Validación de métodos de ensayo

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1 Validación de métodos de ensayo

2 Validación verificación de que los requisitos especificados son adecuados para un uso determinado Ejemplo: Un procedimiento de medición ordinariamente usado para la medición de la concentración de nitrógeno en agua puede ser validado para la medición de la concentración de nitrógeno en suero humano

3 Norma ISO 5725 Utiliza los términos veracidad y precisión para describir la exactitud de un método de medición: Veracidad: se refiere al grado de acuerdo entre el valor medio de un número grande de resultados de un ensayo y el valor de referencia verdadero o aceptado Precisión: se refiere al grado de acuerdo entre resultados de un ensayo

4 Protocolo para el diseño, conducción e interpretación de estudios colaborativos Pure & Appl. Chem., Vol. 78, N 1, , 2006 THE INTERNATIONAL HARMONIZED PROTOCOL FOR THE PROFICIENCY TESTING OF ANALYTICAL CHEMISTRY LABORATORIES (IUPAC Technical Report) La organización de estos ensayos requiere mucho trabajo y deben realizarse solamente con métodos que han sido previamente estudiados

5 Consideraciones preliminares: estimación preliminar de la precisión desvío del método recuperación aplicabilidad interferencias comparación con otros métodos procedimiento de calibración descripción cifras significativas número de laboratorios

6 Disponibilidad de un material de referencia Intervalo de niveles que se encuentran en la práctica Disponibilidad de materiales que lo representen Número de réplicas Envío de una muestra a los laboratorios antes de la oficial Número de laboratorios Información que se debe enviar Información que se debe requerir además de los datos

7 Material de referencia material suficientemente homogéneo y estable del cual una o más propiedades han sido suficientemente bien establecidas para ser usado para la calibración de un aparato, evaluación de un método de medición o asignar valores a materiales

8 Ejemplos de material de referencia Relacionados con magnitudes agua de pureza declarada, cuya viscosidad dinámica se usa para la calibración de viscosímetros suero humano sin un valor de magnitud asignado para la concentración del colesterol inherente, usado solamente como un material para el control de la precisión de la medida tejido de pescado con una fracción de masa declarada de dioxina, usada como calibrador

9 Ejemplos de material de referencia Relacionados con propiedades cualitativas: carta de colores que indica uno o más colores especificados compuesto de DNA con una secuencia especificada de ácido nucleico orina con androstenediona

10 material de referencia acompañado por los documentos emitidos por una autoridad, con referencia a procedimientos válidos para obtener un valor de la propiedad especificada con incertidumbre y trazabilidad Ejemplo: suero humano con valor de la magnitud asignado para la concentración de colesterol con su incertidumbre de medida declarada en su respectivo certificado, para usarse como calibrador o como material para el control de la veracidad de la medida

11 Proveedores de Materiales de Referencia National Institute of Standards and Technologies Institute for Reference Materials and Measurements (Unión Europea) Bureau of Analyzed Samples American Society of Testing and Materials

12 Trazabilidad propiedad de un resultado de medición por la cual el resultado puede ser relacionado a una referencia establecida mediante una cadena ininterrumpida y documentada de calibraciones, cada una de las cuales contribuye a la incertidumbre de medida

13 Trazabilidad en análisis químicos Errores sistemáticos pretratamiento de muestra interferencias efecto matriz

14 Datos discordantes En un conjunto de observaciones pueden encontrarse valores de la medición anormalmente altos o bajos que no concuerden con el resto de los datos Posibles causas por las cuales aparecen: mal funcionamiento del método error de cálculo error al transcribir los datos pérdida o contaminación Cuando aparece un dato sospechoso, puede someterse a una prueba para saber si realmente lo es y si debe ser rechazado

15 Parámetros

16 Exactitud Grado de concordancia entre el resultado de una medición y el valor de referencia aceptado Establecer contrastes de hipótesis correspondiente a una distribución muestral con respecto a un valor límite o certificado t n 1 x 0 n s

17 Exactitud Muestra / Patrón analizado programa interlaboratorio:

18 Exactitud Relación entre coeficientes de variación y concentración de analito en interlaboratorios (Ecuación de Horwitz)

19 Exactitud Porcentaje de desviación estándar relativa (RSD%) Similar a la reproducibilidad pero ahora utilizado para validar exactitud a través de un interlaboratorio

20 Exactitud Método de adiciones y estudio de recuperación Se adiciona analito puro de concentración conocida a muestra real sin analito (disolución matriz blanco) o con concentración previamente determinada Mismo proceso de pretratamiento de muestra Análisis y cálculo de recuperación de analito sobre el adicionado

21 Exactitud Relación entre concentración de analito y % recuperación (AOAC)

22 Exactitud Comparación con un método de referencia Método de referencia reconocido Método a validar 1, s 1 Establecer contrastes de hipótesis con valores de análisis 2, s2 H0 Exactitud validada

23 Linealidad Calcular la función que relaciona concentración analito y respuesta de método

24 Criterios de linealidad coeficiente de correlación r > 0,998 (r2 > 0,996) % RSD factores de respuesta de concentraciones de calibración < 5%

25 Homocedasticidad de residuos (varianza constante) Incluir valores de confianza para b (pendiente) y a (ordenada en el origen) x x x

26 Precisión Comparación estadística de las dispersiones (s) en condiciones de repetitividad y/o reproducibilidad Preciso, sesgado Impreciso, insesgado Impreciso, sesgado Preciso, insesgado

27 Precisión Condiciones de repetibilidad Precisión obtenida en la que los resultados de una medición se obtienen: mismo método mismo operador mismo instrumento/equipo de medida en un corto intervalo de tiempo (mismo día)

28 Precisión Condiciones de reproducibilidad Precisión obtenida en la que los resultados de una medición se obtienen mismo método misma muestra diferentes operadores diferentes equipos de medida intervalo de tiempo > 24 horas si es posible, diferentes laboratorios

29 Precisión Repetibilidad Reproducibilidad Instrumento No cambiar Cambiar Accesorios No cambiar Cambiar Operadores No cambiar Cambiar Matriz muestras Cambiar Cambiar Concentración Cambiar Cambiar Lote de reactivos No cambiar Cambiar Condiciones ambientales No cambiar Cambiar Laboratorios No cambiar Cambiar/ No cambiar

30 Precisión Al menos 5 medidas a 2 o 3 concentraciones diferentes del rango de trabajo Calcular el % RSD Precisión describe errores aleatorios Sesgo: describe errores sistemáticos Exactitud incorpora ambos tipos de error

31 Precisión Valores aceptables de precisión en función de la concentración para reproducibilidad Ecuación de Horwitz Para condiciones de repetibilidad se acepta:

32 Precisión Ecuación de Horwitz

33 Selectividad El grado por el cual un método puede determinar un analito en particular dentro de una mezcla compleja sin ser interferido por otros componentes de la mezcla Las pruebas para asegurar la selectividad dependen de: matriz muestra técnica utilizada información (relevante que verifique la selectividad del método)

34 Selectividad Análisis de muestra y MRC por el método a validar y otros métodos independientes Análisis de muestras conteniendo varias interferencias sospechadas en la presencia del analito de interés Se identifica irrefutablemente la señal de analito? Se ve interferido por otros componentes? Las interferencias inhiben o incrementan la detección o cuantificación? Señal de analito identificada y comprobada libre de interferencias

35 Intervalo/rango de trabajo Intervalo de concentración en el que puede obtenerse una exactitud y precisión adecuadas al objetivo del método Se determina a partir de estudios de: linealidad homocedasticidad precisión y exactitud

36 Intervalo/rango de trabajo Con todos estos datos se define el rango de aplicación del método: concentración mínima suele coincidir con LOD y LOQ concentración máxima en función de linealidad, homocedasticidad y datos de precisión y exactitud

37 Límite de detección (LOD) ylod = yblanco + 3 sblanco

38 Límite de cuantificación (LOQ) se define: yloq = yblanco + 10 sblanco para obtener yblanco: se puede tomar el valor a (ordenada en el origen) de la calibración se puede medir 10 veces un disolución blanco y realizar el promedio de la señal

39 Incertidumbre Estimación que caracteriza un intervalo de valores en el que se sitúa con una alta probabilidad el valor verdadero de la magnitud medida Se deben evaluar todas las fuentes de incertidumbre posibles de etapas que influyen en la medida última Todo contribuye a aumentar el error de la medida Propagación de errores

40 Incertidumbre

41 Robustez Medida de la capacidad del método de permanecer inalterado debido a pequeñas (pero deliberadas) variaciones en los parámetros indicando su fiabilidad durante su uso normal Identificar las condiciones y variables del método que puedan tener un efecto significativo en la medida Test de robustez de Youden-Steiner

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