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1 Redalyc Sistema de Información Científica Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal ARMENDÁRIZ, ESPERANZA Entrevista al doctor Mario Alberto Rocha Peña Ciencia UANL, vol. XIII, núm. 4, octubre-diciembre, 2010, pp Universidad Autónoma de Nuevo León México Disponible en: Ciencia UANL ISSN (Versión impresa): Universidad Autónoma de Nuevo León México Cómo citar? Número completo Más información del artículo Página de la revista Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

2 Premio de Investigación UANL 2010 Entrevista al doctor Mario Alberto Rocha Peña C I E N C I A S D E L A T I E R R A ESPERANZA ARMENDÁRIZ Desde la década de 1930 del siglo pasado, en todo el mundo se han registrado cerca de 100 millones de árboles que han muerto a causa del virus de la tristeza; por eso es necesario continuar con los monitoreos que en 2006 se dejaron de realizar en México. Hoy, el Dr. Mario Alberto Rocha Peña se hizo acreedor, por segunda vez, al Premio de Investigación UANL por desarrollar anticuerpos contra este virus que afecta las plantaciones de cítricos a nivel mundial. Para el investigador universitario la citricultura es de gran importancia para México, ya que actualmente, en más de 500 mil hectáreas plantadas con cítricos, "el virus está latente, en forma asintomática, y cuando éste se manifiesta, la planta se marchita, como si le faltara agua, las hojas se empiezan a colgar por así decirlo y, gradualmente, el árbol pierde vigorosidad y finalmente muere". En qué consiste el estudio acerca del virus de la tristeza en cítricos? La detección masiva se lleva a cabo con anticuerpos específicos para el virus de la tristeza. Los anticuerpos específicos para el virus los desarrollamos contra la proteína de la cubierta del virus expresada en la bacteria Escherichia coli. La proteína expresada en bacterias la purificamos y la inyectamos en cabras y conejos. Los anticuerpos desarrollados en cabras y conejos los empleamos mediante una técnica del laboratorio denominada ELISA (por sus siglas en inglés) para detectar el virus en plantas infectadas. Cuál es la muestra que ustedes tomaron para hacer este estudio? Trabajamos en colaboración con investigadores del Departamento de Agricultura de Estados Unidos (USDA), con sede en California, y con la Agencia para la Erradi- 348 CIENCIA UANL / VOL. XIII, No. 4, OCTUBRE - DICIEMBRE 2010

3 ESPERANZA ARMENDÁRIZ cación del Virus de la Tristeza de California (CCTEA, por sus siglas en inglés). El trabajo lo desarrollamos en tres etapas: primero evaluamos nuestros anticuerpos con una colección del virus de la tristeza, que tiene el USDA, establecida con muestras del virus colectadas en diversas áreas citrícolas de mundo, representadas en los cinco continentes. Nosotros tomamos una muestra representativa de 69 de esos aislamientos para probar nuestros anticuerpos, y asegurar que reconocieran todas las razas del virus. La segunda etapa consistió en la evaluación de nuestros anticuerpos con una colección de 280 aislamientos del virus de California, en esta evaluación comparamos nuestros anticuerpos con un kit comercial disponible para la detección del virus de la tristeza y con los anticuerpos que rutinariamente emplean en la CCTEA de California. Se mostró que nuestros anticuerpos desarrollados contra la proteína recombinante del virus fueron tan efectivos como los anticuerpos evaluados de California y los disponibles comercialmente. La tercera etapa consistió en el análisis masivo de muestras de cítricos con nuestros anticuerpos. En esta parte utilizamos nuestros anticuerpos para evaluar 41 mil muestras de 300 huertas de cítricos del estado de California; esta etapa se realizó como parte del programa de monitoreo que tiene la CCTEA en California. Qué resultados arrojó el análisis masivo de muestras? Esta investigación, como principal aportación, mostró que los anticuerpos producidos a partir de nuestro sistema de proteína recombinante fueron efectivos en la detección del virus, mediante la técnica ELISA, como anticuerpos primarios para atrapar el virus a las placas de microtitulación, y como anticuerpos intermedios para detectar al virus en las muestras de cítricos infectadas. En estudios similares, otros investigadores no habían obtenido resultados consistentes en este aspecto, es decir, los anticuerpos desarrollados a partir proteínas recombinantes no fueron eficientes para utilizarlos como anticuerpos primarios. Nuestro sistema emplea anticuerpos primarios desarrollados en cabra y, como secundarios, los desarrollados en conejos. Otra aportación relevante de esta investigación es que nuestros anticuerpos no tienen reacción cruzada con tejido sano de plantas de cítricos. Durante el proceso de evaluación, a nivel de campo, en un lote de mandarinas no infectadas por el virus, éstas dieron resultados falsos positivos con los anticuerpos desarrollados en California, en contraste con nuestros anticuerpos hubo reacción negativa para estas muestras. Nuestros anticuerpos fueron desarrollados contra la proteína recombinante sin marca, por el contrario, los anticuerpos desarrollados en California fueron también contra la proteína recombinante, pero marcados por un sistema denominado fusión de maltosa. La ventaja principal de producir anticuerpos mediante nuestro sistema de proteína recombinante es que contamos con los cultivos bacterianos transformados con el gen de la proteína de la cápside del virus sin marca, lo cual permite producir anticuerpos en forma permanente. Asimismo, fue relevante la utilidad de nuestros anticuerpos pará el análisis masivo de muestras de cítricos. Los resultados fueron satisfactorios: se detectaron plantas infectadas por el virus en plantaciones comerciales, en muestras masivas, las cuales fueron eliminadas como parte del programa de erradicación de la CCTEA en California. Cuál fue la principal aportación de esta investigación? CIENCIA UANL / VOL. XIII, No. 4, OCTUBRE - DICIEMBRE

4 ENTREVISTA AL DOCTOR MARIO ALBERTO ROCHA PEÑA Esta investigación está concluida? Esta parte de la investigación, se puede decir, está concluida en lo que respecta al desarrollo del sistema de detección, para el análisis masivo de muestras de cítricos empleamos anticuerpos desarrollados contra la proteína recombinante de la cápside del virus. En México, qué tan fuerte es el virus de la tristeza y qué tanto afecta a las plantaciones, se detecta con facilidad? La citricultura de México es de gran importancia para el país, actualmente, ya que de 500 mil hectáreas de cítricos, 90 por ciento de la citricultura está plantada sobre lo que se conoce como el portainjerto del naranjo agrio, y esa combinación vuelve a los árboles vulnerables al virus de la tristeza. Otro factor importante es que, desde 2004, existe en el país el pulgón café de los cítricos (Toxoptera citricida), el insecto vector más eficiente en la diseminación del virus de la tristeza. La importancia del virus de la tristeza en México es que se encuentra latente, es decir, sin manifestación de síntomas. La presencia del virus en algunas plantaciones del país se ha determinado mediante análisis de árboles con anticuerpos específicos al virus. De 1992 a 2006 se llevó a cabo una campaña para la detección y eliminación de árboles infectados por el virus de la tristeza. De acuerdo a los resultados disponibles a través de la SAGARPA, hasta 2006 se analizaron casi un millón 500 mil muestras, con una detección a nivel nacional de 4 mil 468 de árboles infectados distribuidos en las 20 entidades citrícolas del país. Esta campaña se llevó a cabo en seguimiento a la Norma Oficial Mexicana 031, y fue operada por los comités estatales de sanidad vegetal de cada estado citrícola del país, para lo cual se emplearon anticuerpos comerciales adquiridos en el extranjero. De acuerdo a los datos disponibles a través de la SAGARPA, del número de árboles analizados se puede afirmar que cubrieron alrededor de 59 mil hectáreas, lo que equivale a poco más de 10 por ciento de la superficie de cítricos del país, con un total de 4 mil 468 plantas infectadas por el virus. Con base en estos números, se puede anticipar que hay todavía alrededor de 30 mil plantas infectadas por el virus, en forma asintomática, en las 450,000 hectáreas restantes de la citricultura de México. Cómo afecta este virus a la planta? En la primera etapa el virus está latente, es decir, sin manifestación de síntomas; pero cuando se manifiesta, la planta muestra síntomas de marchitez, como si le faltara agua, las hojas se empiezan a colgar, por así decirlo, y gradualmente el árbol pierde vigor, luego muere. La producción de fruto disminuye gradualmente. Bajo diversos factores, el virus ocasiona una muerte repentina o súbita de las plantas de cítricos. La siguiente fase de esta investigación es desarrollar estos anticuerpos para comercializarlos, o cuál es la siguiente etapa? La comercialización de nuestros anticuerpos podría llevarse a cabo siempre y cuando tuviéramos aquí, en México, un mercado. Desafortunadamente, la campaña de detección del virus de la tristeza dejó de operar en 2006, lo cual redujo el uso potencial de nuestros anticuerpos en la citricultura nacional. 350 CIENCIA UANL / VOL. XIII, No. 4, OCTUBRE - DICIEMBRE 2010

5 ESPERANZA ARMENDÁRIZ Cuáles han sido sus líneas de investigación? Han sido con el virus tristeza de los cítricos y enfocadas principalmente a la serología, que es la detección mediante anticuerpos. Qué le ha dejado la investigación? Satisfacciones; para nosotros fue satisfactorio haber desarrollado estos anticuerpos y comprobar que superaron, en cuanto a calidad de reacción, a los comerciales y a los empleados en California. Qué lo motiva a continuar con esta labor dentro de la ciencia? Seguir tratando de encontrar herramientas de laboratorio útiles para la agricultura. Actualmente tenemos un proyecto del Conacyt con el virus de la tristeza, relacionado con la expresión de otros dos genes del virus: uno es el gen p20, que se manifiesta al producir una proteína que se acumula en inclusiones que forma el virus en la planta; el otro es el gen p23, que está asociado a la patogenicidad. Seguimos trabajando con el virus de la tristeza, y continuamos con la misma línea de investigación. CIENCIA UANL / VOL. XIII, No. 4, OCTUBRE - DICIEMBRE

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