PATOLOGIA MOLECULAR DEL CARCINOMA DE COLON. Eva Musulén

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1 PATOLOGIA MOLECULAR DEL CARCINOMA DE COLON Eva Musulén

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4 Patología molecular del CCR 1. Identificar pacientes de riesgo (Síndrome de Lynch) Inestabilidad de microsatélites 2. Guiar estrategia terapéutica Inestabilidad de microsatélites Dianas terapéuticas RAS

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6 Síndrome de Lynch Sd de predisposición al cáncer + frecuente

7 Síndrome de Lynch Sd de predisposición al cáncer + frecuente Autosómico dominante

8 Síndrome de Lynch Sd de predisposición al cáncer + frecuente Autosómico dominante Alteración genética: - Genes reparadores del DNA (Mismatch repair genes)

9 Síndrome de Lynch Sd de predisposición al cáncer + frecuente Autosómico dominante Alteración genética: - Genes reparadores del DNA (Mismatch repair genes) Presentación clínica: - Sd Lynch I - Sd Lynch II

10 Sd Lynch tipo I CCR edad precoz Histología: Medular, mucinoso, anillo de sello Inestabilidad de microsatélites (IMS) Sd Lynch tipo II Carcinoma colorrectal Otros carcinomas relacionados (endometrio, estómago, uréter / pelvis renal, etc)

11 GENES REPARADORES DEL DNA Mismatch repair system

12 GENES REPARADORES DEL DNA Mismatch repair system

13 GENES REPARADORES DEL DNA Mismatch repair system

14 hmlh1 / hmsh2 / hmsh6 / hpms2 Positividad nuclear Proteína funcional Gen íntegro

15 hmlh1 / hmsh2 / hmsh6 / hpms2 Positividad nuclear Negatividad nuclear Proteína funcional Gen íntegro Proteína no funcional Alteración del DNA

16 MLH1 PMS2 MSH2 MSH6 GEN ALTERADO (-) (-) (+) (+) MLH1 (+) (-) (+) (+) PMS2 (+) (+) (-) (-) MSH2 (+) (+) (+) (-) MSH6

17 Microsatélites Zonas repetitivas del DNA: Mononucleótidos (AAAAAAAA) Dinucleótidos (CACACACA) Trinucleótidos (AGCAGCAGC) etc Polimórficas (longitud variable): Entre individuos Entre alelos de un mismo individuo

18 Inestabilidad de microsatélites El sistema de reparación de DNA falla y no se corrigen los nucleótidos introducidos de más o de menos durante la replicación del DNA

19 Inestabilidad de microsatélites en el CCR Panel de 5 microsatélites: NR27, NR21, NR24, BAT25 i BAT26 Estable MSI-Low MSI-High 0 microsatélites mutados 1 microsatélite mutado 2 microsatélites mutados Boland et al. Cancer Res 1998;58:

20 Inestabilidad de microsatélites MSI-H 2 microsatélites mutados NR27 NR21 NR24 bat25 bat26 TEJIDO TUMORAL TEJIDO NORMAL

21 MLH1 PMS2 MSH2 MSH6 GEN ALTERADO IMS (-) (-) (+) (+) MLH1 INESTABLE (+) (-) (+) (+) PMS2 INESTABLE (+) (+) (-) (-) MSH2 INESTABLE (+) (+) (+) (-) MSH6 ESTABLE INESTABLE

22 MLH1 / BRAF PROTEÍNA MLH1 V600E BRAF ALTERACIÓN GEN MLH1 CONCLUSIÓN (-) MUTACIÓN HIPERMETILACIÓN PROMOTOR CCR ESPORÁDICO (-) WILD TYPE MUTACIÓN CCR HEREDITARIO

23

24 EPCAM

25 Chromosome 2

26 EPCAM MSH2 Chromosome 2 Chromosome 2

27 EPCAM 3

28 EPCAM 3

29 EPCAM 3 MSH2 Exon promoter

30 EPCAM 3 MSH2 Met Met Met Exon promoter

31 EPCAM 3 MSH2 Met Met Met Exon promoter

32 EPCAM 3 MSH2 Met Met Met Exon promoter Met Met Met LYNCH SYNDROME

33 EPCAM Deletion of exon 9

34 MSH2 GERMLINE MUTATION MSH2 EPCAM

35 MSH2 GERMLINE MUTATION MSH2 EPCAM EPCAM GERMLINE DELETION MSH2 EPCAM

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37 CRC (-) BRAF V600E gene mutation IHC MLH1 MSH2 MSH6 * MSI PCR <50 years Lynch phenotype (-) MSI-H (-) (+) (+)* SPORADIC * EPCAM IHC PROBABLY LS-RELATED

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39 Patologia molecular CCR 1.- Identificar pacientes de riesgo (Síndrome de Lynch) Inestabilidad de microsatélites 2.- Guiar estrategia terapéutica Inestabilidad de microsatélites

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42 Algorithm for utilizing microsatellite instability alongside clinical pathological factors in stage II and III colorectal cancer. First published in Nat Rev Clinic Oncol 2011;8:

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46 Patología molecular del CCR 1. Identificar pacientes de riesgo (Síndrome de Lynch) Inestabilidad de microsatélites 2. Guiar estrategia terapéutica Inestabilidad de microsatélites Dianas terapéuticas RAS

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49 Cell signalling pathways in CRC

50 Cell signalling pathways in CRC RAS

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53 KRAS

54 LA MUESTRA Cual es la mejor muestra para hacer el estudio mutacional de KRAS en el CCRm?

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57 En el caso de +1 muestra tumoral de un paciente Estudiar la MT más reciente En el caso de CCR-P sincrónicos Analizarlos todos (neoplasias independentes!)

58 EL MÉTODO Secuenciación Sanger KRAS Strip Assay GGT > TGT Pirosecuenciación

59 LAS MUTACIONES Mutaciones de KRAS Exón 2 codones 12 y 13

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61 PEAK Trial mfolfox6 + Panitumumab or Bevacizumab in 1 st -line Treatment of WT KRAS exon 2 mcrc (Open Label, Phase 2) Metastatic CRC (n=285) R 1:1 mfolfox6 (Q2W) + panitumumab 6 mg/kg (Q2W) mfolfox6 (Q2W) + bevacizumab 5 mg/kg (Q2W) Tumour Assessment Q8W (±7 days); Treatment administered until disease progression, death, or withdrawal from study E N D O F T R E A T M E N T 30 days (+ 3 days) S A F E T Y F O L L O W U P P O S T T R E A T M E N T F O L L O W U P Every 3 months (±28 days) until end of study E N D O F S T U D Y Study endpoints: PFS* (1 ); OS, ORR, resection rate, safety, exploratory biomarker analysis *PFS, progression-free survival; defined as time from date of randomisation to date of first radiographic disease (per modified RECIST v1.0), or death within 60 days after the last evaluable tumour assessment or randomisation (whichever is later). Patients not meeting the criteria by the cut-off date were censored at the last evaluable tumour assessment date; OS, overall survival; ORR, objective response rate; mfolfox6, modified FOLFOX6 Schwartzberg L, et al. J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 3631); Protocol ID: ; ClinicalTrials.gov identifier: NCT

62 PEAK Trial Expanded RAS Analysis KRAS EXON 1 EXON 2 EXON 3 EXON N/A % 7% NRAS EXON 1 EXON 2 EXON 3 EXON % 6% 0% BRAF EXON 1 EXON 15 EXON % Schwartzberg L, et al. J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 3631)

63 Proportion event-free (%) PEAK Trial Biomarker Analysis PFS in Patients with WT KRAS exon 2 and WT RAS mcrc Treated with Panitumumab + mfolfox6 # Schwartzberg L, et al. J Clin Oncol 31, 2013 (suppl; abstr 3631). Proportion event-free (%) Original WT KRAS exon 2 (ITT set) WT RAS (exons 2,3,4 of KRAS/NRAS) Months Months Panitumumab + mfolfox6 (n=142) Events n (%) Median (95% CI) months 90 (63) 10.9 ( ) Panitumumab + mfolfox6 (n=88) Events n (%) Median (95% CI) months 50 (57) 13.0 ( ) Bevacizumab + mfolfox6 (n=143) 94 (66) 10.1 ( ) Bevacizumab + mfolfox6 (n=82) 60 (73) 9.5 ( ) HR*=0.87 (95% CI: ) p=0.35 HR*=0.65 (95% CI: ) p=0.03

64 RAS TOTAL Mutaciones de KRAS Exón 2 codones 12 y 13 Exón 3 codones 59 y 61 Exón 4 codones 117 y 146 Mutaciones de NRAS Exón 2 codones 12 y 13 Exón 3 codones 59 y 61 Exón 4 codones 117 y 146

65 Cell signalling pathways in CRC RAF

66 LAS MUTACIONES Exón 15 codón 600 (V600E)

67 Cell signalling pathways in CRC PIK3

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