NMX-F-353/1-S CACAHUATE, OTRAS NUECES, GRANOS Y SUS PRODUCTOS. DETERMINACIÓN DE AFLATOXINAS. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS.

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1 RECOPILADO POR: EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS NMX-F-353/1-S CACAHUATE, OTRAS NUECES, GRANOS Y SUS PRODUCTOS. DETERMINACIÓN DE AFLATOXINAS. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría del Patrimonio y Fomento Industrial.- Dirección General de Normas.- Depto. de Normalización Nacional.- Exp. No AVISO AL PÚBLICO Con fundamento en los Artículos 33, fracción XX y Quinto Transitorio de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal, así como en los Artículos 1o., 2o., 4o., 5o., 6o., 23, 26, 27, 29, 39, 40, 42 y 43 de la Ley General de Normas y de Pesas y Medidas y en el Artículo 13, fracciones I, II, VII, X, XI, XVIII, XXI, del Reglamento Interior de la Secretaría de Patrimonio y Fomento Industrial y en el Artículo 20 fracción II del Reglamento Interior de la Secretaría de Salubridad y Asistencia, esta Secretaría ha aprobado la siguiente Norma Mexicana: Parte 1 "PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Y OBTENCIÓN DEL EXTRACTO DE AFLATOXINAS EN CACAHUATE, OTRAS NUECES, GRANOS Y SUS PRODUCTOS". 1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIÓN La presente Norma Mexicana, establece el método de preparación de la muestra y de la obtención del extracto de aflatoxinas en cacahuate y sus productos; para ser usado en la determinación de aflatoxinas por el método de cromatografía en capa fina. Es también aplicable a otras nueces, granos y sus productos. 2. REFERENCIAS Esta Norma se complementa con las siguientes Normas Mexicanas vigentes: NMX-F-163/2-S. Cromatografía en capa fina - Método de preparación de placas. (Método de preparación de placas para cromatografía en capa fina). NMX-F-163/3-S. Cromatografía preliminar y cuantitativa en capa fina. NMX-F-163/4-S. Patrones de aflatoxinas - Requisitos de pureza". (Requisitos de pureza de los patrones de aflatoxinas). 3. REACTIVOS Y MATERIALES 3.1 Reactivos Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico, a menos que se indique otra cosa. Cuando se mencione agua, debe entenderse agua destilada Tierra de infusorios o diatomeas (opcional).

2 3.1.2 Cloroformo (CHCl 3.) Sulfato de sodio (Na 2 SO 4 )anhidro. Gel de sílice 60 para cromatografía en columna, mm para muestras de 50 g: Activarlo secándolo duramente una hora a 378 K (105 C); agregarle agua en proporción de 1 cm por 100 g, sellar y agitar hasta mezclar completamente. Almacenar 15 horas o poco más en un recipiente a prueba de aire. Éter anhídro. Mezcla MeOH o CHCl 3. (3:97). n-hexano. Materiales Matraces Erlenmeyer de 250 a 500 cm 2 con tapón de vidrio esmerilado Papel de filtración rápida Embudo Buchner (opcional) Frasco vial de 10 cm 2 provisto de tapón hueco de polietileno y tapa Lana de vidrio Columna para cromatografía de 2.2 cm de diámetro por 30.0 cm de longitud, con llave de teflón y reservorio de 250 cm 2 (véase figura 1) Material común de laboratorio de química, no especificado de otra manera. 4. APARATOS E INSTRUMENTOS 4.1 Molino de martillo o cortador giratorio (tipo cutter) o molino de disco (buril) (o equivalente). 4.2 Balanza con 0.1 g de sensibilidad. 4.3 Agitador con acción de muñeca 4.4 Equipo para filtración al vacío (opcional). 4.5 Baño de vapor. 4.6 Licuadora 5. PROCEDIMIENTO Precaución. Pulverizar las muestras secas puede ocasionar que se transmita polvo por el aire. Aunque no haya toxinas presentes, existe el peligro potencial de inhalar esporas del hongo o de reacciones alérgicas. Usar máscara o un recolector de polvo Preparación de la muestra del lote La contaminación de aflatoxinas en productos fragmentados como granos o nueces, es

3 posible que ocurra en zonas de alta concentración, que posiblemente no estén distribuidas al azar. Efectuar el muestreo y la preparación de las muestras teniendo en cuenta este factor. Debido a la posibilidad de zonas de contaminación, incluir muestra totales de laboratorio en la preparación de las muestras. Moler la máxima cantidad que sea práctica (1 kg mínimo) y hacer un mezclado completo para lograr una distribución efectiva de las posibles porciones contaminadas antes de tomar la muestra de análisis. Un cacahuate contaminado puede contener suficientes aflatoxinas para dar por resultado un nivel significativo, cuando se mezcle con 10,000 cacahuates (aproximadamente 5 kg) Crema de cacahuate y harina de cacahuate: No necesitan preparación antes de la extracción si no contienen partículas grandes Harina de cacahuate con partículas grandes: Reducir sus partículas, moliéndola hasta obtener un polvo fino en un molino de martillo, un cortador giratorio o en un molino de disco (buril), o equipo equivalente. Se procede igual en el caso de otras nueces, granos y sus productos. 5.2 Muestra para análisis: Sacarla con las mismas precauciones que se aplican a la muestra del lote. Siempre que sea posible, dividir agitando o por medio de cualquier procedimiento similar para dividir al azar, hasta que la subdivisión esté cerca de la cantidad deseada. Cuando la subdivisión no sea práctica, formar números de pequeñas porciones tomadas al azar. Con los líquidos, suspender cualquier material particulado antes de sacar la muestra para análisis. 5.3 Extracción En el caso de oleaginosas y sus productos: colocar 50 g en un vaso de licuadora, adicionarle 25 cm 2 de agua, 25 g de tierra de diatomeas (opcional), 250 cm 2 de cloroformo (CHCl 3 ) y homogenizar entre 3 y 5 minutos a alta velocidad. En el caso que no se requiera terminar de homogenizar, pasar al inciso Colocar 50 g de la muestra preparada en un matraz Erlenmeyer con tapón de vidrio esmerilado, de 500 cm 3. Agregarle 25 cm 3 de agua, 25 g de tierra de diatomeas (opcional), 250 cm 2 de cloroformo (CHCl 3.) y asegurar el tapón con cinta adhesiva Agitar 30 minutos en un agitado de acción de muñeca y filtrar a través de papel estirado o si es lenta la filtración, pasar a un buchner precubierto con una capa de 5 mm de la tierra de diatomeas y utilizar un vacío ligero. (Filtrar con vacío únicamente para filtraciones lentas, puesto que la evaporación del cloroformo es rápida, ocasionándose la concentración del extracto) Recoger los primeros 50 cm 3 de cloroformo filtrados y proceder como sigue :

4 5.4 Purificación del extracto de aflatoxinas, por cromatografía en columna: Preparar la columna y correr el cromatograma con 50 cm 3 del extracto de CHCl 3 como se indica a continuación, utilizando un promedio de flujo de 10 cm 3 por minuto : En el fondo de una columna para cromatografía, colocar una capa de lana de vidrio de aproximadamente 1 cm de espesor, cuidando que no quede muy compactada Agregar aproximadamente 5 g de Na 2 SO 4 anhidro, para dar una base al gel de sílice Agregar CH 3 Cl hasta la mitad de la columna Añadir 10 g de gel de sílice para cromatografía en columna preparado como se indicó en reactivos (véase 3.1) Lavar los lados de la columna con 20 cm 2 de CHCl 3 y agitar para dispersar el gel de sílice Cuando la proporción de asentamiento sea más lenta, drenar algo de CH 3 Cl para ayudar al asentamiento. Dejar de 5 a 7 cm de CHCl 3 por encima del gel de sílice Agregar lentamente 15 g de Na 2 SO 4 anhidro Drenar el CHCl 3 hasta el nivel del Na 2 SO 4 anhidro A la columna así preparada (véase fig. 1), agregar los 50 cm 3 del extracto de CHCl 3 de la muestra, obtenidos según Eluír a velocidad máxima con 150 cm 3 de n-hexano, seguidos por 150 cm3 de éter anhidro y desecharlos Eluír las aflatoxinas con 150 cm 3 de mezcla MeOH- CHCl 3 (3:97), recogiendo esta fracción desde el tiempo de adición hasta que pare el flujo Evaporar casi hasta sequedad en un baño de vapor y opcionalmente con ayuda de una suave corriente de nitrógeno Transferir el residuo cuantitativamente a un frasco vial con ayuda de CHCl Evaporar a sequedad, opcionalmente bajo una suave corriente de nitrógeno Sellar el frasco vial con un tapón hueco de polietileno y con su tapa, y protegerlo de la luz Guardar el extracto de aflatoxinas, para cromatografía en capa fina, en un congelador, continuándose en el capítulo 6 de la Norma NMX-F-163/3-S (véase 2) Esta parte 1 "Preparación de la muestra y obtención del extracto de aflatoxinas en cacahuate, otras nueces, granos y sus productos" se complementa con las partes 2, 3 y 4 de la Norma NMX-F-163-S "Granos de cacao - Determinación de aflatoxinas", aplicándose éstas de manera exactamente igual a los extractos de aflatoxinas de muestras de cacahuate, continuándose

5 en el capítulo 6 de la Parte BIBLIOGRAFÍA Association of Official Analytical Chemists.- Official Methods Of Analisis (A.O.A.C) Twelfth Edition, William Horwits Editor, Washigton, D. C Chapter 26, Natural Poisons. Alfatoxins, Method I (CB) parts , , , (a). México, D. F., a 27 de junio de La Directora General de Laboratorios de Salud Pública de la Subsecretaría de Salubridad, Ma. de Lourdes Costarrica González.- Rúbrica.- El Director General, Román Serra Castaños.- Rúbrica.

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