Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales

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1 Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales Lic. PEDRO ELÍAS PATIÑO MARTÍNEZ Lic. EDGAR ENRIQUE RAMÍREZ PARRA Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales Universidad de Santander Teléfono (57) Ext 253 Fax (57) BUCARAMANGA 2006

2 Justificación Durante el proceso de formación del estudiante de la UDES, los conceptos teóricos requieren ser corroborados mediante la experimentación los cuales muchos de ellos se privilegian al interior de las prácticas de laboratorio. Para dichas prácticas el alumno debe utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos químicos los cuales son preparados por laboratoristas o docentes. La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos químicos requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parámetros para cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de prepararlos y cuidados básicos. El presente manual permitirá a los laboratoristas o docentes tener una guía para la preparación de las diferentes soluciones utilizadas en las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales Pedro Patiño

3 CUIDADOS BASICOS Y NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL La preparación de las soluciones es un Proceso que requiere todos los cuidados básicos posibles y el cumplimiento de normas de Bioseguridad personal, ya que en dicha preparación se esta expuesto a químicos que son altamente tóxicos y nocivos para la salud humana CUIDADOS BASICOS Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente nivelada y calibrada. Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar completamente limpia. La vidriería donde se preparan los soluciones debe estar completamente limpia y en algunos casos estéril. Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos oscuros para evitar procesos de oxidación por acción de la luz. Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre, concentración, fecha de preparación, fecha de vencimiento y código de riesgos. Siempre se deben mezclar lentamente los ácidos fuertes sobre el agua. La preparaciones de ácidos fuertes o reactivos volátiles debe hacerse en las campanas extractoras de gases. NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la preparación que se realice Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que se prepare una solución. No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.

4 En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de la zona de preparación de reactivos o fuera de esta y consultar un médico. SOLUCIONES AGUA DE BROMO Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de bromo en tetracloruro de carbono. Cuidados: solución altamente tóxica para el organismo Uso: Para determinación de compuestos orgánicos ACETO-ORCEINA Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de Ácido Acético Glacial y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullición por 2 minutos, dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses Cuidados: Tóxicos y corrosivos Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas) ACETO CARMIN Pesar 0,5 gr de carmín, adicionarle 45 ml de ácido acético glacial y completar con 55 ml de agua destilada Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas) Cuidados: Tóxicos y corrosivos ACIDO CLORHIDRICO 2.5 N Medir ml de HCl 37%, aforar a 100 ml con H 2 O destilada

5 Cuidados: Tóxicos y corrosivo Uso: En pruebas de división celular (mitosis) ALCOHOL- CETONA Medir 70 ml de Alcohol Etílico absoluto y completar a 100 ml de solución con Acetona pura Cuidados: Comburente Uso: Decolorante para la coloración de Gram ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y completar a 100 ml con agua destilada Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Para titulación ácido base y pruebas cualitativas de ph. ACIDO SULFURICO 1 M Medir 49 ml de Ácido Sulfúrico y aforar a 1000 ml con agua destilada Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Para titulación ácido base ACIDO ACETICO 1 N Medir ml de ácido acético 100% y aforar a 1000 ml con agua destilada. Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Pruebas cualitativas de ph.

6 AZUL DE METILENO 1% Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada hasta obtener una solución uniforme Cuidados: Tóxicos Uso : Para tinción de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos vegetales, pruebas de difusión celular ALCOHOL ACIDO 3% Medir 97 ml de alcohol etílico absoluto, adicionarle con mucho cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de Ácido Clorhídrico al 37% Cuidados: Comburente y corrosivos Uso: Para coloración de Microbiológica ACIDO OXALICO 1 N Pesar 6,3 gr de ácido oxálico y aforar a 100 ml con H 2 O destilada Uso: Para titulación de ácido-base ACIDO NITRICO 3M Medir 50 ml de Agua Destilada, adicionarle 29.1 ml de ácido nítrico al 65% luego completar a 100 ml con H 2 O destilada Cuidados: Tóxicos y corrosivos AZUL DE BROMOTIMOL Pesar 0.1 gr. de azul de bromotimol y diluirlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador para titulación ácido-base

7 BARFOED Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H 2 O, luego adicionarle 1.8 ml de ácido acético glacial Cuidados: Tóxicos y corrosivos Uso: Diferenciación los Monosacáridos reductores de los Disacáridos reductores BIAL Pesar 1.5 gr. de orcinol y disolverlo en 500 ml de HCl concentrado y añadir 20 gotas de Fe Cl 3 1% Cuidados: Tóxico y corrosivo Uso: Para identificar pentosas BIURET Pesar 3 gr. de CuSO 4.5H 2 O, adicionarle 9 gr. de tartrato de sodio y potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Añadir 5 gr. de KI y completar a 1000 ml con NaOH. (NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua) Uso: Para determinación de proteínas(enlace peptídico) Cuidados: Tóxico y corrosivo BENEDICT Solución A: Pesar 173 gr. de Citrato de sodio, adicionarle 100 gr. de Na 2 CO 3 completar a 800 ml de H 2 O destilada. Filtrar y completar hasta 850 ml de H 2 O. Solución B: Pesar 17.3 gr de CuSO 4 y disolverlo en 150 ml de agua destilada Disolver suavemente la solución B en la A agitando continuamente. Uso: Para determinación de carbohidratos reductores Cuidados: Tóxico y corrosivo

8 BUFFER DE FOSFATOS Solución I: Pesar 13.8 gr. De NaH 2 PO 4 y disolverlo en 250 ml de H 2 O destilada Solución II: Pesar gr. De Na 2 HPO 4 y disolverlo en 500 ml de H 2 O destilada Mezclar ml de solución I de solución II y aforar a 500 ml con H 2 O destilada Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA BUFFER LISIS II Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M ph 8.0 y adicionarle gr NaCl y aforar a 1000 ml con agua destilada Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA BUFFER LISIS I Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100, adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. ph 7.5 y 5 ml de MgCl 2 1M aforar a 1000ml con H 2 O destilada destilada. (Tris-HCl 10mM. PH 7.5)= gr 100 ml s/n Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x ml tris ml Mgcl 2 1M). Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

9 BÚFER DE EXTRACCIÓN Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl ph mm, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mm, B- Mercaptoetanol 10 mm y SDS 1.3%. Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA BÚFFER DE DILUCIÓN (TE) Mezclar las siguientes sustancias: Tris HCl ph mm, EDTA 10 Mm Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA BÚFFER TBE 5X Mezclar las siguientes sustancias: Pesar 54 gr. de Tris Base, adicionarle 20 ml de EDTA 0.5 M y 27,5 gr de Ácido Bórico Completar con agua destilada en balón aforado a la cantidad necesaria, posteriormente autoclavar Cuidados: Tóxicos corrosivos Uso: Extracción de DNA

10 BUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA Solución A : Fosfato ácido de disodio (Na 2 HPO 4 ) 0.2 M Solución B : Ácido cítrico (C 6 H 8 O 7. H 2 O) 0.1 M BUFFER ph 5.0 (515 ml S/N A ml S/N B). BUFFER ph 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B) BUFFER ph 8.0 (972,5 ml S/N A ml S/N B). CLORURO DE SODIO 0.1 M Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H 2 O destilada Uso: Para Fenómenos de membranas DAMASHECK Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15 gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H 2 O destilada. Adicionarle 3 gotas de formol 37 % Uso: Para recuento de reticulocitos DRABKIN Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de bicarbonato de sodio (NaHCO 3 ) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio (K 3 Fe(CN) 6 ) Completar a 1000 ml con H 2 O destilada. Uso: Para Recuento en Hematológico Cuidados: Tóxicos corrosivos

11 2,4 DINITROFENILHIDRIZINA Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H 2 SO 4 concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol absoluto, decantar y utilizar el filtrado. Uso: Indicador Cuidados: Tóxicos DISOLUCION DE FERROCIANURO Pesar 1.65 gr. de K 3 (Fe(CN) 6 ) recristalizado, adicionarle 10.6 gr. carbonato de sodio anhídrido y aforar a 1000 ml de H 2 O destilada. Guardar en frasco oscuro (duración 2 meses). Uso: Indicador Cuidados: Tóxicos ETANOL 0.6 M Medir 34.9 ml de alcohol etílico absoluto y completar a un 1 litro de solución con H 2 O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana. ERLICH (PRUEBA) Ácido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solución de NaNO 3 0.5% y Na 2 CO 3 FOUCHER 25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H 2 O y 10 ml de cloruro férrico al 10 %

12 FEHLING A Pesar 34.6 gr. de CuSO 4. 5 H 2 O (vitriolo azul) y disolverlo en 500 ml de H 2 O destilada Cuidados: Tóxicos Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para determinación de azucares reductores FEHLING B Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le añaden 62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H 2 O Cuidados: Tóxicos y corrosivo Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinación de azucares reductores FENOLFTALEINA Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 % Uso: Indicador Ácido-Básico Cuidados: Tóxicos GLUCOSA 0.1 M Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H 2 O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana. GLICEROL 0.6 M Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H 2 O destilada Uso: Para Fenómenos de membrana.

13 HAYEN 2.5 gr. de sulfato de sodio 0.5 gr. de cloruro de sodio 0.25 gr. cloruro de mercurio completar a 1000 ml de H 2 O HIDROXIDO DE SODIO 1M Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H 2 O destilada Nota: La disolución del NaOH en el agua se debe realizar en la cámara extractora de gases Uso: Diferentes usos, principalmente Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo JUGO GASTRICO ARTIFICIAL Medir 40 ml de Ácido Acético 0.1 N, adicionarle 15 ml de Ácido Clorhídrico 0.1 N y aforar a 100 ml con agua destilada Uso: Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo LUCAS Pesar 17 gr. de ZnCl 2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en baño frío, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen y guardar en nevera. Uso: Diferenciación de alcoholes primarios, secundarios y terciarios y corrosivo

14 LUGOL Tejidos vegetales Parásitos 0.5 gr. de yodo 0.5 gr. de yodo 1 gr. de yoduro de potasio 1 gr. de yoduro de potasio 100 ml de agua destilada 300 ml de agua destilada Uso: Colorante Cuidados: Corrosivo LIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H 2 O destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37% MILLON Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO 3 concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja sedimentar y se decanta (preparación en cámara extractora ). Cuidados: Corrosivo MOLISCH Pesar 50 gr. de α naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95% (estable 1 semana) Uso: Para determinación general de Azucares y corrosivo

15 MEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA) Medir 500 ml de H 2 O destilada y adicionar lentamente 250 ml de H 2 SO 4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le mezcla dicromato de potasio y finalmente sé afora a 1000 ml con H 2 O destilada. Uso: Limpieza de material con restos carbónicos Cuidados: Corrosivo METIL NARANJA Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % o en 100 ml de H 2 O destilada Uso: Indicador Ácido Básico NESSLER Pesar 15 gr. de HgI 2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H 2 O. Esta disolución se vierte en el vaso con HgI 2, disolver muy bien con agitación. En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H 2 O Luego se le adiciona la otra solución y se agita, al final decantar y separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo)

16 NITRATO DE PLATA 0.1 N Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua destilada. Uso: Determinación de cloruros (formación de un precipitado blanco) y corrosivo NYLANDER Pesar 2 gr. de nitrato dibásico de bismuto y adicionarle 4 gr. de tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve para disolución completa de la sal, se enfría y se separa por filtración. NINHIDRINA 0.2% Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona Uso: Determinación del grupo amino de aminoácidos y proteínas y corrosivo NEGRO DE ERICROMO Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 % (o triturarlo con solución al 1 % de cloruro de sodio) Uso: Indicador

17 O-TOLUIDINA Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego disolverlos hasta completar a 1000 ml con ácido acético al 95 % ROJO CONGO 5% Pesar 5 gr. de rojo congo y disolverlo en 100 ml de H 2 O destilada Uso: Para reconocimiento de lípidos Cuidados: Tóxicos ROJO DE METILO Pesar 0.1 gr. de rojo de metilo y completar a 100 ml de alcohol etílico al 96 % Uso: Indicador Ácido Básico REACTIVO DE SCHIFF Pesar 2 gr. de fucsina básica y disolverlo en 400 ml de H 2 O hirviendo, enfriar a 50 C luego añadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de metasulfito de potasio, 1 gr. de carbón activado filtrar y adicionarle 10 ml de HCl 2N Almacenar en frasco oscuro y en nevera SELIVANOFF Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de Ácido Clorhídrico al 20% Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa) Cuidados: Tóxicos corrosivos

18 SOLUCION DE RINGER(Holfretter) ( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H 2 O destilada Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H 2 O destilada (1:9) SOLUCION PATRON DE LIPIDOS Pesar 1 gr. de ácido esteárico y disolver en 100 ml de cloroformo Uso: Determinación de lípidos corrosivos SOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l ) Pesar 3.6 gr. de KIO 3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H 2 O destilada, añadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de solución. Conservar a 4 C. Uso: Determinación de lípidos Cuidados: Tóxicos Proporción 1: 3 SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS MICROSCOPICAS 1 ml de ácido acético en 3 ml de alcohol etílico

19 SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO 4 Pesar gr. de KmnO 4 y disolverlo en 1000 ml de H 2 O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría y calibración del espectrofotómetro Cuidados: Tóxicos SOLUCION 30 ppm DE K 2 Cr 2 O 7 EN KOH 0.05 N Pesar 2.8 gr. de KOH y gr de dicromato de potasio (K 2 Cr 2 O 7 ) y llevarlo a 500 ml de solución con agua destilada. Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría corrosivos SOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO 4 Pesar 71.8 mg de KMnO 4 y llevar a 500 ml de solución con H 2 O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría SACAROSA 0.1 M 3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solución con H 2 O destilada Conservar en Nevera a 8 grados

20 SUDAN III 0.2% Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etílico al 70%, se mezclan(calentando en baño de María a 90 grados centígrados) y se dejan en reposo durante 24 horas. Uso: Para coloración de cutícula y gotas de grasa en células vegetales SUDAN III 1 gr. de sudan en polvo +30 ml de ácido acético y completar con 70 ml de H 2 O. (calentar para lograr una mejor disolución) Uso: Para determinación de lípidos por solubilidad en muestras biológicas SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER ph 7 Pesar 13.3 gr. de Na 2 HPO 4 y 4.3 gr. de ácido benzoito, llevar a 250 ml de H 2 O destilada, calentar y añadir 0.2 gr. de almidón y 5 ml de H 2 O destilada y completar a 500 ml con H 2 O destilada y conservar a 4 C. SULFATO DE COBRE (CuSO 4 ) 2000ppm Pesar 2 gr. de CuSO 4 y llevar 1000 ml de H 2 O destilada Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría

21 SULFATO 100 ppm Pesar gr. de K 2 SO 4 en un litro de H 2 O destilada TIONINA Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y completar a 100 ml con H 2 O destilada. Uso: Para coloración de tejidos vegetales TOLLENS Solución A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada Solución B: Preparar 20 ml de NaOH al 10% Mezclar Solución A y Solución B, luego adicionarle amoniaco concentrado hasta disolver el precipitado. Guardar preferiblemente en frasco oscuro Uso: Para formación del espejo de plata corrosivos TURK 100 ml de Ácido acético al 3% + 3 gotas de azul de metileno TIMOL AL 1 % Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico absoluto Uso: Indicador de ph

22 TIMOLFTALEINA Pesar 0.1 gr. de tiomolftaleina en 100 ml de alcohol etílico al 50 % TANRED Solución A: 18 gr. KI ml de H 2 O destilada. Solución B: 6.75 gr. de HgCl ml de H 2 O destilada La solución B se disuelve sobre la A, agitar hasta que desaparezca el naranja, completar con ácido acético glacial hasta 500 ml. VIOLETA DE METILO Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador de ph WRIGHT Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a poco 60 ml de Metanol Analítico y homogenizarlo, dejarlo en maduración por lo menos ocho (8) días. Filtrarlo cada dos meses Uso: Colorante para identificación de Células Sanguíneas

23 Bibliografía Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos químicos Frankfurter Strabe Darmstadt.GERMANY. J.T.Baker.Catalog Tyco Specialty Products.2003 Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA. Promega, Life Science Catalog-2004 Merck, Productos de Laboratorio para la práctica-indicadores- Sustancias patrón primario. Patiño, Pedro; Edgar Ramírez, Manuel de Preparación de Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002 Plumer, David; Introducción a la Bioquímica Práctica. McGraw Hill

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