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1 RepublicofEcuador EDICTOFGOVERNMENT± Inordertopromotepubliceducationandpublicsafety,equaljusticeforal, abeterinformedcitizenry,theruleoflaw,worldtradeandworldpeace, thislegaldocumentisherebymadeavailableonanoncommercialbasis,asit istherightofalhumanstoknowandspeakthelawsthatgovernthem. NTE INEN 0543 (1981) (Spanish): Alimentos para animales. Determinación de la proteína cruda

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3 CDU: AL Norma Técnica Ecuatoriana ALIMENTOS PARA ANIMALES. DETERMINACIÓN DE LA PROTEINA CRUDA INEN OBJETO Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN Casilla Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro Quito-Ecuador Prohibida la reproducción 1.1 Esta norma establece el método para determinar el contenido de proteína cruda en alimentos para animales. 2. DEFINICIONES 2.1 Contenido de proteínas en alimentos para animales. Es la cantidad de nitrógeno total, expresado convencionalmente como contenido de proteína, y determinada mediante procedimientos normalizados. 3. RESUMEN 3.1 Determinar el contenido de nitrógeno total mediante el método de Kjeldalh y multiplicar el resultado por el factor 6,25 o por 5,70 para expresarlo como proteína. 4. INSTRUMENTAL 4.1 Aparato Kjeldahl, para digestión y destilación. 4.2 Matraz Kjeldahl, de 500 cm Matraz Erlenmeyer, de 500 cm Bureta de 50 cm Balanza analítica, sensible al 0,1 mg. 5. REACTIVOS 5.1 Acido sulfúrico concentrado, con densidad 1,84 g/cm 3 a 20 C, exento de nitrógeno. 5.2 Solución 0,5 N o 0,1 N de ácido sulfúrico, debidamente estandarizada. 5.3 Solución concentrada de hidróxido de sodio, exento de nitrógeno. Disolver 450 g de hidróxido de sodio sólido en agua destilada y diluir la solución hasta cm 3. La densidad relativa de la solución final debe ser mayor de 1,36 g/cm Solución 0,5 N o 0,1 N de hidróxido de sodio, debidamente estandarizada. -1-

4 NTE INEN Solución de sulfuro alcalino o solución de tiusulfato de sodio. Disolver 40 g de sulfuro de potasio o de sulfuro de sodio en cm 3 de agua destilada; o disolver 80 g de tiusulfato de sodio pentahidratado en cm 3 de agua destilada. 5.6 Sulfato da potasio o sulfato de sodio anhidro, exento de nitrógeno, reactivo para análisis. 5.7 Oxido mercúrico o mercurio metálico, reactivo para análisis (ver Anexo A). 5.8 Solución alcohólica de rojo de metilo. Disolver 1 g de rojo de metilo en 200 cm 3 de alcohol etílico al 95% (v/v). 5.9 Granallas de zinc. 6. PREPARACION DE LA MUESTRA 6.1 Moler aproximadamente 100 g de muestra, en un micromolino que contenga un tamiz de abertura de 1 mm, según Norma INEN 104, y que a través de él pase aproximadamente un 95% del producto. 6.2 Transferir rápidamente la muestra homogenizada a un recipiente herméticamente cerrado, hasta el momento del análisis. 7. PROCEDIMIENTO 7.1 La determinación debe realizarse por duplicado sobre la misma muestra preparada y en el residuo proveniente de la determinación de pérdida por calentamiento (ver INEN 540). 7.2 Pesar, con aproximación al 0,1 mg, aproximadamente de 0,50 a 1 g de muestra. 7.3 Transferir la muestra al matraz Kjeldahl y agregar el catalizador formado por 0,7 g de óxido mercúrico (o 0,65 g de mercurio metálico) y 15 g de sulfato de potasio en polvo (o 15 g de sulfato de sodio anhidro). 7.4 Agregar 25 cm 3 de ácido sulfúrico concentrado y un trozo pequeño de parafina, para reducir la formación de espuma durante la digestión. 7.5 Agitar el matraz y colocar en forma inclinada en la hornilla del aparato Kjeldahl. Calentar suavemente hasta que no se observe formación de espuma y aumentar el calentamiento hasta que el contenido del matraz hierva uniformemente. Continuar el calentamiento rotando el matraz frecuentemente durante la digestión. Después de que el contenido presente un aspecto límpido, continuar el calentamiento durante 30 minutos y dejar enfriar. 7.6 Agregar aproximadamente 200 cm 3 de agua destilada, enfriar la mezcla hasta una temperatura inferior a 25 C, agregar 25 cm 3 de la solución de sulfuro alcalino (o tiosulfato de sodio) y agitar la mezcla para precipitar el mercurio (ver A.2). 7.7 Agregar unas pocas granallas de zinc para evitar proyecciones durante la ebullición. -2-

5 NTE INEN Inclinar el matraz y verter por sus paredes cuidadosamente, para que se formen dos capas, 75 cm 3 de la solución concentrada de hidróxido de sodio (o mayor cantidad, si fuere necesario, para alcanzar un alto grado de alcalinidad). 7.9 Conectar el matraz Kjeldahl al condensador mediante la ampolla de destilación. El extremo de salida del condensador debe estar sumergido en 50 cm 3 de la solución 0,5 N o 0,1 N de ácido sulfúrico contenido en el matraz Erlenmeyer de 500 cm 3, a la cual se han agregado unas gotas de la solución alcohólica de rojo de metilo (ver Nota) Agitar el matraz Kjeldahl hasta mezclar completamente su contenido y luego calentar Destilar hasta que todo el amoniaco haya pasado a la solución ácida contenida en el matraz Erlenmeyer (lo cual se logra después de destilar por lo menos 150 cm 3 ) Usando la solución 0,5 N o 0,1 N de hidróxido de sodio, titular el contenido en el matraz Erlenmeyer (ver Nota) Realizar un solo ensayo en blanco con todos los reactivos, sin la muestra y siguiendo el mismo procedimiento descrito a partir de 7.3, para cada determinación o serie de determinaciones. 8. CALCULOS 8.1 El contenido de proteínas en alimentos para animales se calcula mediante la ecuación siguiente: Siendo: P = (1,40) (6,25 o por (V1 N1 V2 N2 ) (V3 N1 V 5,70) m 4 N 4 ) P = contenido de proteínas en alimentos para animales, en porcentaje de masa. V 1 = volumen de la solución de ácido sulfúrico empleado para recoger el destilado de la muestra, en cm 3. N 1 = normalidad de la solución de ácido sulfúrico. V 2 = volumen de la solución de hidróxido de sodio empleado en la titulación, en cm 3. N 2 = normalidad de la solución de hidróxido de sodio. V 3 = volumen de la solución de ácido sulfúrico empleado para recoger el destilado dei ensayo en blanco, en cm 3. V 4 = volumen de la solución de hidróxido de sodio empleado en la titulación del ensayo en blanco, en cm 3. m = masa de la muestra, en g. El factor 5,70 se usará cuando el producto sea proveniente en granos de trigo. 9. ERRORES DE METODO 9.1 La diferencia entre los resultados de una determinación efectuada por duplicado no debe exceder de 0,70%; en caso contrario, debe repetirse la determinación. -3-

6 NTE INEN INFORME DE RESULTADOS 10.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmética de los dos resultados de la determinación En el informe de resultados, deben indicarse el método usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse, además, cualquier condición no especificada en esta norma o considerada como opcional, así como cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado Deben indicarse todos los detalles necesarios para la completa identificación de la muestra. -4-

7 NTE INEN ANEXO A A.1 Por convenio previo entre las partes interesadas pueden usarse los siguientes catalizadores: a) 2,5 g de la siguiente mezcla: Selenio en polvo Sulfato cúprico Cu SO4. 5H 2O Sulfato de sodio Na 2SO4 8 g 8 g 500 g b) 2,5 g de la siguiente mezcla: Selenito de sodio Na 2SeO 3 Sulfato cúprico Cu SO4.5H 2O Sulfato de potasio K 2SO4 3 g 6 g 50 g c) 2,0 g de la siguiente mezcla: Sulfato de potasio K 2SO4 Selenito mercúrico Hg Se O 3 96g 4 g d) 2,5 g de la siguiente mezcla: Sulfato de potasio K 2 SO4 Oxalato de potasio K 2 C 2 04.H 2O 10 g 2 g A.2 Cuando se usen los catalizadores indicados en A.1, no debe agregarse la solución de sulfuro alcalino o de tiosulfato de sodio. -5-

8 NTE INEN APENDICE Z Z.1 NORMAS A CONSULTAR INEN 540 INEN 104 Alimentos para animales, Determinación de la pérdida por calentamiento. Tamices de ensayo. Tamaños nominales de las aberturas. Z.2 BASES DE ESTUDIO Norma Española UNE Piensos compuestos y primeras materias. Determinación cuantitativa de la proteína bruta. Macro método. Instituto Nacional de Racionalización y Normalización. Madrid, Método AOAC de análisis AOAC 7. Animal Feed. Crude protein official final action. Association of Analytical Chemists. Washington, Norma Colombiana ICONTEC E 14. Alimentos para animales. Tortas de semillas oleaginosas. Instituto Colombiano de Normas Técnicas. Bogotá, Norma Hind IS: Indian Standards Specification for compounded feeds for cattle. Determination of crude protein. Indian Standards Institution. Nueva Delhi, Norma Centroamericana ICAITI h4. Harinas de origen vegetal. Método de ensayo para determinar el contenido de proteínas. Instituto Centroamericano de Investigación y Tecnología Industrial. Guatemala,

9 INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA Fecha de iniciación: Fecha de aprobación:

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