TÉCNICAS REPRODUCTIVAS EN LAS ENFERMEDADES HEREDITARIAS

Transcripción

1 3r curso de actualización en habilidades médicas y de enfermería Dra. Noemí Galindo IVI-Alicante Noemi.Galindo@ivi.es PÁG.1 TÉCNICAS REPRODUCTIVAS EN LAS ENFERMEDADES HEREDITARIAS Alcoi, 8 de Marzo 2012

2 Introducción Óvulo Espermatozoide 23 cromx 23 cromx 46 XX 46 XY PÁG.2

3 Incidencia Anomalías cromosómicas: 0,4-0,6 % Alteraciones génicas : 1-2 % Herencia recesiva 25 % Herencia recesiva 25 % Herencia dominante 50 % Herencia dominante 50 % PÁG.3

4 Opciones Diagnóstico prenatal aborto terapéutico Donación de gametos Donación de embriones Adopción DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL PÁG.4

5 DIAGNÓSTICO PREIMPLANTACIONAL Procedimientos 1. Selección n de pacientes 2. Estimulación-ICSI-cultivo cultivo 3. Biopsia y fijación 4. Análisis Genético 5. Transferencia PÁG.5

6 DGP: Selección de pacientes Ley 14/2006, 26 de mayo, sobre Técnicas de Reproducción Humana Asistida. Artículo 12. Diagnóstico preimplantacional. Los centros debidamente autorizados podrán practicar DPI para: a) Detección de enfermedades hereditarias graves, de aparición precoz, y no susceptibles de tratamiento curativo posnatal con arreglo a los conocimientos científicos actuales b) La detección de otras alteraciones que puedan comprometer la viabilidad del preembrión. Otra finalidad no comprendida o determinación de los Antígenos de histocompatibilidad con fines terapéuticos para terceros requerirán autorización expresa. PÁG.6

7 DGP: Selección de pacientes DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL Cariotipos anormales (PGD) Alteraciones estructurales: - Traslocaciones robertsonianas - Traslocaciones recíprocas - Inversiones Alteraciones numéricas: - varón: 47, XYY; 47, XXY - mosaicismos:45,x/46,xx/47,xxx Enfermedades monogénicas PÁG.7

8 DGP: Selección de pacientes ENFERMEDADES MONOGÉNICAS Enfermedades Autosómicas Recesivas Atrofia Muscular Espinal Fibrosis Quística β-talasemia Defecto de la Glicosilación (CDG1A) Sordera congénita neurosensorial no sindrómica Poliquistosis renal (ARPKD) Leucodistrofia metacromática Deficit 21-Hidroxilasa Enfermedad Gaucher Tirosinemia tipo 1 Linfohistiocitosis familiar Acidemia propiónica A Acidemia propiónica B Mucopolisacaridosis IIIA (SanFilippo A) Displasia hidrótica ectodérmica, Síndrome de Clouston Déficit L-CHAD Osteopetrosis, Inmunodeficiencia combinada severa, alinfocítica Enfermedades con herencia ligada al cromosoma X Enfermedades Autosómicas Dominantes Distrofia Miotónica, Steinert Huntington Poliquistosis Renal, AD. Ligada a PKD1 Neurofibromatosis tipo 1 Charcot-Marie-Tooth 1A Ataxia Espinocerebelar, SCA1, SCA3 Esclerosis tuberosa tipo 1 Exostosis múltiple hereditaria Neoplasia Múltiple Endocrina 2A Cáncer colon hereditario, no polipósico (S. Lynch) Poliposis adenomatosa familiar Esclerosis tuberosa tipo 2 Síndrome Von Hippel Lindau Paraparesia espástica familiar Poliquistosis Renal, AD. Ligada a PKD2 Retinosis Pigmentaria PÁG.8 Síndrome de X frágil Hemofilia A Distrofia Muscular Duchenne/Becker S. Alport Incontinencia Pigmenti Déficit Ornitin Transcarbamilasa Enfermedad de Norrie Mucopolisacaridosis II Mucopolisacaridosis IIIA

9 DGP: Selección de pacientes Selección de embriones euploides: -Mejorar la implantación -Disminuir la tasa de aborto -Reducir el riesgo de cromosomopatías SCREENING GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL de Aneuploidías (PGS) Parejas mal pronóstico reproductivo Edad materna avanzada ( 41 a) Fallo de implantación Abortos recurrentes PÁG.9 FISH espermatozoides anormal

10 QUÉ CROMOSOMAS analizamos????? Monosomía X 8,6 Trisomía autosómicas 26,1 Trisomía 13 1,1 Trisomía 15 1,7 Trisomía 16 7,5 Trisomía 18 1,1 Trisomía 21 2,3 Trisomía 22 2,7 Trisomías sexuales 0,3 Poliploidía 9,8 Anomalías estructurales 2,0 DGP: Selección de pacientes 13,15,16,17,18, 21,22,X,Y PÁG.10 Datos de Hassold et al, 1996 (n=4088)

11 SGP: Selección de pacientes Estudio randomizado IVI: EDAD MATERNA AVANZADA Criterios de inclusión: n: análisis retrospectivo para seleccionar rango edad años DGP: Selección de pacientes O N G O I N G PÁG.11 Edad

12 Fallo repetido de implantación SGP: Selección de pacientes 3 fallos FIV/ICSI, <40 años, 6 MII Estudio previo de infertilidad: Ecografia vaginal (histeroscopia si es necesario) Cariotipos de la pareja Estudio de trombofilias: anticuerpos anticardiolipina y lupus anticoagulante; Antitrombina III; APCR (si positiva, mutación del factor V de Leiden); niveles de proteina C y S; Homocisteina sérica y screening de mutaciones MTHFR y factor II. PÁG.12

13 ABORTO DE REPETICIÓN Aborto de repetición: estudio retrospectivo SGP: Selección de pacientes Improved results in RM patients: - < 5 abortos previos - Gestación previa anormal - Aumento de anomalías cromosómicas masculinas Gestación/transfer Tasa de implantación Tasa de aborto Resultados en AR < 38 años: - 57% embriones anormales - 53,1% gestación evolutiva/transfer - 13,0% aborto 2 abortos n=105 PÁG.13 3 abortos n=76 4 abortos n=56 > 5 abortos n=16-44,1 gestación evolutiva/ciclo

14 SGP: Selección de pacientes PARÁMETROS SEMINALES ALTERADOS Oligozoospermia severa < 5 mill espermatozoides/ml Teratozoospermia severa disomía para cromosomas sexuales disomía 21 diploidía y poliploidía (Moosani, 1995; In t Veld, 1997; Rubio, 2001; Bernardini, 1998; Pang, 1999; Pfeffer, 1999; Bernardini, 2000; Vegetti, 2000; Ushijima, 2000; Nishikawa, 2000; Calogero, 2001; Devillard, 2002 ; Martin, 2003; Mateu, 2006) PÁG.14

15 SGP: Selección de pacientes FACTOR MASCULINO Azoospermia no obstructiva Teratozoospermia severa Oligozoospermia severa (<5 mill/ml) 60 % FISH anormal >4-<10 10-<20 20 PÁG.15 Rodrigo et al., 2009

16 Diagnóstico preimplantatorio Conlleva un tratamiento de Fecundación in vitro, en el que se obtienen varios embriones para su análisis. Ventaja: se trata de parejas infértiles PÁG.16

17 Cronología Consejo genético 2.- Estimulación ovárica-icsi-cultivo 3.- Micromanipulación embrionaria 4.- Análisis genético 5.- Transferencia embrionaria PÁG.17

18 Estimulación ovárica Protocolos con análogos de la GnRH PÁG.18

19 Punción folicular transvaginal Obtención de ovocitos: punción Quirófano Laboratorio de FIV PÁG.19

20 +/- vitrificación de ovocitos D5: Transferencia embriones sanos D3: Diagnóstico genético Tasa fecundación ICSI Ovocitos MII Ovocitos punción Estimulación ovárica PÁG.20

21 Inyección intracitoplasmática de espermatozoides PÁG.21 Es la fecundación del ovocito mediante la introducción de un espermatozoide con la ayuda de una micropipeta

22 DGP: implicación clínica Desarrollo embrionario NO selecciona anomalías cromosómicas Magli MC et al (2000), Sandalinas M et al (2001), Ziebe S et al (2003), Munné S (2004), Rubio C (2007) PÁG.22 FISH de espermatozoides

23 Información genética Información genética de la célula embrionaria Polar Body biopsy Cleavage stage biopsy Blastocyst biopsy Day-0 Day-1 Day-3 Day-5 PÁG.23

24 DGP: biopsia de blastómera y fijación Rotura de la zona pelúcida Aspiración de las blastómeras PÁG.24 Fijación de las blastómeras

25 jcmr2 DGP: análisis genético PCR: reacción en cadena de la polimerasa FISH: hibridación in situ fluorescente: 9 cromosomas. PÁG.25

26 Diapositiva 25 jcmr2 Independientemente de las muestras con las que estemos trabajando, qué nivel de análisis abarcamos? Julio Martín ; 05/05/2002

27 DGP: análisis genético: PCR PCR: Mutaciones génicas Fibrosis quística Distrofia Test muscular informatividad de Duchenne previo: Síndrome de mutaciones Marfan Distrofia miotónica marcadores genéticos Retinitis pigmentosa Síndrome del X-frX frágil Corea de Huntington ß - Talasemia... PÁG.26

28 DGP: análisis genético: PCR Lisis celular de membrana plasmática y nuclear liberación ADN amplificación por PCR y detección por fluorescencia Primers PCR FLUORESCENTE secuencia de ADN a amplificar (72ºC-1 ) + TERMOCICLADOR 94ºC º C ELECTROFORESIS PÁG.27 Síntesis de ADN Elongación de cadenas Descondensación y adhesión de primers

29 DGP: análisis genético: FISH FISH: hibridación in situ por fluorescencia Alteraciones cromosómicas -Estructurales: translocaciones - Sondas específicas -Numéricas. - 9 cromosomas Síndrome de Down, Klinefelter XXY síndrome XYY, síndrome s de Turner (XO), edad avanzada, aborto de repetición PÁG.28

30 DGP: análisis genético: FISH Sondas marcadas con fluorescencia con afinidad por los cromosomas que queramos estudiar Qué CROMOSOMAS? 13,15,16,17,18, 21,22,X,Y Jobanputraet al, 2002:el FISH para los cromosomas 13, 15, 16, 18, 21, 22, X, Y permitiría detectar el 83% de anomalías citogenéticas en abortos PÁG.29

31 DGP: análisis genético: FISH FISH. Hibridación in situ con fluorescencia sonda ADN secuencia cromosómica Descondensación Desnaturalización Renaturalización PÁG.30

32 DGP: análisis genético: FISH XY XXY XXXX PÁG.31

33 DGP: análisis genético: Arrays Normal (XY) Arrays de CGH (Hibridación Genómica Comparada) Anomalías as numéricas de todos los cromosomas 24 cromosomas Aumento nivel de detección!! Aumento tasa de embarazo e implantación PÁG % en >40 años >20-25% en AR y FI En 40 años, si existe factor masculino severo adicional a FI o AR: 44,4% embriones NO detectables con FISH

34 DGP: análisis genético: Arrays CGH arrays Amplificación genómica completa Muestra ADN control Marcaje Cy3 Cy5 Purificación y combinación Hibridación sobre el array Cy3 + Cy5 Hibridación sobre plataformas con secuencias de ADN específicas de regiones concretas de cr. humanos Lectura e interpretación de resultados: software PÁG cromosomas BlueGnome Ltd., Cambridge, UK

35 DGP: análisis genético: Arrays Normal (XY) Aneuploide: -19, -21 (XY) PÁG.34

36 DGP: análisis genético: Arrays Embrión n caótico PÁG.35

37 FIV/ICSI: Transferencia embrionaria 1 ó 2? SET Selección embriones: Genética Viabilidad Vitrificación sobrantes PÁG.36 ASPECTOS MÉDICOS DE LA ESTERILIDAD FEMENINA

38 Gracias por su atención Centro IVI Dirección Código Postal población Tel Fax PÁG.37