artículo Hongos patógenos en la lucha contra revista

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1 El uso de hongos entomopatógenos en el control de plagas se remonta a finales del siglo XIX, anterior al desarrollo de insecticidas químicos. Hongos patógenos en la lucha contra Ceratitis capitata PILAR MOYA Centro de Ecología Química Agrícola Universidad Politécnica de Valencia La historia del uso de hongos entomopatógenos para el control de plagas agrícolas se remonta a finales del siglo XIX, mucho antes del desarrollo de los insecticidas químicos. El primer uso descrito fue la aplicación del hongo Metarhizium anisopliae para el control del abejorro del maíz, Anisoplia austriaca, en Ucrania, por Metschnikoff, en 1879 (Ferron, 1978). A comienzos de los años 50 los insecticidas químicos, más rápidos, cómodos y efectivos desplazaron en su totalidad al control biológico. Sin embargo, el uso y abuso de estos insecticidas durante los últimos 50 años ha provocado la aparición de resistencias en las plagas, toxicidad medioambiental, contaminación de las aguas MARZO 2003 HORTICULTURA Diferentes estadios de crecimiento de Ceratitis capitata, la mosca de la fruta. En la imagen de la izquierda, adulto de la mosca. A la derecha, larvas en tercer estadio y emergencia de un macho adulto. superficiales y subterráneas, desequilibrios ecológicos y problemas de salud pública. Estos inconvenientes han potenciado, a partir de la década de los 80, un resurgimiento del control biológico con el fin de desplazar o reducir la aplicación de productos químicos. Hasta hace 10 años, el potencial de los hongos entomopatógenos parecía limitado por falta de competitividad en la producción en masa del micoplaguicida y por la pobreza e inconsistencia de los resultados en la fase de campo. La falta de éxito en campo se atribuyó a las condiciones ambientales, en particular a la elevada humedad relativa considerada esencial para la infectividad (Gillespie, 1988) o al efecto de la exposición a la luz solar, siendo particularmente perjudicial para las esporas la porción UVB del espectro solar (Inglis et al., 1995). Sin embargo, el desarrollo en las tecnologías de las fermentaciones y formulaciones ha permitido eliminar parcialmente estos inconvenientes, de forma que ahora es posible utilizar determinados hongos para el control de plagas, incluso en regiones semi-áridas (Neethling y Dent, 1998). Actualmente existen 47 bioplaguicidas basados en hongos en todo el mundo (Copping, 1999) y es probable que se registren muchos más en un futuro cercano. La Ceratitis capitata Wiedemann, (Diptera: Tephritidae), mosca de la fruta o del Mediterráneo, es una de las plagas más perjudiciales que se conocen para la agri-

2 FITOSANDAD cultura. Afecta a una gran variedad de cultivos, concretamente más de 350 especies de frutas, cítricos, bayas y hortalizas (Líquido et al., 1991). Este hecho, unido a su alto potencial de reproducción y su adaptabilidad a diferentes entornos, hace que tenga una amplia distribución en todo el mundo (Enkerlin y Mumford, 1997), principalmente en latitudes tropicales y templadas, donde las temperaturas invernales raramente descienden de los 2ºC. El control actual de C. capitata en España se basa en el uso de insecticidas organofosforados (malation), de ahí la necesidad de buscar métodos alternativos y más ecológicos de control. De hecho, en estos momentos, se está valorando la posibilidad de utilizar el método de la suelta de machos estériles (SIT), promovido por la Comunidad Valenciana, la utilización de métodos de captura masiva basados en atrayentes de hembras más efectivos (Heath et al., 1998; Epsky et al., 1999; Katsoyannos et al., 1999) y el control biológico con parasitoides (Beitia et al., 2002). EL Centro de Ecología Química Agrícola de la Universidad Politécnica de Valencia, fundado por el catedrático D. Eduardo Primo Yúfera y actualmente dirigido por D. Jaime Primo Millo, basa parte de sus investigaciones, desde hace mucho tiempo, en el control ecológico de la mosca. Fruto de ellas, ha surgido un posible nuevo método de lucha contra Ceratitis basado en la quimioesterilización. Los estudios en campo a gran escala, durante dos años consecutivos, parecen indicar que este método podría consolidarse como una alternativa real y adecuada de lucha. Más recientemente, nos planteamos la posibilidad del control biológico de Ceratitis con hongos entomopatógenos. Un estudio exhaustivo de la literatura científica acerca del potencial de los hongos como agentes de control biológico de esta plaga reveló que se trataba de un área prácticamente inexplorada. La información encontrada se limitaba a dos s científicos brasileños sobre la patogeneicidad de Metarhizium anisopliae sobre moscas adultas de C. capitata en el laboratorio (García et al., 1980, 1984). En base a esto, evaluamos, en laboratorio, la susceptibilidad de la mosca a diferentes cepas fúngicas, todas ellas Deuteromicetos, entre los que se encuentran algunos de los géneros entomopatógenos de dípteros más importantes, capaces de provocar epizootias en poblaciones de mosca bajo condiciones de laboratorio y campo (Barson et al., 1994; Reithinger et al., 1997). Dos de las cepas evaluadas en nuestro estudio, un Metarhizium anisopiae y un Paecilomyces fumosoroseus, mostraron un elevado grado de infectividad, suficiente para justificar posteriores trabajos que permitieran evaluar su potencial como agentes de control (Castillo et al., 2000). Brevemente, la susceptibilidad de Ceratitis capitata a los distintos hongos se evaluó sometiendo a los adultos, mediante aplicación tópica, a diferentes concentraciones de conidios, en formulación acuosa, (en un rango entre 1 x 10 6 y 1 x 10 2 conidios/ mosca) de cada una de las cepas. M. anisopliae y P. fumosoroseus mostraron niveles significativamente similares de patogeneicidad, con valores de LD 50, a los 10 días del tratamiento, de 5.1 x 10 3 y 6.1 x 10 3 conidios/mosca, respectivamente. Los LT 50 a las dosis más altas de estudio (1 x 10 6 y 1 x 10 5 conidios/mosca) tampoco permitieron establecer diferencias entre las cepas. Sin embargo, a la dosis de 1 x 10 4 conidios/mosca, la cepa M. anisopliae mostró mayor velocidad provocando la micosis y, consecuentemente, matando a los insectos (LT 50 de 8.8 frente a los 11.0 días requeridos por P. fumosoroseus). La velocidad provocando la muerte es un factor importante cuando consideramos los hongos entomopatógenos como agentes de biocontrol de Ceratitis, porque un periodo de tiempo reducido entre el tratamiento y la muerte puede evitar, en gran medida, la oviposición de las hembras. Siguiendo este criterio se seleccionó la cepa de M. anisopliae para el desarrollo del método de control. La Ceratitis capitata, mosca de la fruta o del Mediterráneo, es una de las plagas más perjudiciales que se conocen para la agricultura. Afecta a una gran variedad de cultivos. Ha surgido un posible nuevo método de lucha contra Ceratitis basado en hongos patógenos Metarhizium anisopliae: mecanismo de acción y su potencial como agente de biocontrol. Etapas en el proceso de infección de Metarhizium anisopliae. Los hongos son únicos entre los patógenos de insectos en el sentido en que infectan a su huésped a través de la cutícula externa. La patogénesis se inicia con la adhesión de un conidio a la cutícula del insecto, a través de un mecanismo de adhesión no específico mediado por la hidrofobicidad de la pared celular del conidio (Boucias y Pendland, 1991). Una vez el propágulo entra en contacto con la cutícula del insecto apropiado, puede germinar y producir estructuras de penetración como, por ejemplo, el appressorium, a partir del cual se forman las hifas de penetración. Una infección en la epicutícula puede ser abortada si un factor esencial para la fase de adhesión está ausente (St. Leger, 1991). Específicamente, la infección puede verse impedida por baja humedad (el hongo requiere agua HORTICULTURA 167-MARZO

3 para la germinación y su crecimiento), por la incapacidad para utilizar nutrientes disponibles en la superficie de la cutícula, o por la ausencia de los factores necesarios para reconocer un huésped susceptible o un lugar adecuado para la penetración. El reconocimiento de un huésped susceptible puede incluir tanto señales químicas como topográficas y/o la presencia de factores inhibidores como ácidos grasos o melanina, dentro de la cutícula (St. Leger et al., 1991). Para penetrar la cutícula, el hongo utiliza una combinación de mecanismos enzimáticos y mecánicos. La producción de exoproteasas se ha demostrado que son importantes para la penetración de M. anisopliae, pero parece que otras enzimas como endoproteasas, esterasas, lipasas y quitinasas pueden estar también implicadas (Butt et al., 1998). El control actual de C. capitata en España se basa en el uso de insecticidas organofosforados (malation), de ahí la necesidad de buscar métodos alternativos y más ecológicos de control, como la suelta de machos estériles, la captura masiva basada en atrayentes de hembras y el control biológico con parasitoides Una vez el hongo alcanza el hemocele, crece como cuerpos hifales, que son estructuras uni- o multicelulares a las que les falta una pared celular formal. En su lugar poseen una fina capa fibrilar sobre la membrana plasmática; MARZO 2003 HORTICULTURA Cuerpos hifales secundarios Representación esquemática de las estructuras de infección de Metarhizium anisopliae Conidio Blastosporas son las llamadas blastosporas. Antes de que el hongo pueda proliferar en el hemocele, debe evitar la respuesta defensiva del insecto y la producción de toxinas por el hongo puede debilitar dicha respuesta. El insecto puede responder a la infección fúngica utilizando mecanismos humorales (por ejemplo, fenoloxidasa, lectinas, proteínas y péptidos de defensa) y celulares (fagocitosis o encapsulación) (Bidochka et al., 1997). La muerte del insecto puede sobrevenir a través de una combinación de acciones, incluyendo el agotamiento de nutrientes, obstrucción física o invasión de órganos, y toxicosis. A este respecto, M. anisopliae produce las dextrusinas que parece están relacionadas con la patogeneicidad. Varias de estas substancias se sabe que inducen parálisis tetánica (Dumas et al., 1996) y otras pueden ser inmunosupresivas (Cerenius et al., 1990). Después de la muerte, el hongo crece en el interior del cadáver, produciendo metabolitos que se piensa pueden estar implicados en la exclusión competitiva de otros microorganismos que pueden competir por el cadáver. Posteriormente, y bajo condiciones Apresorium Placa de penetraci n Epicut cula Procut cula Hemocele Epidermis favorables, las hifas emergen del cadáver; producen células conidiogénicas, se produce la esporulación en la superficie de la cutícula y se liberan los conidios. La dispersión de los conidios es pasiva, dependiendo fundamentalmente del viento, pero otros factores como la lluvia, pueden jugar un papel importante en la diseminación. Seguridad de M. anisopliae La seguridad es uno de los principales factores en el desarrollo y uso práctico de un plaguicida microbiano y es fundamental en el momento de su registro. Schaerffenberg (1968) realizó los primeros estudios toxicológicos de M. anisopliae sobre mamíferos. Este y posteriores trabajos permitieron establecer que no se desarrolla sintomatología patológica o toxicológica cuando el hongo se aplica, por diferentes métodos, a pájaros, peces, ratas, ratones o conejos. Estos datos parecen indicar que el hongo es seguro. Tampoco se han detectado efectos perjudiciales sobre abejas, lombrices, Daphnia sp y palomas. Potencial de M. anisopliae como agente de biocontrol M. anisopliae es un importante hongo entomopatógeno que

4 FITOSANDAD Los hongos son únicos entre los patógenos de insectos en el sentido en que infectan a su huésped a través de la cutícula externa. Una vez que entran en contacto, pueden germinar y producir estructuras de penetración se ha utilizado ampliamente como modelo en investigaciones acerca de la virulencia y los mecanismos bioquímicos de la patogeneicidad (Charnley, 1989; Charnley y St. Leger, 1991; Hajek y St. Leger, 1994), así como en estudios sobre formulación y aplicación del hongo y su uso en estrategias de biocontrol. M. anisopliae es un Deuteromiceto, por lo que sólo se le conoce un ciclo de vida asexual. El hongo se identifica fácilmente por poseer unas esporas asexuales (conidios) verdes, cilíndricas que se producen en cadenas y forman una capa compacta y densa de esporas. Este hongo es una especie ubicua y probablemente forma parte de la flora natural del suelo. Además se ha aislado de muchas especies de insectos, describiéndose más de 200 especies de huéspedes, pertenecientes a 7 órdenes de insectos. La mayoría de estos huéspedes pertenecen al orden coleóptera, con un total de 134 especies, principalmente entre las familias Curculionidae, Elateridae y Scarabaeidae; se han detectado infecciones en Díptera e Himenóptera, aunque son poco frecuentes. A pesar de esto, cabe destacar que distintas cepas de M. anisopliae difieren considerablemente en su rango de huéspedes, por lo que se requieren bioensayos para seleccionar la cepa más virulenta frente a un insecto específico. M. anisopliae var. acridum se está desarrollando actualmente como agente de control biológico de saltamontes y locustas en varias regiones del mundo, incluyendo Africa, Australia y Brasil. Se venden como una formulación volumen ultra bajo, de esporas secas en aceites minerales, bajo el nombre comercial Green Muscle. Además, este hongo tiene un éxito considerable cuando se aplica en suelo. Se emplea para el control de la plaga de los pastos Aphodius tasmaiae Hope, en Australia (Gillespie y Claydon, 1989). Actualmente se está comercializando otro producto basado en M. anisopliae para el control de otra plaga de los pastos, Adoryphorus couloni, en Australia también, bajo el nombre BioGreen. M. anisopliae ha mostrado un considerable potencial para el control de termitas. El producto, comercializado como BioBlast, es capaz de producir la destrucción total de una colonia de termitas, en un periodo de 2 semanas, con una infección de la población tras el tratamiento de sólo el 5-!0%. Se vende como una formulación inyectable. Finalmente, la cámara de control de cucarachas Bio-Path es el primer agente microbiano registrado en USA para el control de cucarachas. Las cucarachas que entran en la cámara se ponen en contacto con el hongo y reciben una dosis letal de esporas. Los insectos infectados pueden también transmitir el patógeno a miembros sanos de la población. Desarrollo de un método atracticida para el control de Ceratitis capitata Actualmente, el control biológico de plagas de insectos con hongos entomopatógenos se realiza mediante métodos aumentativos por inundación y consiste en la liberación del agente patógeno, de forma masiva (normalmente mediante pulverización) y en un corto espacio de tiempo (Dent, 2000). Aún con las mejoras introducidas gracias al desarrollo de las técnicas de formulación, esta práctica sigue mostrando problemas, originadas fundamentalmente por la falta de persistencia de las esporas en campo, que si bien ha aumentado considerablemente, todavía no es suficiente. Esto ocasiona que, para alcanzar el nivel de control adecuado de la plaga, se requieran aplicaciones masivas frecuentes, lo que deriva en una falta de competitividad frente a los métodos actuales de control con insecticidas químicos. Se hace necesario, por tanto, el desarrollo de un método de aplicación de hongos selectivo y de larga duración que subsane, en lo posible, los actuales inconvenientes. Para ello, se pensó en diseñar el método atracticida que se describe a continuación y cuyo primer paso fue el diseño de la trampa atrayente-contaminante La muerte del insecto se produce a través de una combinación de acciones, incluyendo el agotamiento de nutrientes, obstrucción física o invasión de órganos y toxicosis. M. anisopliae produce las dextrusinas que parece están relacionadas con la patogeneicidad Así, el método se caracteriza por emplear un dispositivo atrayente-contaminante en el cual las esporas del hongo se fijaron sobre un material mineral adsorbente, este material, a su vez, llevaba incorporado un atrayente específico para el insecto a controlar, en este caso, trimedlure. Las esporas se formularon en aceite, componente que tenía una función doble en la trampa. Contribuía, por una parte, a evitar la desecación de las esporas y favorecer la adhesión de éstas al cuerpo del insecto; por otra HORTICULTURA 167-MARZO

5 parte, y debido a que el propio emisor constituye el soporte de las esporas, influía sobre la emisión del atrayente, prolongando su duración. La utilización de aceite en la formulación de hongos entomopatógenos es una práctica habitual desde que Prior et al. (1988) describiese que incrementaba la efectividad de los patógenos. Este aumento de efectividad se debe, probablemente, a que el aceite evita la desecación de los conidios, aumenta la capacidad de adhesión del conidio a la cutícula evitando, así, la primera barrera de la patogeneicidad, extiende el inóculo sobre el cuerpo del huésped, incluso dentro de las hendiduras y, por último, posiblemente interfiere con la naturaleza defensiva de la cutícula. M. anisopliae se está desarrollando actualmente como agente de control biológico de saltamontes y locustas en Africa, Australia y Brasil, además tiene un éxito considerable en el suelo para el control de la plaga de los pastos, en Australia y se ha mostrado que tiene potencial para el control de termitas y cucarachas Adicionalmente, el trabajo de Barson et al. (1994) sobre el control de Musca domestica mediante Metarhizium spp muestra que cuando los conidios del hongo se formulan en aceite vegetal la eficacia del tratamiento (referido a la velocidad provocando la micosis) es dos veces superior a la obtenida con formulaciones basadas en agua. El complejo formado por el material adsorbente MARZO 2003 HORTICULTURA Trampa atrayentecontaminante incluyendo la placa infectiva y un emisor adicional de trimedlure (Econex) para atracción a largas distancias. hongo-atrayente se fijó sobre un material adherente para impedir la dispersión el complejo por acción, por ejemplo, del viento. Para este fin se pensó en utilizar una sustancia gelificante, complementada con un humectante que, además de fijar el complejo, fuese capaz de mantener un grado de humedad relativamente alto y constante a lo largo del tiempo. Por último, el dispositivo, en campo, se colocó en una trampa delta clásica, de forma que las esporas quedaban protegidas, también, de las radiaciones solares. En principio, este método de aplicación de hongos entomopatógenos parece poseer ventajas indiscutibles frente a los actuales métodos de aplicación, mediante pulverización. Cabe destacar, en primer lugar, la selectividad derivada del empleo de atrayentes específicos y la gran duración del efecto atrayente-contaminante, gracias al empleo del emisor de velocidad controlada (material adsorbente). A- demás, se consigue una persistencia mucho mayor de las esporas con el control de la humedad. Por otra parte, la concentración de esporas por unidad de superficie aumenta considerablemente lo cual, unido a la acción atrayente, favorecerá en gran medida la eficacia del tratamiento a la vez que se reduce considerablemente la cantidad de esporas aplicadas por hectárea. Por último, se evita la inundación masiva de hongos en zonas de cultivo, con lo que se minimiza un posible efecto sobre la fauna útil. El ensayo en el laboratorio de placas atrayentes-contaminantes, envejecidas en condiciones de campo, confirmó la eficacia de éstas provocando infección durante más de tres meses. Estos resultados impulsaron el posterior ensayo en campo. Evaluación de la actividad atracticida en campo El objetivo del ensayo fue estudiar la dinámica poblacional de la mosca de la fruta en un campo tratado con esporas del hongo y en un campo con tratamientos convencionales y estimar si existen diferencias entre ellos. Se valoró también, de esta forma, el efecto de control sobre la mosca y la compatibilidad con agroquímicos de uso ordinario. El campo de ensayos se encuentra en el término municipal de Alzira, en la Ribera Alta. La zona es un valle cerrado por cadenas montañosas excepto en su lado Oeste, único extremo del campo que linda con otros cultivos de cítricos.

6 FITOSANDAD moscas/mosquero/d a /abr 04/may 19/may La zona de experiencias tiene una extensión de 40 Ha, y linda al oeste con una zona utilizada para un ensayo de placas quimioesterilizantes y al este con campos forestales. A 300 metros al oeste de la zona de experiencias, se eligió un campo de 5 Ha que se tomó como blanco para comparar la evolución de sus capturas con las del campo tratado con hongos. Para prevenir la invasión de la zona tratada por moscas de huertos vecinos se han empleado dos métodos de control. El primer método está basado en la captura masiva. Éste se realiza colocando trampas con a- trayentes e insecticida a lo largo de la frontera del campo tratado. El segundo método, que refuerza el efecto barrera conseguido con los mosqueros, consiste en tratamientos convencionales con malation y cebo proteico, en los campos vecinos a la zona en estudio. El campo de ensayo es una plantación donde predominan especies del género Citrus, siendo las variedades cultivadas: Marisol, Clemen Nules, Navelina, Navelate y Valencia-late. La zona de experiencias de 40 Ha está dividida en dos zonas de ensayos. La parte este del Valle, de 20 Has de extensión, donde se han Gráfico1.jpg Rh_hi2003/Rh_167/fotosdig 03/jun 18/jun 03/jul 18/jul 02/ago 17/ago fecha 01/sep 16/sep 01/oct 16/oct La seguridad es un de los principales factores en el desarrollo y uso práctico de un plaguicida microbiano. No se ha desarrollado sintomatología patológica o toxicológica en pájaros, peces, ratas, ratones y conejos. Tampoco sobre abejas, lombrices, Daphnia sp y palomas Blanco Zona Hongo un trto. Zona Hongo dos trto. 31/oct 15/nov 30/nov Evolución de la población de Ceratitis capitata sometida al control biológico de Metarhizium anisopliae. realizado las aplicaciones convencionales de los cultivos de cítricos (aplicaciones semanales por parcheo de malation con cebo proteico desde un mes y medio antes de la recolección de los cítricos) y una colocación de trampas infectivas de abril a junio. La zona más occidental de la parcela de ensayos tiene también una extension de 20 Has, y en ella, además de los tratamientos convencionales, se han colocado placas infectivas, dos veces durante la campaña, de abril a junio y de julio hasta el final de la campaña (diciembre). Características y localización de las trampas. Las placas atrayentes-contaminantes se introdujeron en trampas delta y se colgaron de los árboles a una altura de 1,5 m. En toda la zona del campo de ensayos se pusieron 30 trampas por hectárea a tresbolillo, de forma que cada trampa tuviera un radio de influencia de 11 metros. En total se colocaron 600 trampas en cada zona. A cada trampa delta, además de la placa con el gel con las esporas del hongo, se le introdujo adherido a su pared tres sobres de Tripack de Suterra (trimetilamina, acetato amónico y putrescina) con los que se pretende aumentar la atracción de hembras. En una de cada tres trampas se introdujo un emisor de trimedlure (TML) de Econex para la atracción sobre machos a largas distancias. En este caso, la distancia entre emisores de TML es tres veces mayor que la distancia entre emisores Tri-Pack. Las trampas se colocaron entre el 20 de marzo y el 2 de abril en toda la zona de ensayos. En la parte tratada más occidental de la parcela de ensayos las placas de hongo se sustituyeron por trampas nuevas la segunda quincena de junio, mientras que la parte este de la zona de ensayos se retiraron las trampas que se habían colocado. Las trampas de la zona occidental no se han vuelto a sustituir desde el mes de junio. Medida de la eficacia del método: seguimiento de la población de mosca Para realizar el seguimiento de la población se colocó 1 mosquero McPhail (atrayente de TML Econex + pastilla DDVP) por hectárea tanto en los campos tratados con hongos como en la parcela blanco. Los mosqueros McPhail son de plástico, invaginados y con tapa transparente. Se han revisado semanalmente desde el mes de febrero hasta diciembre. Resultados del ensayo a- tracticida Los resultados del seguimiento de la población en la zona HORTICULTURA 167-MARZO

7 tratada con hongo de abril a junio, en la zona tratada con hongo dos veces (abril a junio y de julio a diciembre) y en la parcela blanco se muestran en la gráfico 1. En la parcela blanco, situada al oeste de la zona de ensayos, el máximo de población se alcanza a mediados de junio llegando a un valor de 59 moscas por mosquero y día. En la evolución de la población del blanco se puede observar un descenso anómalo de la población la primera semana de julio, que coincide con aplicación aérea de malation que realizó la Conselleria d Agricultura, Pesca i Alimentació de Valencia, el 27 de junio, para el tratamiento de zonas vecinas. En principio, cabe pensar que la avioneta pudo desplazarse afectando a nuestra zona blanco. Los ensayos realizados con los hongos entomopatógenos han mostrado resultados muy esperanzadores, consiguiendo una reducción de la población de mosca en seis veces la población natural, cuando se mantienen durante toda la canpaña placas infectivas visibles En los campos tratados con hongos el máximo de la curva de población se ve retrasada 20 días respecto a la del campo blanco, lo que puede ser debido a dos circunstancias distintas: a la acción de los hongos que impiden la normal explosión demográfica y la retrasa, o a las diferentes condiciones microambientales de las parcelas debido a que están separadas por 3 km de distancia MARZO 2003 HORTICULTURA Respecto a la eficacia del tratamiento con hongo podemos observar que en el campo tratado con hongo de abril a junio la población de mosca se mantiene muy baja hasta el final del mes de junio. Sin embargo en cuanto retiramos las trampas infectivas la población de mosca se dispara alcanzando un máximo similar al del campo blanco. En cambio, en la zona que se trató de abril a junio y de julio a diciembre con los hongos la población de mosca tiene un ascenso de población mucho más atenuado, siendo el pico poblacional 4 veces menor que el observado en la zona tratada una sola vez con placas de hongos. Debemos tener en cuenta que los dos campos tratados con hongos son contiguos y en ambos se realizaron los mismos tratamientos químicos contra piojo rojo de California en mayo-junio, minador durante el verano y mosca de la fruta a partir del 15 de agosto. Además el campo con dos tratamientos de hongo se encuentra entre el campo blanco el campo con un tratamiento de hongo, lo que valida, en mayor grado, los resultados obtenidos. Discusión Los ensayos realizados con los hongos entomopatógenos han mostrado resultados muy esperanzadores, consiguiendo una reducción de la población de mosca en seis veces la población natural, cuando se mantienen, durante toda la campaña, placas infectivas viables. A este respecto, comentar que hacia el més de octubre las placas infectivas habían reducido mucho su capacidad de contaminación, cuando se contrastó su actividad en el laboratorio; sin embargo, en campo se observaba todavía control de la población, efecto que se mantuvo hasta el final de la campaña. Este hecho nos hace suponer que se puede haber establecido una epizootia, por transmisión horizontal de la contaminación y posteriores infecciones a partir de las esporas generadas sobre los cadáveres de los organismos afectados. Aunque estamos barajando Este método es compatible con otros tratamientos, por lo que podría convertise en una herramienta útil dentro del control integrado de la plaga, utilizándose complementariamente con otros métodos ecológicos de control, como la autoesterilización o la suelta de machos estériles resultados preliminares y a falta de confirmar estos datos en posteriores campañas citrícolas, el método parece viable, tanto a nivel de actividad como desde el punto de vista económico. Además, como se ha visto en el ensayo, el método es compatible con otros tratamientos, por lo que podría convertirse en una herramienta útil dentro del control integrado de la plaga, sobre todo, utilizándose complementariamente con otros métodos ecológicos de control, por ejemplo, la autoesterilización o la suelta de machos estériles. En este sentido, unos insecticidas que podrían resultar idóneos para establecer un posible efecto sinérgico serían, tanto por su inocuidad para el medio ambiente como por su mecanismo de acción, los reguladores del crecimiento de insectos. Estos insecticidas interfieren, directamente, en el desarrollo y formación de la cutícula de los insectos o en el proceso de la muda. Si la formación, endurecimiento o la esclerotización de la nueva cutícula se ven afectados, la capacidad de ésta para servir de barrera a la infección fúngica se ve comprometida y la probabilidad de producir una micosis podría potenciarse.