Matricariae flos MANZANILLA, inflorescencia

Transcripción

1 Matricariae flos MANZANILLA, inflorescencia La droga está constituída por las inflorescencias desecadas de Matricaria chamomilla L. La droga debe contener, como mínimo, 0,4 % de aceite volátil y 0,25 % de apigenina 7-O-glucósido (C 21 H 20 O 10, 432,38). CARACTERÍSTICAS Las inflorescencias poseen olor aromático y característico. SINONIMIA CIENTÍFICA Matricaria recutita L. Chamomilla recutita (L.) Rausch. ENSAYOS DE IDENTIFICACIÓN - Descripción macroscópica Capítulos de 10 a 17 mm de diámetro constituidos por una porción central hemisférica o cónica, de 3 a 10 mm de diámetro, internamente hueco y externamente cubierta de flores tubulosas amarillas, sin paleas, rodeada por 12 a 17 flores marginales, liguladas y blancas. Capítulos maduros y secos con flores liguladas visiblemente giradas hacia el pedicelo. Involucro verde, formado por dos a tres series de brácteas oblongo-lanceoladas, glabras o con tricomas glandulares biseriados en la cara abaxial, imbricadas, con ápices obtusos y margen hialina. Flores marginales pistiladas, dispuestas en una sóla serie, con el tubo de la corola corto y recto, levemente amarillo, de hasta 1.5 mm de largo, comprimido a la altura de la apertura de la lígula; lígula bien desarrollada, tridentada, largamente ovalada u oblonga, de 7 a 10 mm de largo por hasta 2 a 3 mm de ancho, marcada por 4 nervaduras longitudinales, raramente acompañadas por uno a dos nervios paralelos más cortos, estilo dividido en dos ramas papilosas. Flores centrales perfectas, numerosas, de hasta 2.5 mm de largo, con un tubo recto y limbo pentalobulado; lóbulos agudos, iguales, alargándose a partir de una fuerte constricción, donde se observa una gran densidad de tricomas glandulares; cinco estambres sinánteros y epipétalos; ovario inferior, estilo igual al de las flores liguladas. Fruto aquenio ovoide con 3 a 5 estrías longitudinales. - Descripción microscópica Las brácteas del involucro, cuando están diafanizadas y desde una vista frontal, presentan un margen escarioso formado por células alargadas, de paredes finas y con cutícula levemente estriada; la epidermis presenta numerosos estomas anomocíticos y en su mesófilo se observan, por transparencia, elementos de conducción y muchas fibras con numerosas puntuaciones. La epidermis de la corola de las flores liguladas y tubulosas presentan en vista frontal, cutícula estriada y células con paredes periclinales muy finas y levemente sinuosas; en la sección transversal, la epidermis de las flores liguladas es fuertemente papilosa en su cara abaxial, así también como en la cara adaxial de los lóbulos de las flores tubulosas. Se observan tricomas glandulares esparcidos en la epidermis de la corola ligulada, particularmente numerosos en la constricción débil que corresponde a la abertura de la lígula y también en la cara abaxial y en el margen de las corolas tubulosas, donde son abundantes. En la sección transversal, en el mesófilo de las corolas de ambas flores, ocurren pequeñas agrupaciones de cristales de oxalato de calcio. Las células del ápice de los estilos, en los estigmas son evidentemente papilosas. Los filamentos de los estambres son cilíndricos y la epidermis está compuesta de células pequeñas de paredes levemente engrosadas; en las paredes de las anteras se encuentran agrupaciones de cristales de oxalato de calcio y en su interior; granos de pólen esféricos de aproximadamente 30 µm de diámetro, 3 poros germinativos y exina espinosa. En

2 la base del ovario de los dos tipos de flores se encuentra un anillo formado por tres capas de esclereidas de paredes engrosadas y punteadas; la epidermis del ovario está formada por células alargadas con paredes sinuosas que presentan en filas longitudinales de tricomas glandulares con cabeza biseriada de 2 a 4 células, alternadas con células oblongas hasta fusiformes que contienen mucílagos; en las paredes internas del ovario se observan numerosas agrupaciones de cristales de oxalato de calcio. Los aquenios presentan células productoras de mucílagos y tricomas glandulares en su superficie; la base del aquenio está formada por un anillo de esclereidas isodiamétricas con paredes gruesas y lúmen pequeño. - Descripción del polvo El polvo responde a todas las exigencias establecidas para la especie, menos los caracteres macroscópicos. Son características: coloración amarilla; fragmentos de brácteas de involucro con margen escariosa y cutícula estriada; estomas anomocíticos y elementos de conducción y fibras con numerosas puntuaciones; fragmentos de epidermis de las corolas con cutícula estriada; fragmentos de epidermis de las corolas con papilas; fragmentos del estilo y estigmas con papilas en sus extremidades; fragmentos de ovarios o de aquenios con restos del anillo formado por capas de esclereidas de paredes engrosadas y puntuadas; fragmentos de paredes de ovarios o de aquenios con agrupaciones de cristales de oxalato de calcio; tricomas glandulares biseriados con un pie de dos células y con una cabeza formada por 2 a 4 células por serie con cutícula bien extendida formando una vesícula donde se deposita un aceite esencial; granos de pólen maduros de cerca de 30 µm; grupos de granos de pólen inmaduros con exina no bien visible. - Cromatografía Proceder conforme se describe en Cromatografía en capa delgada. Fase estacionaria: sílica-gel GF 254. Fase móvil: tolueno y acetato de etilo (97:3). Solución muestra: diluir 50 µl del aceite volátil obtenido en el ensayo de Determinación de aceite volátil en 1 ml de xileno. Solución de referencia: diluir 2 µl de camazuleno, 5 µl de levomenol y 10 mg de acetato de bornilo en 5 ml de tolueno. Revelador: disolver 1 g de vainillina en 100 ml de metanol. Agregar 4 ml de ácido clorhídrico y 5 ml de ácido sulfúrico. Procedimiento: aplicar, separadamente, en la cromatoplaca, en forma de banda, 10 μl de la Solución muestra y 10 μl de las Solución de referencia. Desarrollar el cromatograma. Remover la cromatoplaca y dejar secar bajo corriente de aire. Nebulizar la placa con el Revelador y calentar a 105 C durante 1 minuto. Resultados: el esquema siguiente presenta la secuencia de zonas presentes en el cromatograma obtenido con la Solución de referencia y la Solución muestra. Otras zonas pueden estar ocasionalmente presentes.

3 Parte superior de la placa Camazuleno: zona rojo- Zona rojo rosa rosa Acetato de bornilo: zona azul-violeta Levomenol: zona violeta Zona azul-violeta Zona violeta Zona violeta Zona amarillo-verdosa Solución de Referencia Solución muestra - Ensayo de pureza Determinación de materia extraña. No debe contener más de 5,0%. Determinación de cenizas totales. No debe contener más de 10,0 %. Determinación de pérdida por secado. Utilizar el Método gravimétrico. No debe contener más de 12,0%. Determinación de material fragmentado. No debe contener más de 25% de droga tamizada (710) determinado sobre 20 g de droga. - Ensayos de contaminantes Metales tóxicos y arsénico. Debe cumplir con los requisitos. Residuo de pesticidas. Debe cumplir con los requisitos. - Ensayo microbiológico. Debe cumplir con los requisitos. - Valoración A. Determinación del aceite volátil Proceder conforme se describe en Determinación de aceites volátiles. Agregar 30 g de la droga recientemente molida en un balón de 1000 ml conteniendo 500 ml de agua como líquido de destilación y 0,5 ml de xileno en el tubo graduado del aparato tipo clevenger. Destilar a una velocidad de 3-4 ml por minuto durante 4 horas. Luego de la destilación, cerrar el flujo de agua del condensador y continuar con la destilación hasta que todo el contenido azul adherido a las paredes del condensador se junte con el aceite recogido en el tubo graduado. Reiniciar el flujo de agua y destilar por 10 minutos más. Medir el volumen y expresar el rendimiento por 100 g de droga (v/p). B. Apigenina 7-O-glucósido Proceder conforme se describe en Cromatografia líquida de alta eficiencia. Utilizar un equipo para cromatografía de líquidos provisto de un detector ultravioleta ajustado a 340 nm; una precolumna con fase estacionaria constituida por sílica químicamente unida al grupo octadecilsilano; una columna de 250 mm de largo y 4 mm de diámetro interno, constituida por sílica químicamente unida al grupo octadecilsilano (5 μm) y un flujo de fase móvil de 0,6 ml/minuto.

4 - Fase móvil A: agua y ácido fórmico (99,5:0,5). - Fase móvil B: metanol y ácido fórmico (100:0,08) Tiempo Fase móvil A Fase móvil B Elución (minutos) gradiente lineal isocrática gradiente lineal isocrática gradiente lineal isocrática Solución muestra: reducir 4 g de la droga a polvo (500). Introducir 0,2 g de la droga pulverizada en un balón de 50 ml y agregar 20 ml de etanol 96 % (v/v). Calentar a reflujo en un baño de agua durante 15 minutos. Dejar enfriar y filtrar a través de algodón. Lavar el algodón con 2 ml de etanol 96 % (v/v). Agregar al filtrado 1 ml de Solución diluida de hidróxido de sodio R (0,425 g/5 ml) recientemente preparada y calentar a reflujo en un baño de agua por 1 hora. Dejar enfriar. Diluir la solución a 25,0 ml con etanol 96 % (v/v). A 5,0 ml de la solución agregar 0,05 g de ácido cítrico R. Agitar durante 5 minutos. Diluir 500 µl del filtrado obtenido a 1,0 ml con una mezcla de Fase móvil A y Fase móvil B (75:25). Filtrar a través de un filtro PVDF de 0,45 µm. Solución de referencia: disolver 1,0 mg de apigenina-7-o-glucósido en 10,0 ml de metanol. Diluir 250 µl de esta solución a 2 ml con una mezcla de Fase móvil A y Fase móvil B (75:25). Calcular el contenido en porcentaje de apigenina-7-o-glucósido total a partir de la siguiente expresión: en que A 1 = área de pico correspondiente a apigenina-7-o-glucósido en el cromatograma obtenido con la Solución muestra; A 2 = área de pico correspondiente a apigenina-7-o-glucósido en el cromatograma obtenido con la Solución de referencia; m 1 = masa en gramos de la droga seca en la Solución muestra; m 2 = masa en gramos de apigenina-7-o-glucósido en la Solución de referencia; P= contenido en porcentaje de apigenina-7-o-glucósido en la Solución de referencia. Aptitud del sistema: preparar una solución que contenga 50 µg/ml de rutina en metanol. Mezclar 250 µl de la solución de rutina con 250 µl de Solución de referencia de apigenina-7-o-glucósido descripta arriba. Completar a volumen de 1 ml. El cromatograma obtenido debe presentar una resolución mínima de 2 minutos entre los picos de apigenina-7-o-glucósido y rutina. Acondicionamiento y almacenamiento En recipiente herméticamente cerrado, protegido de la luz y del calor. Rotulado De acuerdo a la legislación vigente.

5 Figura 1 - Aspectos macroscópicos, microscópicos y de la microscopia del polvo en Matricaria chamomilla L. Complemento de leyenda de la Figura 1. Las escalas corresponden en A a 1 cm, en B y G a 1 mm, en C a F, H-I a 1 mm, en J-K a 100 µm, en L a Q a 500 µm. A aspecto de la sección longitudinal del capitulo. B - corola ligulada en vista lateral. C - fragmento de corola ligulada mostrando el estilo dividido en dos ramas papilosas. D - flor con corola tubulosa en vista lateral. E - flor tubulosa en vista lateral, en sección longitudinal, mostrando los estambres sinánteros. F - flor tubulosa en vista lateral, en sección longitudinal, mostrando los estambres epipétalos. G - fragmento de la porción apical de la corola mostrando el estilo dividido. H - corola tubulosa aislada. I - fruto aislado. J - anillo de esclereídas de paredes engrosadas y pontuadas em la base del ovário, en vista lateral. K - anello de esclereídas de paredes engrosadas y

6 pontuadas em la base del ovário, en vista frontal. L - fragmento de bráctea del invólucro con elementos de conduçión y abundantes fibras. M - fragmento de corola con papilas evidentes. N - tricoma glandular en vista lateral. O - fragmento de epidermis de la corola con tricomas glandulares, en vista frontal. P - fragmento de la epidermis de la bráctea del involucro con estomas anomocíticos. Q - grano de polen aislado.