NMX-F-552-SCFI-2009 CAFÉ VERDE DESCAFEINADO - ESPECIFICACIONES Y MÉTODOS DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-F-552- SCFI-1998)

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1 NORMA MEXICANA NMX-F-552-SCFI-2009 CAFÉ VERDE DESCAFEINADO - ESPECIFICACIONES Y MÉTODOS DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-F-552- SCFI-1998) GREEN DECAFFEINATED COFFEE - SPECIFICATIONS AND TEST METHODS

2 PREFACIO En la elaboración de la presente norma mexicana participaron las siguientes empresas e instituciones: - AGROINDUSTRIAS UNIDAS DE MÉXICO, S.A DE C. V. - ALIANZA NACIONAL DE ORGANIZACIONES AGROPECUARIAS Y CAFETALERAS, A.C. (ANAORAC). - ASOCIACIÓN MEXICANA DE LA CADENA PRODUCTIVA DEL CAFÉ (AMECAFÉ). - ASOCIACIÓN MEXICANA DE EXPORTADORES DE CAFÉ, A. C. - ASOCIACIÓN NACIONAL DE LA INDUSTRIA DEL CAFÉ. - CAFIVER, S.A DE C. V. - CIBA TLAXCALA - CENTRAL INDEPENDIENTE DE OBREROS AGRÍCOLAS Y CAMPESINOS (CIOAC) - COMERCIALIZADORA PASSMAR. - COMITÉ TÉCNICO DE NORMALIZACIÓN NACIONAL PARA CAFÉ Y SUS PRODUCTOS

3 - CONFEDERACIÓN MEXICANA DE PRODUCTORES DE CAFÉ. - CONFEDERACIÓN NACIONAL CAMPESINA. - CONFEDERACION NACIONAL DE PRODUCTORES RURALES. - DESCAFEINADORES MEXICANOS, S. A. DE C. V. - GRUPO NESTLÉ MÉXICO. - INSTITUTO MEXICANO DE NORMALIZACIÒN Y CERTIFICACIÓN, A.C. - INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIONES FORESTALES, AGRÍCOLAS Y PECUARIAS (INIFAP) - INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL. - INSTITUTO TECNOLÓGICO DE VERACRUZ. - RED DE INDUSTRIALES PERENNES (CAFÉ). - SABORMEX, S. A DE C. V.

4 - SECRETARIA DE AGRICULTURA, GANADERIA, DESARROLLO RURAL, PESCA Y ALIMENTACIÓN (SAGARPA). Subsecretaría de Agricultura. Dirección General de Fomento a la Agricultura. Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria (SENASICA). Subdirección de Normas - ECONOMIA. Dirección General de Normas. - SOCIEDAD MEXICANA DE NORMALIZACIÓN Y CERTIFICACIÓN, S.C. (NORMEX) - UNIDAD DE INTELIGENCIA Y ESTUDIOS ESTRATÉGICOS - UNIÓN GENERAL OBRERO CAMPESINA Y POPULAR - UNIÓN NACIONAL DE PRODUCTORES DE CAFÉ, A. C. - UNIÓN NACIONAL CAMPESINA Y POPULAR (UCP-ROJA).

5 ÍNDICE DEL CONTENIDO Número del capítulo Página 1 OBJETIVO 1 2 CAMPO DE APLICACIÓN 1 3 REFERENCIAS 1 4 DEFINICIONES 3 5 CLASIFICACIÓN Y DESIGNACIÓN DEL PRODUCTO 4 6 ESPECIFICACIONES 4 7 MUESTREO 9 8 MÉTODOS DE PRUEBA 9 9 ENVASADO VIGENCIA BIBLIOGRAFÍA CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 44

6 NORMA MEXICANA NMX-F-552-SCFI-2009 CAFÉ VERDE DESCAFEINADO - ESPECIFICACIONES Y MÉTODOS DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-F-552- SCFI-1998) GREEN DECAFFEINATED COFFEE - SPECIFICATIONS AND TEST METHODS 1 OBJETIVO Esta de norma mexicana establece las especificaciones de calidad aplicables al café verde descafeinado. 2 CAMPO DE APLICACIÓN Esta norma mexicana es aplicable al café verde descafeinado independientemente del proceso de descafeinado por el cual fue obtenido e indistintamente del mercado al cual sea destinado. 3 REFERENCIAS Para la correcta aplicación de esta norma se deben consultar las siguientes normas mexicanas vigentes: NMX-B-231-SCFI-1990 Cribas para clasificación de materiales granulares. Declaratoria de Vigencia publicada el 9 de enero de La Dirección General de Normas de la Secretaría de Economía aprobó la presente norma, cuya declaratoria de vigencia fue publicada en el Diario Oficial de la Federación el:

7 2/44 NMX-F-107-SCFI-2008 NMX-F-129-SCFI-2008 Café Verde en sacos Muestreo. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 1 de julio de Café Verde Preparación de las muestras para su uso en análisis sensorial. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 1 de julio de NMX-F-158-SCFI-2008 Café verde Inspección Olfativa y Visual Determinación de defectos y materia extraña. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 1 de julio de 2008 NMX-F-162-SCFI-2008 NMX-F-176-SCFI-2008 NMX-F-177-SCFI-2009 NMX-F-551-SCFI-2008 Café verde - Tabla de defectos. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 1 de julio de del 15 de enero de Café verde Determinación de la pérdida de masa a 105ºC. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 2 de septiembre de Café verde de especialidad Especificaciones, Clasificación y Evaluación Sensorial. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de Federación el 5 de agosto de Café verde Especificaciones, preparaciones y evaluación sensorial. Declaratoria de Vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 18 de febrero de NMX-F-586-SCFI-2008 Café y sus Productos Vocabulario. Declaratoria de Vigencia publicada el 16 de diciembre de 2008.

8 3/44 4 DEFINICIONES Para efectos de la aplicación de esta norma, se deben consultar las definiciones de evaluación sensorial establecidas en la norma mexicana NMX-F-551-SCFI y las definiciones indicadas en la norma mexicana NMX-F-586-SCFI-2008 (véase 3 Referencias); además de las siguientes: 4.1 Café verde descafeinado: Es el grano de café verde que ha sido sometido a un proceso de extracción de determinado porcentaje de cafeína contenida de origen, por medio de solventes químicos o naturales. 4.2 Cafeína: Sustancia blanca cristalina de sabor amargo y sin aroma, ligeramente soluble en agua. Es un alcaloide con estructura química similar a la teofilina, teobromina y al ácido úrico. 4.3 Licor de café: Son los sólidos solubles del grano de café diluidos en agua. 4.4 Proceso de descafeinado: Proceso al cual es sometido el café verde para la extracción de cafeína, utilizando ya sea solventes químicos o naturales. 4.5 Proceso de descafeinado por agentes naturales: Proceso que consiste en la extracción de la cafeína de los granos de café verde, utilizando como agente de extracción, solventes naturales tales como agua, licor de café, dióxido de carbono y acetato de etilo; este último, proveniente de azúcares o almidones. 4.6 Proceso de descafeinado por solventes químicos: Proceso que consiste en la extracción de la cafeína de los granos de café verde, utilizando como agente de extracción, solventes obtenidos por síntesis química, tales como acetato de etilo y cloruro de metileno.

9 4/ Sólidos solubles: Son los componentes químicos del grano de café solubles en agua. 5 CLASIFICACIÓN Y DESIGNACIÓN DEL PRODUCTO El producto objeto de esta norma se clasifica en once calidades, las cuales se designan como: - Estrictamente altura descafeinado - Desmanche descafeinado - Altura descafeinado - Natural tipo Atoyac descafeinado - Extra prima lavado descafeinado - Natural descafeinado - Prima lavado descafeinado - Robusta lavado descafeinado - Buen lavado descafeinado - Robusta natural descafeinado - Lavado descafeinado - Maragogype descafeinado 6 ESPECIFICACIONES 6.1 Contenido de cafeína Contenido residual de cafeína máximo de 0,12 %. Este parámetro se verifica de acuerdo a Contenido residual de solventes Cuando se aplique el proceso de descafeinado utilizando como solvente cloruro de metileno, el contenido máximo residual del solvente debe ser de 0,001 % (10 partes por millón). Este parámetro se verifica de acuerdo a Especificaciones físicas y sensoriales Las once calidades de café verde descafeinado deben cumplir con las especificaciones que se establecen en la tabla 1. Esto se verifica de acuerdo a lo indicado en los métodos de prueba citados en el Capítulo 3 Referencias así como en el Capítulo 8 Métodos de Prueba La humedad máxima del café verde descafeinado debe ser de 12 %. Este parámetro se verifica de acuerdo a la norma mexicana NMX-F-176-SCFI-2008 (véase 3 Referencias).

10 5/44 TABLA 1.- Especificaciones físicas y sensoriales del café verde descafeinado Calidad Estrictamente Altura 1) 5) Extraprima Parámetro Altura 1) 5) 1) 5) Lavado Altitud (M.S.N.M.) 4) Mayor 1200 De 900 a 1200 De 800 a 900 Tamaño cribas tipo 1 6) Tamaño cribas tipo 2 6) Tamaño cribas tipo 3 6) 25% < 15; 75% > 15 25% 15; 75% > 14 25% < 15; 75% > 15 Mínimo 12 25% < 15; 75% > 15 25% < 14; 75% > 14 25% < 13; 75% > 13 Mínimo 12 25% 14; 75 % > 14 25% < 14; 75% > 14 25% < 12; 75% > 12 Número de defectos 2) 3) tipo Número de defectos 2) 3) tipo Número de defectos 2) 3) tipo Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia 0-1,5 0-1,5 0-1,5 extraña tipo 1 2) 3) Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia 1,5-3,0 1,5-3,0 1,5-3,0 extraña tipo 2 2) 3) Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia 3,0-8,0 3,0-8,0 3,0-8,0 extraña tipo 3 2) 3) Color 7) N/A N/A N/A Bouquet (aroma) 5 De 4 a 5 De 4 a 5 Acidez 5 5 De 4 a 5 Cuerpo 5 De 4 a 5 De 4 a 5 Sabor 5 De 4 a 5 De 4 a 5

11 6/44 TABLA 1.- (Continúa) Especificaciones físicas y sensoriales del café verde descafeinado Calidad Parámetro Prima Buen 1) 5) lavado 1) 5) lavado Altitud (M.S.N.M.) 4) Tamaño cribas tipo 1 6) 25 % 14; 75 % > 14 Mínimo 12 Tamaño cribas tipo 2 6) 25 % 13; 75 % > 13 Mínimo 12 Tamaño cribas tipo 3 6) 25 % 12; 75 % > 12 Mínimo 12 Número de defectos tipo 1 2) 3) Número de defectos tipo 2 2) 3) Número de defectos tipo 3 2) 3) Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia 0-1,5 0-1,5 extraña tipo 1 2) 3) Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia 1,5-3,0 1,5-3,0 extraña tipo 2 2) 3) Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia extraña tipo 3 2) 3) 3,0-8,0 3,0-8,0 Color 7) N/A N/A Bouquet (aroma) De 3 a 5 De 2 a 5 Acidez De 3 a 5 De 1 a 5 Cuerpo De 2 A 5 De 1 a 5 Sabor De 3 a 5 De 2 a 5

12 7/44 TABLA 1.- Calidad Parámetro Altitud (M.S.N.M.) 4 ) (Continúa) Especificaciones físicas y sensoriales del café verde descafeinado Lavado 5 ) Desmanche 5) Natural 5) Atoyac Natural 5) Robusta lavado 5) Robusta natural 5) N/A N/A N/A N/A N/A N/A Tamaño cribas tipo 1 N/A N/A N/A N/A N/A N/A Tamaño cribas tipo 2 N/A N/A N/A N/A N/A N/A Tamaño cribas tipo 3 N/A N/A N/A N/A N/A N/A Número defectos tipo 1 2) 3) N/A N/A N/A N/A N/A N/A Número de defectos tipo 2 2) 3) N/A N/A N/A N/A N/A N/A Número de defectos tipo 3 2) 3) N/A N/A N/A N/A N/A N/A Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia 2) 3) extraña tipo 1 Imperfecciones físicas totales y % en masa de materia extraña 2) 3) tipo 2 Imperfecciones físicas totales y % en > 55 > 20 > 30 > 20 > 30 masa de materia 2) 3) extraña tipo 3 Color 7) N/A N/A N/A N/A N/A N/A Bouquet De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 (aroma) Acidez De 0 a 5 De 0 a 5 N/A N/A N/A N/A Cuerpo De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 Sabor De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5 De 0 a 5

13 8/44 TABLA 1.- (Concluye) Especificaciones físicas y sensoriales del café verde descafeinado NOTAS: 1) En lo correspondiente a los cafés de calidad estrictamente altura, altura, extra prima lavado, prima lavado y buen lavado, el tipo 1 corresponde a lo común y comercialmente conocido como preparación europea, el tipo 2 a los cafés de preparación americana y el tipo 3 equivale a los cafés con otras preparaciones. 2) Entre los rangos estipulados para cada calidad, existe una gran variabilidad de tipos de cafés, que se manifiestan debido a que, a medida que aumenta el porcentaje o número de defectos físicos, disminuye proporcionalmente la calidad. 3) En virtud de que existen dos parámetros para determinar los defectos (número y porcentaje), se acepta con que uno de dichos parámetros cumpla con las especificaciones. 4) m.s.n.m. significa metros sobre el nivel del mar. La altitud es un parámetro de referencia, no una especificación técnica. 5) N/A significa no aplica. 6) En el caso del café Maragogype deberá considerarse la Tabla 2.- Tamaño de la criba para café Maragogype. 7) El color en el café verde descafeinado varía dependiendo del proceso de descafeinado que se aplique y de las características de las instalaciones y equipos que conforman dicho proceso.

14 9/44 TABLA 2.- Tamaño de la Criba para café Maragogype Tamaño cribas tipo I Tamaño cribas tipo II Tamaño cribas tipo III Tamaño de la Criba para café Maragogype Altura Extra prima lavado Estrictamente altura 90 % > % > % > % > % > % < % > % > % >18 10 % > % > % < % > % > % > % > % > % < 16 Prima lavado 90 % > % > % > % > % > % < 16 Buen lavado 90 % > % > % > % > % > % < 16 7 MUESTREO Para el muestreo del producto, los niveles de inspección pueden ser establecidos de común acuerdo entre productor y comprador, recomendándose el uso de las norma mexicana NMX-F-107-SCFI-2008 (véase 3 Referencias). Para la preparación de las muestras para su uso en análisis sensorial se recomienda la norma mexicana NMX-F-129-SCFI-2008 (véase 3 Referencias). 8 MÉTODOS DE PRUEBA Para la verificación de las especificaciones que se establecen en esta norma, se deben aplicar las normas mexicanas del capítulo 3 Referencias y los métodos de prueba que se indican a continuación: 8.1 Contenido de cafeína Se determina siguiendo cualquiera de los métodos que se indican a continuación. La diferencia estriba en el equipo de medición que se utilice: Determinación de cafeína utilizando cromatógrafo líquido (HPLC)

15 10/ Resumen Extracción de la cafeína, de una porción de muestra, con agua en presencia de óxido de magnesio, seguida de filtración y purificación de una alícuota, mediante una columna de silica modificada con grupos fenil. La determinación del contenido de cafeína se efectúa en cromatógrafo de líquidos. El límite mínimo de detección es de 0,02 mg/kg Reactivos Usar solo reactivos de reconocido grado analítico a menos que sea especificado de otra manera, agua destilada desmineralizada y filtrada y soluciones desgacificadas Cafeína pura y anhidra, para preparar solución patrón Fase móvil, mezcla metanol y agua 30:70 v/v, poner 600 ml de metanol en un matraz volumétrico aforado de 2 l, adicionar agua hasta aforo, mezclar y después filtrar a través de una membrana de 0,45 µm (véase nota 9). NOTA 9:- La columna y la fase móvil pueden ser diferentes a las descritas siempre y cuando la resolución de la cafeína sea Metanol grado HPLC (véase nota 10). NOTA 10:- Por ajuste de la concentración del metanol, el tiempo de retención de cafeína puede ser modificado hasta optimizar la separación de HPLC Mezcla de disolvente para columna de purificación, metanol-aguaácido acético, 75:25:1 v/v Mezcla de solución de amoniaco (0,3 mol/l) - metanol, 90:10 v/v Mezcla de solución etanol-agua, 1:4 v/v Óxido de magnesio.

16 11/ Solución estándar de cafeína (0,01 g/l). Dejar la solución patrón a temperatura ambiente, posteriormente con una pipeta, transferir 2 ml de esta solución a un matraz aforado de 100 ml, adicionar agua hasta aforo y mezclar. Esta solución debe prepararse el día que se va a utilizar Solución patrón de cafeína (0,5 g/l). Determinar la masa de 125 mg de cafeína con una aproximación de 0,1 mg, transferir a un matraz aforado color ámbar de 250 ml; agregar la solución de etanol-agua hasta la mitad del matraz, disolver la cafeína y diluir hasta aforo con la mezcla de etanol-agua. La solución puede mantenerse en refrigeración hasta por un mes, verificando que se mantenga la concentración original y la ausencia de degradación o contaminación Aparatos y materiales Cromatógrafo de líquidos de alta resolución. Equipado con detector ultravioleta para efectuar mediciones entre 254 nm y 280 nm. La absorción máxima para cafeína se encuentra en 272 nm Columna cromatográfica para HPLC tipo C18, preferentemente con partículas esféricas y teniendo una eficiencia de por lo menos platos teóricos. El número teórico de platos (N) de la columna puede ser calculado como sigue, de acuerdo a la forma de pico obtenida por inyección de la solución estándar de cafeína pura (véase nota 11). (t) 2 N= 5, w 0,5 Donde: t W 0,5 es el tiempo de retención del pico, y es el ancho del pico en su altura media.

17 12/44 NOTA 11:- Las condiciones cromatográficas y la composición de la fase móvil están referidas a partículas esféricas tipo C18, columna de dimensiones 110 mm x 4,6 mm llenada con sistemas HPLC. Si se utiliza otro tipo de columna debe ser necesario ajustar la alternativa de la fase móvil y las condiciones cromatográficas Columna de purificación para cromatografía de fase reversa, de 3 ml de capacidad, llenada con sílica modificada con grupos fenilo, con partículas de 40 nm Molino de café adecuado para triturar los granos de café Licuadora con rueda dentada, con chaqueta de enfriamiento o molino analítico con aspas y chaqueta de enfriamiento, o cualquier otro molino para grano de café Criba tejida de tela de alambre con un tamaño de orificio de 630 µm Filtros de 0,45 µm tamaño del poro Baño maría, capacidad de operación a 90 C ± 1ºC con agitación continua Balanza analítica, con exactitud de 0,000 1 g Botella de 250 ml de capacidad, con tapa de rosca Matraces volumétricos de 10 ml, 50 ml, 100 ml, 250 ml y ml de capacidad Pipetas de 2 ml, 5 ml y 10 ml de capacidad Material y equipo común de laboratorio Procedimiento Preparación de la muestra de prueba Obtener de la muestra una submuestra de 300 g y moler en el molino de café hasta que pase a través del tamiz de 630 µm (véase nota 12).

18 13/ Determinación del contenido de materia seca Calcular el contenido de materia seca de la muestra de prueba a partir de la determinación de humedad, tomando como referencia el método de prueba que se indica en Porción de prueba Determinar la masa de 1 g de la muestra de prueba, por lo menos con una precisión de 0,001 g (véase nota 12). NOTA 12: Es recomendable que para la toma de la submuestra y la porción de prueba se aplique previamente la técnica del cuarteo Extracción de cafeína a) Poner la porción de la muestra pesada conforme al inciso anterior dentro de un matraz de 250 ml, agregar 4 g ± 0,5 g de óxido de magnesio y 100 g de agua. Determinar la masa del matraz y sus contenidos con una precisión de 0,1 g. b) Tapar la botella y mezclar los contenidos, colocar en baño maría y calentar a 90ºC bajo agitación continua por 20 min. c) Enfriar y pesar otra vez, con una precisión de 0,1 g. El peso de la masa debe ser igual al obtenido en el inciso a). Si las masas difieren, realizar otra extracción usando otra porción de muestra. d) Dejar que la solución se asiente; tomar una porción de la solución y filtrarla a través del filtro indicado en Purificación de la solución Antes de que ocurra cualquier separación de la solución, activar la columna de purificación. a) Preparación de la columna de purificación. - Colocar la columna de purificación como se muestra en la figura 1.

19 14/44 - Abrir la llave de paso y enjuagar la columna con 5 ml de metanol, ajustando la válvula (llave de paso) para que gotee. Cuando se quede sobre la superficie de la sílica de 1 mm a 2 mm de metanol, cerrar la válvula; agregar 5 ml de agua, abrir la válvula y cerrar otra vez cuando de 1 mm a 2 mm de agua permanezcan sobre la superficie de la sílica. Se debe evitar que la columna se seque, de lo contrario la preparación se debe repetir. b) Absorción de cafeína. - Con una pipeta, introducir dentro de la columna 10,0 ml de la solución filtrada obtenida en Ajustar la válvula permitiendo que la solución gotee, cerrar ésta cuando la superficie de la solución caiga justo abajo de la superficie de la sílica. c) Eliminación de componentes no deseados. - Abrir la válvula de la columna y agregar 2,5 ml de solución amoniaco-metanol, cerrar ésta cuando la superficie de la solución caiga justo abajo de la superficie de la silica, agregar nuevamente 2,5 ml de la solución y dejar fluir completamente hacia la columna. - Suministrar aproximadamente 20 ml de aire a través de la columna con objeto de remover la mayor cantidad posible de la solución (véase nota 13). NOTA 13: La columna puede estar seca en esta etapa del proceso.

20 15/44 FIGURA 1.- Preparación de la columna de purificación

21 16/44 d) Solución de disolución de cafeína. - Colocar abajo de la columna, un matraz aforado de 10 ml. - Abrir la válvula y agregar 7,5 ml de la solución mezcla de disolvente, ajustando la válvula para realizar el goteo, permitir que la solución fluya completamente hacia el matraz, adicionar el agua hasta aforo y mezclar (véase nota 14). NOTA 14: La columna de purificación puede ser regenerada con metanol como se indica en Para los propósitos de purificación puede ser usada máximo 10 veces Análisis HPLC a) Ajuste del equipo. Colocar el cromatógrafo y ajustar como sigue: - Rango de flujo de la fase móvil de 0,5 ml/min a 1,5 ml/min, dependiendo de la columna usada. - Se recomienda una temperatura en la columna de 40ºC (véase nota 15). NOTA 15: La separación de la punta puede ser mejorada incrementando la temperatura de la columna, pero ésta no debe exceder de 60 C. b) Análisis. Una vez que el rango de flujo de la fase móvil y la temperatura están estables, inyectar dentro de la columna 10 µl de la solución de dilución de cafeína obtenida conforme a y posteriormente inyectar 10 µl de la solución estándar de cafeína (véase nota 16). NOTA 16: Al iniciar la operación se recomienda inyectar primeramente un blanco de reactivos y el estándar para verificar que la respuesta del instrumento es adecuada.

22 17/ Expresión de resultados El contenido de cafeína de la muestra, expresado en gramos por 100 g del contenido de materia seca se expresa de la siguiente manera: A x 10 x X C 1 X X X 100 A c 10 x m 0 x RS Donde: A x A c : C 1 m 0 RS es el área de los picos de la cafeína obtenida con la solución de prueba; es el área de los picos de la cafeína obtenida con la solución estándar de cafeína; es la concentración de la solución estándar de cafeína ( ) en gramos por litro; es la masa de la porción de prueba, en gramos, y es el contenido de materia seca, expresada como porcentaje de masa Repetibilidad y reproducibilidad Repetibilidad La diferencia entre los valores obtenidos en dos determinaciones llevadas a cabo simultáneamente o en rápida sucesión sobre la misma muestra en las mismas condiciones de analista, aparato y laboratorio, no debe exceder el valor de 0,01 g de cafeína /100 g de café Reproducibilidad La diferencia en el resultado de dos determinaciones, llevadas a cabo en diferentes laboratorios sobre una misma muestra, no debe exceder el valor de reproductibilidad de 0,02 g de cafeína /100 g de café.

23 18/ Informe de la prueba El informe de la prueba debe incluir los siguientes datos: - Identificación de la muestra; - Año de cosecha; - Número de lote; - Resultado obtenido; - Cualquier desviación al procedimiento aquí descrito; - Cualquier anomalía durante el desarrollo de la prueba, y - Fecha de la determinación Determinación de cafeína por medición espectrofotométrica (método de referencia) Resumen Extracción de la cafeína desde una porción de muestra, en un medio amoniacal, con sucesiva purificación con dietil-eter en dos columnas cromatográficas; la primera en medio alcalino y la segunda en medio ácido, seguido del arrastre de la cafeína con cloroformo. Medición espectrométrica en una longitud de onda de máxima absorbancia (en la región ultravioleta). El método es particularmente sensible, por lo que es indispensable seguir las instrucciones a detalle. El límite más bajo de detección es 0,02 % de cafeína en base seca Reactivos Usar solo reactivos de reconocido grado analítico a menos que sea especificado de otra manera, agua destilada desmineralizada y filtrada y soluciones desgacificadas Solución de ácido sulfúrico, 200 g/l solución [c (H 2 SO 4 ) 2 mol/l] Solución de hidróxido de sodio, 80 g/l solución [c (NaOH) 2 mol/l].

24 19/ Tierra diatomácea. El producto usado debe asegurar mínimo el 98 % de recuperación de cafeína de la porción de muestra (véase nota 17). NOTA 17: Se recomienda utilizar la celita 545 o equivalente Solución de hidróxido de amonio, 70 g/l, solución (1 volumen de solución de hidróxido de amonio concentrada, δ 20 0,9 g/ml, + 2 volúmenes de agua) Dietil-eter, puro o repurificado por cromatografía (véase ) y saturado con agua. Pasar 800 ml de dietil-eter a través de una columna conteniendo 100 g de óxido de aluminio básico con actividad grado 1. El dietil-eter, ya repurificado debe ser mantenido en botellas oscuras hasta que se utilice. Alternativamente, el eter-dietil destilado recientemente y libre de óxidos, puede ser utilizado en lugar del dietil-eter repurificado por cromatografía Cafeína [1,3,7-trimetil-2, 6-dioxopurine (C 8 H 10 N 4 O 2 )] pura, anhidra Cloroformo, puro o repurificado (véase ) por cromatografía como se indica en , y saturado con agua Aparatos y materiales Columnas cromatográficas (véase figura 2), de 250 mm de longitud y 21 mm en el diámetro interno (columna I) y de 17 mm en el diámetro interno (columna II), con válvulas preferentemente de teflón.

25 20/44 FIGURA 2.- Columnas cromatográficas

26 21/ Espectrofotómetro ultravioleta, exactitud dentro de 0,004 unidad de absorbancia, dentro del rango utilizado Celdas de cuarzo, de longitud de paso de 10 mm Vaso de precipitado con capacidad de 100 ml Recipiente para hervir agua Matraces aforados de 50 ml, 100 ml y ml Pipetas aforadas de 2 ml y 5 ml Balanza analítica Molino de disco dentado con chaqueta de enfriamiento, o molino de tipo analítico con doble cortador y chaqueta de enfriamiento, o molino similar adecuado para granos de café verde Tamiz de tela de alambre entretejido, tamaño de abertura nominal de 600 µm o 630 µm Procedimiento Preparación de la muestra de prueba. Obtener de la muestra una submuestra de 300 g y moler en el molino de café hasta que pase el tamiz indicado Determinación del contenido de materia seca. Calcular el contenido de materia seca después de determinar el contenido de humedad de la muestra de prueba, siguiendo el método de prueba que se indica en 8.3.

27 22/ Porción de prueba (véase nota 18) Determinar la masa de aproximadamente 1 g de la muestra de prueba con una precisión de 0,1 g, transferir a un vaso de precipitado de 100 ml, agregar 5 ml de la solución de hidróxido de amonio y calentar por 2 min en el recipiente para hervir agua, agregar 6 g de tierra diatomácea y mezclar cuidadosamente. NOTA 18: Es recomendable que para la toma de la submuestra y la porción de prueba se aplique previamente la técnica del cuarteo Determinación Llenado de las columnas Columna I (columna básica) a) Separación A - Mezclar cuidadosamente 3 g de la tierra diatomácea y 2 ml de hidróxido de sodio, amasar con una espátula flexible hasta que ésta sea homogénea (véase nota 19); debiendo obtenerse un polvo ligeramente húmedo. - Transferir el polvo húmedo en porciones de aproximadamente 2 g, dentro de la columna cromatográfica de 21 mm de diámetro, la cual en su parte inferior debe estar taponeada con una bola de algodón o lana de vidrio. - Apisonar la mezcla cada vez que se transfiere, sin excesiva fuerza, debiendo auxiliarse con una varilla de vidrio hasta obtener una capa homogénea y compacta. - Taponear con una bola de algodón o lana de vidrio la parte superior de la columna. b) Separación B - Transferir la mezcla de la tierra diatomácea y la porción de prueba, dentro de la columna en la parte superior de la separación A.

28 23/44 - Secar doblemente en un vaso de precipitado, porciones de aproximadamente 1 g de la tierra diatomacea y transferir ésta dentro de la columna. Apisonar hasta obtener una capa homogénea. - Colocar una bola de algodón o lana de vidrio en la parte superior de la separación B. Columna II (columna ácida). - Colocar en la columna cromatográfica de 17 mm de diámetro, 3 g de tierra diatomácea y 3 ml de la solución de ácido sulfúrico y mezclar cuidadosamente. La parte inferior debe estar taponeada con una bola de algodón o lana de vidrio. - Empacar dentro de la columna, como se describió anteriormente, la separación A, de la columna I y colocar una tapa de lana de vidrio en la parte superior de esta separación (véase nota 19). NOTA 19: El material de empaque de la columna puede ser preparado en gran cantidad con anticipación y guardarse en recipientes cerrados. Una masa de 6,36 g se requiere por cada columna ácida Cromatografía. - Colocar las columnas, una sobre la otra, de modo que el efluente de la columna I pueda caer directamente sobre la columna II. - Pasar 150 ml de dietil-eter a través de las dos columnas. - Ajustar la llave de la columna II de modo que la cantidad de líquido remanente se quede sobre la separación. - Remover la columna I. - Pasar 50 ml de dietil-eter (véase nota 20) a través de la columna II, utilizar la porción inicial para enjuagar el extremo de la columna I y pasar también esta porción dentro de la columna II.

29 24/44 NOTA 20: El dietil-eter usado puede ser recuperado por sacudimiento con el sulfato de hierro. - Desechar el efluente de la columna II. - Pasar una corriente de aire desde la parte superior hacia la parte inferior de la columna II (por ejemplo utilizando una perilla de goma), hasta que no gotee más dietil-eter de la columna y el aire circulado por las llaves lleve solo un ligero olor a eter (véase la advertencia que se indica en el último párrafo del presente subinciso). - Limpiar la columna II con 45 ml a 50 ml de cloroformo. Recolectar lo utilizado en un matraz de 50 ml, diluir hasta la marca con el cloroformo y mezclar con cuidado. El rango del flujo del dietil-eter y el cloroformo bajo condiciones de flujo normal, debe ser entre 1,5 ml/min y 3 ml/min. Si este rango es excedido, la determinación debe volverse a realizar. Advertencia.- Las adiciones de dietil-eter y cloroformo deben llevarse a cabo en una campana bien ventilada con chimenea al exterior. Lo anterior a efecto de prevenir la inhalación del solvente y la posibilidad de una explosión Medición espectrofotométrica (véase figura 3). a) Medición de la solución de prueba. Para evitar error por la evaporación de cloroformo, es preciso medir la absorbancia de la solución de cafeína en cloroformo, usando las celdas de cuarzo contra el cloroformo, a la longitud de onda de máxima absorbancia que dé el aparato (cerca de 276 nm), y con longitudes de onda arriba y abajo de 30 nm, con el objeto de verificar la pureza de la cafeína obtenida. Si la absorbancia máxima excede el límite de exactitud del instrumento usado, es preciso repetir la medición con una porción diluida de la solución de cafeína en cloroformo. En este caso es necesario tomar la dilución dentro de la cuenta del cálculo. Los factores de la fórmula que se indica posteriormente tendrán que ser ajustados acorde con esta operación. Si la absorbancia máxima medida está por debajo de 0,2 se debe repetir la determinación usando una porción de prueba de más masa.

30 25/44 b) Preparación y medición de la solución de referencia. Preparar una solución de referencia de cafeína de la siguiente manera: - Determinar la masa de 100 mg ± 20 mg de cafeína anhidra pura con una precisión de 0,1 mg. Transferir a un matraz de ml, disolver en cloroformo y diluir hasta aforo. Con una pipeta transferir 5,0 ml de esta solución a un matraz de 50 ml y diluir con cloroformo hasta aforo. Medir la absorbancia de esta solución como se indica en el punto anterior, (inciso (a)). La correcta absorbancia de la solución de referencia debe ser en la región de 0,4 (véase figura 3).

31 26/44 FIGURA 3.- Ejemplo de medición espectrométrica

32 27/ Número de determinaciones. Llevar a cabo dos determinaciones en porciones separadas de prueba, tomadas de la misma muestra de prueba Prueba en blanco Llevar a cabo una prueba en blanco con los reactivos, usando el procedimiento descrito anteriormente, pero omitiendo la porción de prueba. Antes de usar reactivos repurificados, repetir la prueba en blanco para verificar su pureza Expresión de resultados a) Método de cálculos y fórmula El contenido de cafeína de la muestra, expresado en gramos por 100 g de materia seca es igual a: 5 x 10 5 x C x A 1 CA = A 2 x m x P Donde: CA C es el contenido de cafeína de la muestra; es la concentración, en gramos por mililitro, de cafeína en la solución de referencia ( ), y A 1 es la absorbancia corregida del extracto purificado ( ), obtenido en , inciso a.

33 28/44 (A 1 ) λ-30 nm + (A 1 ) λ +30 nm (A 1 ) λ Donde: El prefijo λ se refiere a la longitud de onda de máxima absorbancia (cerca de 276 nm). A 2 es la absorbancia corregida de la solución de referencia de cafeína en , inciso b. (A 2 ) λ 30 nm + (A 2 ) λ +30 nm (A 2 ) λ m P es la masa en gramos de la porción de prueba, y es el contenido de materia seca expresada como porcentaje de la masa, de la muestra, (véase ). b) Resultados Tomar como resultado la media aritmética de los valores obtenidos Repetibilidad y reproducibilidad Repetibilidad La diferencia entre los valores obtenidos en dos determinaciones llevadas a cabo simultáneamente o en rápida sucesión sobre la misma muestra en las mismas condiciones de analista, aparato y laboratorio, no debe exceder el valor de 0,01 g de cafeína /100 g de café.

34 29/ Reproducibilidad La diferencia en el resultado de dos determinaciones, llevadas a cabo en diferentes laboratorios sobre una misma muestra no debe exceder el valor de reproductibilidad de 0,01 g de cafeína /100 g de café Informe de la prueba El informe de la prueba debe incluir los siguientes datos: - Identificación de la muestra; - Año de cosecha; - Número de lote; - Resultado obtenido; - Cualquier desviación al procedimiento aquí descrito; - Cualquier anomalía durante el desarrollo de la prueba, y - Fecha de la determinación. 8.2 Determinación de residuos de solventes clorados Para la determinación de residuos solventes clorados en el café verde descafeinado, puede utilizarse cualquiera de los siguientes dos métodos de prueba propuestos a continuación Extracción de los residuos de solventes clorados por arrastre de vapor Resumen Condensación de este vapor para su pirólisis a 950 C en un tubo de cuarzo, atrapando los productos desagregados en una solución alcalina de trióxido de arsénico, para proceder a una determinación potenciométrica con nitrato de plata de los residuos clorados presentes. El límite mínimo de detección es de 1 mg/1 kg. El método no es aplicable para la determinación cualitativa de residuos clorados.

35 30/ Reactivos Usar solo reactivos de reconocido grado analítico a menos que sea especificado de otra manera, agua destilada desmineralizada y filtrada y soluciones desgacificadas. Los reactivos y el agua deben estar libres de cloro; el agua debe ser calentada hasta ebullición y condensarse en atmósfera de nitrógeno Acido sulfúrico concentrado Acido nítrico concentrado Etanol Solución volumétrica de nitrato de plata (AgNO 3 ), 0,005 mol/l Disolver 0,849 g de nitrato de plata en agua y aforar a un litro. Titular con solución estándar de cloruro de sodio (NaCl), 0,005 mol/l para obtener la concentración exacta de la solución Solución de cloro. Solución estándar de cloro (NaCl), 0,005 mol/l. Disolver 0,292 g de cloruro de sodio (NaCl) en agua y aforar a ml Solución alcalina de permanganato de potasio Disolver 5 g de permanganato de potasio y 10 g de hidróxido de sodio en agua y aforar a 100 ml Solución alcalina de trióxido de arsénico Disolver 3 g de trióxido de arsénico y 10 g de hidróxido de sodio en agua y aforar a 100 ml Dilución de la solución alcalina de trióxido de arsénico (1:9) Diluir 1 volumen de la solución alcalina de trióxido de arsénico en 9 volúmenes iguales de agua.

36 31/ Agente antiespumante Aparatos y materiales Material y equipo común de laboratorio y en particular el que integra el aparato de extracción de solventes El aparato para la extracción de residuos de solventes clorados del café se presenta en la figura 4 y está integrado por: (A): (B): Matraz de tres bocas con capacidad de ml. Válvula de aguja. (C y D): Botellas de lavado con disco sinterizado, de 250 ml de capacidad y diámetro interno de 35 mm a 45 mm. La botella (C) debe contener 50 ml de ácido sulfúrico concentrado y la (D) 50 ml de la solución alcalina de permanganato de potasio. (E): (F): Medidor de flujo (Flujómetro). Botella de lavado con disco sinterizado de 100 ml de capacidad y diámetro interno de 35 mm a 45 mm. Esta botella debe contener 50 ml de solución alcalina de trióxido de arsénico. (G): Frasco de destilación con capacidad de 300 ml a 500 ml (para extractos de café que formen espuma), la capacidad de ml es recomendada para una porción de muestra de 50 g. (H): (I): (J): Manta eléctrica. Filtro. Horno eléctrico con sensor térmico y control para operar a 950 C ± 25ºC, de por lo menos 60 cm de largo, con un hoyo cilíndrico de 25 mm a 30 mm, diseñado de tal forma que permita la introducción de dos a cuatro tubos.

37 32/44 (K): Tubo de cuarzo de 100 cm de largo, 7 mm de diámetro externo y 5 mm de diámetro interno. Las terminales de estos tubos deben estar de 10 cm a 320 cm fuera del horno y conectados a la botella de absorción en una distancia de 5 cm para mantener el calor. (L): Botella de absorción con disco sinterizado con poros P 2 y capacidad de 20 ml, conteniendo 10 ml de disolución alcalina de trióxido de arsénico Aparato para titulación potenciométrica con medidor y electrodos de referencia Procedimiento Toma de muestra Tomar de la muestra, una porción de 50 g de café verde descafeinado Determinación a) Calentar el horno a una temperatura de 959 C ± 25ºC y ajustar el flujo de aire a 5 l/h. b) Conectar al aparato la botella de absorción (M) conteniendo 10 ml de la dilución de la solución alcalina de trióxido de arsénico. c) Introducir una porción de la muestra en el frasco de destilación y adicionar agua fría (100 ml a 150 ml). Si se requiere, adicionar agente antiespumante. Conectar herméticamente el frasco al aparato por medio de pinzas y cambiar la dirección de flujo con dirección al horno de pirólisis. Calentar por 5 h. d) Al terminar la destilación, desconectar la botella de absorción (M) Titulación potenciométrica a) Efectuar la titulación potenciométrica en la botella de absorción.

38 33/44 b) Recoger todos los restos destilados con etanol, con un volumen que no exceda de 20 ml. c) Conectar los electrodos, adicionar 2 ml de ácido nítrico diluido (1:1) y 1 ml de la solución de cloruro de sodio. d) Titular sobre un baño maría frío y agitador magnético, usar la solución de nitrato de plata Blanco testigo Antes de cada serie de pruebas correr un blanco testigo, si el aparato está en uso constante, correr un blanco cada día y tomar en cuenta los resultados para el cálculo final. Hacer las mediciones en el blanco testigo, aplicar el procedimiento anterior, pero usando agua en el frasco de destilación. La duración del blanco testigo debe ser de una hora. La obtención de un resultado de 5 mg a 10 mg de cloruros después de adicionar la corrección de la solución de cloruro de sodio se considera satisfactorio Número de determinaciones Se recomienda que las determinaciones que se realicen sean por duplicado. Si los resultados son muy distantes (generalmente altos), se puede moler el café y mezclar homogéneamente antes de tomar la porción de muestra.

39 34/44 FIGURA 4.- Aparato para la extracción de residuos de solventes clorados del café

40 35/ Expresión de los resultados Los resultados obtenidos del contenido de residuos de solventes clorados, expresado como miligramos de cloruro por kilogramo, es igual a: 0,1773 x 1000 x V x c CR = m x 0,9 Donde: CR V m c es el contenido de residuos de solventes clorados; es el volumen en mililitros de la solución estándar de nitrato de plata utilizados para titulación, incluyendo la corrección del prueba con el blanco-testigo; es la masa en gramos, de la porción de la muestra a analizar; es la concentración en moles por litro de la solución de nitrato de plata; 0,9 es el factor de conversión para un 100 % de recuperación, y 0,1773 es la masa en gramos, del equivalente de cloruro en 1 ml de la solución estándar de nitrato de plata 0,005 mol/l Repetibilidad y reproducibilidad Repetibilidad La diferencia entre los valores obtenidos en dos determinaciones llevadas a cabo simultáneamente o en rápida sucesión sobre la misma muestra en las mismas condiciones de analista, aparato y laboratorio, no debe exceder el valor de 0,50 mg de solvente/kg de café Reproducibilidad La diferencia en el resultado de dos determinaciones, llevadas a cabo en diferentes laboratorios sobre una misma muestra no debe exceder el valor de reproductibilidad de 0,50 mg de solventes/kg de café.

41 36/ Informe de la prueba El informe de la prueba debe incluir los siguientes datos: - Identificación de la muestra; - Año de cosecha; - Número de lote; - Resultado obtenido; - Cualquier desviación al procedimiento aquí descrito; - Cualquier anomalía durante el desarrollo de la prueba, y - Fecha de la determinación Determinación de solvente residual por cromatografía de gases Objetivo Describir la técnica analítica para determinar el contenido de solvente residual (Acetato de etilo y Cloruro de Metileno) en café verde descafeinado Reactivos - Cloruro de sodio grado reactivo; - Cloruro de metileno grado cromatográfico; - Agua destilada o desionizada, y - Acetato de etilo grado cromatográfico Equipo - Cromatógrafo de gases, calibrado; - Espacio de cabeza (Head space), y - Balanza analítica Materiales - Pipetas volumétricas de 0,5 y 1,0 ml; - Viales; - Espátula de acero inoxidable; - Septas para viales, y - Engargoladora para viales.

42 37/ Método Preparación de la solución estándar En un matraz volumétrico de 100 ml, parcialmente lleno con agua desionizada, depositar 0,05 (50 µl) ml de acetato de etilo y de cloruro de metileno con una jeringa de 100 y/o 50 µl Aforar el matraz y agitar manualmente por tres minutos. Esta solución equivale a 660 ppm de cloruro de metileno y 450 ppm de acetato de etilo Preparación de la solución estándar 2 Con una jeringa de 100 µl tomar una alícuota de 0,1 ml (100 µl) de la solución anterior y transferirlos a un matraz volumétrico de 50 ml parcialmente lleno con agua desionizada, aforar, agitar por dos minutos. Esta solución equivale a 1,32 ppm de cloruro de metileno y 0,9 ppm de acetato de etilo y será la que se use para la calibración de los cromatógrafos Preparación de la muestra Pesar 3g ± 0,1g de café verde descafeinado. Agregar 5 ml de agua desionizada Tipo 1. Sellar el vial con la septa con la ayuda de la engargoladora Preparación de un testigo En un vial colocar 8 ml de agua desionizada Tipo 1; sellar con la engargoladora Preparación del cromatógrafo

43 38/44 Condiciones de análisis: Detector Columna Presión del gas acarreador Gas de arrastre Mezcla de combustión Split FID PE-624 6% cianopropinil 94% metilpolisiloxano (60 m X 0,53 mm X 3 um) 8,5 psi Helio Aire 450 ml/min/hidrógeno 45/mL/min 0,0 ml/min Temperatura del detector 250 ºC Temperatura del inyector 160 ºC Temperatura del Horno 40 ºC Tiempo de corrida 15 min Condiciones del Espacio de cabeza (Head space): Modo HS Constante Temperatura de muestra 80º C Temperatura de aguja 150º C Temperatura columna de 160º C transferencia Tiempo de análisis 16 min Tiempo del termostato 30 min Tiempo de presurización 5 min Tiempo de inyección 0,20 min Tiempo de retroceso 0,0 Venteo del vial Off

44 39/44 Los tiempos de retención de los compuestos de interés son los siguientes: Retención de los compuestos Cloruro de metilo Tiempo 7,58 min Acetato de etilo 12,88 min Cuantificación de las muestras Una vez calibrado el cromatógrafo se realiza en forma automática la inyección de las muestras y con la ayuda del software apropiado y los factores correspondientes, la concentración de Cloruro de metileno y Acetato de etilo aparece reportada en la columna correspondiente a ppm. 8.3 Determinación de humedad Para la determinación de este parámetro se puede utilizar el método de prueba descrito en la NMX-F-176-SCFI-2008 (véase 3 Referencias), o bien el que a continuación se detalla: Resumen El método se basa en secar una porción de muestra de granos de café verde descafeinado, a temperatura de 130 C ± 2ºC y a presión atmosférica; la prueba debe determinarse por duplicado, con un reposo intermedio para permitir la distribución uniforme del agua que queda en los granos Aparatos y materiales - Estufa para determinación de humedad, rango 10 C a 200ºC; - Cápsulas con tapa para determinación de humedad, y - Pirómetro, rango 10 C a 200ºC Procedimiento Efectuar al menos dos determinaciones sobre cada muestra.

45 40/ Toma de muestra En una cápsula previamente secada y tarada, repartir 5 g de café verde descafeinado en una sola capa. Si la muestra contiene alguna materia extraña de masa importante (clavo, piedra, etc.), eliminar y utilizar una nueva muestra. Poner la tapa a la cápsula y determinar su masa con una aproximación de 0,1 mg Determinación Primer Secado: Colocar la cápsula descubierta y la tapa en la estufa ajustada a 130 C ± 2 ºC. Retirar la cápsula después de 6 h ± 15 min, poner la tapa y colocar en el desecador. Cuando se haya enfriado a temperatura ambiente, determinar la masa de la cápsula tapada con una aproximación de 0,1 mg. Después de determinar la masa, colocar la cápsula tapada en el desecador y dejar por lo menos 15 h. Segundo Secado: Volver a colocar la cápsula en la estufa en las condiciones antes descritas y dejar 4 h ± 15 min. Retirar, dejar enfriar a temperatura ambiente en el desecador y determinar la masa de nuevo Cálculo y expresión de los resultados La pérdida de masa P 1 durante el primer secado, expresado en gramos por 100 g de muestra de ensayo, es igual a: (m o - m 1 ) x 100 P 1 = m o La pérdida de masa P 2, durante ambos secados en la estufa, expresada en gramos por 100 g de muestra para ensayo, es igual a:

46 41/44 (m o - m 2 ) x 100 P 2 = m o Donde: m o m 1 m 2 es la masa inicial de la muestra en gramos; es la masa de la muestra después del primer secado, en gramos, y es la masa de la muestra después del segundo secado, en gramos. Exprésese P 1 y P 2 con una aproximación de 0,01 %. Normalmente la diferencia entre P 1 y P 2 debe ser inferior a 1,0 g por 100 g de muestra. Si no es así, es preciso repetir la determinación. La humedad P del producto, expresada en porcentaje de masa, es igual a la pérdida de masa observada después del primer secado más la mitad de la pérdida de masa complementaria observada después del segundo secado: P 1 + (P 2 - P 1 ) ( P 1 + P 2 ) P = = Se debe tomar como resultado la media aritmética de las dos determinaciones, expresada con una aproximación de 0,1 % Repetibilidad La diferencia entre dos resultados individuales obtenidos con la misma muestra para ensayo, en las mismas condiciones de analista, aparato, laboratorio y durante un corto intervalo de tiempo, no debe exceder de 0,3 g de agua por 100 g de muestra.

47 42/44 9 ENVASADO El producto regulado por esta norma debe contenerse en cualquier tipo de envase cuyo material sea resistente e inocuo. 10 VIGENCIA La presente norma mexicana entrará en vigor 60 días naturales después de la publicación de su declaratoria de vigencia en el Diario Oficial de la Federación. 11 BIBLIOGRAFÍA NOM-008-SCFI-2002 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 27 de noviembre de NMX-F SCFI Café verde descafeinado - Especificaciones y métodos de prueba. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación el 19 de octubre de NMX-Z-013/ Guía para la redacción, estructuración y presentación de las normas mexicanas. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación 31 de octubre de NMX-Z-013/ Guía para la redacción, estructuración y presentación de las normas mexicanas. - Parte 2: Materias primas y productos farmacéuticos. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federación 14 de mayo de 1981.

48 43/44 ISO Green coffee -- Determination of water content - - Basic reference method. Edition 2. Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Diciembre, ISO Coffee and its products - Vocabulary. Edition 4. Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Noviembre ISO Coffee, determination of caffeine content (Reference method). Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Junio, ISO Green coffee in bags - Sampling. Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Diciembre, ISO Green Coffee - Olfactory and visual examination and determination of foreign matter and defects. Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Marzo, ISO Green coffee - Size analysis - Manual sieving. Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Junio, ISO Green coffee - Preparation of samples for use in sensory analysis. Organización Internacional de Normalización. Ginebra, Suiza. Mayo, 2008.