) que no procede de un Programa de certificación de cítricos o de Programas no reconocidos por el Servicio. c) Planta seleccionada: Es aquella planta que se selecciona en el país por sus buenas características varietales y sanidad para la extracción del material local. d) Plantas madres de reserva: Son aquellas plantas postulantes a convertirse en el Banco de Germoplasma luego de cumplir con los requisitos exigidos por esta norma. e) Plantas madres de partida: Son aquellas plantas postulantes a convertirse en el Bloque Fundación luego de cumplir con los requisitos exigidos por esta norma. 2

3 3 f) Bloque Plantas Madres de Semillas: Son aquellas plantas seleccionadas por sus buenas características varietales y sanidad aparente de las cuales se extraerán sólo semillas para conformar el almácigo de Portainjertos certificados. g) Portainjertos certificados: Son aquellos producidos a partir de semillas certificadas provenientes del Bloque Plantas Madres de Semillas o de semillas o estacas extraídos de plantas madres productoras de material inicial para portainjerto las que estarán conformando las diferentes etapas de la certificación. h) Semilla certificada: Se considera semilla certificada, toda aquella semilla extraída de plantas madres que conformen cualquiera de las etapas de la certificación o del Bloque Plantas Madres de Semillas. SECCION 2 REQUISITOS PARA LOS VIVERISTAS Deberán cumplir con los requisitos señalados en la sección III de las Normas Generales de Certificación de Semillas y Plantas frutales Solicitud de certificación de plantas de vivero La presentación de la solicitud se efectuará en las Direcciones Regionales del Servicio Agrícola y Ganadero en formularios especiales que serán proporcionados por el Dept. de Semillas, junto con el plano de distribución de las plantas en el terreno, la descripción de la variedad, el certificado de indexaje (cuando corresponda) y los certificados de certificación cuando se trate de material vegetal proveniente de otro programa de certificación nacional o extranjero. La solicitud de certificación de las plantas candidatas a Banco de Germoplasma y Bloque Fundación debe hacerse con 60 días de anticipación al inicio de los indexajes, quedando inscritas en forma provisoria como Plantas madres de reserva y Plantas madres de partida respectivamente. Para el Bloque incremento, la presentación de la solicitud deberá hacerse a lo menos con 60 días de anticipación a la extracción del material vegetal inicial para la formación de este bloque. Para la etapa de Planta certificada la solicitud deberá hacerse a lo menos con una semana de anticipación a la injertación, no obstante esto, para aquellas situaciones en que no fuere posible cumplir este plazo, se podrán aceptar solicitudes con menor anticipación. En el caso de la planta seleccionada para la extracción de material local al igual que para el Bloque Plantas madres de semillas, la presentación de la solicitud de certificación debe hacerse con 60 días de anticipación al inicio de los indexajes de la misma o de extracción de material de propagación. Los viveristas que produzcan etapas intermedias del Programa de Certificación a partir de material vegetal proveniente de otro productor, deberán presentar la solicitud con 30 días de anticipación a la llegada de dicho material al vivero Código de inscripción Según pauta de Códigos de Inscripción, Identificación y Etiquetado para la Certificación de plantas frutales Aislamiento Cada etapa del Programa de Certificación deberá cumplir con los requisitos específicos de aislamiento y plazo de utilización que se señalan en el cuadro 1. Sin perjuicio de esto, el entorno del terreno en que se ubicarán las platabandas o hileras de plantas madres, almacigueras o vivero propiamente tal, deberá estar libre de malezas y 3

4 4 aislado a lo menos 10 mt., de plantas, árboles y cercas vivas cuyas plagas y enfermedades pueden ser transmitidas a las plantas del vivero o plantas madres. Cuadro 1. Condiciones de aislamiento y plazo de utilización de las etapas de la certificación. Etapa Condiciones de aislamiento Plazo de utilización Banco de Invernaderos: a prueba de insectos, doble puerta, sistema de 10 años Germoplasma (*) desinfección a la entrada y sin piso de tierra en la entrada. A 100 mt. de cualquier plantación de cítricos o plantas de citricos en el vivero que no pertenescan al programa de certificación. Bloque Fundación (**) En campo: a 500 mt. para plantas productoras de yema y semilla 25 años de cualquier plantación de cítricos o plantas de citricos en el vivero que no pertenescan al programa de certificación. Distancia a determinar frente a focos de tristeza. Invernaderos: a prueba de insectos, doble puerta, sistema de desinfección a la entrada y sin piso de tierra en la entrada. A 100 mt. de cualquier plantación de cítricos o plantas de citricos en el vivero que no pertenescan al programa de certificación. Bloque Incremento En campo: a 100 mt. para plantas productoras de yema y semilla 3 años en campo de cualquier plantación de cítricos o plantas de citricos en el vivero que no pertenescan al programa de certificación. Distancia a determinar frente a focos de tristeza. Invernaderos: a prueba de insectos, doble puerta, sistema de desinfección a la entrada y sin piso de tierra en la entrada. A 50 mt. de cualquier plantación de cítricos o plantas de cítricos en el vivero que no pertenezcan al programa de certificación. 4 años invernadero Planta Certificada En campo: a 100 mt de cualquier plantación de cítricos o plantas de no más de 2 cítricos en el vivero que no pertenezcan al programa de certificación. temporadas Portainjertos Certificados Distancia a determinar frente a focos de tristeza. Invernaderos: a prueba de insectos, doble puerta, sistema de desinfección a la entrada y sin piso de tierra en la entrada. A 50 mt. de cualquier plantación de cítricos o plantas de cítricos en el vivero que no pertenezcan al programa de certificación. Bloque de plantas En campo: a 50 mt de cualquier plantación de cítricos o plantas de 25 años madres de semilla cítricos en el vivero que no pertenezcan al programa de certificación. Distancia a determinar frente a focos de tristeza. * idem plantas madres de reserva ** idem plantas madres de partida El Servicio determinará las medidas de aislamiento que deberán ser tomadas frente a focos de tristeza en la zona de ubicación del vivero Invernaderos Todos los Invernaderos deberán estar totalmente aislados, con malla antiáfido, doble puerta, sistema de desinfección y sin piso de tierra en la entrada. Para el Banco de Germoplasma, Bloque fundación y Plantas 4

5 5 indicadoras, deberán usarse de preferencia invernaderos de estructura sólida por el plazo de utilización de estas etapas. No obstante lo anterior, cuando se utilicen invernaderos de polietileno para cualquiera de las etapas de la certificación, se deberán tomar todas las medidas de resguardo necesarias para no dejar las plantas expuestas en ningún momento cuando se realice el recambio del plástico, labor que deberá estar bajo la supervisión de un inspector del Servicio Suelos Los suelos utilizados para semilleros, macetas y viveros, deberán ser suelos vírgenes o que no hallan sido cultivados con especies cítricas por lo menos por 3 años. Se podrán utilizar suelos que no cumplan las condiciones recién detalladas siempre y cuando se utilicen técnicas de esterilización como la fumigación con bromuro de metilo, vapor o cualquier otra aprobada por el Servicio Equipos e infraestructura Deberá contarse con la infraestructura y equipos necesarios y suficientes para la producción de plantas de óptimo estado sanitario y calidad, los cuales serán calificados por el Servicio Herramientas Las herramientas utilizadas en las distintas etapas de la certificación serán de exclusivo uso de cada etapa y deberán ser desinfectadas al usarlas entre planta y planta con hipoclorito de sodio del 1-3%. Estas herramientas deben estar perfectamente identificadas con cada etapa para evitar errores en su uso Manejo de las plantas En todas las etapas de la certificación la densidad de plantas debe permitir su clara individualización para facilitar la observación y revisión. Por otro lado, las plantas deben mantener su calidad fitosanitaria, para lo cual se aplicarán programas de manejo y control de enfermedades y plagas, de acuerdo a los estándares de manejo fitosanitario usados para cualquier huerto comercial de cítricos. Para las etapas de Banco de Germoplasma y Bloque Fundación la extracción de material de propagación debe permitir la floración y fructificación de las plantas para permitir la comprobación de las características varietales. Las técnicas de manejo de plantas, que difieran de los estándares tradicionales para producción de plantas de cítricos, en cualquiera de las etapas de la certificación, deberán ser comunicadas al Servicio con la debida anticipación para que éste pueda llevar un control efectivo del programa de certificación, haciendo respetar las condiciones exigidas en el mismo Depuración La pureza varietal debe ser mantenida durante todo el proceso de certificación, por lo tanto se deberán eliminar todas las plantas fuera de tipo, deformes o dañadas, así como aquellas que no cumplan con los requisitos fitosanitarios detallados en la sección Identificación y etiquetado de las plantas en el vivero Según pauta de Códigos de Inscripción, Identificación y Etiquetado para la Certificación de plantas frutales. El viverista cuidará la buena conservación de las etiquetas y marcación durante las etapas de formación de las plantas y envasado de material para venta o almacenamiento Claves de color Según Sección V de las Normas generales de Certificación de Semillas y Plantas Frutales. 5

6 6 SECCION 3 REQUISITOS FITOSANITARIOS Todo el material vegetal en cualquiera de las etapas de la certificación deberá estar libre al menos por observación visual de cualquier organismo que afecte la calidad en forma significativa y que reduzca el valor de utilización de las plantas de vivero y en particular de aquellas señaladas en el Anexo 3, pudiendo ser motivo de rechazo o eliminación de todas o algunas de las plantas en las diferentes etapas, según la gravedad de los problemas que presenten (ver punto 3.3). Para los virus, viroides y nemátodos la certificación deberá cumplir con los requisitos específicos señalados más adelante, pudiéndose, exigir el reindexaje de las plantas en cualquiera de las etapas de la certificación cuando haya motivos justificados que así lo ameriten Enfermedades virales y viroides Las enfermedades transmisibles que serán motivo de rechazo en la certificación son: Citrus Tristeza Virus (CTV) Citrus Psorosis disease (A y B) Citrus Exocortis Viroid (CEVd) Citrus Cachexia Viroid (CCVd) Esta lista podrá ser modificada cuando razones técnicas así lo aconsejen, en cuyo caso se dictará una resolución al respecto Técnicas de diagnóstico Los test biológicos con plantas indicadoras será la técnica exigida en las etapas de Banco de Germoplasma, Bloque Fundación y Bloque de plantas madres de semillas, debiendo cumplir con los requisitos señalados en el anexo II. Sin perjuicio del uso de los test biológicos con plantas indicadoras, en las etapas de Bloque Incremento, Planta Certificada y eventualmente sobre los Portainjertos certificados (para aquellas situaciones en que el Servicio estime sea necesario chequear su sanidad) se podrán utilizar técnicas moleculares o serológicas las que deberán contar con un alto grado de confiabilidad y con un protocolo previamente autorizado por el Servicio. Las técnicas de diagnóstico a utilizar y la frecuencia de análisis son las indicadas en el cuadro 2. En el cuadro 3 se presenta la intensidad de muestreo y la tolerancia de enfermedades para cada etapa de la certificación. 6

7 7 Cuadro 2. Frecuencia de análisis y técnicas de diagnostico a utilizar de las enfermedades importantes para la certificación. Fitopatógeno Frecuencia de análisis Técnica de en años diagnóstico Invernadero Campo Citrus Tristeza Virus (CTV) 3 1 Indexaje ELISA-Inmuno impresión** PCR** Citrus Psorosis disease (A y B) 10 6 Indexaje Citrus Exocortis viroid (CEVd) 3 3 Indexaje Electroforesis** PCR** Citrus Cachexia Viroid (CCVd) 3 3 Indexaje Electroforesis** PCR** ** Sólo podrán ser utilizadas para las etapas de Bloque Incremento, Planta certificada y Portainjerto certificado. Cuadro 3. Intensidad de muestreo, enfermedades y tolerancia en cada etapa de la certificación. Etapa de Número de plantas Enfermedades Tolerancia Tolerancia otras Certificación a muestrear a analizar enfermedades enfermedades Invernadero Campo (cuadro 2) (cuadro 2) (%) (%) Banco de 1/1 1/1 todas 0 0 Germoplasma (*) Bloque Fundación (**) 1/1 1/1 todas 0 0 Bloque Incremento 1/100 1/10 CTV 0 0,25(***) Planta Certificada 1/5000 1/1000 CTV 0 2(***) Bloque de plantas 1/1 CTV 0 0,25(***) madres de semilla 1/5 todas (no CTV) 0 0,25(***) * Idem Plantas madres de reserva ** Idem plantas madres de partida *** Síntomas visuales enfermedades consideradas en el anexo Requisitos nematológicos El suelo destinado a la implantación del vivero deberá estar libre de nemátodos fitopatógenos (cuadro 4), lo cual se comprobará mediante un análisis nematológico oficial de las almacigueras y del vivero propiamente tal. Este análisis tendrá que hacerse con la anticipación suficiente de modo de efectuar los tratamientos de control que se precisen antes de la implantación del material de propagación en el terreno. 7

8 8 Para las etapas de la certificación en que se vendan plantas establecidas directamente sobre el suelo, deberá realizarse un análisis nematológico cada año, para cumplir con lo indicado en el cuadro 4. Cuadro 4. Nematodos importantes en la certificación y su tolerancia. A nivel del suelo Hemicycliophora spp. Meloidogyne spp. Pratylenchus spp. Tylenchulus semipenetrans Xiphinema americanum Tolerancia ausencia* ausencia* ausencia* ausencia* ausencia* A nivel de la planta Tylenchulus semipenetrans Meloidogyne incognita Meloidogyne javanica Pratylenchus spp. cero cero cero cero * cada 250 gr. de suelo 3.3. Tolerancias Para las enfermedades y plagas indicadas en el anexo 3, y dependiendo de la etapa de la certificación y grado del daño, el Servicio podrá exigir la eliminación o la toma de las medidas fitosanitarias necesarias sobre las plantas o lote de plantas afectado, quedando las mismas condicionales a la corroboración de su sanidad en una visita posterior. Para el caso específico de Phytophtora spp. y nematodos en las etapas de Banco de Germoplasma, Bloque Fundación y Bloque Incremento se aplicará el criterio señalado anteriormente. No obstante lo anterior, para los Portainjertos Certificados y Planta Certificada, aquellas plantas afectadas deberán ser eliminadas del lote aunque no superen la tolerancia exigida. Si la tolerancia es superada, además de lo anterior, deberá aplicarse tratamientos químicos sobre todo el lote. Para las enfermedades virales y viroides señalados en el punto 3.1, cualquier material vegetal que sea encontrado enfermo en cualquiera de las etapas de la certificación deberá ser aislado y destruido inmediatamente. No obstante lo anterior aquel material vegetal de alto valor podrá ser saneado e ingresar nuevamente al proceso tomando las precauciones necesarias para que no sea un foco de infección de otras plantas. 8

9 9 SECCION 4 ESQUEMA DEL PROGRAMA DE CERTIFICACION DE CITRICOS Material introducido Corriente Material introducido Certificado (Homologado) Planta Seleccionada Bloque Plantas Madres de semillas Cuarentena Postentrada ( estacas) Indexajes Todas las Enfermedades (estacas) Indexajes enfermedades transmisibles por semilla (semillas) Indexajes Genuidad Varietal Programa Saneamiento (estacas) Multiplicacion del material Marterial local Almacigo Portainjertos Certificados Indexaje pruebas (+) material local Programa Saneamiento (estacas) Indexajes Banco de Germoplasma Bloque Fundacion Indexajes Genuidad Varietal Indexajes Genuidad Varietal Bloque Incremento Indexajes Portainjertos Certificados Yemas Certificadas Planta Certificada Indexajes 9

10 4.1. Descripción del proceso Material inicial El Programa de Certificación podrá partir con material introducido certificado o material introducido corriente, el cual estará sujeto a cuarentena de post-entrada de acuerdo el tiempo que determine el Depto. de Protección Agrícola. Para el inicio de la certificación con material local se podrá partir de una Planta seleccionada para la extracción de estacas, indexándola para las enfermedades indicadas en el Cuadro 2. Aquella planta seleccionada para conformar el Bloque plantas madres de semillas, será indexada de acuerdo a lo indicado en el Cuadro 3. El programa de saneamiento será aplicado a todo material vegetal de estacas que sea material introducido corriente, material local o material introducido certificado de programas no reconocidos u homologados por el Servicio, de acuerdo al protocolo indicado en el Anexo 2. El Servicio podrá exigir que se someta a saneamiento cualquier otro material vegetal si existieran razones justificadas que ameriten tal medida Multiplicación El material vegetal multiplicado, ya sean estacas o semillas, en cualquiera de las etapas del proceso de certificación, deberá ser previamente esterilizado. Todos los portainjertos utilizados para la injertación en cualquier etapa de la certificación deberán provenir de semilla certificada o de estacas provenientes de las plantas madres de material inicial para portainjerto, sometidos a las mismas condiciones de aislamiento exigidas para la etapa que conformarán. Para las almacigueras de los portainjertos se deberán usar contenedores de propagación que permitan la perfecta identificación y elección de la plántula nucelar Formación de los Bloques de las distintas etapas de la certificación Del material multiplicado, se tomarán a lo menos dos plantas, que deberán mantenerse en invernadero constituyendo las Plantas madres de reserva. Otro número de plantas serán llevadas a campo o invernadero pasando a constituir las Plantas madres de partida; para estas últimas se utilizarán a lo menos 2 portainjertos distintos si son 4 o más plantas por variedad o 1 sólo portainjerto si son menos de cuatro, para probar su comportamiento varietal. Pasado el tiempo suficiente (a lo menos una temporada productiva) para caracterizar varietalmente e indexar el total de las mismas, comprobando su identidad, estabilidad, homogeneidad y sanidad, estas plantas pasarán a conformar el Banco de Germoplasma y Bloque Fundación respectivamente. Para aquellas plantas provenientes de material local saneado sólo será necesario indexar al inicio, para aquellas enfermedades con resultado (+) en el indexaje practicado a la planta seleccionada. El Banco de Germoplasma se mantendrá en invernaderos y será indexado. De estas plantas de reserva se podrá extraer material (yemas) para conformar el Bloque Fundación o Bloque Incremento sólo cuando sea necesario. El Bloque Fundación se mantendrá en campo o invernadero y será indexado periódicamente. De aquí se extraerá el material vegetal para formar el Bloque Incremento, etapa que se mantendrá en campo o en invernaderos y será indexada periódicamente. Finalmente la Planta Certificada será producto de la injertación de yemas certificadas sobre portainjertos certificados y se mantendrá en campo o invernaderos siendo indexada periódicamente hasta el momento de su venta Bloque de plantas madres de semillas y Portainjertos certificados El Bloque de plantas madres de semillas sólo estará destinado a la extracción de semillas para conformar el almácigo de Portainjertos certificados, cumpliendo con el aislamiento e indexajes exigidos. Sin perjuicio de

11 2 lo anterior, se podrán formar las distintas etapas de la certificación con plantas madres de estacas y semillas (doble propósito) o sólo semillas, para la producción de Portainjertos certificados cumpliendo con los requisitos exigidos a las plantas madres de yema para injerto. Los Portainjertos certificados deberán ser mantenidos en las mismas condiciones de aislamiento requeridos para la Planta Certificada previo a su injertación. Cuadro 5. Etapas de producción, material que producen y etapa para la cual constituyen material inicial. Etapa Material vegetal Etapa a producido formar Banco de Yemas fundación Bloque Fundación Germoplasma Semillas certificadas Bloque Incremento Planta Certificada Portainjertos Certificados* Bloque Fundación Yemas registradas Bloque Incremento Semillas certificadas Planta Certificada Portainjertos Certificados* Bloque Incremento Yemas certificadas Planta Certificada Semillas certificadas Portainjertos Certificados* Bloque plantas madres Semillas certificadas Portainjertos Certificados* de semillas * Deberán ser mantenidos en el aislamiento exigido a la etapa que van a conformar 4.2. Venta de material vegetal de etapas intermedias Se podrán vender estacas, semillas y plantas terminadas de cualquiera de las etapas de la certificación a cualquier viverista que cumpla con todos los requisitos señalados en esta norma para continuar con el Programa de Certificación. Todo el material vegetal deberá estar perfectamente identificado y cuantificado con su respectivas etiquetas, y su transporte será en condiciones de resguardo para no verse expuesto en ningún momento al contagio de enfermedades hasta su llegada al lugar de mantenimiento Almacenamiento de material Se podrán almacenar en refrigeración estacas y semillas de cualquiera de las etapas de la certificación para ser utilizadas con posterioridad. El material deberá ser almacenado en condiciones asépticas identificado y etiquetado de acuerdo a lo señalado en el punto

12 3 SECCION 5 INSPECCIONES A LOS VIVERISTAS 5.1 Comunicaciones al Servicio Los viveristas que participen en el Programa de Certificación de Cítricos deben comunicar a lo menos con dos semanas de anticipación lo siguiente: a) Desinfección del suelo y toma de muestras para el análisis nematológico c) Recolección de semillas y su siembra d) Recogida de injertos e) Arranque y transplante de portainjertos f) Almacenaje de estacas y yemas g) Inicio del saneamiento h) Inicio de los indexajes i) Extracción de material local de la planta seleccionada j) Injertación k) Arranque de las plantas certificadas para la venta l) Venta de material vegetal para otros programas de certificación local. m) Cambio del polietileno de los invernaderos cuando corresponda n) Floración y fructificación Sin perjuicio de lo señalado, el viverista deberá comunicar al Servicio cualquier situación que así lo amerite con la debida anticipación Visitas Los inspectores del Servicio realizarán las visitas que sean necesarias durante la temporada para verificar el cumplimiento de las normas de certificación. Estas visitas podrán ser sin previo aviso y no estarán necesariamente basadas en las comunicaciones que el viverista deberá hacer al Servicio (punto 5.1), en las cuales se llenará una boleta de inspección con copia para el viverista. SECCION 6 CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS PLANTAS A CERTIFICAR 6.1. Defectos y Condiciones Generales Sólo se podrán certificar las plantas de vivero que no presenten síntomas de enfermedades o plagas, daños o defectos, problemas fisiológicos producto del mal manejo del vivero que perjudiquen el desarrollo futuro del árbol en el huerto Edad y Calibre La altura de injertación será a lo menos de 20 cm. sobre el nivel del suelo. La edad de las plantas al momento de la venta será de 8 meses de sobreinjerto sobre portainjerto de semilla o estaca. La altura mínima de las plantas será de 70 cm. con 50 cm. de sobreinjerto y el diámetro mínimo de 0,75 cm. Estas alturas se medirán desde el nivel del suelo, y el diámetro a 5 cm. sobre el injerto. 3

13 4 ANEXO 1 PROTOCOLO DE SANEAMIENTO POR MICROINJERTACION DE APICES Esta técnica se debe utilizar para la obtención de plantas libres de virus a partir de material introducido corriente, material local y en cualquier otro material en que el Servicio estime sea conveniente para asegurar su sanidad. Toda la operación deberá realizarse en laboratorios o recintos que cumplan todas las condiciones de asépcia y equipamiento necesarias. En términos generales y sin perjuicio de que se utilicen pasos equivalentes, a continuación se detallan las etapas de la microinjertación de ápices: 1-Los portainjertos: Idealmente deben ser Troyer citrange o Poncirus trifoliata, provenientes de semillas certificadas, las cuales una vez removida la cubierta seminal deben ser esterilizadas durante 10 min. en una solución de hipoclorito de sodio al 0,7% y 0,1% de agente mojante (Tween 20), para luego ser lavadas 3 veces con agua destilada. Luego serán puestas a germinar en tubos de ensayo, en un medio de agar solidificado al 1% con la solución salina de Murashige-Skoog. Se deberán mantener en completa oscuridad y a una Tº de 27ºC, para que al cabo de 15 días (aprox) las plántulas sean extraídas en una cámara de flujo laminar, para eliminar sus cotiledones y decapitar la plúmula y la radícula, quedando así listas para la microinjertación. 2-El injerto : El material de injertación será obtenido a partir de estacas seleccionadas de arboles locales o material introducido corriente, con una buena sanidad aparente. Las estacas deben ser esterilizadas superficialmente en una solución de 1,5-2% de hipoclorito de sodio y 0,1% de agente mojante (Tween 20) durante 20 min. para luego ser lavadas 3 veces con agua destilada. Las estacas serán cultivadas en tubos de ensayo adecuados a sus dimensiones, con una solución salina de Murashige-Skoog con agar al 1,2%. El cultivo se mantendrá a 32ºC constantes con un fotoperíodo 16 horas luz y 8 horas oscuridad, por un período de 7-14 días para que las yemas broten. Los brotes producidos in vitro serán removidos de las varetas (1-1,5 cm de longitud) y esterilizados superficialmente en una solución de 0,25% de hipoclorito de sodio y 0,1% de agente mojante (Tween 20) durante 5 min., quedando así listos para la microinjertación. 3-La Microinjertación : Se deberá tomar el meristema apical de los brotes con 2-3 primordios con un diámetro de 140 a 180 micras, luego se practicará en el extremo de la plúmula del portainjerto una incisión en T para introducir el ápice. El conjunto portainjerto-injerto será reimplantado en un medio de cultivo similar a los anteriores y mantenido a 27ºC con un fotoperíodo de 16 horas luz y 8 horas oscuridad. El éxito de la microinjertación se manifestará con la brotación del injerto. Al utilizar portainjetos trifoliados es fácil diferenciar la brotación de estos y por lo tanto el fracaso de la injertación, sin embargo, el uso de portainjertos unifoliados puede llevar a confusión para lo cual la persona encargada debe estas perfectamente entrenada y tener a su disposición las herramientas necesarias para diferenciar ambas situaciones. 4-Transplante : La planta debe tener al menos 2 hojas antes de ser transplantadas a suelo, esto será en aproximadamente en 3 a 7 semanas. Podrán ser puestas puestas en una mezcla artificial de suelo estéril o injertarse sobre patrones vigorosos a partir de semilla certificada y mantenidos en condiciones de aislamiento adecuado. 4

14 5 ANEXO 2 INDEXAJE La persona a cargo de esta unidad debe ser un profesional del área perfectamente entrenado para llevar a cabo las técnicas aplicadas y hacer los reconocimientos y lectura de síntomas de enfermedades en las plantas indicadoras. Plantas indicadoras Todas las plantas indicadoras deben ser sanas, homogéneas, estables y varietalmente puras, siendo manejadas de manera adecuada para mantener un buen desarrollo y sanidad. Las plantas indicadoras inoculadas deben ser identificadas etiquetadas indicando la plantas candidatas al indexaje y la fecha de inicio. Se deberá llevar un Libro de registro del proceso que estará a disposición de los supervisores del Servicio. Se deberá contar con testigos positivos y negativos para todas las enfermedades a indexar, los cuales deben ser inoculados al momento de inicio de cada indexaje para asegurar el buen desarrollo de la técnica y la no influencia de factores externos que confundan la lectura de síntomas. Además, se deberá contar con un Termógrafo en el invernadero de indexaje conservando los registros de Tº para ser revisados por el Servicio. Las semillas de plantas indicadoras poliembriónicas serán cultivadas in vitro (ídem saneamiento). Para aquellas plantas indicadoras monoembriónicas como el Cidro Etrog se usarán estacas siguiendo el proceso normal de saneamiento cuando sea necesario. Las yemas del Cidro Etrog serán injertadas sobre Cidro Córcega o cualquier otra variedad de cidro provenientes de semillas certificadas. Para el caso del Mandarino Parson special el procedimiento es similar al del Cidro Etrog pero se usará (preferentemente) Citrus volkameriana como portainjerto. Proceso de inoculación El proceso de indexaje debe seguir las indicaciones establecidas en el cuadro 6 de acuerdo a lo siguiente: 1. Tristeza y Psorosis: Cuando las plantas indicadoras estén lo suficientemente desarrolladas, de la planta candidata al indexaje se tomarán dos inóculos constituidos por dos escudos de corteza sin yema. Sobre el tallo de la planta indicadora se realizan, a unos centímetros de distancia, dos cortes en forma de T, dentro de los cuales se colocan los inóculos. Luego la planta indicadora es despuntada para favorecer los brotes laterales sobre los cuales se observarán los primeros síntomas. 2. Exocortis y Cachexia: Para la Exocortis, una vez que el portainjerto de Cidro Córcega tenga 1 año, se injerta el Cidro Etrog. A un lado y otro de la yema injertada se sitúan los inóculos (escudos de corteza de la planta a indexar). Para la Cachexia, una vez que el portainjerto de C. volkameriana este lo suficientemente desarrollado, se injertará una yema del mandarino Parson special. Los dos inóculos de la planta a indexar se sitúan a un lado y otro de la yema de mandarino. El Servicio podrá exigir la repetición de cualquier indexaje cuando no se cumpla con las condiciones de manejo necesarias para la detección de las enfermedades señaladas o en cualquier otro caso que estime conveniente. 5

15 6 Cuadro 6. Condiciones generales del Indexaje para las enfermedades importantes en la certificación. Enfermedad Planta indicadora Nº de plantas Duración del testado Tº Síntomas a inocular desde la inoculación Tristeza Lima mejicana 4 6 a 12 meses 18-25ºC Vein clearing Stem pitting Psorosis Madame Vinous semanas a 36 meses 18-25ºC Blanqueamiento irregular de Pineapple una parte y otra del nervio cen- tral de las hojas de brotación de primavera y/o otoño. Exocortis Cidro Etrog semanas a 1 mes 27-32ºC Sobre la brotación de la yema Cidro Arizona 861-S1 del Cidro se observa un enro- llamiento del limbo de las hojas y del nervio central. Reducción de los entrenudos (epinastia). Cachexia Mandarino Parson 6 7 a 12 meses 27-32ºC Acumulación de goma y abul- (Xiloporosis) special tamiento de los tejidos al nivel del injerto. ANEXO 3 ENFERMEDADES Y PLAGAS Las plantas certificadas deberán estar libres al menos por observación visual de las siguientes enfermedades y plagas: 1- Enfermedades causadas por hongos y otros microorganismos Pseudomona syringae Phytophtora spp. Tizón de flores y ramillas Pudrición de cuello y raíces 2- Acaros e insectos Acaros: Brevipalpus spp. Eryophyes sheldoni Panonychus citri Stenotarsonemus latus Falsa arañita roja Acaro de la yema Arañita roja Acaro del plateado Insectos: Aleurothrixus floccosus Mosquita blanca Naupactus xantographus Burrito Aonidiella aurantii Escama roja Planococcus citri Chanchito blanco Aonidiella citrina Escama amarilla Pseudococus spp. Chanchitos blancos Icerya purchasi Conchuela acanalada Saissetia spp. Conchuela negra Lepidosaphes beckii Conchuela morada Unaspis citri Escama 6

16 7 Anótese, comuníquese y publíquese. ROSA MESSINA CRUZ INGENIERO AGRONOMO DIRECTORA Nº / YJD/MMF/yjd DISTRIBUCION A: - Director regiones I a XII y Región Metropolitana. - Departamento de Semillas. - Oficina de Partes. - Archivo. - Miembros del Comité Frutal : Sra. Ximena Besoaín U. Católica de Valparaíso Sra. Mónica Castro V. U. Católica de Valparaíso Sr. Germán Errázuriz Procitrus Sr. Jorge Escobar Viveros San José Sr. Luis Fernández McD Univiveros Sr. Francisco Gardiazabal Sociedad Gardiazabal y Matta Sra. Verena Müller Univiveros Sr. Juan E. Ortúzar F. U. Católica 7