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- Inmaculada Ríos Carmona
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1 NUEVA VESIÓN Test rápido para detección de gluten en alimentos y superficies. Ed.4 - Marzo 2012 KT-5660
2 Test rápido para detección de gluten en alimentos y superficies. Contenidos 1. Uso previsto Introducción Condiciones de almacenamiento Materiales suministrados para 25 test Materiales convenientes no suministrados Precauciones Preparación y análisis de las muestras Análisis de alimentos Análisis de superficies Interpretación de resultados Análisis de alimentos Análisis de superficies Control de calidad Especificidad Sensibilidad Análisis de alimentos Análisis de superficie Limitaciones eferencias... 9 Anexo
3 1. Uso previsto es una prueba rápida y sensible que permite detectar gluten tanto en los alimentos y bebidas como en superficies. 2. Introducción La enfermedad celíaca afecta al intestino delgado provocando la atrofia de las vellosidades intestinales, lo que interfiere en la absorción de nutrientes tales como proteínas, grasas, hidratos de carbono, sales minerales y vitaminas. Dicha enfermedad se debe a una respuesta inmunológica inapropiada al gluten (mezcla de proteínas presente en cereales) de trigo, cebada, centeno y, en menor medida, de avena [ref.1 y 2]. En la actualidad, el único tratamiento del que disponen los enfermos celíacos es seguir una dieta estricta sin gluten durante toda su vida, un hecho que presenta grandes dificultades en la práctica, sobre todo si tenemos en cuenta que el gluten, además de estar presente en multitud de alimentos, lo está también en aditivos y conservantes. Según la Comisión del Codex Alimentarius y el eglamento (CE)41/2009 sobre la composición y etiquetado de productos alimenticios apropiados para personas con intolerancias al gluten, para considerar un alimento exento de gluten o "sin gluten", respectivamente, éste debe tener un contenido de gluten inferior a 20 partes por millón (ppm*). * Miligramos de gluten por kilogramo de alimento. 3. Condiciones de almacenamiento se debe almacenar a una temperatura ambiente inferior a 30 ºC. Las tiras analíticas deben permanecer en su envase sellado hasta el momento de su uso para conseguir un óptimo funcionamiento. Después de realizar el análisis, los componentes de utilizados pueden eliminarse como un residuo normal en el hogar. 4. Materiales suministrados para 25 test - Tira analítica GlutenTox (x25). - Pipeta de plástico (x50). - Cucharilla de plástico desechable (x25). - Bote de extracción (x25) de tapón amarillo. - Bote de dilución (x25) de tapón azul. - Instrucciones de uso. 5. Materiales convenientes no suministrados - eloj, preferentemente con cronómetro. - Mortero o utensilios para triturar la muestra. - Balanza. - Alcohol Etílico. - Guantes desechables sin polvo. 2
4 6. Precauciones - Se recomienda el uso de guantes desechables sin polvo para evitar contaminaciones que interfieran con el análisis. Si no se dispone de ellos, extreme las precauciones lavándose las manos cuidadosamente antes del test. - Una vez sacada la tira GlutenTox del envase metálico, debe utilizarse lo antes posible y en un ambiente lo más limpio posible. - No usar ningún elemento del kit después de la fecha de caducidad. - No ingerir ninguna solución (líquido) del kit (el bote de extracción contiene alcohol etílico). - Manténgase fuera del alcance de los niños. 7. Preparación y Análisis de las Muestras 7.1. Análisis Alimentos NOTA IMPOTANTE! - Antes de utilizar el kit, limpie con agua y jabón los materiales y las zonas en las que la muestra vaya a estar en contacto y aclare después con abundante agua. Es muy aconsejable pasar un trapo limpio humedecido con alcohol tras la limpieza. Los materiales incluidos en el kit GlutenTox vienen listos para usar, no requieren limpieza previa y son desechables tras su uso Triture la muestra lo máximo posible utilizando un mortero y/o una picadora doméstica perfectamente limpia. Si la muestra es muy dura (turrón, caramelos, etc.) rómpala previamente con un cuchillo o martillo para facilitar un triturado eficaz. NOTA IMPOTANTE! - Si un alimento consta de varias partes, asegúrese de tomar una muestra representativa de cada una y de preparar una muestra final homogénea. Si no lo hace así y el gluten estuviera distribuido desigualmente en el alimento podría obtenerse un falso negativo Utilice medidas de enrase del alimento con la cucharilla suministrada siguiendo la tabla mostrada a continuación (Tabla 1. "Cantidad de muestra según tipo de alimento"), o si dispone de una balanza adecuada (1), pese 1 gramo de muestra. Si la muestra es líquida, use una medida de la cucharilla suministrada o, alternativamente, tome 1 mililitro de líquido si tiene otro instrumento de medida de volúmenes. (1) El uso de la balanza aumenta la precisión del proceso de análisis 3
5 Tipo Alimento Ejemplos Cucharadas Harinas, Polvo fino Alimentos porosos Líquidos Carnes y embutidos Harina maíz, harina de arroz, leche en polvo, especies, etc. Pan, galletas, bizcochos, snacks, etc. Leche, leche condensada, horchata, yogur, salsas, cremas, etc. Carnes, chorizo, morcilla, paté conservas de carnes y pescados, etc. Tabla 1. Cantidad de muestra según tipo de alimento Añada el contenido de la cucharilla suministrada, el gramo o el mililitro al bote de extracción de tapón amarillo Cierre el bote, agítelo vigorosamente durante al menos 2 minutos y déjelo reposar durante unos 5-10 minutos de forma que se queden los restos sólidos en el fondo del tubo. El tiempo de reposo dependerá del tipo de muestra Coja líquido con la pipeta de plástico desechable del bote de extracción de tapón amarillo y añada 12 gotas al bote de dilución de tapón azul, el límite de detección será de 4 ppm. Tras esta operación, tire la pipeta de plástico. Agítelo suavemente durante al menos 15 segundos Abra el bote de dilución de tapón azul y coloque el tapón del mismo bote invertido sobre una superficie plana. Añada con una pipeta desechable nueva 5-6 gotas del bote de dilución de tapón azul al tapón del mismo. Ponga en contacto este líquido con la zona algodonosa (zona inferior de la tira) hasta que absorba todo el líquido (ver Figura 1 sección 6 y 7). Espere un máximo de 10 minutos para ver el resultado final, si pasan más de 10 minutos, el resultado final podría perder fiabilidad. En algunos casos una alta concentración de gluten puede hacer aparecer el resultado en menos tiempo (1-2 minutos). 4
6 * * Según equivalencias tabla 2 12 para 4 ppm (Ensayo general) 3 para 20 ppm (Ensayo opcional) Máximo 10 minutos Figura 1. Preparación y análisis de las muestras 5
7
8 esultado positivo: si además de la línea de control (AZUL), también aparece una línea OSA en la parte central del test (T), la muestra contiene al menos 4 ppm de gluten. NOTA: La intensidad de la línea rosa suele depender de la cantidad de gluten que contenga la muestra. En los casos en los que el usuario quiera confirmar si el alimento tiene más de 20 ppm de gluten en referencia a la legalidad vigente, se recomienda hacer un segundo ensayo siguiendo las instrucciones del apartado 7.1.5, pero añadiendo sólo 3 gotas del bote de extracción de tapón amarillo al bote de dilución de tapón azul. Si en este ensayo adicional se obtiene un resultado positivo (aparición de una línea OSA), la muestra analizada contiene más de 20 ppm de gluten, superando así el límite establecido legalmente para su etiquetado como sin gluten. Por el contrario, si el resultado es negativo (no aparición de una línea OSA), la muestra presentará probablemente una cantidad de gluten comprendida entre 4-20 ppm (ver Figura 2. "Interpretación de resultados"). En ambas situaciones, para una mayor exactitud y precisión en la medida del contenido de gluten en el alimento, Biomedal recomienda hacer un análisis con técnicas cuantitativas. esultado inválido: Si la línea de color AZUL no aparece, independientemente de que aparezca o no la línea de color OSA, la prueba se considera inválida. Las causas más comunes por las que puede aparecer un resultado inválido son: una cantidad insuficiente de muestra, error al realizar alguno de los pasos o deterioro de los reactivos. Si esto ocurre, repita el test, y si persiste el problema contacte con su proveedor Análisis de superficies esultado negativo: Si aparece una sola línea de color AZUL (línea de control) en la parte central del test (C). La contaminación potencial de la superficie es inferior a 0,01 ppm de cada Kg de alimento en una superficie de trabajo de al menos 900 cm 2 (menos de 30 cm x 30 cm). esultado positivo: Si además de la línea de control aparece también una línea OSA en la parte central del test (T), existe una contaminación positiva con gluten. esultado inválido: Cuando la línea de control AZUL no aparece, se aplican las mismas consideraciones que para el apartado 8.1. de resultados inválidos. 9. Control de calidad El control interno de funcionamiento viene incluido en el test. La línea azul que aparece es el control interno del test comprobando que el volumen de muestra es suficiente y que el procedimiento seguido ha sido el adecuado. 10. Especificidad es capaz de detectar específicamente la presencia de la fracción tóxica, para los celíacos, de prolaminas de trigo, centeno, cebada y, también, cantidades suficientemente elevadas de avena que supongan un riesgo para algunos celíacos. Sin embargo, no se observa señal positiva cuando las muestras contienen arroz y maíz, cereales seguros para los celíacos, y otros ingredientes vegetales seguros como la soja. 7
9 NUEVA VESIÓN ENSAYO GENEAL Análisis con 12 gotas Alimentos Sin Gluten Menos de 20 ppm ENSAYO OPCIONAL Análisis con 3 gotas Alimentos con más de 4 ppm y con menos de 20 ppm de gluten* Alimentos con Gluten* Más de 20 ppm * Se recomienda un ensayo cuantitativo en laboratorio acreditado o bien descartar el consumo en celíacos en caso de que no se pueda acceder a dichos análisis. Contactar con Biomedal para asistencia técnica: Tel: info@glutentoxhome.com Figura 3. Interpretación de resultados. 8
10 11. Sensibilidad Análisis de alimentos El límite máximo de detección es de 4 ppm. La alta sensibilidad del test permite ajustarse ampliamente a las directrices del Codex Alimentarious y el eglamento (CE)41/ Análisis de superficies El resultado obtenido del ensayo es la presencia o ausencia de gluten por la superficie analizada, no pudiéndose extrapolar a valores de ppm de gluten. Analizando la superficie de 16 cm 2 detectamos un mínimo de 10 ng/cm 2. Con estos datos podemos estimar que si por una superficie examinada de trabajo de por ejemplo cm 2 (40 cm x 25 cm), donde el análisis haya salido negativo, y donde se trabaja con una masa alimentaria de 1 kg se tiene la seguridad que el producto final tendría menos de 0,01 ppm (0,01 mg gluten/kg alimento), esta cantidad es unas veces menos que la cantidad permitida por la normativa europea establecida en 20 ppm (20 mg gluten/kg alimento). Esto significa que el método tiene unos grandes márgenes de seguridad y que su empleo proporciona mucha tranquilidad a los clientes, asociaciones de celíacos e inspectores de seguridad alimentaria. 12. Limitaciones En algunas muestras con chocolate, como consecuencia de una mayor complejidad de la matriz del alimento, el proceso de extracción puede ser insuficiente y por tanto derivar en un resultado falso negativo. En alimentos tratados con temperaturas superiores a 180 ºC el gluten puede extraerse con menor eficiencia, pero en condiciones de máxima sensibilidad (12 gotas del extracto sobre el bote con tapón azul), la detección de un mínimo de 20 ppm es factible. 13. eferencias 1. Shan L., et al.; "Structural basis for gluten intolerance in celiac sprue"; Science; 2002; 297: Comino I. et al.; Diversity in oat potential immunogenicity: basus for the selection of oat varieties with no toxicity ; Gut; 2011; 60:
11 10 Anexo 1 Superfície mínima para analizar. 16 cm 2 16 cm 2 40 cm
12 Para más información, por favor visite nuestra WEB o contacte con nosotros en: SEVILLA Av. Américo Vespucio, nº 5-4, planta 1ª, módulo 12 Parque Científico Tecnológico Cartuja Sevilla - España Tel. (+34) Fax. (+34) Biomedal S.L info@biomedal.com - info@glutentoxhome.com 11
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