APOPTOSIS Y ESTRES OXIDATIVO EN ESPERMATOZOIDES DE PACIENTES CON PATOLOGIAS QUE CONDUCEN A INFERTILIDAD

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1 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 1 FONDECYT-REGULAR APOPTOSIS Y ESTRES OXIDATIVO EN ESPERMATOZOIDES DE PACIENTES CON PATOLOGIAS QUE CONDUCEN A INFERTILIDAD Programa: Fondecyt Regular Los metabolitos reactivos del oxígeno ejercen diversas funciones en la fisiología celular. Por una parte, actúan como moduladores fisiológicos participando en una variedad de procesos de transducción de señales en diferentes tipos celulares, que incluyen al espermatozoide, y por otra parte se les asocia a envejecimiento, enfermedad y apoptosis.la participación del estrés oxidativo en la etiología de la infertilidad masculina ha quedado establecida a través de numerosos estudios. Las especies reactivas del oxígeno (EROs) juegan un papel importante en la alteración de la función espermática, a través de mecanismos que inducen daño peroxidativo a las membranas y oxidación de proteínas que cumplen funciones claves durante la interacción gamética. Además, las EROs pueden inducir daño oxidativo al DNA con profundas implicaciones tanto para el desarrollo embrionario normal como para el desarrollo ulterior del individuo.durante los últimos años se ha sugerido, que la producción no controlada de estos intermediarios oxigénicos, así como la deficiencia de los sistemas de defensa antioxidante tendrían un papel crítico en la regulación de la muerte celular programada, o apoptosis, en diversos sistemas biológicos. En este contexto, se ha propuesto que Bcl-2, regulador antiapoptótico, protege a las células de la apoptosis debido a su capacidad de reducir la producción de metabolitos reactivos del oxígeno. Por esta razón, la condición de estrés oxidativo, que se sabe ejerce un efecto deletéreo sobre la función del espermatozoide eyaculado, podría además ser responsable de gatillar la apoptosis en las células espermatogénicas intratesticulares.el propósito de esta investigación es estudiar la integridad del genoma en espermatozoides de pacientes portadores de condiciones fisiopatológicas que frecuentemente conducen a infertilidad. El grupo de estudio incluirá 75 pacientes portadores de patologías caracterizadas por alteraciones del microambiente testicular asociadas a la generación de estrés oxidativo, y 25 donantes controles normales. Los pacientes se dividirán en tres grupos: 1) con infertilidad primaria que presentan oligozoospermia idiopática y soliciten tratamiento de Reproducción Asistida: Fecundación in vitro (FIV) e Inyección Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI) 2) afectados de varicocele y 3) con antecedentes de criptorquídea.los espermatozoides serán separados del plasma seminal y seleccionados por migración en medios de cultivo.la integridad del DNA será evaluada en las fracciones total (no seleccionada) y seleccionada de espermatozoides mediante la técnica de TUNEL y el ensayo Cometa. La presencia en los espermatozoides del marcador de apoptosis, proteína FAS, se realizará por inmunodetección en un citómetro de flujo (FACScan). Los resultados obtenidos serán relacionados con la producción de

2 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 2 especies reactivas del oxígeno (evaluada por quimioluminiscencia), la susceptibilidad de los espermatozoides al estrés oxidativo y la capacidad antioxidante (TRAP) de los correspondientes plasmas seminales. En el grupo de pacientes afectados de oligozoospermia idiopática, se correlacionarán los parámetros estudiados con los resultados de la FIV y del ICSI ( tasa de fecundación y calidad del desarrollo embrionario). Debido al interés biológico del antioxidante, N-acetil-L-cisteína, se estudiará su efectividad en la protección al daño al DNA inducido por los metabolitos reactivos del oxígeno.la presencia de daño genético en los espermatozoides de pacientes infértiles o portadores de patologías que conducen a infertilidad, constituye actualmente un área relevante de investigación en el campo de la infertilidadesto, debido a las consideraciones éticas que genera el riesgo potencial de microinyectar un espermatozoide defectuoso o con daño en el DNA, en el citoplasma ovular durante los procedimientos de Reproducción Asistida. Antecedentes # Nombre : APOPTOSIS Y ESTRES OXIDATIVO EN ESPERMATOZOIDES DE PACIENTES CON PATOLOGIAS QUE CONDUCEN A INFERTILIDAD # Número : # Año Concurso : 2001 # Concurso : FONDECYT-REGULAR # Consejo : TECNOLOGIA # Duración : 3 años # Estado : APROBADO # Sector de Aplicación : CONOCIMIENTO GENERAL Los metabolitos reactivos del oxígeno ejercen diversas funciones en la fisiología celular. Por una parte, actúan como moduladores fisiológicos participando en una variedad de procesos de transducción de señales en diferentes tipos celulares, que incluyen al espermatozoide, y por otra parte se les asocia a envejecimiento, enfermedad y apoptosis. La participación del estrés oxidativo en la etiología de la infertilidad masculina ha quedado establecida a través de numerosos estudios. Las especies reactivas del oxígeno (EROs) juegan un papel importante en la alteración de la función espermática, a través de mecanismos que inducen daño peroxidativo a las membranas y oxidación de proteínas que cumplen funciones claves durante la interacción gamética. Además, las EROs pueden inducir daño oxidativo al DNA con profundas implicaciones tanto para el desarrollo embrionario normal como para el desarrollo ulterior del individuo. Durante los últimos años se ha sugerido, que la producción no controlada de estos intermediarios oxigénicos, así como la deficiencia de los sistemas de defensa antioxidante tendrían un papel crítico en la regulación de la muerte celular programada, o apoptosis, en diversos sistemas biológicos. En este contexto, se ha propuesto que Bcl-2, regulador antiapoptótico, protege a las células de la apoptosis debido a su capacidad de reducir la producción de metabolitos reactivos del oxígeno. Por esta razón, la condición de estrés oxidativo, que se sabe ejerce un efecto deletéreo sobre la función del espermatozoide eyaculado, podría además ser responsable de gatillar la apoptosis en las células espermatogénicas intratesticulares.

3 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 3 El propósito de esta investigación es estudiar la integridad del genoma en espermatozoides de pacientes portadores de condiciones fisiopatológicas que frecuentemente conducen a infertilidad. El grupo de estudio incluirá 75 pacientes portadores de patologías caracterizadas por alteraciones del microambiente testicular asociadas a la generación de estrés oxidativo, y 25 donantes controles normales. Los pacientes se dividirán en tres grupos: 1) con infertilidad primaria que presentan oligozoospermia idiopática y soliciten tratamiento de Reproducción Asistida: Fecundación in vitro (FIV) e Inyección Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI) 2) afectados de varicocele y 3) con antecedentes de criptorquídea. Los espermatozoides serán separados del plasma seminal y seleccionados por migración en medios de cultivo. La integridad del DNA será evaluada en las fracciones total (no seleccionada) y seleccionada de espermatozoides mediante la técnica de TUNEL y el ensayo Cometa. La presencia en los espermatozoides del marcador de apoptosis, proteína FAS, se realizará por inmunodetección en un citómetro de flujo (FACScan). Los resultados obtenidos serán relacionados con la producción de especies reactivas del oxígeno (evaluada por quimioluminiscencia), la susceptibilidad de los espermatozoides al estrés oxidativo y la capacidad antioxidante (TRAP) de los correspondientes plasmas seminales. En el grupo de pacientes afectados de oligozoospermia idiopática, se correlacionarán los parámetros estudiados con los resultados de la FIV y del ICSI ( tasa de fecundación y calidad del desarrollo embrionario). Debido al interés biológico del antioxidante, N-acetil-L-cisteína, se estudiará su efectividad en la protección al daño al DNA inducido por los metabolitos reactivos del oxígeno. La presencia de daño genético en los espermatozoides de pacientes infértiles o portadores de patologías que conducen a infertilidad, constituye actualmente un área relevante de investigación en el campo de la infertilidad Esto, debido a las consideraciones éticas que genera el riesgo potencial de microinyectar un espermatozoide defectuoso o con daño en el DNA, en el citoplasma ovular durante los procedimientos de Reproducción Asistida. Resultados ARTICULOS # ABSENCE OF FAS PROTEIN DETECTION BY FLOW CYTOMETRY IN HUMAN SPERMATOZOA, FERTILITY AND STERILITY, VOL.81 (4) # PARODI, DANIELA

4 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 4 EVENTOS # ACTIVIDAD PROOXIDANTE Y ANTIOXIDANTE EN PACIENTES CON VARICOCELE, # DIAZ FONTDEVILA, MARINA FATIMA # SMITH GARCES, ROSITA CECILIA # VANTMAN BRETSCHNEIDER, DAVID JACOBO. # ESTRES OXIDATIVO E INDUCCION DE APOPTOSIS EN PACIENTES CON VARICOCELE, En: 13º CONGRESO CHILENO DE ENDOCRINOLOGIA Y METABOLISMO. PULLEHUE, CHILE # DIAZ FONTDEVILA, MARINA FATIMA # SMITH GARCES, ROSITA CECILIA # VANTMAN BRETSCHNEIDER, DAVID JACOBO.

5 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 5 # ESTRES OXIDATIVO Y DAÑO AL DNA EN PACIENTES CON VARICOCELE, En: 18º REUNION DE LA ASOCIACION LATINOAMERICANA DE INVESTIGADORES EN REPRODUCCION HUMANA. CUBA REVISTA CUBANA DE SALUD PUBLICA, VOL.29 (1) # PARODI, DANIELA # ESTRES OXIDATIVO Y SU RELACION CON EL VARICOCELE: ESTUDIO PRELIMINAR, # ALBORNOZ VALDES, JAIME ANDRES # VANTMAN BRETSCHNEIDER, DAVID JACOBO. # ESTRUCTURA DE LA CROMATINA, APOPTOSIS Y EXPRESION DE FAS EN ESPERMATOZOIDES DE INDIVIDUOS CON VARICOCELE, En: 13º REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y DESARROLLO. LA SERENA, CHILE # DIAZ FONTDEVILA, MARINA FATIMA

6 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 6 # DELRIO, M # GAZZO, M # PARODI, DANIELA. # EXPRESION DEL SISTEMA FAS/FASL EN TEJIDO TESTICULAR HUMANO, En: 14º REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y DESARROLLO. LA SERENA, CHILE # GABLER, F # QUEZADA, S. # INCREASED SPERM DNA DAMAGE IN MEN WITH VARICOCELE, En: 19º ESHRE ANNUAL MEETING. MADRID, ESPANA HUMAN REPRODUCTION, VOL # PARODI, DANIELA # MARCADORES DE ESTRES OXIDATIVO EN FLUIDO FOLICULAR DE PACIENTES TRATADAS CON AGNRH DURANTE LA FECUNDACION IN VITRO, En: 18º REUNION DE LA ASOCIACION LATINOAMERICANA DE

7 CONICYT: Repositorio Institucional: Ficha de Iniciativa de CIT (Ciencia, Tecnología e Innovación) 7 INVESTIGADORES EN REPRODUCCION HUMANA. CUBA REVISTA CUBANA DE SALUD PUBLICA. # ACOSTA, A # IÑIGUEZ, GERMAN # POMMER TELLEZ, RICARDO AGUSTIN. # PRODUCCION DE ESPECIES REACTIVAS DEL OXIGENO Y DAÑO AL DNA EN PACIENTES CON VARICOCELE, En: 14º REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y DESARROLLO. LA SERENA, CHILE # PARODI, DANIELA INFORME FINAL # APOPTOSIS Y ESTRES OXIDATIVO EN ESPERMATOZOIDES DE PACIENTES CON PATOLOGIAS QUE CONDUCEN A INFERTILIDAD, p.

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