I PRODUCCIÓN ESPERMÁTICA DE MORUECOS SOMETIDOS A TRATAMIENTOS COMBINADOS DE LUZ Y MELATONINA

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1 TRATAMIENTOS FOTOPERIODICOS EN 2 CENTROS DE IA (CIOP Ordiarp y ARDIEKIN Arkaute) Experiencias y aplicaciones prácticas J-M Arranz & I. Beltrán de Heredia I PRODUCCIÓN ESPERMÁTICA DE MORUECOS SOMETIDOS A TRATAMIENTOS COMBINADOS DE LUZ Y MELATONINA Hoy en día la mayoría de los centros de IA ovina han recurrido al uso de tratamientos fotoperiódicos. Estos tratamientos puestos a punto al comienzo de los años 80, son necesarios debido al hecho de que las IA, con semen refrigerado, se realizan antes de la época de actividad sexual, es decir en anoestro estacionario. El uso de tratamientos fotoperíodicos, basados exclusivamente en el uso de la luz, requieren edificios estancos, así como la disponibilidad de equipos de ventilación forzada, que permitan su uso. Los implantes de melatonina han supuesto una alternativa a estos tratamientos, ya que permiten el alojamiento de animales en edificios habituales, con ventilación estática. La CIOP, con la ayuda del INRA de Nouzilly, ha realizado diferentes experiencias entre 1992 y 1994, para testar diferentes protocolos fotoperiódicos, en los que se asociaba la luz con la melatonina (Arranz et al, 2 ème Renc. Rech. Ruminants 1995, ). Ardiekin, S.L. dispone de un edificio con control de luz y temperatura. Sin embargo, las experiencias realizadas en él con corderos, si bien presentan respuestas positivas y superiores a otros tratamientos (Beltrán de Heredia et al., Producción Ovina y Caprina XXIII, 1998, ) no justifican su uso, debido a la baja actividad sexual manifestada por éstos cuando son sometidos a los ciclos de variación de luz requeridos por los animales adultos allí ubicados. En 1999 y 2000, Ardiekin, ha realizado experiencias asociando el uso de luz y melatonina en corderos con el fin de utilizarlos como reproductores cuando éstos tienen 8 meses de vida. a) CIOP Exposición de los resultados obtenidos en 1993 con primales (1,5 años) y corderos (7 meses) 1 Protocolo El trabajo se realizó con 4 lotes de primales y 3 lotes de corderos. Los lotes se constituyeron en enero, y eran homogeneos en cuanto a peso. Se sometieron a diferentes modalidades de tratamiento: Edad Lote Lote 1 Lote 2 Lote 3 control Primales (n=19) Días largos + 1 Días largos + 3 implantes Días largos + 6 implante (n=18) (n=18) implantes (n=19) Corderos (n=19) Días largos + Días Días largos+ 2 implantes decrecientes (n=19) (n=20) El tratamiento días largos, tuvo una duración de 60 días (01/02-31/03), la colocación de los implantes se realizó el 01/04 La simulación de los días largos se realizó mediante iluminación artificial de 6:00 a 8:30 horas y un flash de luz de las 22:00 a las 23:00 horas. De enero a julio los machos se pesaron cada mes. Las medidas del volumen testicular (=peso

2 testicular) se realizaron con un collar de bolas de volumen creciente. Las características de los eyaculados (nº de salto, volumen, concentración, motilidad) se registraron a lo largo de la campaña de IA, entre el 1/06 y el 15/07. Los resultados de los partos (fecha, nº de corderos, problemas patológicos) se recogieron en otoño. 2 Resultados * Peso testicular: El uso de implantes de melatonina provoca en los primales un rápido y significativo crecimiento de la talla testicular, alcanzando el máximo dos meses después de su implantación. El aumento más importante se obtiene con 3 implantes. En los corderos, la utilización de la melatonina provoca un crecimiento rápido de la talla testicular cuando la comparamos con el lote control. El lote sometido unicamente a tratamiento lumínico, presenta una evolución comparable, pero con un desfase del orden de 1 a 2 meses. * Peso vivo: el uso de melatonina retrasa el crecimiento de los machos, pero su efecto se limita a los dos meses posteriores a la fecha del implante. Este retraso en el crecimiento queda compensado posteriormente. * Producción de semen: en los primales, 71 individuos sobre 73 se pusieron en testaje. La producción de dosis por salto aumenta un 32% en los machos que recibieron 3 implantes (efecto significativo). Respecto a los corderos, el porcentaje de puesta en testaje pasa del 21% para los animales del lote control y lote 1, a un 45% en los del lote 2. El número de dosis por salto, también fue superior en un 11% (no significativo). * Resultados de partos: No existen diferencias significativas ni en fertilidad ni en prolificidad después de la IA, independientemente de la edad de los animales, primales o corderos. Tabla1.- Principales características de los eyaculados obtenidos entre el 01/06 y el 15/07 (media + desviación estandar) Edad Primal Cordero Control Lote 1 Lote 2 Lote 3 Control Lote 1 Lote 2 Número de moruecos recogidos Numero salto/macho 23,4 21,1 20,9 21,4 16,5 13,0 17,2 Número dosis/macho Volumen/ salto 0,89 (0,22) 0,91 (0,19) 1,06 (0,29) 0,96 (0,22) 0,61 (0,12) 0,62 (0,18) 0,57 (0,12) Concentración (10 9 /ml) (550) (635) (402) (426) (910) (529) (479) Número de dosis/eyacul ado 7,92 (2,22) 9,48 (2,46) 10,47 (2,41) 10,14 (2,64) 4,84 (1,55) 5,13 (1,33) 5,36 (0,91) Teniendo en cuenta los resultados experimentales obtenidos entre 1992 y 1995, la CIOP después de 1995, ha generalizado el uso de la melatonina para el conjunto de los moruecos. Así mismo, se han realizados mayores esfuerzos sobre el manejo de los corderos, y en concreto sobre el programa de entrenamiento. b) ARDIEKIN, S.L. Presentaremos los resultados derivados de la experiencia realizada en 1999, ya que la del 2000 está pendiente de obtener los resultados reproductivos.

3 1.- Protocolo Los corderos se distribuyeron en dos lotes homogeneos en cuanto a fecha de nacimiento, peso vivo y volumen testicular, en el momento de comenzar la experiencia, 1 de marzo. El lote de animales control, se mantuvo en condiciones naturales; el lote tratado, recibió 2 meses de días largos (01/03-30/04), seguidos de 2 implantes de melatonina (18mg/implante, Mélovine Sanofi). La fecha de innoculación de implantes fue el 01/05. El protocolo de días largos aplicado fue el descrito por Arranz et al. (1995), y descrito en el apartado I.a.1. Los animales se pesaron y su volumen testicular se midió (collar de bolas de volumen creciente; STAB, Tours) hasta el mes de septiembre, con cadencia mensual aproximadamente. El entrenamiento de los moruecos a la recogida de semen en vagina artificial se inició en el mes de mayo, y aquellos animales cuyo semen se consideró apto para inseminar, fueron puestos en testaje. Discusión 2.- Resultados * El volumen testicular en el lote tratado, después de la inoculación de la melatonina experimenta un crecimiento rápido que alcanza su máximo dos meses más tarde, mientras que en el lote control este crecimiento es más lento, pero un mes más tarde alcanzan el mismo nivel, presentando al final de la experiencia testículos ligeramente más voluminosos que el lote tratado. * El peso corporal evoluciona de la misma manera, y en los mismos niveles en los dos lotes animales. * La actividad sexual, recogida de semen en vagina artificial, es mayor en el lote tratado, que en el control, (73% vs 40%, p> 0,05), sin embargo esta diferencia no es significativa. Estas diferencias de actividad han permitido realizar 741 IA con el lote tratado y 358 IA con el lote control, lo que ha permitido finalizar el testaje en el 75% de los animales utilizados del lote tratado y en el 100% de los del lote control. * Resultados reproductivos, la fertilidad obtenida con estos animales es del 49%, la prolificidad del 1,46, y la mortalidad del 5%. Estos resultados son comparables entre lotes, y comparables a los obtenidos al usar reproductores adultos. Queda pendiente de analizar los resultados del año 2000, ya que los partos derivados de la IA correspondientes se están produciendo. Una vez analizados los resultados, se tomará la decisión correspondiente respecto a su uso. II USO DE MELATONINA SOBRE LOS LOTES DE IA EN ANIMALES ADULTOS a) Pireneos Atlánticos Los ganaderos que recurren de manera importante al uso de la IA, han llegado a realizar, 2 ó 3 lotes de IA en animales adultos. El último lote generalmente está constituido por hembras tardías (han tenido partos tardíos), todavía con producciones altas y más jóvenes (la mayoría con 1,5 y 2,5 años). En estos caso, el éxito reproductivo, es a menudo inferior al observado en el resto del rebaño. Es por lo tanto sobre este tipo de animales, sobre los que se han realizado varios ensayos entre 1994 y Se ha estudiado el efecto de la utilización de la melatonina además del tratamiento de sincronización clásico.

4 1 Protocolo Dentro del lote de IA, se ha comparado un lote de animales control (no tratados) con un lote de hembras que recibían 2 implantes de melatonina (Mélovine Sanofi: 18 mg/implante), 37 días antes de la fecha de IA, lote tratado. Intra lote, los dos grupos de animales eran homogeneos en cuanto a edad e intervalo parto-ia. La eficacia del tratamiento se ha evaluado a partir de los registros de partos (fecha, número de corderos nacidos, problemas patológicos). Estos ensayos se han realizados sobre 10 lotes, cuya fecha media de IA se situó sobre el 04/07 (± 7 días). La dosis de PMSG utilizada varió entre 600 UI (3 lotes a finales de junio) y 500 UI (7 lotes). 2 Resultados La presentación de resultados es individualizada, partos derivados de IA, los dos primeros retornos (R12), los retornos posteriores (R2+), y el porcentaje de hembras vacias o eliminadas. En conjunto, la fertilidad sobre IA ha pasado del 60% al 66,7% en las hembras tratadas, la fertilidad después de 2 retornos, alcanza 79,2 y 85,8%, repectivamente (tablas 2 y 3). Cuando se tiene en cuenta la edad de los animales, la diferencia es de 4,5 puntos para las hembras de 1,5 años, y de 15,2 para las de 2,5 años. Tabla 2.- Fertlilidad sobre IA y sobre retornos por campaña y edad de las ovejas. Campaña Edad Control Tratado n Fertilidad (%) n Fertilidad (%) IA R12 R2+ Vacías IA R12 R2+ Vacías ,0 11,7 16,7 1, ,0 16,7 3,3 5, ,1 21,7 13,0 1, ,4 15,8 11,8 3, ,9 21,6 23,9 5, ,6 23,6 13,5 3,4 1,5 años ,5 17,2 16,7 3, ,0 16,8 12,8 3,4 2,5 años 48 50,0 27,1 22, ,2 28,3 0 6,5 TOTAL ,0 19,2 17,9 2, ,7 19,1 10,2 4,0 n: número de animales. Tabla 3.- Prolificidad sobre IA y sobre retornos por campaña y edad de las ovejas. Campaña Edad Control Tratado n Prolificidad (%) n Prolificidad (%) IA Retorno IA Retorno NC NC ,5 ans ,5 ans TOTAL Los resultados de prolificidad son acordes a la bibliografía, la utilización de la melatonina provoca un incremento significativo de la prolificidad post-ia, más de 12 corderos por cada 100 partos (Tabla 3). Sin embargo, no ha provocado ningún efecto sobre la prolificidad en los partos de retorno.

5 b) Comunidad Autónoma del País Vasco Los resultados de fertilidad derivados del uso de la inseminación artificial presentan una gran variabilidad entre explotaciones. Este hecho, unido al interés de los ganaderos por mejorar estos resultados, nos permitió estudiar durante los años 1998 y 1999 el efecto que el uso de la melatonina sobre los animales inseminados presenta sobre los resultados reproductivos derivados de la IA, así como del primer retorno. 1.- Protocolo Se realizó una comparación entre animales control (sin implante) y animales tratados (1 implante de melatonina/animal, Mélovine Sanofi, 18 mg/implante). El implante se inoculó entre 31 y 38 días antes de la IA. Los dos lotes estaban equilibrados repecto a la edad y la fecha de parto precedente. La efectividad del tratamiento se ha evaluado en cuanto a fertilidad y prolificidad. Estos ensayos se han realizado en 9 lotes de animales, cuya fecha de inseminación ha estado comprendida entre junio y agosto. El tratamiento de sincronización de celo y de la ovulación ha sido el clásico, esponjas vaginales impregnadas de 40 mg de FGA durante 14 días y en el momento de su retirada se inyectan 500 UI de ecg, excepto para las ovejas inseminadas en el mes de junio, que recibieron esponjas vaginales de 30 mg de FGA durante 12 días y la misma dosis de ecg. 2.- Resultados En la Tabla 4 se presentan los resultados de fertilidad obtenidos según el año y el lote experimental. Se observan grandes diferencias entre años (p<0,01), de tal manera que en 1998 la fertilidad media post-ia fue del 58,5% y sin diferencias entre lotes, mientras que en 1999, la fertilidad media fue del 46%, y el lote tratado presentó mayor fertilidad 53,5 vs 39,5% (p<0,01). Los efectos edad y mes de inseminación no influyen sobre los resultados. Al considerar la fertilidad derivada de la IA más el primer retorno (IA+R), las diferencias observadas son atribuibles al efecto explotación 74,0 vs 68,6% p<0,05. Tabla 4.- Fertilidad sobre IA y primer retorno, en 1998 y 1999, según el lote animal. Año Control Tratado n IA IA+R n IA IA+R ,0 79, ,0 77, ,5 68, ,5 74,0 Los resultados de prolificidad (Tabla 5), muestran como ésta es superior en el lote tratado (p<0,01), obteniéndose 19 corderos más por cada 100 ovejas paridas. Estas diferencias se mantienen en el retorno (p<0,001). Este efecto se traduce en un incremento post-ia de partos triples en detrimento de partos simples, y en el retorno (R) de partos dobles frente a partos simples. Tabla 5.- Prolificidad sobre IA y primer retorno, en 1998 y 1999, según el lote animal. Año Control Tratado n IA IA+R n IA IA+R ,58 1, ,82 1, ,55 1, ,69 1,66

6 Discusión La melatonina permite realmente una mejora de los resultados. De cualquier manera, su aplicación es poco práctica, ya que exige una constitución de los lotes de IA muy temprana, una intervención suplementaria, y su coste es elevado. El uso de implantes antes de la IA quedará circunscrito a casos muy concretos, en rebaños que presenten problemas de fertilidad, en aquellos que presenten problemas en el retorno de celos, o en los que tengan problemas de dispersión de la paridera. En estos casos, se podría elegir entre las ovejas a inseminar, aquellas que recibirían el implante de mélovine. III.- UTILIZACIÓN DE LA MELATONINA SOBRE LOTES DE CORDERAS EN MONTA NATURAL La puesta en cubrición a las corderas (8-10 meses), es una práctica poco habitual en las ganaderías del País Vasco, sin embargo, el parto y el momento del parto son dos factores muy importantes dentro del sistema de producción. Con objeto de incrementar el número de corderas parídas, así como de concentrar la paridera de las mismas, se diseñó esta experiencia que se llevó a cabo durante los años 1998 y Protocolo Este trabajo se ha realizado en un total de 5 explotaciones y 550 animales. Los moruecos estuvieron aislados de las corderas mínimo durante 2 meses. Las premisas de trabajo a fecha de colocación del implante de melatonina en el año 98 fueron, animales de 6 meses de edad, 32 Kg de peso y la melatonina se implantó 35 días antes de la introducción de los moruecos. Estas condiciones se modificaron el año 99 de acuerdo a los resultados obtenidos en el 98, quedando de la siguiente manera: edad mínima 5 meses, 28 Kg de peso e inoculación de los implantes de melatonina 50 días antes de la introducción de los moruecos. El porcentaje de machos recomendado fue del 10%, y que éstos fueran adultos. El período de introducción de machos se ha extendido entre finales del mes de agosto y finales del mes de septiembre. 2.- Resultados Los resultados reproductivos analizados, son los derivados del primer mes de cubrición (tabla 6). La fertilidad media obtenida después de un mes de cubrición, está en torno al 50%, siendo determinante en estos resultados la edad de los animales, la época de introducción de machos, y el tratamiento con melatonina. * La edad, los animales de 10 meses presentan una fertilidad mayor que la de los de 9 y 8 meses (p<0,05). * La época de introducción de machos, la fertilidad obtenida cuando éstos se introducen a finales, mediados de septiembre es superior a la obtenida cuando este momento se situa a finales de agosto (63, 53 y 38%, p< 0,05), respectivamente. * El uso de implantes de melatonina provoca un incremento significativo de la fertilidad (59 vs 47% ; p<0,01).

7 Tabla 6.- Resultados reproductivos obtenidos en corderas, según el año experimental y el lote animal. Año Control Tratado (1 implante melatonina) n Fertilidad Prolificidad n Fertilidad Prolificidad (%) (%) ,8 1, ,4 1, ,3 1, ,3 1,17 La prolificidad obtenida, número de corderos nacidos por cordera parida, se sitúa entre 1,1 y 1,2. La melatonina no modifica estos resultados. La fertilidad global, derivada de todo el período de cubrición, es del 72%, e independiente del uso de melatonina. La melatonina provoca una mayor concentración de partos derivados del primer mes de cubrición (81% vs 64%, p<0,01). Discusión El tratamiento de melatonina permite una mayor concentración de partos, si bien es cierto que el porcentaje total de animales que paren es independiente del tratamiento y de la época de introducción de machos. IV PROGRAMA DE TRATAMIENTO FOTOPERIÓDICO EN LOS CORDEROS a) CIOP El Centro de Cría, recoge cada año 320, de los cuales selecciona aproximadamente 200 por año. Teniendo en cuenta los costes de cría y mantenimiento, el objetivo es testar el máximo número de corderos a partir de que éstos tienen 7 meses de vida. La llegada de los corderos al Centro de Cría se realiza de forma escalonada entre finales de diciembre y principios de febrero, los corderos se recogen cuando tienen 55 días de edad. A partir del momento que llegan al Centro de Cría, se someten a un programa de simulación de días largos, iluminación artificial a la mañana de 6:00 a 8:30 horas, y un flash luminoso de 22:00 a 23:00. La colocación de implantes se realiza en dos fechas, teniendo en cuenta el período de IA de las diferentes razas - colocación de 2 implantes para una parte de los BB y los MTN a partir del 13/03 (~ 30 corderos) - colocación de 2 implantes para el resto de corderos el 31/03 (~ 150 corderos). La elección de los animales a implantar, testar a partir de los 7 meses, se realiza a partir de la edad de los animales, el peso vivo, el volumen testicular y el valor genético de los animales. El seguimiento longitudinal del volumen testicular demuestra, que éste es máximo 60 días después de la colocación de los implantes. La fase de entrenamiento de los corderos, se realiza de manera más intensiva a partir de abril y sobre todo en mayo. A partir del momento que los corderos producen un eyaculado de calidad aceptable, se transladan al Centro de IA, y se someterán a testaje a partir de la 2ª quincena del mes de mayo (BB) o en junio (MTN y MTR). En el año 2000, el balance ha sido de IA de testaje, de las cuales el 35% se han realizado con corderos (42% en MTR y solamente un 13% en MTN). En número de machos puestos en testaje, 100 corresponden a primales, y 97 a corderos. De entre los cuales, 60 primales y 42 corderos han finalizado su testaje. La producción de semen de los corderos es inferior a la de los primales y adultos (5,9 vs 8,8 dosis/salto). La fertilidad media de las ovejas inseminadas es tambien ligeramente inferior (56,2% vs 59,1%).

8 b) ARDIEKIN, S.L. En el momento actual, el uso combinado de tratamiento lumínico más implantes de melatonina en corderos está en fase experimental. Una vez concluida ésta y en función de los resultados obtenidos, se tomarán las decisiones pertinentes en cuanto a su uso.

9 Anexo 1.- LA CIOP: Cooperativa de Inseminación Ovina de Pirineos (Ordiarp 64 Fr) La Cooperativa de Inseminación, se creó en Desde 1997, tiene un nivel de actividad estabilizado, que se cifra en torno a las IA por año La casi totalidad de las inseminaciones se centran en el programa de mejora genética de las 3 razas ovinas lecheras locales. (Basco-Béarnaise: BB, Manech Tête Noire: MTN, Manech Tête Rousse: MTR). La parte correspondiente a la creación del progreso genético (testaje+cubriciones dirigidas) representa el 75%, mientras que la concerniente a la difusión corresponde al 25% restante. La fertilidad media obtenida post-ia, se ha ido mejorando entre 1975 y 1993, situándose a partir de ese momento alrededor del 59%. La prolificidad después de la sincronización del celo oscila entre 1,45 y 1,55, según los años. IA / dia Adultos Corderas Mayo Junio Julio Agos Sept Oct Figura 1.- Distribución de las IA entre los meses de mayo y septiembre. La campaña de IA sobre animales adultos, se concentra en el mes de junio (75% de las IA), mientras que la que se realiza en corderas, más escalonada, se extiende a lo largo de las tres primeras semanas de septiembre (53% de las IA).

10 Anexo ARDIEKIN, S.L.: Centro de Selección e Inseminación Artificial Ovina (Arkaute, Vitoria-Gasteiz, Sp) Ardiekin, S.L. es el Centro de Selección e Inseminación Artificial de las razas Latxa y Carranzana. Se creó en 1988, momento en el que asumió el trabajo desarrollado por el Departamento de Agricultura del Gobierno Vasco en este tema desde El número de IA que realiza por año se encuentra en continuo incremento. En el año 2000, ha realizado IA La totalidad de inseminaciones se sitúan dentro del marco del programa de mejora genética de las ovejas Latxa ( Latxa Cara Negra y Latxa Cara Rubia) y Carranzana en el ámbito de la Comunidades Autónomas del País Vasco y la Comunidad Foral de Navarra (Latxa Cara Rubia). Aproximadamente el 56% de las inseminaciones se realizan con dosis procedentes de machos en testaje, y el 44% restante con dosis procedentes de machos mejorantes. La fertilidad media sobre IA se encuentra en torno al 50%, y la prolificidad es del 1,6 La campaña de inseminación se realiza fundamentalmente entre los meses de mayo y septiembre (Figura 2), existiendo dos picos de trabajo en agosto y junio, que representan el 44 y el 35% de la actividad. Esta última campaña, se han utilizado 131 moruecos, de los cuales 90 eran machos en en testaje y 41 machos mejorantes. Respecto a los animales en testaje, 15 eran corderos. Miles Abril Mayo Junio Julio Agosto Septiem. Octubre LCN LCR CARR TOTAL LCN LCR CARR TOTAL Figura 2.- Distribución de las IA a lo largo de la campaña. El 23/01/2001 Jean-Marc Arranz (SICA-CREOM Ordiarp Fr) Ignacia Beltrán de Heredia (Neiker, A.B., Granja Modelo de Arkaute, Apdo. 46, Vitoria-Gasteiz Sp)

11 UTILISATION DES TRAITEMENTS PHOTOPERIODIQUES dans 2 centres d IA (ARDIEKIN Arkaute & CIOP Ordiarp) Expérimentations et applications pratiques I. Bertran De Heredia & J-M Arranz I MAITRISE DE LA PRODUCTION SPERMATIQUE DES BELIERS PAR DES TRAITEMENTS ASSOCIANT LA LUMIERE ET L UTILISATION DE LA MELATONINE La plupart des centres d IA ovine font aujourd hui largement appel au conditionnement photopériodique des mâles. Ces traitements mis au point au début des années 1980, sont rendus nécessaires par le fait que les IA, en semence fraîche, ont lieu en avance de saison sexuelle, voire en contre-saison. Le conditionnement photopériodique basé sur l utilisation seule de la lumière nécessite de disposer de bâtiments étanches, ce qui aussi suppose des équipements complémentaires pour maîtriser l ambiance des bâtiments. L application d implants de mélatonine constitue donc une alternative permettant un hébergement des animaux dans des bâtiments légers avec une ventilation statique. La CIOP, dans les Pyrénées Atlantiques (Fr) a été amenée à expérimenter et tester avec l aide de l INRA de Nouzilly, entre 1992 et 1994, différentes modalités de programmes photopériodiques sur adultes puis sur agneaux associant lumière et mélatonine (Arranz et al, 2 ème Renc. Rech. Ruminants ). Ardiekin S.L., en Alava (CAB/Sp), dispose, pour sa part, d un bâtiment permettant un contrôle de la lumière et de la température. Les expérimentations réalisées dans ce bâtiment avec les agneaux ont permis de mettre en évidence la réponse positive et supérieure aux autres traitements (Beltrán de Heredia et al., 1998). Toutefois, le bas niveau d activité sexuelle manifesté quand ils sont soumis au même conditionnement photopériodique que les adultes ne justifie pas ce type de traitement. C est pourquoi Ardiekin S.L. a réalisé en 1999 et 2000 des expérimentations associant l utilisation de la lumière et de la mélatonine sur agneaux afin de pouvoir les utiliser comme reproducteurs à l âge de 8 mois. b) CIOP Nous reprenons ici les résultats obtenus en 1993 sur antenais (1,5 ans) et sur agneaux (7 mois). 1 Protocole 4 lots d antenais et 3 lots d agneaux de poids comparables sont constitués en janvier et soumis aux modalités de traitement suivantes : Type d animaux Lot témoin Lot 1 Lot 2 Lot 3 Antenais (n=19) Jours longs + 1 implant Jours longs + 3 implants Jours longs + 6 (n=18) (n=18) implants (n=19) Agneaux (n=19) Jours longs + jours décroissants (n=19) Jours longs + 2 implants (n=20) Le traitement «jours longs» dure 60 j (01/02-31/03) et la pose des implants (Régulin : 18 mg/implant) a lieu le 01/04. La simulation des jours longs est réalisée par un éclairement artificiel, le matin de 6 h 30 à 8 h 30 et le soir par un flash lumineux de 22 h à 23 h. De janvier à juillet, les mâles sont pesés chaque mois. Des mesures de volumes testiculaires (= poids testiculaires) sont réalisées avec un chapelet de boules de volume croissant. Les

12 caractéristiques des éjaculats sont enregistrées (nombre de saut, volume, concentration, motilité) tout au long de la campagne d IA entre le 01/06 et le 15/07. Les données de misesbas (date, taille de la portée, problèmes sanitaires) sont collectées à l automne. 2 Résultats * Poids testiculaire : la pose des implants induit chez les antenais une augmentation significative et rapide des poids testiculaires avec un maximum 2 mois après la pose : l augmentation la plus marquée est obtenue avec 3 implants. Chez les agneaux, l utilisation de la mélatonine entraîne un accroissement rapide de la taille testiculaire comparativement aux agneaux non traités. Le lot ayant subi le traitement lumineux seul présente une évolution comparable mais avec un décalage dans le temps de l ordre de 1 à 2 mois. * Poids corporel : l utilisation de la mélatonine ralenti la croissance des mâles mais l effet se limite aux 2 mois qui suivent la pose, le retard de croissance étant compensé par la suite. * Production de semence : chez les antenais, 71 individus sur 73 ont été mis en testage normalement. La production de doses/saut a été accrue de 32 % chez les mâles ayant reçu 3 implants (effet significatif). En ce qui concerne les agneaux, le taux de mise en testage passe de 21 % pour les animaux des lots témoin et lumière à 45 % chez ceux qui ont reçu de la mélatonine. Le nombre de doses/saut a été aussi augmenté de 11 % (non significatif). * Résultats de mises-bas : il n y a eu aucune différence significative des taux de misesbas ni de la taille de portée après l IA, qu il s agisse des agneaux ou des antenais. Tableau 1.- Principales caractéristiques de la semence récoltée entre le 01/06 et le 15/07 (moyenne + écart-type) Catégorie de béliers Antenais Agneaux Témoin Lot 1 Lot 2 Lot 3 Témoin Lot 1 Lot 2 Nombre de béliers collectés Nombre de saut/bélier 23,4 21,1 20,9 21,4 16,5 13,0 17,2 Nombre de doses/bélier Volume/ saut 0,89 (0,22) 0,91 (0,19) 1,06 (0,29) 0,96 (0,22) 0,61 (0,12) 0,62 (0,18) 0,57 (0,12) Concentration (10 9 /ml) (550) (635) (402) (426) (910) (529) (479) Nombre de doses par éjaculat 7,92 (2,22) 9,48 (2,46) 10,47 (2,41) 10,14 (2,64) 4,84 (1,55) 5,13 (1,33) 5,36 (0,91) Sur la base des résultats expérimentaux obtenus entre 1992 et 1995, la CIOP a généralisé l utilisation de la mélatonine pour l ensemble des mâles dès Les efforts ont par la suite porté plus spécifiquement sur la conduite des agneaux, et en particulier sur les programmes d entraînement.

13 b) ARDIEKIN S.L. Nous présenterons les résultats d expérimentations réalisés en 1999 et Protocole Les agneaux sont répartis, au début de l expérimentation (01/03), en 2 lots homogènes pour les dates de naissance, le poids vif et les volumes testiculaires. Le lot témoin est conduit en conditions naturelles. Les animaux du lot traité sont soumis aux jours longs pendant 2 mois (01/03 30/04), puis reçoivent 2 implants de mélatonine (Mélovine Sanofi : 18 mg/implant) le 01/05. Le protocole de jours longs est identique à celui décrit dans le paragraphe I a) 1. Les animaux sont pesés et les volumes testiculaires mesurés (chapelet de boules de volume croissant STAB-Tours- Fr) jusqu au mois de septembre, une fois par mois environ. L entraînement des béliers à la collecte de semence avec vagin artificiel démarre en mai et les animaux dont la semence est jugée satisfaisante sont mis en testage. 2.- Résultats * Après la pose des implants, les volumes testiculaires du lot «traitement» s accroissent rapidement pour atteindre leur taille maximum 2 mois plus tard, alors que, sur les animaux «témoins», la croissance plus lente, atteint un niveau maximum équivalent au bout de 3 mois. En fin d expérimentation, le lot témoin conserve des volumes légèrement supérieurs. * Le poids corporel évolue de la même manière et au même niveau sur les 2 lots. * L activité sexuelle, par collecte de semence en vagin artificiel, est meilleure au sein du lot traité que du lot témoin. Cependant, cette différence n est pas significative. Ces écarts d activité ont permis de réaliser 741 IA avec les mâles du lot «traitement» et 358 IA avec ceux du lot témoin, ce qui a permis de tester 75 % des animaux utilisés du lot traité et 100 % de ceux du lot témoin. *La fertilité obtenue avec ces animaux est de 49 %, la prolificité de 1,46, et la mortalité de 5%. Ces résultats de reproduction sont comparables d un lot à l autre et ne diffèrent pas de ceux obtenus avec les reproducteurs adultes. Discussion Les résultats de reproduction de l essai 2000 ne sont pas encore connus. De ces résultats dépendra la décision sur les modalités de conditionnement photopériodique à adopter. II UTILISATION DE LA MELATONINE SUR DES FEMELLES ADULTES SYNCHRONISEES ET INSEMINEES a) Pyrénées-Atlantiques Les éleveurs faisant appel de manière importante à l IA sont amenés à réaliser 2 ou 3 lots d IA sur les femelles adultes. Le dernier lot est surtout constitué de femelles «tardives» (ayant mis bas tard), encore en forte production et plutôt jeunes (1,5 ans et 2,5 ans en majorité). De ce fait, la réussite à l IA est souvent inférieure à celle observée sur le reste du troupeau. C est donc sur ce type d animaux qu ont été réalisés plusieurs essais entre 1994 et 1996, visant à étudier l effet de l utilisation de la mélatonine en complément d un traitement de synchronisation des chaleurs classique.

14 1 Protocole Intra lot d IA, on compare des animaux non traités (témoins) à des femelles recevant 2 implants de mélatonine (Mélovine Sanofi : 18 mg/implant) 37 jours avant la date d IA. Intra lot, les 2 groupes d animaux sont équilibrés par génération et pour les intervalles misesbas précédentes-ia. L efficacité du traitement est évaluée à partir des enregistrements des mises-bas (date, taille de la portée, événements pathologiques). Ces essais ont été menés sur 10 lots, la date moyenne d IA se situant au 04/07 (± 7 jours). Les doses de PMSG utilisées variaient entre 600 UI (3 lots en fin juin) et 500 UI (7 lots). 2 Résultats Les résultats sont présentés en séparant les mises-bas sur IA, les 2 premiers retours (R12), les retours ultérieurs (R2+) et les effectifs de brebis restées vides durant la campagne ou réformées. Globalement, le taux de mise-bas sur IA est passé de 60 % à 66,7 % chez les femelles traitées, les taux de mise-bas, après 2 retours, atteignant respectivement 79,2 et 85,8 % (tableaux 2 et 3). Lorsqu on tient compte de l âge des femelles, l écart est de 4,5 points de fertilité pour les brebis de 1,5 ans, mais passe à 15,2 pour celles de 2,5 ans. Tableau 2.- Taux de mises-bas sur IA et sur retours par campagne et âge des brebis Campagne Age Témoin Traitement Mélovine Effectif Taux de mise-bas (%) Effectif Taux de mise-bas (%) IA R12 R2+ Vides IA R12 R2+ Vides ,7 16,7 1, ,7 3, ,1 21,7 13 1, ,4 15,8 11,8 3, ,9 21,6 23,9 5, ,6 23,6 13,5 3,4 1,5 ans ,5 17,2 16,7 3, ,8 12,8 3,4 2,5 ans ,1 22, ,2 28,3 0 6,5 TOTAL ,2 17,9 2, ,7 19,1 10,2 4 Tableau 3.- Prolificité sur IA et sur retours par campagne et âge des brebis Campagne Age Témoin Traitement Mélovine Effectif Prolificité (%) Effectif Prolificité (%) IA Retour IA Retour NC NC ,5 ans ,5 ans TOTAL Les résultats de prolificité sont conformes à la bibliographie: l utilisation de la mélatonine entraîne une augmentation significative de la prolificité sur IA (+12 agneaux/100 mises-bas) (Cf. Tableau 3). Par contre, elle n a pas eu d effet sur la taille de la portée lors des mises-bas sur retours.

15 b) Communauté Autonome du Pays Basque Les résultats de fertilité à l IA présentent une grande variabilité entre exploitations. Ce constat et la motivation des éleveurs à améliorer leurs résultats, nous ont poussé à étudier, en 1998 et 1999, l effet de l utilisation de la mélatonine, lorsque les animaux sont inséminés, sur les résultats de reproduction à l IA et lors du premier retour. 1.- Protocole On a comparé des animaux témoins (sans implant) et des animaux traités (1 implant de mélatonine/animal, Mélovine Sanofi, 18 mg/implant). L implant est posé entre 31 et 38 jours avant l IA. Les 2 lots étaient équilibrés pour les âges et les dates de mises-bas précédentes. L effet du traitement est évalué sur les résultats à la mise-bas, fertilité et prolificité. Ces essais ont été réalisés sur 9 lots dont les dates d IA étaient comprises entre juin et août. Les femelles sont synchronisées avec les traitements habituels : pose d éponges vaginales imprégnées de 40 mg de FGA durant 14 jours, suivie, au moment du retrait, d une injection de 500 UI de ecg, sauf pour les brebis inséminées en juin qui ont reçu une éponge de 30 mg de FGA pendant 12 jours. 2.- Résultats Les résultats de fertilité par âge et par lot sont présentés dans le tableau 4. On a observé d importantes différences entre année (p<0,01). En 1998, la fertilité moyenne sur IA a été de 58,5 % sans différence d un lot à l autre. Par contre, en 1999, la fertilité moyenne a été de 46 %, et le lot traité a présenté une meilleure fertilité (53,5 % vs 39,5 %, p<0.01). Les effets âge et mois d insémination n influent pas sur les résultats. Si l on considère la fertilité cumulée IA + 1 er retour (IA+R), on observe des différences uniquement en 1999 liées à l effet exploitation (74,0 vs 68,6% p<0,05). Tableau 4.- Fertilité à l IA et sur le premier retour par lot, en 1998 et 1999 Année Témoin Traitement n IA IA+R n IA IA+R ,0 79, ,0 77, ,5 68, ,5 74,0 Les résultats de prolificité (Tableau 5) font apparaître une supériorité pour le lot traité (p<0,01), avec un gain de 19 agneaux pour 100 mises-bas. Cet effet se traduit par un accroissement post-ia des portées triples, au détriment des portées simples, et, lors des retours des portées doubles par rapport aux portées simples. Tableau 5.- Prolificité à l IA et sur premier retour, en 1998 et 1999 Année Témoin Traitement n IA IA+R n IA IA+R ,58 1, ,82 1, ,55 1, ,69 1,66 Discussion: La mélatonine permet une réelle amélioration des résultats. Toutefois, son utilisation reste peu pratique (constitution plus précoce des lots d IA, intervention supplémentaire) et son coût élevé.

16 Le recours aux implants avant IA doit resté circonscrit à certains cas particuliers, dans des élevages rencontrant des problèmes d hypofertilité et pour lesquels on relève une mauvaise qualité des retours, ou des difficultés à grouper les mises-bas. Dans ces cas, on peut alors cibler, parmi les brebis à inséminer, celles qui recevront le traitement mélovine. III.- UTILISATION DE LA MELATONINE SUR DES LOTS D AGNELLES EN MONTE NATURELLE La mise en reproduction des agnelles (8-10 mois) est une pratique peu habituelle dans les élevages du Pays Basque. Cependant, la lutte et l époque des luttes sont 2 facteurs très importants des systèmes de production. Dans l objectif d augmenter le nombre d agnelles mettant bas ainsi que de grouper les mises-bas de ces femelles, une expérimentation a été conçue et réalisée en 1998 et Protocole Ce travail a été réalisé sur 550 individus dans 5 exploitations. Les béliers étaient isolés des agnelles durant 2 mois minimum. Un essai préliminaire a été mené en 1998 pour ajuster la date de pose des implants, sur des animaux de plus de 6 mois, pesant plus de 32 kg, la mélatonine étant implantée 35 jours avant l introduction des béliers. Compte tenu des résultats obtenus en 1998, ces conditions furent modifiées en 1999 : les agnelles devaient être âgées de plus de 5 mois, leur poids atteindre 28 kg, tandis que les implants étaient inoculés 50 jours avant l introduction des béliers. Les mâles sont introduits entre la fin du mois d août et la fin du mois de septembre, le pourcentage de mâles adultes recommandé étant de 10 %. 2.- Résultats Les résultats de reproduction (tableau 6) sont relatifs au premier mois de lutte. La fertilité moyenne obtenue après 1 mois de lutte se situe aux alentours de 50 %. L âge des animaux, l époque d introduction des mâles et le traitement avec mélatonine sont déterminants. * Age : les agnelles de 10 mois présentent une meilleure fertilité que celles de 8 ou 9 mois (p<0,05). *Période : la fertilité est plus élevée (p<0.05) quand la période d introduction se situe fin septembre (63 %) et mi-septembre (53 %) que fin août (38 %). *L utilisation des implants provoque une augmentation significative de la fertilité (59 vs 47 % ; p<0,01). Tableau 6.- Résultats de reproduction des agnelles par lot et par année d essai Année Témoin Traitement (1 implant de mélatonine) n Fertilité Prolificité n Fertilité Prolificité (%) (%) ,8 1, ,4 1, ,3 1, ,3 1,17 La prolificité (nombre d agneaux nés par agnelle mettant bas) se situe entre 1,1 et 1,2, sans effet de la mélatonine.

17 La fertilité globale sur la saison de lutte atteint 72 %. Elle est indépendante de l utilisation ou non de la mélatonine. Toutefois, la mélatonine a entraîné un meilleur groupage des mises-bas issue du 1 er mois de lutte (81 % vs 64 %, p<0,01). Discussion Le traitement avec la mélatonine a permis un meilleur groupage des mises-bas, mais le pourcentage final de femelles mettant bas est indépendant du traitement et de l époque d introduction des mâles.

18 IV PROGRAMME DE TRAITEMENT PHOTOPERIODIQUE DES AGNEAUX c) CIOP Le Centre d Elevage recrute chaque année 320 agneaux pour en tester environ 200 par an. Compte tenu des coûts d élevage, l objectif est de tester un maximum d agneaux dès l âge de 7 mois. L arrivée des agneaux en Centre d Elevage (CE) est échelonnée entre fin décembre et début février, les agneaux étant ramassé à l âge moyen de 55 jours. Dès leur arrivée en Centre d Elevage, ils sont soumis à une simulation de jours longs avec un éclairage artificiel le matin de 6 h à 8 h 30, et un flash lumineux de 22 h à 23 h. Les implants sont posés à 2 dates pour tenir compte des différences de période d IA d une race à l autre:- pose de 2 implants pour une partie des BB et des MTN dès le 13/03 (~ 30 mâles), - pose de 2 implants pour les autres mâles le 31/03 (~ 150 mâles). Le choix des animaux à implanter (= à tester à 7 mois) se fait sur l âge, le poids des animaux, les volumes testiculaires, et bien sûr la valeur génétique des animaux. Le suivi longitudinal des volumes testiculaires montre que ceux-ci sont maximum 60 jours après la pose des implants. La phase d entraînement des agneaux (vagins artificiels) devient plus intensive en avril et surtout mai : dès que les agneaux vont produire une semence de qualité suffisante, ils vont rejoindre le Centre d IA, et seront mis en testage dès la 2 ème quinzaine de mai (BB) ou durant le mois de juin (MTR, MTN). En 2000, le bilan s établi à IA de testage, dont 35 % réalisées avec des agneaux (42 % en MTR et seulement 13 % en MTN). En nombre de béliers, 100 antenais ont été mis en testage et 97 agneaux. Parmi ces animaux, 60 antenais et 42 agneaux ont pu terminer leur testage. La production de semence des agneaux reste inférieure à celle des antenais et des adultes (5,9 doses/saut vs 8,8). Le taux de mises-bas des brebis inséminées est aussi légèrement plus faible (56,2 % vs 59,1 %). d) ARDIEKIN S.L. Actuellement, l usage combiné de la lumière et de la mélatonine est en phase expérimentale. Le recours ou non à ce type de traitement fera l objet d une décision, à l issue des essais en cours et en fonction des résultats.

19 Encart 1 LA CIOP : Coopérative d Insémination Ovine des Pyrénées (Ordiarp 64 Fr) Créée en 1975, la Coopérative d Insémination s est développée régulièrement pour atteindre un niveau d activité de IA/an en 1997, niveau stable depuis 3 ans. La quasi totalité des IA sont liées à la réalisation d un programme de sélection laitière sur 3 races locales (Basco-Béarnaise: BB, Manech Tête Noire: MTN, Manech Tête Rousse: MTR): la part liée à la création de progrès génétique chez les sélectionneurs (testage + accouplement raisonné) représente 75 % et celle liée à la diffusion 25 %. Les taux de fertilité sur IA moyens se sont régulièrement améliorés entre 1975 et 1993, et se situent depuis lors aux alentours de 59 %. La prolificité sur oestrus induit oscille entre 145 et 155 d une année à l autre. La campagne d IA adulte est concentrée sur le mois de juin (75 % des IA) alors que celle des agnelles, plus étalée, est centrée sur les 3 premières semaines de septembre (53 % d IA) Nbre d'ia / jour Adultes Agnelles 0 Mai Jun Jul Août Sept Oct Figure 1 : Répartition des IA de mai à octobre

20 Encart 2.- ARDIEKIN S.L. (Arkaute Vitoria CAB Sp) Ardiekin S.L. est le centre de sélection et d insémination artificielle des races Latxa y Carranzana. La société Ardiekin S.L. a été créée en 1998, avec pour mission de poursuivre le travail engagé par le département agricole du Pays Basque depuis Le nombre d IA réalisées chaque année est en constante augmentation et atteint IA en La totalité des IA concerne le programme d amélioration génétique des brebis Latxa (Tête Noire et Tête Rousse) et Carranzana au sein de la Communauté Autonome du Pays Basque et de la Communauté «foral» de Navarre (Latxa Tête Rousse). Approximativement, 56 % des doses sont issues des béliers de testage, et les 44 % restants de mâles améliorateurs. La fertilité moyenne sur IA se situe aux environs de 50 % et la prolificité à 1,6. La campagne d insémination s étale entre le mois de mai et celui de septembre (figure 2). Les 2 pics d activité se situent en août (44 %) et en juin (35 %). Miles Abril Mayo Junio Julio Agosto Septiem. Octubre LCN LCR CARR TOTAL LCN LCR CARR TOTAL Figure 2.- Répartition des IA pendant la campagne. 23/01/2001 Ina Beltran De Heredia (Neiker, A.B., Granja Modelo de Arkaute, Apdo. 46, Vitoria- Gasteiz Sp) Jean-Marc Arranz (SICA CREOM Ordiarp Fr)