Diagnóstico de virus fitopatógenos

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Andrés Ortega Juárez
hace 8 años
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1 Diagnóstico de virus fitopatógenos Curso: Diagnósticos en Fitopatología. 24 de setiembre de 2015 Vivienne Gepp Dos páginas web Gergerich, R.C., and V. V. Dolja Introduction to Plant Viruses, the Invisible Foe. The Plant Health Instructor. DOI: /PHI-I engroups/pages/plantviruses.aspx Plant Pathology Guidelines for Master Gardeners. Symptoms Of Viral Diseases. es/module_06.shtml Características generales Criterios de clasificación Virus fitopatógenos: Acido nucleico + proteína 90% ARN, 1 cadena Viroides: ARN cadena simple, circular Huésped Síntoma Forma de transmisión Forma Tamaño Ácido nucleico Tobacco mosaic virus (TMV) Grupos Virus Familias Géneros Especies Clasificación Tobacco mosaic virus (TMV) Family: Virgaviridae Genus: Tobamovirus Species: Tobacco mosaic virus = Tobacco mosaic tobamovirus Acronym: TMV Género Luteovirus Potato leafroll luteovirus Barley yellow dwarf luteovirus 1

aspx Plant Pathology Guidelines for Master Gardeners. Symptoms Of Viral Diseases. http://erec.ifas.ufl.edu/plant_pathology_guidelin es/module_06.

2 Dificultades en el diagnóstico de virus: pequeño tamaño poca diversidad morfológica síntomas similares síntomas variables: cultivar condiciones ambientales Técnicas de diagnóstico Biológicas Físicas Serológicas Moleculares Una técnica es suficiente para el diagnóstico? Diagnóstico por propiedades biológicas: 1. Plantas huéspedes: Cuál(es)? Síntomas 2. Infección de plantas indicadoras: Cuál(es)? Síntomas 3. Transmisión: Cómo? Macroscópicos Microscopicos: Síntomas Cuerpos de inclusión Efectos citopatológicos (en núcleo, cloroplastos, mitocondrias) APS. Illustrated Glossary of Plant Pathology. y/pages/i-m.aspx Diagnóstico por síntomas Síntomas de diferente virus en pimiento 2

Infección de plantas indicadoras: Cuál(es)? Síntomas 3. Transmisión: Cómo?

3 Síntomas - cloróticos Síntomas necróticos Síntomas necróticos Síntomas Específicos de virus? Síntomas Los síntomas dependen de: Planta Síntomas específicos de virus? Patógeno Ambiente 3

4 Los síntomas dependen del ambiente Los síntomas dependen de la variedad ej. TSWV Plantas indicadoras Nicotiana spp., Solanum spp., Chenopodium spp., Cucumus spp., Phaseolus spp., Vicia spp., Pisum spp., Brassica spp, etc. según los casos. Plantas indicadoras Cuáles inocular? Cómo reaccionan? Susceptible o no, sin síntomas Síntomas: locales y/o sistémicos Fuentes de información: Bibliografía, Internet Internet Association of Applied Biologists. Descriptions of Plant Viruses. Brunt, A.; Crabtree K.; Dallwitz, M.; Gibbs, A.; Watson, L. and Zurcher, E. Plant Viruses Online. Descriptions and Lists from the VIDE Database. Plantas indicadoras Sin síntomas Lesiones locales Síntomas sistémicos 4

Susceptible o no, sin síntomas Síntomas: locales y/o sistémicos Fuentes de información: Bibliografía, Internet Internet Association of Applied Biologists. Descriptions of Plant Viruses.

5 Tospovirus Petunia sp. Impatiens sp. Blackberry chlorotic ringspot Ilarvirus Métodos de transmisión Pepino Rubus sp. Chenopodium quinoa Ann Appl Biol 149 (2006) Nicotiana tabacum cv. Xanthi-nc Por injerto Mecánica = por savia Por vectores: pulgones trips moscas blancas otros insectos nematodos Transmisión por injerto Wikipedia. Strawberry vein banding virus Transmisión mecánica 1. Macerado de planta enferma 2. Abrasivo (carborundum) 3. Planta sana VIRUS INDEXING PROCEDURES cations/web_version/117/ch5.htm ase.co.uk/virusrese archpage3.asp = Transmisión por jugos 5

Xanthi-nc Por injerto Mecánica = por savia Por vectores: pulgones trips moscas blancas otros insectos nematodos Transmisión por injerto Wikipedia.

6 Transmisión por pulgones u otros insectos Técnicas basadas en características físicasf Forma y tamaño Propiedades de sedimentación Microscopio electrónico Forma y tamaño Partículas de virus: Sombreadas Con tinción negativa Fuente: Walkey, 1991 Técnicas que dependen de la proteína del virus 6

Microscopio electrónico Forma y tamaño Partículas de virus: Sombreadas

7 Serología Serología Antígeno 1. Producción de antisuero Anticuerpo Antisuero Policlonal Monoclonal 2. Técnicas serológicas - diagnóstico Técnicas serológicas (1) Técnicas serológicas Reacción antígeno - anticuerpo Precipitación Difusión Aglutinación ipt=sci_arttext Técnicas serológicas Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay Difusión Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay (ELISA) zyme-linked-immunosorbant-assay-elisa.html How Do You Diagnose a Virus Infection in a Plant? /pathology/florida_viruses/diag/what%2 0is%20it.html 7

8 Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay Serología ventajas: Especificidad Rapidez Sensibilidad Menor dependencia de condiciones biológicas e ambientales Semi-cuantitativo (ELISA) Serología - desventajas Detecta sólo la proteína del virus Cada antisuero detecta UN virus/género/raza Posibles reacciones cruzadas Disponibilidad de antisueros Técnicas que detectan del ácido nucleico del virus ARN de doble cadena Hibridación de ácidos nucleicos (Sondas) PCR ARN de doble cadena J.R. Fisher Double- Stranded RNA Analysis as a Tool for Diagnosing Plant Viruses. NPDN News. Vol. 3 Issue 5, May end/20 8

proteína del virus Cada antisuero detecta UN virus/género/raza Posibles reacciones cruzadas Disponibilidad de antisueros Técnicas que detectan del ácido nucleico del virus ARN de

9 Hibridación de ácidos nucleicos Hibridación de ácidos nucleicos Base: unión de un trozo conocido (sonda) a uno desconocido, si es complementario. Southern Blot - ADN Northern Blot - ARN Northern blot Fuente: Techniques of Molecular Biology. Hibridación de ácidos nucleicos PCR con primers específicos Clonar segmentos de virus en cuestión Dot-Blot 9

Southern Blot - ADN Northern Blot - ARN Northern blot Fuente: Techniques of Molecular Biology.

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