CONTRA CEPAS DE Mycobacterium tuberculosis

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1 ACTIVIDAD ANTIFÍMICA DE EXTRACTOS DE PLANTAS ENDÉMICAS DE MEXICO CONTRA CEPAS DE Mycobacterium tuberculosis L.Q. Erika Cabral de Anda Maestría a en Ciencias en Biotecnología D. en C. Blanca Estela Rivera Chavira M. en C. Norma Herrera Díaz D. en C. Quintín n Rascón n Cruz M. en C. Vinicio Torres Muñoz Universidad Autónoma de Chihuahua D. en C. Jorge Molina Torres CINVESTAV IPN Unidad Irapuato

2 INTRODUCCIÓN La tuberculosis es una enfermedad infecto contagiosa que puede afectar a diversos órganos, pero se localiza en los pulmones con mayor frecuencia.

3 Tratamiento Farmacológico Los pacientes toman una combinación n de cinco drogas de primera líneal nea: isoniacida, rifampicina, estreptomicina, pirazinamida y etambutol para eliminar a M. tuberculosis. Drogas de segunda línea: l capreomicina, cicloserina,, etionamida, kanamicina. Tienen las desventajas de ser costosas s y más m s tóxicas t para el paciente, provocando que con mayor frecuencia se abandone el tratamiento.

4 Farmacorresistencia La resistencia secundaria es inducida por una incorrecta administración n del tratamiento. La resistencia primaria se presenta en enfermos que han sido contagiados por pacientes con cepas resistentes.

5 La tuberculosis es la segunda causa de mortalidad a escala mundial, la Organización Mundial de la Salud estima que cada año a o mueren 2 millones de personas por esta causa. En México M la tuberculosis es la tercera causa de muerte después s de las neumonías y de las infecciones intestinales. (Sada, 2003)

6 Plantas Medicinales Contienen compuestos activos que son más m tolerantes que las drogas sintéticas, ticas, además pueden producir menos reacciones alérgicas rgicas, no se acumulan y pueden ser administrados por un largo período. (Lowkova et al., 2001)

7 En México M se cuenta con una gran variedad de plantas medicinales, sin embargo, son pocas a las que se les han determinado el principio activo.

8 Asteraceae Salmea scandens Heliopsis longipes Acmella radicans Undecamida Octadecamida Propenamida Rutaceae Zanthoxylum cubense Euphorbiaceae Croton pottsii Croton ornato Umbelliferae Ligusticum porteri Verbenaceae Lippia berlandieri

9 JUSTIFICACIÓN Debido a la alta incidencia de la tuberculosis y a la aparición de cepas multirresistentes esistentes,, se requiere buscar nuevas alternativas para el tratamiento de la enfermedad, dentro de las cuales se encuentra el uso de plantas medicinales.

10 OBJETIVO GENERAL Determinar la actividad antifímica de extractos de plantas endémicas de MéxicoM contra cepas de Mycobacterium tuberculosis.

11 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Obtener extractos de diferentes partes de las plantas de Ligusticum porteri, Croton ornato, Croton pottsii, Lippia berlandieri. Estandarizar las técnicas t de extracción n y azul de alamar. Determinar la susceptibilidad de los extractos contra M. tuberculosis utilizando la técnica t de azul l de alamar.

12 METODOLOGIA

13 Recolección n de Plantas Prensar por 3 días Congelador a -20ºC Extracción n con Soxhlet Extractos Rotavapor a 45 C

14 Preparación n del inóculo Transferir en caldo 7H9GC MIC No hay crecimiento Crecimiento Micobacterium tuberculosis Löwenstein-Jensen Nefelómetro de MacFarland No 1 3x10 8 CFU/mL

15 RESULTADOS

16 ENSAYO CON SOLVENTES Hexano Etanol DMSO Rango % 1-30% 1-30% 50% 75% 30% 15% 30% 6%

17 Croton pottsii Extracción Parte usada Cepa MIC (µg/ml) Fresco P.A. Seco P.A. Fresco Raíz Seco Raíz Hexano,, acetato de etilo, cloroformo, etanol (No tiene actividad antimicobacterial > 200 µg/ml) Triplicado

18 Croton ornato Extracción Parte usada Cepa Solvente MIC (µg/ml) Fresco P.A. Hexano Acetato Cloroformo Etanol Hexano Acetato Cloroformo Etanol (No tiene actividad antimicobacterial > 200 µg/ml) Triplicado

19 Discusión n de resultados Evaluaron el efecto inhibitorio de extractos de Croton pseudopulchellus contra cepas de M. tuberculosis sensibles y resistentes, encontrando un MIC 100 µg/ml (sensible) y un MIC 500 µg/ml (resistente). Lall et al., 1999 Diterpenos aislados de Croton kongensis perteneciente a la familia Euphorbiaceae inhiben el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis con un MIC 6.25 µg/ml. Thongtan et al., 2003

20 Ligusticum porteri Extracción Parte usada Cepa Solvente MIC (µg/ml) Seco Raíz Hexano Acetato Acetona Etanol 200 Hexano Acetato Acetona Etanol (No tiene actividad antimicobacterial > 200 µg/ml) Triplicado

21 Discusión n de resultados Aceites esenciales de Myoporum crassifolium extraídos con hexano inhiben el crecimiento de Mycobacterium bovis con un MIC 50 µg/ml. Billo et al., 2005 Extracto de diclorometano de Amorphophallus bequaertii inhibe el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis a 100 µg/ml. Ndaya et al., 2002

22 Ligusticum porteri Fracción LH1 LH2 LH3 LH4 LH5 Cepa MIC (µg/ml( g/ml) Hexano (No tiene actividad antimicobacterial > 200µg/ml) Triplicado

23 Lippia berlandieri Extracción Parte usada Cepa Solvente MIC (µg/ml) Seco P.A. Hexano Diclorometano Acetona Etanol Hexano Diclorometano Acetona Etanol (No tiene actividad antimicobacterial > 200 µg/ml) Triplicado

24 Discusión n de resultados Extracto de hexano de Lantana hispida (Verbenaceae) presenta actividad antimicobacterial MIC 200 µg/ml Fracción n VI 12.5µg/ml. Jiménez et al., 2003

25 Lippia berlandieri Fracción OD1 Cepa MIC (µg/ml( g/ml) 200 OD2 100 OD3 50 OD4 100 OD5 50 Diclorometano (No tiene actividad antimicobacterial > 200µg/ml) Triplicado

26 EXTRACTOS EXTRACTOS Planta Planta Extracci Extracción Parte Parte usada usada Cepa Cepa MIC MIC (µg/ml) g/ml) CH Acmella Acmella radicans radicans Seco Seco Ra Raíz CH CH CH Heliopsis Heliopsis longipes longipes Seco Seco Ra Raíz Zanthoxilum Zanthoxilum cubense cubense Seco Seco Corteza Corteza Salmea Salmea scandens scandens Seco Seco Ra Raíz CINVESTAV CINVESTAV-IPN IPN

27 Discusión n de resultados Extracto de Achillea wilhelmsii (Asteraceae)) presenta actividad antimicobacterial a 200 µg/ml. Tosun et al., 2004 Flavonoides de Haplopappus sonorensis Asteraceae inhiben a Mycobacterium tuberculosis con un MIC 100 µg/ml. Murillo et al., 2003 Extracto de Commiphora mukul (Rutaceae) Mycobacterium aurum a 62.5 µg/ml. inhibió Newton et al., 2002 a

28 Planta Extracción Parte usada Cepa MIC (µg/ml) Acmella radicans Seco Raíz Octadecamida Propenamida (No tiene actividad antimicobacterial > 200µg/ml) Triplicado

29 Planta Extracción Parte usada Cepa MIC (µg/ml) Heliopsis longipes Seco Raíz Undecamida Triplicado

30 Discusión n de resultados Actividad antimicobacterial de siete amidas aisladas de Piper sarmentosum perteneciente a la familia Piperaceae,, con MIC µg/ml g/ml Rukachaisirikul et al., et al., 2004 Actividad antimicobacterial de compuestos aislados de Piper sanctum perteneciente a la familia Piperaceae, con MIC 4-64 µg/ml Mata et al., 2004

31 CONCLUSIONES Extractos de Croton pottsii y Croton ornato no mostraron actividad antimicobacterial a 200 µg/ g/ml. Extractos de Ligusticum porteri y Lippia berlandieri inhibieron el crecimiento de M. tuberculosis a 200 µg/ g/ml. Heliopsis longipes, Salmea scandes, Acmella radicans, Zanthoxilum cubense inhibieron el crecimiento de ambas cepas µg/ g/ml. Undecamida aislada de Heliopsis longipes inhibió el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis presentando un MIC 12.5 µg/ml para la cepa resistente siendo mayor contra la cepa sensible MIC 6.25 µg/ml.

32 ACTIVIDAD ANTIFÍMICA DE EXTRACTOS DE PLANTAS ENDÉMICAS DE MEXICO CONTRA CEPAS DE Mycobacterium tuberculosis L.Q. Erika Cabral de Anda Maestría a en Ciencias en Biotecnología D. en C. Blanca Estela Rivera Chavira D. en C. Jorge Molina Torres M. en C. Norma Herrera Díaz CINVESTAV IPN D. en C. Quintín n Rascón n Cruz M. en C. Vinicio Torres Muñoz Universidad Autónoma de Chihuahua CINVESTAV IPN Unidad Irapuato

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