11 kn. de publicación: ES kint. Cl. 5 : C12P 21/08

Transcripción

1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 kn. de publicación: ES kint. Cl. 5 : C12P 21/08 A61K 39/395 A61K 49/00 G01N 33/577 //(C12P 21/08 C12R 1/91) 12 k TRADUCCION DE REIVINDICACIONES DE SOLICITUD T1 DE PATENTE EUROPEA 86 k Número de solicitud europea: k Fecha de presentación de la solicitud: knúmero de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 30 Prioridad: FR k 71 Solicitante/s: Commissariat a l Energie Atomique 31/33, rue de la Fédération F Paris, FR k 43 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Frobert, Yveline y Grassi, Jacques k 46 Fecha de publicación de la traducción de las reivindicaciones: k 74 Agente: Gil Vega, Víctor k 54 Título: Procedimiento de preparación de anticuerpos monoclonales específicos de las interleucinas 1α y1β. Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 REIVINDICACIONES 1. Procedimiento de preparación de anticuerpos monoclonales específicos de las IL-1α y1β, caracterizado porque incluye la inmunización de mamíferos, en particular roedores, y más particularmente ratones, por unas IL-α o-1β según el caso, que reconocen específicamente las II-1α recombinantes o las IL-β naturales o recombinantes que no presentan prácticamente ninguna reacción cruzada entre las dos IL-1, teniendo dichos anticuerpos una constante de disociación inferior a , porque se componen de varios grupos que reconocen regiones distintas de las IL-1α ó -1β y cuyos anticuerpos de ciertos grupos son aptos para unirse de manera compatible con todos los anticuerpos de los demás grupos, a saber: - los anticuerpos anti-il-1α se componen de tres grupos (A, B y C) que reconocen tres regiones distintas de la interleucina-1α, siendo todos los anticuerpos de un grupo aptos para unirse de manera compatible con todos los anticuerpos de los otros dos grupos, pero no siendo compatibles con otro anticuerpo del mismo grupo; - los anticuerpos anti-il-1β se componen de cuatro grupos, cuyos dos primeros (A y B) tienen un comportamiento similar al de los anticuerpos anti-il-1α, cuyos anticuerpos del grupo C son compatibles con un solo anticuerpo de los dos primeros grupos y cuyos anticuerpos del cuarto grupo (D) son incompatibles con uno cualquiera de los anticuerpos de los tres primeros grupos, y no se unen a la IL-1-β nativa recombinante, reconocen una interleucina -1β modificada y reaccionan con un conjunto IL-1-β-AChE; y porque dichos anticuerpos anti-il-1α y anti-il-1β reconocen los conjugados IL-1α o1β/acetilcolinesterasa (AChE). 2. Procedimiento de preparación de los anticuerpos monoclonales según la reivindicación 1, caracterizado porque dichos anticuerpos ponen en práctica hibridomas utilizados para la utilización de anticuerpos monoclonales anti-il-1α y anti-il-1β de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2 depositados en la Collection Nationales de Cultures de Microorganismes (CNCM) (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos) mantenido por el Institute Pasteur, con fecha del 8 de Diciembre de 1988 e identificados en esta Colección bajo los números I-823, I-824, I-825, I-826, I-827, I-828, I Procedimiento de producción de fragmentos Fab de los anticuerpos monoclonales antiinterleucina-1α o1β según la reivindicación 1, caracterizado porque dichos anticuerpos monoclonales se tratan con pepsina en medio ácido, para obtener fragmentos F(ab ) 2 queseaislanporcromatografía sobre tamiz molecular, y porque estos fragmentos F(ab ) 2 se someten a un proceso de reducción progresica, por un agente reductor apropiado, tal como la β-mercaptoetilamina (βmea), para obtener un fragmento Fab que se purifica mediante paso por una columna de cromatografía sobre tamiz molecular Procedimiento de producción de conjugados de AChE y de anticuerpos monoclonales enteros anti-il-1α o anti-il-1β y de conjugados de AChE y de fragmentos de anticuerpos monoclonales anti-il-1-α o anti-il-1-β, en particular fragmentos Fab de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque por lo menos un grupo tiol incorporado o presente naturalmente en uno de los fragmentos, se acopla con por lo menos un grupo maleimido incorporado en AChE por medio de un agente de acoplamiento apropiado tal como en particular, un ester de N-hidroxi-succinimida. 5. Test inmunoenzimático por competición, de detección de la IL-1α y de la IL-1β en el material florante de cultivos celulares y en fluidos biológicos, caracterizado porque un anticuerpo monoclonal anti-il-1α o anti-il-1β apropiado, utilizando como primer anticuerpo, y unas IgG sostenidas por un soporte apropiado, utilizadas como segundo anticuerpo, se ponen en contacto con conjugados de IL-1-AChE, que hacen el papel de trazadores, y con interleucina-1α o-1β, después de lo cual se revela la actividad AChE por cualesquiera medios apropiados. 6. Test enzimo-inmunométrico altamente específico y sensible, de detección de la IL-1-α y de la IL-1β en material flotante de cultivos celulares y de fluidos biológicos, caracterizado porque unos anticuerpos monoclonales anti-il-1α y/o anti-il-1β sostenidos por un soporte apropiado se ponen en contacto con IL-1α o-1β ycon conjugado Acm-AChE, después de lo cual se revela la actividad AChE por cualesquiera medios apropiados. 7. Test según la reivindicación 6, caracterizado porque la IL-1α o-il-1β se añade al anticuerpo simultáneamente con el conjugado AChE y los dos anticuerpos monoclonales reaccionan simultáneamente con la IL-1α o-1β. 8. Test según la reivindicación 6, caracterizado porque la IL-1α o-1β se introducen en primer lugar y reacciona con el anticuerpo fijado en el soporte, después de lo cual se introduce el conjugado Acm-AChE y se revela la actividad AChE por cualesquiera medios apropiados. 9. Kit para la realización de tests inmunoenzimáticos por competición, según la reivindicación 5, caracterizado porque incluye: unaseriedeplacasdemicrotitulación revestidas de un anticuerpo constituido por IgG de conejo anti-ratón; por lo menos un frasco conteniendo dosis apropiadas de anticuerpo monoclonal anti- IL-1α y/o de anticuerpo monoclonal anti- IL-1β; por lo menos un frasco conteniendo conjugados de IL-1α ydeachey/oporlomenos un frasco conteniendo conjugados de IL-1β ydeache; cantidades o dosis apropiadas de un substrato de revelación del AChE; cantidades o dosis apropiadas de IL-1α y/o de IL-1β.

3 Kit para la realización de test inmunométricos según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8,caracterizado porque incluye: unaseriedeplacasdemicrotitulación revestidas de anticuerpos monoclonales anti-il- 1α yanti-il-1β; por lo menos un frasco conteniendo conjugados de AChE y de anticuerpos monoclonales anti-il-1β; cantidades o dosis apropiadas de un substrato de revelación del AChE; cantidades o dosis apropiadas de IL-1α y/o IL-1β. 11. Procedimiento de preparación de agentes de uso terapéutico, caracterizado porque dichos agentes incluyen como constituyentes activos, una mezcla de anticuerpos monoclonales anti-il-1α y/o anticuerpos anti-il-1β y/o sus fragmentos, solos o conjugados o hibridados o asociados con otras sustancias. (Reserva del art CPE). 12. Procedimiento de preparación de agentes de diagnóstico apropiados para ser utilizados para el diagnóstico in vivo, caracterizado porque dichos agentes incluyen anticuerpos anti-il- 1α y/o anticuerpos anti-il-1β o sus fragmentos, asociados a un antígenoy/oaunhaptenoy/oa otro anticuerpo o fragmento de anticuerpo, y/o marcados por marcadores estables o radiactivos. (Reserva del art CPE). Las reivindicaciones con la mención del art del Convenio Europeo de Patentes no producirán efectos en España en la medida en que confieran protección a productos químicos o farmacéuticos, conforme a la disposición transitoria del RD 2424/1986, de 10 de Octubre relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea (CPE)

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