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1 13 PROGRAMA DE TRANSFERENCiA DE EMBRIONES J. Cabodevila Introducción La transferencia embrionaria puede ser llevada a cabo en Centros de TE o directamente en el campo. Existen opciones intermedias, por ejemplo, que las donantes se encuentren en un Centro de TE donde se efectúa la recolección de los embriones, las receptoras en un campo cercano, donde se llevan a cabo las transferencias. La organización del programa de TE es diferente en cada una de estas circunstancias. En todos los casos, comienza con la selección de las donantes y finaliza con el diagnóstico de preñez efectuado a los 60 días post-transferencia. En general, la selección de hembras como donantes es responsabilidad del productor y al profesional le queda la opción de aceptarlas o no después de: 1. Efectuar una anamnesis exhaustiva considerando especialmente los antecedentes de superovulación. 2. Llevar a cabo un examen clínico a donde se considere el estado corporal y el estado de los órganos genitales (ver planilla de anamnesis y examen clínico de donantes). Teniendo en cuenta la variabilidad que existe en la respuesta a los tratamientos de superovulación y la importancia económica que tiene la sincronización de las receptoras en la financiación de un programa de TE, es conveniente efectuar el mismo, con un mínimo de 3 donantes. Para ingresar a un programa de TE, las donantes seleccionadas deben cumplir los siguientes requisitos: - Tener un período post-parto no menor a 60 días, habiendo registrado un ciclo previo de duración normal. - Haber transcurrido más de 50 días de un tratamiento superovulatorio anterior. - Es conveniente que al efectuar el tratamiento la donante no se encuentre con cría al pie. Para facilitar la comprensión del programa se debe considerar en primer término, la sincronización de celos en las donantes y luego en las receptoras. Sincronización de celos en donantes La forma más común de sincronizar el celo en las donantes es mediante la administración de PGF 2alfa o sus análogos sintéticos. Otra forma, es prolongar la fase luteal de manera artificial mediante la administración de progesterona o progestágenos. Cuando se inyecta PGF 2alfa, puede ocurrir: - Que todas las donantes presenten celo inducido o natural en los próximos 5 días. - Que no todas presenten celo. En ese caso, al administrar una segunda dosis de PGF 2alfa 11 días después, todas las donantes estarán en fase luteal. Luego de la presentación del celo natural o inducido (día 0 -cero-), el tratamiento de superovulación puede comenzar indistintamente entre los días 8 y 12 del ciclo estral. Es decir que, la inducción puede comenzar en el mismo momento en aquellas donantes en las que la diferencia entre sus días 0 no sea mayor de 4 días. En el cuadro 1 se presenta un programa de TE donde la sincronización de celos entre donantes y receptoras se lleva a cabo con PGF 2 y la inducción a la superovulación con FSH-p. La sincronización de celos en las donantes puede efectuarse también mediante el empleo de distintos dispositivos con

2 14 Cabodevila progesterona o progestágenos (PRID ), esponjas intravaginales, implantes subcutáneos (MAPLETOFT, 1987) o directamente inyectando diariamente progesterona durante 9 días (MAPLETOFT, 1982). La utilización de progesterona o progestágenos tiene la ventaja de poder comenzar el programa de TE en forma inmediata independientemente que la donante se encuentre en fase luteal. Donantes Receptoras Día 0 (natural o inducido) 1a dosis PGF2α Día 10±2 07h 5 mg FSH-p 19h 5 mg FSH-p Día 11±2 Día 12±2 07h 4 mg FSH-p 19h 4 mg FSH-p 07h 3 mg FSH-p + 1 dosis PGF2α 19h 3 mg FSH-p + 1 dosis PGF2α 2a dosis* PGF2α Día 13±2 Día 14±2 07h 3 mg FSH-p 19h 3 mg FSH-p + detección de celo detección de celo e IA Día 0 = celo inducido Detección de celo Día 15±2 IA Recolección de embriones método no quirúrgico Día 7±1 TE Cuadro 1: Programa de TE donde la sincronización de celos entre donantes y receptoras se lleva a cabo con PGF 2alfa y la inducción a la superovulación con FSH-p. * La sincronización de celos en receptoras puede efectuarse también administrando una sola dosis de PGF 2alfa a hembras seleccionadas, mediante palpación transrectal, por poseer un cuerpo lúteo. En el cuadro 2 se describe un programa de TE donde la sincronización de celos en las donantes se lleva a cabo con progesterona o progestágenos. La sincronización de celos en las receptoras no sufre variaciones con respecto a lo descrito en el cuadro 1. Durante el período de detección de celo en donantes y receptoras, cuadros 1 y 2, es conveniente efectuar 3 detecciones diarias (mañana, mediodía, tarde) empleando el método visual, 30 minutos en cada oportunidad. Biotecnologia de la Reproducciön

3 15 Día 0 Colocación del PRID, esponja intravaginal o implante subcutáneo Día 7 07h 5 mg FSH-p 19h 5 mg FSH-p Día 8 07h 4 mg FSH-p 19h 4 mg FSH-p Día 9 07h 3 mg FSH-p + 1 dosis PGF2α retiro del PRID, esponja o implante 19h 3 mg FSH-p + 1 dosis PGF2α Día 10 Día 11 07h 3 mg FSH-p 19h 3 mg FSH-p + detección de celo detección de celo e IA Día 0 = celo inducido Día 12 IA Día 18 Recolección de embriones método no quirúrgico Cuadro 2: Programa de TE donde la sincronización de celos en las donantes se lleva a cabo con progesterona o progestágenos Sincronización de celos en receptoras La transferencia de embriones puede efectuarse indistintamente sobre celo natural o inducido. Hay que tener en cuenta que para obtener buenos resultados de preñez, el celo de las receptoras deberá tener una sincronización no mayor a las 24 h con el de la donante, ver capítulo VIII, (ROWSON y col., 1972). La sincronización de celos con PGF 2 se describió en la Tabla 1. Cuando se efectúa la administración de una sola dosis de PGF 2 a hembras seleccionadas por poseer un CL es necesario reservar un número mayor de receptoras por donante porque el diagnóstico de CL mediante palpación transrectal tiene una eficacia que varía entre el 71 y el 96% (FORTIN, 1989). En general, considerando que el promedio de embriones transferibles por cada donante es alrededor de 5, se sincronizan 8 receptoras por donante dado que algunas deben ser descartadas antes de efectuar la transferencia por razones diversas: quistes ováricos, celos anovulatorios, imposibilidad de cateterizar la cérvix.

4 16 Cabodevila La donante presenta celo generalmente 48 h post primera administración de la PGF 2alfa. Se efectúan 2 inseminaciones, la primera a las 8-12 h del comienzo del celo y la segunda IA, 12 h después de la primera. En cada IA, se utiliza una dosis de semen de óptima calidad. Cuando la donante no presenta celo, la decisión a tomar dependerá de cada situación en particular. Hay que tener presente que las donantes que sufren un desfasaje en la presentación del celo o que directamente no presentan celo generalmente tienen una respuesta superovulatoria pobre o nula. Toda la información relacionada con donantes y receptoras se anota en las planillas respectivas. Luego de la transferencia, en las receptoras se controla el no retorno. A los 14 días post-transferencia puede extraerse una muestra de sangre para efectuar un dosaje de progesterona en plasma. Finalmente, a los 60 días post-transferencia se hace la palpación transrectal. Manejo de la hormona El FSH-p se diluye en solución fisiológica estéril (la relación 1 mg = 1 ml, es la más práctica) y se conserva refrigerada o congelada. Es conveniente fraccionarla de manera tal que la totalidad de la hormona descongelada sea utilizada en el mismo momento. Caso contrario hay que refrigerarla sin volver a congelarla. La hormona debe ser descongelada o calentada a temperatura ambiente. Biotecnologia de la Reproducciön

5 17 PROTOCOLO DE SUPEROVULACION DONANTE N :... RAZA:... PROCEDENCIA:... EDAD:... FECHA ÚLTIMO CELO:... OBSERVACIONES SUPEROVULACION: DROGA:... DILUCION:... ESQUEMA DE TRATAMIENTO: FECHA DEL CELO:... INSEMINACION ARTIFICIAL: 1 o I.A.: 2 o I.A.: OBSERVACIONES: TACTO PREVIO: OVARIO DERECHO OVARIO IZQUIERDO FOLICULOS: CUERPOS LUTEOS: RECUPERACION DE EMBRIONES: DIA:... HORA:... OBSERVACIONES: EVALUACION MORFOLOGICA: EMBRIONES VIABLES: CLASIFICACION:... EMBRIONES ANORMALES:... OVOCITOS SIN FERTILIZAR:... TOTAL RECUPERADO: CELO POST-SUPEROVULACION: firma del profesional

6 18 Cabodevila TRANSFERENCIA DE EMBRIONES PROTOCOLO DE DONANTES Donante N : Procedencia: Raza: Edad: Peso actual: Fecha última participación en Exposición Rural: Comentarios: Número de partos: Fecha del último parto: Tipo de parto: Para la última gestación cuántos Servicios Recibió?... Ha sido repetidora?: Fecha del último celo: 1.Normal, 2.Distócico, 3.Ternero Muerto 4.Cesárea Fecha último servicio: REVISACION CLINICA Estado Corporal: Estado de los órganos genitales en general: Estado de los ovarios en particular: O.D. O.I. Tamaño: Folículos: Cuerpos Lúteos: Semen que se utilizará: Prueba de enhebrado con pipeta de I.A.: Resultado: 1. Pasa sin Dificultad 2. Pasa con Dificultad 3. No pasa Biotecnologia de la Reproducciön

7 19 ANTECEDENTES DE SUPEROVULACION PRIMER TRATAMIENTO SEGUNDO TRATAMIENTO Hormona: Dosis: Hormona: Dosis: Total de Ovocitos y Embriones Total Ovocitos y Embriones TERCER TRATAMIENTO CUARTO TRATAMIENTO Hormona: Dosis: Hormona: Dosis: Total de Ovocitos y Embriones Total de Ovocitos y Embriones Bibliografía FORTIN, M Sincronización de celos en bovinos con prostaglandinas. Aspectos prácticos. CABIA, 15: MAPLETOFT, R Superovulation and recovery of ova from the bovine. Proc. Owners. Managers Workshop IETS, MAPLETOFT, R Sincronization of donor cows and recipients. XI Jornadas de Reproducción Animal del CIAVT. Venado Tuerto, Pcia. de Santa Fe. ROWSON, L., LAWSON, R., MOOR, R., BAKER, A Egg transfer in the cow: Synchronization requirements. J. Reprod. Fert. 28:

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