Detección de patógenos en alimentos, utilizando la técnica de PCR, reacción en cadena de la polimerasa.
|
|
- Ricardo Medina González
- hace 8 años
- Vistas:
Transcripción
1 Detección de patógenos en alimentos, utilizando la técnica de PCR, reacción en cadena de la polimerasa. Lic. Esp. Mariano Diego Massari 1er Congreso Bioquímico Córdoba ª Jornada de Actualización en Especialidades Bioquímicas 2ª Jornada: El Rol del Bioquímico y la Formación de los Futuros Profesionales
2 Tendencia en la utilización de la Biología Molecular como herramienta para el diagnóstico. Desarrollo de metodos más rápidos y efectivos, altamente especificos. Los metodos convencionales son laboriosos y llevan demasiado tiempo. El éxito de la implementación de la PCR para la identificación de microorganismos patógenos es la elección correcta de secuencias blanco.
3 Fundamento del PCR La PCR es una metodología que consiste en la amplificación enzimática en ciclos repetidos de un fragmento específico de ADN o ARN utiliza la enzima ADN polimerasa, a partir de pequeñas cantidades de moléculas de ADN o ARN. Dos oligonucleótidos son utilizados como cebadores Primers. Estos son cadenas de nucleótidos que se unen a secuencias complementarias en el extremo 5 de cada hebra de ADN a amplificar.
4
5 Pasos a realizar en una PCR Obtener el ADN templado Preparación de la mezcla de la reacción. Agregar el templado a la mezcla de reacción. Ciclado. Electroforesis en gel de agarosa. Visualización / registro de resultados.
6 Obtención de Templados Estandarizar el método de extracción de acuerdo a la matriz. Para el aislamiento bacteriano, solo es necesario el proceso de hervido. En cambio para el aislamiento en muestras mas complejas que pueden llegar a contener inhibidores o poca carga bacteriana, es necesario un enriquecimiento bacteriano previo y en algunos casos la necesidad de eliminar los inhibidores. Para la realización de una simple PCR no es necesario un ADN tan limpio y purificado, pero para realizar una secuenciación si es necesario que este ADN este limpio y purificado.
7 Preparación de la mezcla de reacción Buffer Tris-HCl 20mM y 50nM KCl ph es necesario para la adecuada actividad enzimática. Cloruro de Magnesio: cofactor indispensable (Taq polimerasa) y afecta el annealing de los primers. Los rangos de concentración utilizados son de (1 a 3) mm. Altas concentraciones disminuyen la especificidad de la reacción. Bajas concentraciones disminuyen la eficiencia de la reacción.
8 Deoxirribonucleotidos: ATP, CTP, GTP Y TTP, (dntps). Agregados en iguales proporciones para minimizar falsas incorporaciones en la polimerización. Se ajusta la concentración para optimizar la especificidad y fidelidad de la reacción. Generalmente 100 um en el ensayo. Primers o cebadores: Preferentemente entre 15 y 30 pb de longitud. No deben ser complementarios entre si. Deben tener similar contenido de (G + C) y en baja conc. en el extremo 3. No deben contener estructuras secundarias. El rango de concentración en el ensayo varía desde (0.3 a 1) um. Altas concentraciones disminuyen la especificidad de la reacción. Bajas concentraciones disminuyen la eficiencia de amplificación.
9 Enzima ADN polimerasa: Enzima Taq polimerasa. Tienen actividad de polimerasa y exonucleasa 5-3. Debe agregarse al final de la preparación de la máster mix. El rango habitual en cada ensayo es de ( ) U. baja concentración disminuye el rendimiento de la reacción altas concentraciones generan productos inespecíficos. La concentración en la que se utilizan cada uno de los reactivos va a afectar la sensibilidad y especificidad de la reacción. Todos los reactivos deben ser conservados a -20 C.
10 ADN blanco, La secuencia a amplificar debe contener desde menor a 0.1 a unas pocas kilobases. La cantidad total de ADN usado normalmente es de 0.05 a 1.0 ug. No es necesario que la muestra conteniendo la secuencia a amplificar esté altamente purificada. Controles Blanco de Templado: Reactivos solos, sin templado. Control positivo: templado de una cepa patrón que se sabe + (positiva). Control negativo: - templado de una cepa patrón que se sabe (negativa)
11 Pasos del termociclado El ciclado, consiste en una serie de pasos descriptos a continuación: Desnaturalización inicial: (94-96) C, (2-5) min Desnaturalización (94-96) C, 30 seg 1 min Annealing: (variable) C, 30 seg 1 min Extensión: 72 C, 30 seg 1 min. (Temperatura óptima de la polimerasa) Extensión final: 72 C, 10 min. Generalmente pueden ir de 25 a 35 ciclos
12
13
14 Temperatura Melting 94 o C PCR Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30ciclos 3 0 Tiempo 3
15 PCR Temperatura Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30ciclos 3 0 Tiempo 3 Fragmentos de tamaño definido
16 PCR Temperatura Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Melting 94 o C 30ciclos 3 0 Tiempo 3 Calor Calor
17 Producción de productos inespecíficos Altas concentraciones de nucleótidos. Bajas temperaturas de annealing. Bajas temperaturas de extensión.
18 Electroforesis en gel de agarosa Se utilizan soluciones de agarosa a variadas concentraciones % P/V utilizando como solvente Buffer Tris Acético EDTA (TAE) 1X o Tris Borato EDTA (TBE) 0.5X. La concentración de la solución de agarosa a preparar va a depender del tamaño de los fragmentos a separar en la electroforesis Agarosa % (P/V) Rango de separación de fragmentos de ADN (kb)
19
20 Condiciones de corrida electroforética Dependiendo del número y tamaño de los fragmentos a separar, se ajusta el voltaje y tiempo aplicado a la cuba electroforética en donde se realizará la corrida. Generalmente en varias aplicaciones se utiliza un fuente con voltaje de 100V durante un tiempo aproximado de 30 minutos.
21 Visualización del gel de agarosa Posterior a la corrida electroforética el gel puede teñirse, sumergiéndolo en una solución de Bromuro de Etidio por el transcurso de un tiempo. Luego este es observado bajo una lámpara ultravioleta, en donde se notaran las diferentes bandas separadas mediante la corrida electroforética. Para un posterior análisis y una documentación del ensayo realizado puede tomarse una fotografía del gel.
22
23 PCR simple Tipos de PCR Sensibilidad analítica alta (100 a 1000 copias de genoma, detectable). PCR Anidado - Nested PCR Consta de dos ciclos de amplificación (2 PCR) con cuatro cebadores, denominados cebadores externos e internos La primera amplificación da 2 fragmentos resultantes. La segunda reacción trabaja sobre los fragmentos obtenidos en la 1ra reacción. Sensibilidad analítica: menor a 10 copias de genoma. Muy sensible. Este modo es mas especifico, ya que cuando la Taq trabaja con grandes cantidades de DNA, su fidelidad disminuye. En cambio con este método, se trabaja con fragmentos cortos desde la segunda reacción, lo que hace mas efectivo el proceso. La especificidad también aumenta porque cuatro oligonucleótidos tienen que unirse específicamente
24
25 PCR Multiple ( Chamberlain 1988) Se lleva a cabo la reacción de PCR tradicional, pero con mas de un par de primers, para amplificar varias regiones al mismo tiempo.
26 PCR Invertido o PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR) Es una variante de la PCR en la que usamos ARN como molde inicial en vez de ADN, y emplea una transcriptasa inversa para realizar la síntesis de un ADN complementario al ARN (ADNc). De esta forma, el desarrollo inicial de una RT-PCR sería: 1er paso: retrotranscripción a partir del ARN. 2º paso: amplificación a partir de la primera hebra de ADNc. 3er paso: PCR estándar.
27 Real Time PCR (r t PCR) Los productos de amplificación se detectan de forma directa durante los ciclos de amplificación, utilizando sondas marcadas con fluorescencia, TaqMan o Molecular Beacon. La fluorescencia se mide a través de la tapa o del lado del recipiente de reacción
28 Se puede dividir en las técnicas basadas: 1- En fluorocromos no específicos. 2- En sondas específicas. 1- Utiliza el SYBR Green, que es un fluoróforo que se intercala en el DNA de doble hebra. Por ende, mientras mas DNA amplificado exista en el medio, mas SYBR green se intercalara y la luminiscencia aumentara proporcionalmente a los fragmentos amplificados. -Ventaja : Utilizar cebadores normales. Más económica que la que usa sondas específicas. - Desventaja: Permite cuantificar sólo una secuencia por reacción.
29
30
31 2- Utilizan una sonda unida a dos fluorocromos que hibrida en la zona intermedia entre el iniciador directo (forward) y el inverso (reverse). Esto permite monitorizar el cambio de patrón de fluorescencia y deducir el nivel de amplificación del gen. - Ventaja: Muy Precisos y evita posibles secuencias inespecíficas. Permite cuantificar el ADN amplificado. - Desventaja: Mas laborioso y costoso (diseño de secuencias específicas como sondas).
32 Hairpin Probes (Molecular Beacons) Sondas con secuencias repetidas invertidas en sus extremos Permitiendo forme una estructura de horquilla. Ventaja: Mas específica que las sondas TaqMan. Puede combinar varias Molecular Beacons en una única reacción. (Multiplex PCR). Desventaja: Diseño riguroso de las regiones tallo y asa de la horquilla.
33 Sondas Hidrolizadas (TaqMan) reportero quencher Actividad exonucleasa
34
35 Hybridization Probes :
PCR. Componentes del PCR. PCR Polymerase Chain Reaction (Reacción en Cadena de la Polimerasa)
PCR PCR Polymerase Chain Reaction (Reacción en Cadena de la Polimerasa) Es una técnica de biología molecular descrita en 1986 por Kary Mullis. (Nobel de química en 1993) Necesidad de pruebas de diagnóstico
Más detallesCUESTIONES. 1. Por qué la PCR convencional no es cuantitativa?
2º BIOQUÍMICA CUESTIONES 1. Por qué la PCR convencional no es cuantitativa? En la PCR convencional, la cuantificación del ADN de la muestra es complicada debido a que la eficacia de amplificación va disminuyendo
Más detallesMETODOLOGÍAS UTILIZADAS EN INVESTIGACIÓN BÁSICA Y APLICADA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
METODOLOGÍAS UTILIZADAS EN INVESTIGACIÓN BÁSICA Y APLICADA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Centro de de Microscopía Electrónica Facultad de de Ciencias Médicas Universidad Nacional de de Córdoba
Más detallesELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR. Raquel Asunción Lima Cordón
ELABORACIÓN N DE MEZCLA PARA PCR Raquel Asunción Lima Cordón PCR Polymerase Chain reaction (reacción en cadena de la polimerasa) Sintetizar muchas veces un fragmento de ADN PCR: simulación de lo que sucede
Más detallesNuevos paneles de PCR Real Time: El diagnóstico molecular más rápido, fiable y eficaz
IDEXX VetLab Suite IDEXX SNAP Tests Laboratorio de Referencia IDEXX Nuevos paneles de PCR Real Time: El diagnóstico molecular más rápido, fiable y eficaz Obtenga respuestas definitivas con la IDEXX RealPCR
Más detallesReacción en cadena de la polymerasa (PCR)
Reacción en cadena de la polymerasa (PCR) 1 PCR Que es? Es una técnica in vitro diseñada para amplificar una región específica de DNA. Es extremadamente sensible, con la capacidad de amplificar millones
Más detallesPCR. Técnica inventada por Kary Mullis :1987. Premio Nobel 1993. Amplifica una ÚNICA secuencia a partir de una mezcla compleja de ADN
PCR PCR Técnica inventada por Kary Mullis :1987 Premio Nobel 1993 Amplifica una ÚNICA secuencia a partir de una mezcla compleja de ADN Aprovecha los requerimientos de la replicación Templete ADN Nucleótidos
Más detallesAPLICACIÓN DE LA PCR: DIAGNÓSTICO DE PARÁSITOS
Prácticas docentes en la COD: 10-71 APLICACIÓN DE LA PCR: DIAGNÓSTICO DE PARÁSITOS FUNDAMENTO TEÓRICO La PCR es una técnica que permite llevar a cabo la síntesis in vitro de fragmentos de ADN. Está basada
Más detalles3/22/2010. Iván Ferrer Rodríguez, PhD Catedrático. En el 1983, Kary Mullis dio a conocer la Técnica de reacción en cadena de la Polimerasa o PCR.
Iván Ferrer Rodríguez, PhD Catedrático En el 1983, Kary Mullis dio a conocer la Técnica de reacción en cadena de la Polimerasa o PCR. Síntesis "in vitro" de secuencias específicas de ADN son amplificadas.
Más detallesTécnicas moleculares.
Técnicas moleculares. DMTV Carolina Acevedo Curso de Microbiología 2015 SÍNTESIS IN VITRO DE UNA GRAN CANTIDAD DE COPIAS DE UN SEGMENTO DE ADN EXISTENTE EN UNA MUESTRA. O sea. Amplificamos en forma exponencial
Más detallesAQUAGESTION. ISAv: Un acercamiento actualizado en la detección de sus variantes en la región. Departamento de Desarrollo y Laboratorio Diagnóstico.
AQUAGESTION ISAv: Un acercamiento actualizado en la detección de sus variantes en la región. Departamento de Desarrollo y Laboratorio Diagnóstico. Noviembre 2011 ACTUALIDAD Este año Sernapesca confirma
Más detallesIdentificación varietal en vid por técnicas de Biología Molecular. Lic. Luciana Garcia Lic. Carolina Chiconofri
Identificación varietal en vid por técnicas de Biología Molecular. Lic. Luciana Garcia Lic. Carolina Chiconofri OBJETIVO Desarrollar un banco de datos a partir de plantas de origen indudable y del uso
Más detallesMateriales para la secuenciación de ADN
Introduccion La Secuenciación Sanger es un método de secuenciación de ADN en el que el ADN diana se desnaturaliza y se hibrida con un cebador de oligonucleótidos, que se extiende entonces gracias a la
Más detallesPCR gen 18S ARNr humano
PCR gen 18S ARNr humano Ref.PCR18S 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO El objetivo de este experimento es introducir a los estudiantes en los principios y práctica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
Más detallesEasy PDF Creator is professional software to create PDF. If you wish to remove this line, buy it now.
Unidad Curricular: Virología y Micología Veterinaria 1 TRABAJO PRÁCTICO No. 3 AMPLIFICACIÓN DE GENES VIRALES Reacción en Cadena de la Polimerasa, conocida como PCR (por sus siglas en inglés: Polimerase
Más detallesTÉCNICAS GENÓMICAS. 2) Cuantificación del número de virus presentes en muestras de sangre o suero: carga vírica
TÉCNICAS GENÓMICAS Utilidad/Objetivos: 1) Detección de microorganismos directamente en muestras clínicas identificando un fragmento específico del genoma del microorganismo concreto 2) Cuantificación del
Más detallesCódigo: IDX-016 Ver: 1 TOXO. Sistema para la detección de la presencia de ADN de Toxoplasma gondii. Reg. MSP 21205
Sistema para la detección de la presencia de ADN de Toxoplasma gondii Reg. MSP 21205 Valdense 3616. 11700. Montevideo. Uruguay. Teléfono (598) 2 336 83 01. Fax (598) 2 336 71 60. info@atgen.com.uy www.atgen.com.uy
Más detallesEl Banco Nacional de ADN oferta un control de calidad de muestras de ADN y ARN.
PROGRAMA CONTROL DE CALIDAD DE MUESTRAS El Banco Nacional de ADN oferta un control de calidad de muestras de ADN y ARN. El programa completo de control de calidad de muestras de ADN y ARN engloba diferentes
Más detallesP.C.R. "Técnica de amplificación enzimática de secuencias específicas de DNA"
P.C.R. "Técnica de amplificación enzimática de secuencias específicas de DNA" Paso 1: Desnaturalización del DNA Paso 2: Hibridación de los "Primers" Paso 3: Extensión Paso 1: Desnaturalización del DNA
Más detallesDETERMINACIÓN DEL FACTOR Rh por PCR
Ref.PCRRh DETERMINACIÓN DEL FACTOR Rh por PCR 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO El objetivo de este experimento es introducir a los estudiantes en los principios y práctica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa
Más detallesMetodología y aplicaciones de la amplificación de material genético: Introducción a la bioinformática.
Departamento de Bioquímica Médica y Biología Molecular Práctica 3 Metodología y aplicaciones de la amplificación de material genético: Introducción a la bioinformática. Curso 1 Medicina (Abril) 2012 BIOQUÍMICA
Más detallesPCR en Tiempo Real. Introducción
Introducción Página 1 de 6 Introducción general La reacción en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en inglés son PCR ("polymerase chain reaction"), es una técnica que fue desarrollada por Kary Mullis
Más detallesReacción en cadena de la Polimerasa (PCR)
Explicación de TP Nº 2 Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) Química Biológica Patológica Dra. Mariana L. Ferramola Dra. Gabriela Lacoste 2015 Definición de PCR Es la amplificación enzimática de un
Más detallesvelocidades de movimiento mediante la aplicación de un campo eléctrico a través de una matriz porosa
INTRODUCCIÓN En general, la electroforesis es una técnica que separa las moléculas en base a sus diferentes velocidades de movimiento mediante la aplicación de un campo eléctrico a través de una matriz
Más detallesversus PCR en Tiempo Real PCR convencional no es cuantitativo
PCR convencional o PCR de punto final versus PCR en Tiempo Real PCR convencional no es cuantitativo S Lobos C - U de Chile 1 PCR clásico La cantidad de producto no está relacionada con la cantidad de DNA
Más detallesLa PCR. La Reacción en Cadena de la Polimerasa es la herramienta más utilizada
La PCR La Reacción en Cadena de la Polimerasa es la herramienta más utilizada PCR- Ventajas y Usos Amplificación ilimitada de secuencias de interés. Rápida, Sencilla y Eficaz. Técnica altamente sensible
Más detallesDetección de la secuencia Alu mediante la técnica Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR ) N. Rodríguez
Detección de la secuencia Alu mediante la técnica Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR ) N. Rodríguez 1 Objetivos Entender la técnica: Reacción de Polimerasa en Cadena (PCR por sus siglas en inglés)
Más detallesPractica la genética Ficha didáctica del profesorado Bachillerato
Ficha didáctica del profesorado Bachillerato www.eurekamuseoa.es Extracción de ADN Cuál es la función de cada uno de los ingredientes utilizados para realizar la disolución tampón para la visualización
Más detallesPROBLEMAS MÁS FRECUENTES Y POSIBLES SOLUCIONES
PROBLEMAS MÁS FRECUENTES Y POSIBLES SOLUCIONES NO SE PRODUCE REACCIÓN O ÉSTA DECAE POCO DESPUÉS DE COMENZAR No hay ADN o hay menos del necesario No hay cebador o la concentración es inferior a la necesaria.
Más detallesMETODOLOGIA DEL PCR. Lic. Jorge Mato Luis. Laboratorio de Genética Molecular Hospital Clínico Quirúrgico Hermanos Ameijeiras
METODOLOGIA DEL PCR Lic. Jorge Mato Luis Laboratorio de Genética Molecular Hospital Clínico Quirúrgico Hermanos Ameijeiras Desnaturalización del DNA 5 A G G T T A G T G G A C C C T T G A T 3 3 T C C A
Más detallesReacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Dr. Alejandro Leal Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés de "polymerase chain reaction") es un método de amplificación in vitro
Más detallesCLASE DE RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS DE PCR LIC. BIOTECNOLOGÍA 2015
CLASE DE RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS DE PCR LIC. BIOTECNOLOGÍA 2015 DEFINICIÓN PCR: Constituye la técnica más importante para amplificar ácidos nucleicos in vitro. Ambas hebras del DNA de interés son replicadas
Más detallesMICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS 2015 INGENIERÍA EN ALIMENTOS LICENCIATURA EN BIOQUÍMICA TRABAJO PRÁCTICO N 1 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS 2015 INGENIERÍA EN ALIMENTOS LICENCIATURA EN BIOQUÍMICA TRABAJO PRÁCTICO N 1 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) OBJETIVOS - Definir PCR, conocer los reactivos que
Más detallesPRÁCTICAS DE MICROBIOLOGIA CLINICA
PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGIA CLINICA Juan Carlos Rodríguez Hospital General Universitario de Alicante E-mail: rodriguez_juadia@gva.es http://microbiologia-alicante.umh.es CASO CLINICO: Rubéola Evolución
Más detallesCUADERNO DE PRÁCTICAS GENETICA MOLECULAR HUMANA. Grado en Medicina
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR III FACULTAD DE MEDICINA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID CUADERNO DE PRÁCTICAS GENETICA MOLECULAR HUMANA Grado en Medicina CURSO ACADÉMICO 2014/2015 INDICE
Más detallesExperiencias en Q-PCR para la aplicación y diagnóstico en Medicina Humana
Experiencias en Q-PCR para la aplicación y diagnóstico en Medicina Humana MSc. Gonzalo Manrique Laboratorio de Biología Molecular Asociación Española Junio de 2009 INDICE INTRODUCCION (conceptos básicos,
Más detalles- Clonar un gen (molde ADN o ARN)
APLICACIONES PCR Aplicaciones de la PCR - Clonar un gen (molde ADN o ARN) - Secuencia conocida - Genes homólogos en especies próximas (primers degenerados) - Información de secuencia proteica (primers
Más detallesFRAGMENTO OLIGO 5-3 Hebra SECUENCIA 5' - - > 3' TAMAÑO (pb) F1. hmtl 569 L AACCAAACCCCAAAGACACC hmth2982 H CTGATCCAACATCGAGGTCG
ANEXO 1 Protocolo para la PCR para la amplificación del mtdna en 10 fragmentos solapantes: Se prepara la siguiente mezcla: Tampón ( TRIS 100 mm, MgCl 2 12 mm, KCl 500 mm, ph 8,3): 10X dntps : 10 mm (cada
Más detallesBIOTECNOLOGÍA. 1.- Ingeniería Genética, ADN recombinante
BIOTECNOLOGÍA 1.- Ingeniería Genética, ADN recombinante Técnica del ADN recombinante: es la más usada en ingeniería genética, esta basada en el uso de las enzimas de restricción o endonucleasas de restricción
Más detallesFACULTAD REGIONAL ROSARIO
FACULTAD REGIONAL ROSARIO CATEDRA BIOTECNOLOGIA ROFESOR: Ing. Eduardo Santambrosio JTP: Ing. Marta Ortega AUX 1ª : Ing. Pablo Garibaldi PCR (Polymerase chain reaction) Reacción en cadena de la polimerasa
Más detallesMódulo 1 Biología Molecular Genética Molecular II 2009. Módulo 1. Amplificación de un fragmento de ADN genómico por PCR
Módulo 1 Amplificación de un fragmento de ADN genómico por PCR En este primer módulo se amplificará por PCR, mediante el uso de oligonucleótidos específicos, un fragmento de ADN genómico de Aspergillus
Más detallesCURSO DE EXTENSIÓN TEÓRICO PRÁCTICO HERRAMIENTAS EFICIENTES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS DE INTERÉS AGROINDUSTRIAL
LIBRO DE MEMORIAS 2 CURSO DE EXTENSIÓN TEÓRICO PRÁCTICO HERRAMIENTAS EFICIENTES PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS DE INTERÉS AGROINDUSTRIAL Santiago de Cali, 23 al 28 de agosto de 2010 3 Libro de memorias
Más detallesPCR a tiempo real. Sección de Biología Molecular, Servicio de Apoyo a la Investigación, Universidad de Murcia
PCR a tiempo real Sección de Biología Molecular, Servicio de Apoyo a la Investigación, Universidad de Murcia PCR a tiempo real (PCRrt) Aplicaciones: - Cuantificación de ácidos nucleicos (AQ). - Estudio
Más detallesPCR A TIEMPO REAL. María Maiques R4-Bioquímica Clínica 25-Abril-07
PCR A TIEMPO REAL María Maiques R4-Bioquímica Clínica 25-Abril-07 VEAMOS Herramientas para detectar mutaciones Moléculas fluorescentes y tecnología FRET PCR a tiempo real: equipos y métodos de detección
Más detalles3. COMPONENTES. Tampón de electroforesis concentrado 2 x 50 ml 10 X (2 envases 500ml)
PCR SIMULADA Ref.PCR Simulada (4 prácticas) 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO El objetivo de este experimento es introducir a los estudiantes en los principios y práctica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa
Más detallesPROBLEMAS MAS FRECUENTES DURANTE LA SECUENCIACIÓN NO SE PRODUCE REACCION O ESTA DECAE POCO DESPUÉS DE COMENZAR
PROBLEMAS MAS FRECUENTES DURANTE LA SECUENCIACIÓN NO SE PRODUCE REACCION O ESTA DECAE POCO DESPUÉS DE COMENZAR Las causas pueden ser las siguientes: No hay ADN o se encuentra en muy baja concentración.
Más detallesimegen Alfa-1-AT Manual de Usuario Referencia: IMG-211
Manual de Usuario imegen Alfa-1-AT Genotipado de las mutaciones Glu342Lys (PI-Z) y Glu264Val (PI-S) del gen SERPINA1 mediante PCR a tiempo real Referencia: Fabricado en España Garantías y responsabilidades
Más detallesPCR? PCR en el diagnóstico? Objetivo: Obtener un gran número de copias de un fragmento particular de ADN a partir de una cantidad mínima original.
PCR? Objetivo: Obtener un gran número de copias de un fragmento particular de ADN a partir de una cantidad mínima original. PCR en el diagnóstico? A partir de una mezcla compleja de ADN, se puede realizar
Más detallesDiagnóstico Virológico PCR y pruebas rápidas: Gripe A. Carlos Artaza Alvarez MIR 4 Hospital Universitario Fundación Alcorcón
Diagnóstico Virológico PCR y pruebas rápidas: Gripe A. Carlos Artaza Alvarez MIR 4 Hospital Universitario Fundación Alcorcón Reacción en Cadena de la INTRODUCCION: Polimerasa (RCP) Década de los 70: Grandes
Más detallesPráctico: Genética bacteriana 2007.
Práctico: Genética bacteriana 2007. Actividad integrada Departamento de Genética Departamento de Bacteriología y Virología. OBJETIVOS Objetivos generales El estudiante al terminar la actividad práctica
Más detallesProtocolos de secuenciación de ADN
1 Protocolos de secuenciación de ADN Introducción El método de secuenciación utilizado aquí es el desarrollado por Sanger en 1975. Este consiste en la incorporación de didesixinucleótidos marcados fluorescentemente
Más detallesDIAGNOSTICO VIROLOGICO MOLECULAR. Dr. Gerardo Andino
DIAGNOSTICO VIROLOGICO MOLECULAR Dr. Gerardo Andino DIAGNÓSTICO MOLECULAR La tecnología empleada para la detección de genomas virales mediante la amplificación de secuencias específicas (PCR y reacciones
Más detallesTaqMan GMO Maize Quantification Kit. Part No: 4481972
TaqMan GMO Maize Quantification Kit Part No: 4481972 1. Introducción Los organismos modificados genéticamente (OMG) se encuentran ampliamente distribuidos, siendo la soja y el maíz los vegetales que ocupan
Más detallesTécnicas de Biología Molecular
Técnicas de Biología Molecular DNA I. Enzimas de restricción Análisis Las enzimas de restricción fueron aisladas de bacterias; su función natural es proteger contra DNA extraño II. Separación electroforética
Más detallesCaracterización morfo-agronómica y molecular de frijoles criollos de color rojo claro en Nicaragua y de frijoles negros en Ipala, Guatemala
Caracterización morfo-agronómica y molecular de frijoles criollos de color rojo claro en Nicaragua y de frijoles negros en Ipala, Guatemala IICA/Red SICTA-CIAT INFORME DE AVANCE Gerardo Gallego - Harold
Más detallesDETECCIÓN DE C. jejuni EN HAMBURGUESA DE POLLO POR PCR TRADICIONAL PRT-712.04-082
Página 1 de 5 1. OBJETIVO Detectar la presencia de Campylobacter jejuni en hamburguesa de pollo mediante técnica de PCR. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE Aplicar este procedimiento a muestras de hamburguesa
Más detallesDNA RECONBINANTE Depende de enzimas capaces de: Cortar Unir Replicar Transcribir inversamente el RNA Otra herramienta es el uso de Sondas específicas
DNA RECONBINANTE Depende de enzimas capaces de: Cortar Unir Replicar Transcribir inversamente el RNA Otra herramienta es el uso de Sondas específicas ELEMENTOS BÁSICOS DE LA INVESTIGACIÓN EN GENES Análisis
Más detallesPROCEDIMIENTO PARA LA UTILIZACIÓN DEL POLIMORFISMO DEL GEN COMT (CATECOL-OXI-METILTRANSFERASA) EN EL DIAGNÓSTICO DEL SÍNDROME DE FIBROMIALGIA
2 PROCEDIMIENTO PARA LA UTILIZACIÓN DEL POLIMORFISMO DEL GEN COMT (CATECOL-OXI-METILTRANSFERASA) EN EL DIAGNÓSTICO DEL SÍNDROME DE FIBROMIALGIA D E S C R I P C I Ó N OBJETO DE LA INVENCIÓN La presente
Más detallesPRINCIPIOS DE LAS INVESTIGACIONES EPIDEMIOLOGICAS Y MEDICIÓN DE EFECTO-CAUSALIDAD PROGRAMA
PRINCIPIOS DE LAS INVESTIGACIONES EPIDEMIOLOGICAS Y MEDICIÓN DE EFECTO-CAUSALIDAD Curso: 25 Hrs. Asistentes: 25 Costo: $15,000 (Quince Mil Pesos 00/100 M.N) OBJETIVO: Conocer algunos conceptos básicos
Más detallesTécnicas descritas en el curso 7.28
Técnicas descritas en el curso 7.28 Técnica: Clase 1 Experimento de incorporación de dntps Ensayo de extensión del cebador Ensayo de unión en filtro Electroforesis en gel Análisis de ADN Helicasa Polaridad
Más detallesN 1 Reacción n en Cadena de la Polimerasa
Trabajo Práctico N 1 Reacción n en Cadena de la Polimerasa Definición n e importancia. Usos y aplicaciones. Optimización. Tipos de PCR. Electroforesis. Fundamentos. Asociado al Programa Teórico: Tema 2.
Más detallesInstituto de Biomedicina y Biotecnología de Cantabria (IBBTEC) SERVICIO DE SECUENCIACIÓN MASIVA
1. DESCRIPCIÓN DEL SERVICIO El servicio de Secuenciación Masiva tiene como finalidad el proporcionar asesoramiento y soporte técnico a los grupos de investigación interesados en realizar proyectos de ultrasecuenciación.
Más detallesAplicaciones de las Técnicas de Detección de Ácidos Nucléicos en Medicina Transfusional
Aplicaciones de las Técnicas de Detección de Ácidos Nucléicos en Medicina Transfusional BIOQ. LILIANA DI TULLIO BUDASSI FAC. CS.BIOQUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS UNIVERSIDAD NACIONAL DE ROSARIO lilianadt2003@yahoo.com.ar
Más detallesTipos de Muestras. Técnicas de Biología Molecular. Extracción de ácidos nucleicos. Extracción de DNA genómico. Muestra de sangre en papel filtro
Técnicas de Biología Molecular Dr. Luis Salazar N Depto. de Ciencias Básicas / UFRO 2004 Tipos de Muestras Extracción de ácidos nucleicos o DNA o RNA Sangre total (EDTA) Saliva Líquido Amniótico Bulbo
Más detallesTEST de PATERNIDAD. Ref.PCR paternidad (4 prácticas) 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO
Ref.PCR paternidad (4 prácticas) 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO TEST de PATERNIDAD Este experimento introduce a los alumnos en el uso del ADN y la PCR para simular una determinación de paternidad. Los estudiantes
Más detallesVALIDACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE LOS MÉTODOS DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA UTILIZADOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS
CAPÍTULO 1.1.3 VALIDACIÓN Y CONTROL DE CALIDAD DE LOS MÉTODOS DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA UTILIZADOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS RESUMEN El diagnóstico de las enfermedades
Más detallesSECUENCIACIÓN SANGER DE ADN: GUÍA DE SOLUCIONES TÉCNICAS
SECUENCIACIÓN SANGER DE ADN: GUÍA DE SOLUCIONES TÉCNICAS Secugen recomienda que para la visualización de las secuencias se usen programas que permitan ver el dato crudo, ya que a partir de ese dato se
Más detalles5. DETECCION DE GENES DE VIRULENCIA MEDIANTE HIBRIDACIÓN CON SONDAS DE ADN
5. DETECCION DE GENES DE VIRULENCIA MEDIANTE HIBRIDACIÓN CON SONDAS DE ADN Materiales - Eppendorf de 1,5 ml estériles - Eppendorf de pared fina para PCR - Puntas de pipeta estériles desechables - Guantes
Más detallesUsos de Herramientas Moleculares en Agricultura: Marcadores Moleculares. Técnicas Moleculares. Técnicas Moleculares 8/13/13
8/13/13 Usos de Herramientas Moleculares en Agricultura: Marcadores Moleculares CAF516 O Recursos Genéticos y Biotecnología 14 Agosto 2013 Técnicas Moleculares Aplicaciones en muchas disciplinas Generan
Más detallesCONTROL DE LA ACTIVIDAD CELULAR
CONTROL DE LA ACTIVIDAD CELULAR Sumario Las Moléculas de los Seres Vivos Control de la actividad celular 1. Las reacciones celulares básicas 2. El control de las reacciones celulares 3. Los modelos de
Más detallesIES Pando Departamento de Biología y Geología 1
IES Pando Departamento de Biología y Geología 1 2 Células en diversos estadios del ciclo celular en la raíz de ajo. 3 Diversos aspectos del núcleo durante el ciclo celular Ciclo celular 4 Repartición del
Más detalles7.012 Serie de ejercicios 5
Nombre Grupo 7.012 Serie de ejercicios 5 Pregunta 1 Al estudiar los problemas de esterilidad, usted intenta aislar un hipotético gen de conejo que explique la prolífica reproducción de estos animales.
Más detallesPCR. Qué es la PCR? T a de fusión de oligonucleótidos (t m )
% a de fusión de oligonucleótidos (t m ) Qué es la PCR? La reacción en cadena de la polimerasa (PCR: polymerase chain reaction) es una técnica de amplificación de secuencias de DNA in vitro t m = 2 (A
Más detallesSISTEMAS DE DETECCIÓN DE PATÓGENOS POR PCR A TIEMPO REAL. Guía de interpretación de resultados
SISTEMAS DE DETECCIÓN DE PATÓGENOS POR PCR A TIEMPO REAL Guía de interpretación de resultados Sistemas de detección de patógenos por PCR a tiempo real Microbial ofrece sistemas para la detección de patógenos
Más detallesGenómica y transcriptómica para la generación de datos en Evolución
recuadro Genómica y transcriptómica para la generación de datos en Evolución Gabriela Bedó Genómica. Sus objetivos Compilar todas las secuencias de un organismo Establecer la localización de los genes
Más detallesELECTROFORESIS AVANZADA
Ref.ELECAVANZADA (4 prácticas) 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO ELECTROFORESIS AVANZADA El objetivo de este experimento es introducir a los alumnos en el conocimiento de la teoría electroforética y familiarizarse
Más detallesCAPÍTULO VI. Expresión de genes relacionados con apoptosis
CAPÍTULO VI Expresión de genes relacionados con apoptosis 1.- Introducción 2.- Protocolos para análisis genéticos 3.- Resultados en MCF-7 4.- Discusión 1.- Introducción Como se ha descrito anteriormente,
Más detallesCuantificación de Legionella mediante real time PCR. Resultados de un estudio experimental.
Cuantificación de Legionella mediante real time PCR. Resultados de un estudio experimental. Gemma Saucedo. Laboratorio Aguas de Barcelona 22-23 de noviembre de 2006 Introducción PCR: Polymerase Chain Reaction
Más detallesREACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Microbiología General Microbiología M de los Alimentos Licenciatura en Bioquímica i Ingeniería en alimentos c Microbiología r 2015 Licenciatura en Biotecnología
Más detallesClonación molecular. Clonar significa hacer copias idénticas
INGENIERÍA GENÉTICA Clonación molecular Clonar significa hacer copias idénticas Este término originalmente fue aplicado al procedimiento de aislar una célula y permitirle reproducirse creando una población
Más detallesELECTROFORESIS BASICA
Ref.ELECBASICA (4 prácticas) 1.OBJETIVO DEL EXPERIMENTO ELECTROFORESIS BASICA El objetivo de este experimento es introducir a los alumnos en el conocimiento de la teoría electroforética y familiarizarse
Más detallesTécnica de PCR. Beatriz Bellosillo. Servei de Patologia, Hospital del Mar, Barcelona, Spain
Técnica de PCR Beatriz Bellosillo Servei de Patologia, Hospital del Mar, Barcelona, Spain Biología Molecular Estudio de los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular
Más detallesTécnicas de Biología Molecular. Dr. Luis Salazar N Depto. de Ciencias Básicas / UFRO
Técnicas de Biología Molecular Dr. Luis Salazar N Depto. de Ciencias Básicas / UFRO 2004 Extracción de ácidos nucleicos o o DNA RNA Tipos de Muestras Sangre total (EDTA) Saliva Líquido Amniótico Bulbo
Más detallesRESULTADOS Y DISCUSIÓN. Estimación de la Concentración Proteica del Filtrado de Cultivo de Mycobacterium tuberculosis H37Rv
RESULTADOS Y DISCUSIÓN Estimación de la Concentración Proteica del Filtrado de Cultivo de Mycobacterium tuberculosis H37Rv La curva estándar con la que se estimó la concentración proteica del filtrado
Más detallesPROCEDIMIENTO DE EVALUACIÓN Y ACREDITACIÓN DE LAS COMPETENCIAS PROFESIONALES CUESTIONARIO DE AUTOEVALUACIÓN PARA LAS TRABAJADORAS Y TRABAJADORES
MINISTERIO DE EDUCACIÓN SECRETARÍA DE ESTADO DE EDUCACIÓN Y FORMACIÓN PROFESIONAL DIRECCIÓN GENERAL DE FORMACIÓN PROFESIONAL INSTITUTO NACIONAL DE LAS CUALIFICACIONES PROCEDIMIENTO DE EVALUACIÓN Y ACREDITACIÓN
Más detallesVeamos rápidamente el ciclo celular
Replicación del adn Veamos rápidamente el ciclo celular Fase G1: Fase de crecimiento celular. Fase G2: la célula ya duplicó su material genético, y se prepara para la mitosis. Fase M: fase de división
Más detalles5. MATERIALES Y MÉTODOS
5. MATERIALES Y MÉTODOS 5.1 Equipos Los siguientes termocicladores se emplearon para la amplificación por PCR: - Perkin Elmer, GeneAmp PCR System 2400. - Perkin Elmer, GeneAmp PCR System 9600. - Applied
Más detallesTécnicas de ADN recombinante: la manipulación genética
Técnicas de ADN recombinante: la manipulación genética A partir de los años 70 se desarrollaron las herramientas de la biología molecular o la ingeniería genética o lo que se ha llamado técnicas del ADN
Más detallesUNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS EN BIOTECNOLOGÍA PCR
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS EN BIOTECNOLOGÍA PCR ALUMNOS: CORTAZAR MARTÍNEZ ADRIANA SILVA RINCÓN ELSA PATRICIA JUNIO, 2004 1 ÍNDICE Introducción
Más detallesIII. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
III. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL 3.1 Análisis Previos Se utilizaron los filtros con muestra de partículas suspendidas en el aire PM 10 que el Instituto Municipal de Ecología (IME) proporcionó para llevar
Más detallesADN y RNA caracterización y métodos de estudio
ADN y RNA caracterización y métodos de estudio Separación por centrifugación de equilibrio en gradiente de densidad de en CsCl Separación por centrifugación de equilibrio en gradiente de densidad de en
Más detalles11.2-DISCUSIÓN Prueba rápida
11.2-DISCUSIÓN Prueba rápida Como se observa en la tabla 9 del total de las embarazadas (62,214) a las que se les realizo la prueba rápida un 99.3%(61,808) de ellas dio como resultado no reactivo, tan
Más detallesCAPÍTULO III. Metodología e instrumentación de análisis celular
CAPÍTULO III Metodología e instrumentación de análisis celular 1.- Hemocitómetro y test de exclusión de colorante Trypan blue 2.- Citometría de flujo 3.- PCR 4.- Electroforesis en gel 5.- Secuenciación
Más detallesInstituto de Biomedicina y Biotecnología de Cantabria (IBBTEC) SERVICIO DE SECUENCIACIÓN MASIVA
1. DESCRIPCIÓN DEL SERVICIO El servicio de Secuenciación Masiva tiene como finalidad el proporcionar asesoramiento y soporte técnico a los grupos de investigación interesados en realizar proyectos de ultrasecuenciación.
Más detallesMÓDULO: GESTIÓN DE RESIDUOS TEMA: DESMINERALIZACIÓN
MÓDULO: GESTIÓN DE RESIDUOS TEMA: DESMINERALIZACIÓN DOCUMENTACIÓN ELABORADA POR: NIEVES CIFUENTES MASTER EN INGENIERIÁ MEDIOAMBIENTAL Y GESTIÓN DEL AGUA ÍNDICE 1. INTRODUCCIÓN 2. INTERCAMBIO IÓNICO 3.
Más detallesCriterios para diseñar primers. Iván Ferrer Rodríguez, Ph.D. Catedrático
Criterios para diseñar primers Iván Ferrer Rodríguez, Ph.D. Catedrático 1 Qué es un primer? Es una cadena corta de nucleótidos, un oligonucleótido. Sirve como punto de partida para la replicación del DNA.
Más detallesTaqMan GMO Screening Kit. Part No: 4466334
TaqMan GMO Screening Kit Part No: 4466334 1. Introducción Los organismos modificados genéticamente (OMG) se encuentran ampliamente distribuidos, siendo la soja y el maíz los vegetales que ocupan mayor
Más detallesAUTOR: JORGE CONTRERAS PINEDA 1. Titulo:
Página 1 de 1 1. Titulo: Electroforesis de DNA 2. Objetivo Conocer los principios básicos de la electroforesis horizontal en geles de agarosa y aplicarlo para la separación de DNA humano, plasmídico, recombinante
Más detalles1. Título. Cuantificacion de ADN por espectrofluorometría mediante el uso de Quant- it PicoGreen dsaadnssay Kit (Invitrogen ).
1. Título. Cuantificacion de ADN por espectrofluorometría mediante el uso de QuantiT PicoGreen dsaadnssay Kit (Invitrogen ). 2. Finalidad. El presente documento describe el Procedimiento Normalizado de
Más detalles