SELECCIÓN POSITIVA DE CÉLULAS CD34+

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1 Página 1 de 8 PROPÓSITO U OBJETO Definir los procedimientos para la selección positiva de células de acuerdo con los estándares de la Unidad de Trasplante de Progenitores Hematopoyéticos (UTPH) del Hospital Universitario La Fe, los estándares de JACIE y otros requerimientos que pudieran ser de aplicación obligatoria. ÁMBITO O ALCANCE Afecta a todas las fases de la selección positiva, desde que el producto recolectado está listo para ser seleccionado hasta el fin de su procesado cuando queda preparado para su liberación para infusión. MODIFICACIONES VERSIÓN FECHA DESCRIPCIÓN A 27/01/09 Selección positiva de células Control de documentos: El original del Manual de Calidad y todos los protocolos y procedimientos operativos serán archivados en la Oficina de Gestión de la Calidad. Las copias controladas están numeradas y selladas con el lema COPIA CONTROLADA en color rojo. Cualquier copia sin el sello rojo se considera NO CONTROLADA y debe ser destruida. Si el presente documento se considera inadecuado u obsoleto, es responsabilidad de cualquier miembro del equipo de la Unidad el hacerlo saber a cualquiera de los Jefes de la Unidad o a la propia Oficina de Gestión de la Calidad. Hojas de Evaluación de la Competencia: Las hojas de evaluación de la competencia de este documento tienen sus respuestas en la versión original custodiada en la Oficina de Gestión de la Calidad. Advertencia de Seguridad: El presente documento es propiedad intelectual de la UTPH del Servicio de Hematología del y, como tal, no debe ser utilizado fuera de este ámbito sin el consentimiento por escrito del Director de Gestión de Calidad y el propio autor del procedimiento. AUTOR DIRECTOR DE CALIDAD DIRECTOR SH y UTPH Nombre: Nombre: Nombre: Cargo: Cargo: Cargo: Firma: Firma: Firma:

2 Página 2 de PERSONAL Y RESPONSABILIDADES INTRODUCCIÓN / ANTECEDENTES ABREVIATURAS Y DEFINICIONES ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD DOCUMENTOS Y EQUIPOS Documentos Equipos PROCEDIMIENTO REQUERIMIENTOS PREVIOS PASOS DEL PROCEDIMIENTO DE SELECCIÓN Primer lavado y incubación con monoclonal Segundo lavado Tercer lavado Selección Fin del procedimiento COMPRENSIÓN, FORMACIÓN Y EVALUACIÓN DE COMPETENCIAS DOCUMENTOS / BIBLIOGRAFÍA ANEXOS Y REGISTROS REVISORES PERSONAL Y RESPONSABILIDADES El Director de la Unidad de Aféresis de la UTPH es responsable de la elaboración de este procedimiento y del control de toda la documentación y copias para asegurarse de que sólo está en uso la última versión aprobada. Los Jefes, de Servicio y de Sección, son responsables de que el personal a su cargo del Servicio y, por tanto, de la UTPH cumpla este procedimiento operativo. Todo el personal de la Unidad de Aféresis es responsable del cumplimiento de este procedimiento operativo en todo momento. Cualquier desviación del procedimiento debe ser documentada y aprobada de acuerdo con el procedimiento operativo Gestión de errores, incidentes, acontecimientos adversos y productos biológicos (-PS-003-A). El presente documento es propiedad intelectual de la UTPH del y como tal, no debe circular fuera de su ámbito sin el consentimiento del Director de Gestión de la Calidad y del autor del documento. 2.- INTRODUCCIÓN / ANTECEDENTES La Selección positiva se utiliza con el fin de conseguir una depleción total o parcial de los linfocitos del inóculo. La razón fundamental de este procedimiento es la prevención de la EICH, tanto en su frecuencia de aparición como en su gravedad. El presente procedimiento pretende ofrecer una orientación en el proceso de selección sin que sea su misión la de suplir la pericia y competencia que se le supone y requiere al personal que lleve a cabo este proceso. 3.- ABREVIATURAS Y DEFINICIONES CPSP EICH Células Progenitoras de Sangre Periférica Enfermedad del injerto contra el huésped 4.- ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD Riesgos biológicos derivados de la manipulación de muestras biológicas y agujas.

3 Página 3 de DOCUMENTOS Y EQUIPOS 5.1 Documentos Control del Sistema de Selección (Anexo 1) Hoja de Selección (Anexo 2) 5.2 Equipos Sistema de selección Clini-Macs KIT con los anticuerpos monoclonales adaptados al tipo de selección que se vaya a realizar que incluye equipo, bolsas de PBS de 1 litro y bolsas de trasvase Albúmina al 20% (2 frascos) Filtro PALL Bolsa de recolección de 150 ml 6.- PROCEDIMIENTO 6.1 REQUERIMIENTOS PREVIOS Para comenzar el procedimiento de selección, se deben cumplir los siguientes requerimientos: Se debe disponer de la solicitud de recolección de CPSP, tal y como se describe en el procedimiento de recolección de CPSP, así como de la indicación expresa en la misma acerca de la necesidad de realizar selección. Se debe haber efectuado el control del sistema de selección antes de proceder a la misma. Este control se describe en el Anexo 1. Se debe disponer del producto previamente recolectado. Se debe haber realizado un proceso de lavado previo tal y como se describe en el procedimiento de recolección. Todos los requisitos exigidos para la donación de CPSP deben cumplirse para la selección. 6.2 PASOS DEL PROCEDIMIENTO DE SELECCIÓN Primer lavado y incubación con monoclonal Todo el procedimiento tiene lugar en campana de flujo laminar. Recoger la bolsa de la cámara frigorífica de conservación situada en el Banco de Sangre del sótano tras verificar los datos del donante de forma detallada. En una bolsa de PBS de 1 L añadir 25 cc de albúmina humana al 20% Llenar la bolsa hasta 600 cc con la solución de PBS enriquecida con albúmina. Centrifugar 15 minutos a 1600 rpm sin usar freno.

4 Página 4 de 8 Colocar la bolsa en el extractor manual de plasma evitando que se mezclen las distintas capas. Ejercer una leve presión e ir retirando el sobrenadante evitando pérdidas totales o parciales del buffy coat. Con una jeringuilla de 50 cc y utilizando una aguja de 2.1 x 38 mm extraer el contenido de la bolsa y anotar en la Hoja de Selección el volumen total del mismo. Reconstituir con la solución de PBS y albúmina hasta un volumen de 93 cc. Añadir el monoclonal (volumen de 7,5 cc) Con la jeringa de 50 cc añadir 100 cc de aire a la bolsa (recordad que se está trabajando en campana de flujo laminar) Dejar 30 minutos a temperatura ambiente agitando cada 5 minutos (dejarlo dentro de la campana de flujo laminar) Segundo lavado Añadir la solución de PBS y albúmina hasta llenar la bolsa y a la vez retirar los 100 cc de aire Centrifugar 15 min a 1600 rpm sin freno a 22 grados centígrados. Colocar la bolsa en el extractor manual de plasma evitando que se mezclen las distintas capas. Ejercer una leve presión e ir retirando el sobrenadante evitando pérdidas totales o parciales del buffy coat Tercer lavado Añadir la solución de PBS y albúmina hasta llenar la bolsa. Centrifugar 15 min a 1600 rpm sin freno a 22 grados centígrados. Colocar la bolsa en el extractor manual de plasma evitando que se mezclen las distintas capas. Ejercer una leve presión e ir retirando el sobrenadante evitando pérdidas totales o parciales del buffy coat. Medir la cantidad que queda en la bolsa con una jeringa de 50 cc y anotarlo en la hoja de selección. Se vuelve a reconstituir la bolsa añadiendo la solución de PBS con albúmina hasta un volumen de 190 cc si hay más de 6 x 10e6 / kg de peso o hasta 100 cc si hay menos de esa cifra. Sacar de la bolsa reconstituída una muestra para hemograma, otra para recuento de y otra para cultivo microbiológicos de aerobios y anaerobios. Esta determinación será denominada como START. Anotar los resultados en la hoja de selección.

5 6.2.4 Selección Página 5 de 8 Encender el equipo y seguir las instrucciones que hay descritas en el mismo para seleccionar los códigos correspondientes. Cebar el circuito del sistema Clini-Macs con una bolsa de 1 litro de PBS a la que previamente se añade 25 cc de albúmina al 20%. Colocar la bolsa en el soporte específico del sistema Clini-Macs utilizando el filtro PALL. Añadir la bolsa de recolección de 150 cc donde irá el producto final a infundir y que previamente habrá sido etiquetada con la etiqueta impresa desde Delphyn a tal efecto. Verificar antes del etiquetado que todos los datos del receptor y del donante son correctos. Presionar la tecla RUN. La selección comienza de forma automática debiendo supervisar el procedimiento in situ. El procedimiento de selección suele durar unos 45 minutos Fin del procedimiento De la bolsa de desecho extraer muestra para hemograma, recuento de y linfocitos T (misma muestra) y microbiología de aerobios y anaerobios. Pesar la bolsa de desecho. De la bolsa de infusión extraer muestras para hemograma y recuento de células y linfocitos T (misma muestra). Pesar la bolsa de infusión. Anotar los resultados de los recuentos en la hoja de selección Comprobar que la cifra de células CD3+ es la esperada y si se requiere una cifra mayor reconstituirla a partir de la bolsa de desecho. En hoja de selección se anotarán los lotes y caducidad de albúmina, monoclonal, PBS, equipo y filtro PALL. Una vez se tenga el producto definitivo de infusión se procederá de acuerdo al protocolo de recolección de CPSP en lo que a la liberación del producto para su infusión inmediata se refiere. 7.- COMPRENSIÓN, FORMACIÓN Y EVALUACIÓN DE COMPETENCIAS Tipo de formación Es precisa formación específica práctica y teórica para uso de este POE. Método de evaluación de la competencia para procedimientos Cuestionario de Evaluación de Competencia Lista de profesionales que deben evaluarse Todos los que utilicen este POE. Formador Personal de la Unidad de Aféresis y/o de la

6 Página 6 de 8 Registro de formación y evaluación de la competencia Empresa comercializadora del equipamiento y kits. Todos los usuarios de este POE deben completar el Registro de Evaluación de la Competencia 8.- DOCUMENTOS / BIBLIOGRAFÍA FACT-JACIE International Standard. Third Edition, 19 Feb PS-003-A. Gestión de errores, incidentes, acontecimientos adversos y productos biológicos -PS-002-A. Registros del Sistema de Calidad -PS-005-A. Recursos humanos. Formación 9.- ANEXOS Y REGISTROS Anexo 1: Petición de Recolección de CPSP Anexo 2: Plantilla de Recogida de Datos Anexo 3: Reacciones Adversas a la Recolección Anexo 4: Informe de Rendimientos Celulares Donante Autólogo Anexo 5: Informe de Rendimientos Celulares Donante Sano Anexo 6: Informe de Donación de CPSP Anexo 7: Petición de Criopreservación de CPSP Anexo 8: Formulario de Liberación de CPSP Anexo 9: Diagrama de Flujo del Proceso Los procedimientos y anexos originales a este documento que queden obsoletos se guardarán indefinidamente a partir de la fecha de la modificación, en el archivo del responsable asignado (Director de la Oficina de Gestión de la Calidad) identificados como obsoletos REVISORES Revisores Nombre Firma Puesto Fecha Miguel Ángel Sanz Jefe de Servicio y Director del Programa de TPH 01/12/08 Guillermo Sanz Jaime Sanz Federico Moscardó Jefe de Sección y Director Unidad Clínica de TPH Médico Adjunto de Hematología. Facultativo de la UTPH Médico Adjunto de Hematología. Facultativo del área de Recolección Celular 01/12/08 01/12/08 01/12/08

7 Página 7 de 8 ANEXO 1. Control del Sistema de Selección Antes de cada proceso de selección, con no más de 7 días de antelación, se realizará un control del Sistema de Selección Cnili-Macs según se describe a continuación: 1. Encender el aparato. Aparecerá el logotipo de Clini-Macs 2. Pulsar 5 3. Pulsar opción 3: chequear aparato 4. Presionar enter (empezar) 5. Vigilar las válvulas, chequeándolas una a una y todas a la vez, comprobando que todas tienen un movimiento de apertura y cierre correctos. 6. Revisar la bomba verificando que gira tanto a izquierda como a derecha a ritmo inicialmente lento y luego rápido 7. Chequear el imán colocando una moneda de céntimo de euro encima del triángulo amarillo. La moneda no debe moverse. 8. Poner un tubular de plástico (de los usados en los sistemas de gotero) lleno de suero fisiológico en el sensor de líquidos 9. Abrir puerta de la bomba 10. Cerrar puerta de la bomba 11. Chequear teclado con la secuencia -/./1/RAM/STOP

8 Página 8 de 8 ANEXO 2. Hoja de Selección

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