ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES GENÉTICAS EN ADENOCARCINOMAS GÁSTRICOS MEDIANTE acgh Y FISH EN SU CONTEXTO CLÍNICO-PATOLÓGICO
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- Ana Isabel Martín Segura
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1 ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES GENÉTICAS EN ADENOCARCINOMAS GÁSTRICOS MEDIANTE acgh Y FISH EN SU CONTEXTO CLÍNICO-PATOLÓGICO CENTRO DE INVESTIGACIÓN DEL CÁNCER HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA
2 Introducción Epidemiología Segunda causa de muerte por cáncer en el mundo. España quinta causa de muerte Resección quirúrgica único tratamiento curativo Factores Pronósticos Grado de Invasión tumoral Tipo histológico Localización Tercio proximal Estadio Ploidía de ADN? o alteraciones genéticas?
3 Introducción Alteraciones moleculares en la carcinogénesis gástrica: Tipo Intestinal Mutación APC Mutación P53 Inestabilidad DS191 Metaplasia intestinal ps2 p16 hmlh1 Adenoma P53 mutación /LOH P27 Amp HER2 Infección Infección pylori HH pylori Mucosa normal RUNX3 CCNE CDC25B CD44 TA Cáncer avanzado Tipo Intestinal precoz Cr 7q LOH Amp CCNE Invasión Metástasis P27 NM23 RUNX3 P73 LOH CD46 TA
4 Introducción Alteraciones moleculares en la carcinogénesis gástrica: Tipo Difuso CDH1 / Mutación RAR β Amp KSAM Amp MET Mucosa Normal 17q21 LOH Infección H pylori Tipo Difuso Precoz CCNE RUNX3 CDC25B CD44 TA P53 mutación /LOH Acetilación histonas Expresión htert con activación telomerasa Cr 7q LOH Amp CCNE RUNX3 P27 NM23 CD46 TA Cáncer Avanzado Invasión Metástasis
5 Objetivos Determinar la incidencia de alteraciones cromosómicas mediante técnica de CGH array en una serie amplia de pacientes diagnosticados de cáncer gástrico. Identificar las posibles correlaciones entre las alteraciones individuales de cada cromosoma con los datos clínico-patológicos de los adenocarcinomas gástricos. Identificar regiones cromosómicas con valor pronóstico en cuanto a la supervivencia global y supervivencia libre de recidiva. Determinar cuáles son las vías de evolución clonal intratumoral, debidas a la inestabilidad cromosómica más frecuentemente observadas en los carcinomas gástricos.
6 Material y Métodos Características clínico-patológicas de la serie Localización tumoral Tipo gastrectomía Porcentaje de casos Hombres Mujeres Tercio superior Tercio medio Tercio inferior Afectación generalizada Intestinal Difuso Mixto Indeterminado Bajo grado Alto grado I II III VI Total Subtotal R R1-R2 Sí No Sexo Tipo histológico Lauren Grado histológico Estadio patológico Tipo resección Recidiva
7 Material y Métodos Diseño del BAC-array 1. Replica de la librería ( Sanger 1Mb clone set ) 2. Aislamiento de la construcción plasmídica 3. Amplificación por DOP-PCR 7. Escaneado porta hibridado 6. Cohibridación con BAC-array 5. Marcaje ADN problema y referencia 4. Depósito sobre el porta
8 Material y Métodos ifish: Regiones cromosómicas analizadas 4p16.3 (WHSC1) 4p11.1 6p21 (CCND3) 6p11.1 7p11.2 (EGFR) 7p p12.1 (KRAS) 12p11.1 7q31 (D7S486) q14 (RB1) 13q34 (LAMP1) 17p13 (P53 ) 17p q12 (HER2) 2p q21 (TOPO2A) 2q13.2 (ZNF217) 17 2
9 Resultados Frecuencia de las alteraciones cromosómicas detectadas mediante acgh en pacientes con adenocarcinoma gástrico
10 Resultados Relación entre las alteraciones genéticas detectadas mediante acgh y las características clínico-patológicas de la enfermedad Tipo Alto grado histológico de diferenciación Intestinal
11 Resultados Relación entre las alteraciones genéticas detectadas mediante acgh y las características clínico-patológicas de la enfermedad Estadio M1 avanzado
12 Resultados Relación entre las alteraciones genéticas detectadas mediante acgh y las características clínico-patológicas de la enfermedad Supervivencia Recidiva libre de recidiva
13 Resultados Relación entre las alteraciones genéticas detectadas mediante acgh y las características clínico-patológicas de la enfermedad Supervivencia global
14 Resultados Características clínico-patológicas y genéticas con impacto sobre la supervivencia libre de recidiva en pacientes con resección R 1 % de casos libres de recidiva % de casos libres de recidiva Afectación ganglionar (p=.1) N (n=23) N1-N3 (n=58) Cromosoma 15q q23 (p=.2) Normal (n=6) del (15q22.31) (n=24) Cromosoma 7p p21.3 (p= <.1) Normal (n=79) Ganancia (n=5) Índice pronóstico (p= <.1) Score (n=17) Score 1 (n=43) Score 2 (n=21) Tiempo (meses) Tiempo (meses) 8
15 Resultados Características clínico-patológicas y genéticas con impacto sobre la supervivencia Supervivencia global (%) Tipo histológico de Lauren (p=.3) Intestinal (n=72) Difuso (n=35) Mixto (n=7) Indeterminado (n=3) Profundidad invasión de la pared (p=.1) T1-T2 (n=19) T3-T4 (n=13) Cromosoma 6p p11.2 (p=.2) 1 Índice pronóstico (p=.1) Supervivencia global (%) Normal (n=15) Ganancia (n=17) Score (n= 13) Score 1 (n=57) Score 2 (n=47) p= Meses desde la cirugía Meses desde la cirugía 1
16 Resultados PATRONES INTRATUMORALES DE EVOLUCIÓN CLONAL Amplificación HER2 Amplificación HER2 y TOPO2A Monosomía cromosoma 17
17 Resultados PATRONES INTRATUMORALES DE EVOLUCIÓN CLONAL 2q +, 13q + 2% Diploide Amp HER2 17% 4p -, 17p - Otras alteraciones 18% 9% 15% 17p - 6% 6p +, 13q + 2q + 11% Amp KRAS 17p - 9% 1% 6% 2q ++ 2% 23% 1 er Clon Aneuploide 2º Clon Aneuploide
18 Resultados INESTABILIDAD CROMOSÓMICA EN ADC GÁSTRICOS: PATRONES INTRATUMORALES DE EVOLUCIÓN CLONAL 4p - 3% 6p +, 13q + 2q + 17p - 8% 6p +, 2q + 3% Amp KRAS 17p - Amp CCND3 2q + 3% Amp CCND3 2% 13q + 13% Amp HER2 Amp TOPO 2A 8% 2q + 5% Amp CCND3 7p + 3% 2q +, 13q + 6p + 2% 2q + 1% 4p -, 17p - 13q + 5% 17p - Otras alteraciones 11% Amp CCND3 +7, 13q + 9% 4p -, +7, 13q + Amp TOPO 2A 1% 17% 2q + 3% 2% 18% 13q + 8% 1% 15% 6% 3% 3% 2% 6% 5% 9% 14% 1% 1% 2q ++ - (4, 17) 13q ++ 2q q p p ++ 3% -4 2% -17 1% 13q ++ 3% 2q ++ 3% 1% 2% 1% 1% 3% 6p +++ 2q +++ 2q +++ 2q +++ 2q er Clon aneuploide 2.º Clon aneuploide 3. er Clon aneuploide
19 Conclusiones Los ADC gástricos son tumores altamente heterogéneos caracterizados por pérdidas de los cromosomas 17p13.3, 16q22.1, 12q24.23 y 22q13.1 junto con las ganancias de 13q21.33, 2p12.1, 1q21.2 y 2q13.2. Las alteraciones en los cromosomas 7p22.1 y 15q22.31 así como la afectación ganglionar, tienen un importante valor como factores pronósticos en la recidiva precoz y en la clasificación de los pacientes en grupos de riesgo. El tipo histológico de Lauren, la profundidad de invasión de la pared y la presencia de anomalías cromosómicas en 6p12.3, tienen un importante valor como factores pronósticos en la supervivencia.
20 Conclusiones. Las alteraciones en los cromosomas 2q, 13q, amplificación de HER2, KRAS y pérdida de 17p representan un evento temprano en el proceso de carcinogénesis gástrica.
21 Agradecimientos. CIC Laboratorio 2 José Luis Ordoñez, Carlos Mackintosh, Victoria Sevillano, Teresa Amaral, Daniel García, Enrique de Álava. Servicio de Anatomía-patológica del Hospital Universitario de Salamanca Dra. María del Mar Abad, Dr. Oscar Bengoechea, Dr. Ignacio Paz Bouza, Dr Oscar Blanco, Dr Ángel Santos-Briz,Belén Rivas, María del Carmen González, María Ángeles Pacios, María Angustias Perez, Ruth Gervás. Servicio de Genómica CIC Servicio de Cirugía General Dr Alberto Gómez Alonso, Dra Carmen González Servicio de Citometría de Flujo José María Sayagués, María González, Laura Gutiérrez
22 MUCHAS GRACIAS
INSTITUTO ONCOLÓGICO NACIONAL
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