UNIVERSIDAD RAFAEL URDANETA VICERRECTORADO ACADÉMICO DECANATO DE POSTGRADO E INVESTIGACIÓN DERECHOS RESERVADOS

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1 UNIVERSIDAD RAFAEL URDANETA VICERRECTORADO ACADÉMICO DECANATO DE POSTGRADO E INVESTIGACIÓN EFECTIVIDAD DEL ALCOHOL ISOPROPÍLICO COMO TRATAMIENTO INNOVADOR EN EL HERPES SIMPLE LABIAL Trabajo Especial de Grado presentado por Juan Antonio Oliveira del Rio. Especialización en Metodología de la Investigación Maracaibo, Diciembre 2006

2 2 EFECTIVIDAD DEL ALCOHOL ISOPROPÍLICO COMO TRATAMIENTO INNOVADOR EN EL HERPES SIMPLE LABIAL Trabajo Especial de Grado para optar al título de Especialista en Metodología de la Investigación presentado por: Juan Antonio Oliveira C.I II

3 3 AGRADECIMIENTO A Dios y a la Virgen por darme la luz en el camino, en proporcionarme fuerzas cuando me sentía sin ellas, a regalarme salud para estar presto en mi formación y ayudarme en todo mi camino para ayudar a otras personas, A mis profesores de la Universidad Rafael Urdaneta, que con su vocación, ejemplo pero sobre todo sabiduría han sido maestros en nuestra formación, y en un futuro se discípulos de tan grandes maestros. A la Dra. Ligia Pérez Castro, amiga, guía, y apoyo, ejemplo consecutivo de lucha, de aprendizaje continuo, pero sobre todo de superación. A la prof. Gladys Sarmiento, por brindarme siempre el mejor y mayor apoyo en mi formación, en darme el ejemplo de poder ayudar incondicionalmente a nuestros alumnos y de darle la mejor mano amiga en este arduo camino. A mis amigos, mónica, carmen y nesky, por compartir momentos difíciles y alegres en esta camino, en brindarme su amistad, en compartir y ser parte de sus vidas, a ellos el agradecimiento eterno y mi gran cariño por siempre y que dios nos mantenga unidos. A todos las personas que de una u otra forma han sido ayuda en mi formación, a ellos todo mi agradecimiento para toda la vida. III

4 4 DEDICATORIA A mis padres, fiel ejemplo de lucha de vida, de superación en las adversidades, de crecer de la nada y de conseguir la meta planteada. A mi esposa, por ser mi gran pilar, por ayudarme en los mejores momentos y ser mi principal motor en las circunstancias difíciles de la vida. A mi hija, Susan por ser la persona más pequeña y a la vez la más grande, por la q me supero cada día mas para darle lo mejor de mi... por ella y para ella para ser su fiel ejemplo. A todos mis amores... Mi gracias eternas. Juan Antonio Oliveira.

5 5 UNIVERSIDAD RAFAEL URDANETA VICERRECTORADO ACADEMICO DECANATO DE POSTGRADO E INVESTIGACÍÓN RESUMEN EFECTIVIDAD DEL ALCOHOL ISOPROPÍLICO COMO TRATAMIENTO INNOVADOR EN EL HERPES SIMPLE LABIAL Esta investigación se centró en evaluar la efectividad del alcohol isopropílico como tratamiento innovador en el herpes simple bucal, en pacientes afectados en diferentes poblaciones del estado Zulia. Se utilizó un tipo de investigación aplicada con un nivel descriptivo, el diseño fue de tipo preexperimental y longitudinal. La muestra de tipo accidental fue de 20 pacientes, se les aplicó alcohol isopropílico 2 veces al día por 15 minutos. Para la recolección de la información se diseñó una hoja de observación, analizando los resultados a través de estadística descriptiva. Los resultados obtenidos fueron 20 casos con etiología de herpes simple tipo I, afectando igualmente a mujeres y hombres y más al maxilar superior. Se disminuyo los signos podromónicos a un solo día después de la aplicación del tratamiento y la desaparición de la enfermedad fue de menos de cinco días, comparándolos con los resultados de Neville existió una diferencia estadísticamente significativa con un nivel de significancia de y un intervalo de confianza del 95%, el efecto costo beneficio del tratamiento fue un ahorro económico entre 7.020bs a bs de acuerdo con los diferentes tratamientos, logrando un tratamiento rápido, económico y sencillo en su aplicación sin efectos colaterales en la lucha contra el herpes labial. Autor: Juan Antonio Oliveira Tutor: Gladys Sarmiento Fecha: Diciembre 2006 Descriptores: herpes labial simple, tratamiento del herpes, alcohol isopropílico. juanoliveira28@hotmail.com

6 6 INDICE GENERAL TITULO AGRADECIMIENTO DEDICATORIA INDICE GENERAL INDICE DE CUADROS INDICE DE TABLAS RESUMEN CAPITULO I: FUNDAMENTACIÓN Planteamiento y Formulación del Problema Objetivos de la Investigación Objetivo General Objetivos Específicos Justificación de la Investigación Delimitación de la Investigación CAPITULO II: MACO TEÓRICO Antecedentes de la Investigación Bases teóricas de la Investigación Aspectos Generales de los Virus La Familia de los Herpesviridae Virus Herpes Simple Tipo I y II Virus Herpes Tipo III o Varicela Zoster (VZV) Virus Herpes Tipo IV o Virus de Epstein-Barr (EBR) Virus Herpes Tipo V o Citomegalovirus (CMV) Virus Herpes Tipo VI o Exantema Súbito Virus Herpes Tipo VII Virus Herpes Tipo VIII Tratamiento actual en el combate del Herpes Aciclovir Aciclor Valacyclovir Mapa de Variables CAPITULO III: MARCO METODOLÓGICO Tipo y Nivel de la Investigación Diseño de la Investigación Sujetos de la Investigación Población Muestra Definición Operacional de las Variables Técnicas de Recolección de Datos Pág. II III IV V VII VIII IX V

7 7 Descripción del Instrumento Plan de Análisis de los Datos Procedimientos CAPITULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIÓN Resultados Conclusiones Recomendaciones REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ANEXOS

8 8 INDICE DE CUADROS Cuadro No. 1 Pág Mapa de operacionalización de las variables

9 9 INDICE DE TABLAS Tabla Nº 1 Pág. Distribución de casos de tipos de virus a través de la prueba de inmunofluorescencia directa en pacientes con herpes labial Tabla Nº 2 Distribución Signos y Síntomas podromónicos presentes en pacientes con herpes labial simple presentes al momento de la toma de muestra e inicio del tratamiento Tabla Nº 3 Distribución de los pacientes diagnosticados con herpes labial según edad y sexo Tabla Nº 4 Distribución de casos diagnosticados con herpes labial según la ubicación de la lesión en los labios Tabla Nº 5 Distribución de casos de pacientes con herpes labial según la etapa de lesión al momento del inicio del tratamiento con alcohol isopropílico Tabla No. 6 Distribución de casos de pacientes con herpes labial según los días transcurridos para la eliminación de los signos y síntomas podromónicos Tabla No. 7 Prueba t para una muestra Distribución de casos de pacientes con herpes labial según los días de resolución de la enfermedad luego de la aplicación del alcohol isopropílico como tratamiento y el estadio de la lesión al momento del estudio Tabla Nº 8 Distribución de casos de pacientes con herpes labial según la resolución de la enfermedad luego de la aplicación del alcohol isopropílico como tratamiento y el estadio de la lesión al momento del estudio

10 10 Tabla No. 9 Prueba t para una muestra Distribución de casos de pacientes con herpes labial según los días de resolución de la enfermedad luego de la aplicación del alcohol isopropílico como tratamiento y el estadio de la lesión al momento del estudio Tabla No. 10 Comparación de precios de medicamentos farmacéuticos según precio de venta al público en farmacias para el tratamiento del Herpes bucal. Aciclovir en diferentes presentaciones con el Alcohol isopropílico para determinar costo beneficio Tabla No. 11 Comparación de precios de medicamentos farmacéuticos según precio de venta al público en farmacias para el tratamiento del Herpes bucal. Aciclor (Aciclovir) en diferentes presentaciones con el alcohol isoporpílico para determinar costo beneficio Tabla No. 12. Comparación de precios de medicamentos farmacéuticos según precio de venta al público en farmacias para el tratamiento del Herpes bucal, Valtrex (Calacyclovir) en diferentes presentaciones con el alcohol isopropílico para determinar costo beneficio

11 11 C A P I T U L O I FUNDAMENTACION Planteamiento y Formulación del Problema Es casi imposible determinar cuantos virus se han detectado hasta los momentos durante toda la historia de la humanidad, pero lo que es cierto es que ellos son capaces de generar diferentes tipos de enfermedades, algunas de ellas capaces de causar alteraciones sistémicas reversibles, otras, capaces de producir alteraciones o daños que nunca podrán ser eliminadas del cuerpo, pero hay también virus que son capaces de hacerle tanto daño al organismo que son totalmente letales a corto, mediano o largo plazo. Los diferentes virus descubiertos en el devenir de la historia humana, gracias a los avances tecnológicos hechos por la humanidad, entre ellos la microscopia electrónica (para citar alguno de ellos), son los responsables de poder identificar no sólo, los diferentes tipos de microorganismos, sino también, saber cuál es su composición, su mecanismo de acción y quizás lo más importante, saber como es su mecanismo de eliminación o tratamiento en el ser humano. Indiscutiblemente, a medida que estos avances tecnológicos se desarrollen, el ser humano será capaz de poder indagar aún más en ese mundo submicroscópico y, por ende, poder saber más de otros tipos de virus no descubiertos o mejor aún, poder controlar los efectos que 1

12 ellos producen y de esta manera eliminar las enfermedades y secuelas de los cuales ellos son responsables. 12 Vale reiterar que los virus son capaces de producir diferentes tipos de enfermedades con sus respectivos signos y síntomas propios de cada una de ellas, causando desde pequeñas incapacidades temporales, pasando por incapacidades permanentes, hasta llegar quizás hasta la muerte del individuo. Esto conlleva a que los pacientes portadores de enfermedades virales presentan otros problemas no solo desde el punto de vista familiar, sino también en lo laboral, en lo académico, en lo sentimental y en lo psicológico, esto puesto que conlleva a pérdida de tiempo y dinero, debido a que los pacientes no pueden ejercer sus diferentes funciones cotidianas. También es importante destacar que debido a las afecciones virales, diariamente en el mundo, se genera una disminución de la producción económica a raíz del ausentismo laboral, producto de incapacidades temporales y permanentes de los trabajadores por presentar enfermedades producidas por agentes virales. Así mismo, se debe tener en consideración que las enfermedades producidas por virus pueden llegar a ser epidemias en un país o en un continente, trayendo indiscutiblemente problemas sociales y económicos fuertes, debido a la globalización de los mercados pueden afectar a naciones vecinas que no hayan sido afectadas. Venezuela, país en vía de desarrollo, no escapa de esta problemática. Es importante comentar que una de las enfermedades virales mas difundidas en el mundo es la producida por el Virus del Herpes simple tipo I, la cual se

13 13 caracteriza por la erupción de ampollas pequeñas y dolorosas, ubicadas por lo general en la piel de los labios. Estas ampollas comúnmente se llaman ampollas febriles o herpes labial. La infección inicial puede ser asintomática o causar únicamente úlceras bucales. El virus permanece en el tejido nervioso de la cara y, en algunas personas, se reactiva y es causante de herpes febril recurrente que generalmente está en la misma área, pero no es grave, Neville (2002). Los virus del herpes son contagiosos y se transmiten ya sea de forma directa a través de la saliva o de forma indirecta a través de elementos contaminados como hojillas de afeitar, toallas, platos y otros artículos que se comparten. Debido a esta forma de contagio tan fácil, esta enfermedad es capaz de afectar a un sin fin de personas dentro de una familia o dentro de una comunidad, y difundirse rápidamente. Luego del contagio, los primeros síntomas generalmente se presentan alrededor de dos semanas ó tres semanas luego del contacto con una persona infectada. Usualmente, las lesiones por el herpes labial permanecen durante siete a diez días y luego comienzan a desaparecer. No obstante, el virus puede permanecer latente en las células nerviosas y luego recurrir ocasionalmente en el sitio original o cerca de él. Normalmente la recurrencia es leve y puede desencadenarse durante los períodos menstruales, exposición al sol, enfermedades con fiebre, estrés u otras causas desconocidas. Por lo general, los primeros síntomas de advertencia del padecimiento de esta enfermedad son el prurito y sensación de quemazón, mientras que el aumento de la sensibilidad u hormigueo se puede presentar aproximadamente dos días antes de la aparición de las lesiones, según expresa Neville (2002)

14 14 Debido a su forma fácil y rápida de contagio, así como los primeros síntomas de la enfermedad que suelen presentar los pacientes, esta enfermedad es capaz de causar incomodidad y malestar general de inmediato, produciendo dificultades en el ámbito familiar, laboral, psicológico, social, así como también en su capacidad física. Los diferentes tratamientos existentes para el tratamiento de las enfermedades virales, han sido enfocados para controlar parcialmente los signos y síntomas que ellas pueden producir, y en algunos casos, se ha podido lograr conseguir un tratamiento eficaz para la eliminación del agente viral y, por ende, su eliminación total. Sin embargo, existen algunas enfermedades producidas por agentes virales a las que no se les ha podido conseguir el tratamiento eficaz, conllevando esto a un manejo sintomático de las mismas, ocasionando la aparición de los signos y síntomas propios de ellas. Estos tratamientos capaces de tratar, prevenir, o de curar, por lo general son tan costosos que no pueden ser adquiridos por gran parte de la comunidad, motivo por el cual se deben buscar tratamientos sencillos, económicos y que estén al alcance de toda la población para de esta forma, poder lograr controlar, tratar o erradicar las enfermedades virales. Es bueno acotar que para tratar el herpes bucal se han postulado soluciones diferentes para su control y/o combate, que van desde tratamientos elaborados con productos naturales (llamados medicinas casera), pasando por medicamentos compuestos o la mezcla de varios productos, o hasta llegar a tratamientos ya elaborados y patentados por compañías farmacéuticas, los cuales son los productos

15 15 de mayores costos, debido a su mismo proceso de elaboración, conllevando estar fuera del alcance económico de muchos pacientes, aunque son tratamientos que no eliminan totalmente el agente viral. Sólo son utilizados para el control del virus a fin de poder acortar los signos y síntomas producidos por ellos. Por todo lo antes expuesto, se hace imprescindible, tomar en consideración la forma de contagio, su mecanismo de reproducción viral, y su posterior almacenamiento dentro del cuerpo humano. Estos factores han dificultado la elaboración de un tratamiento efectivo para la eliminación total de muchos agentes virales, solo se cuenta con tratamientos asintomáticos a altos costos. Pero enhorabuena, se ha comprobado que el alcohol es un producto que desde el punto de vista de su farmacocinética, es capaz de destruir la capa protectora o envoltura de aquellos virus que la posean en su estructura. Hoy día, este principio se utiliza en productos jabonosos alcoholizados para la desinfección de manos, los cuales son utilizados no sólo por profesionales de la salud, sino también por la comunidad en general, ya que estos productos se encuentran fácilmente en supermercados, farmacias, y locales comerciales, todos ellos a bajo costo y al alcance la toda la población. Sin embargo, desde el punto de vista de tratamiento para el herpes bucal no ha sido utilizado este principio o efecto que produce el alcohol en la eliminación o control del virus del herpes, y es por ello que se plantea la necesidad de estudiar el efecto producido por este producto, ya que sería un tratamiento fácil de utilizar, a bajo costo, de rápida adquisición y a disposición de toda la comunidad en general.

16 16 Debido a lo indicado, se plantea la necesidad de utilizar éste principio para el tratamiento eficaz del herpes bucal, para controlar sus efectos, y así evitar los signos y síntomas propios de la enfermedad, los cuales ocasionan problemas estéticos, sociales, laborales y económicos al paciente, a quien es necesario devolverle un equilibrio biopsicosocial acorde a sus necesidades. Por lo antes expuestos, esta investigación tendrá como punto focal, Cual será el efecto del alcohol isopropílico en el tratamiento del herpes bucal simple? Será capaz de disminuir los efectos producidos por la enfermedad del herpes bucal? Objetivo General Objetivos de la Investigación Evaluar la efectividad del alcohol isopropílico como tratamiento innovador en el herpes simple bucal, en pacientes afectados en diferentes poblaciones en el estado Zulia. Objetivos Específicos Identificar el tipo de virus de herpes simple bucal a través de la prueba de inmunofluorescencia directa. Clasificar las lesiones de los pacientes afectados según el estadio de la enfermedad al momento del estudio. Clasificar los pacientes afectados según edad, sexo y ubicación de la lesión.

17 17 Medir el efecto del alcohol isopropílico sobre el herpes bucal tomando en consideración los diferentes estadios de la lesión. Determinar el efecto costo beneficio del alcohol absoluto como tratamiento innovador en el herpes bucal. Justificación de la Investigación En esta investigación se busca realizar una evaluación de la efectividad del alcohol absoluto como un tratamiento innovador para el tratamiento del herpes simple bucal, tomando en consideración la facilidad de su adquisición, el bajo costo que tiene, su rápida aplicación y la disminución del tiempo de duración de la enfermedad. Así mismo, esta investigación, producirá un cambio sustancial en los tratamientos tópicos del herpes bucal, debido al rápido efecto que ejerce el alcohol en la eliminación de los virus con envolturas, conllevando a una mejoría sustancial de los síntomas de la enfermedad. De esta forma, la reincorporación del paciente a sus actividades diarias será más rápida, habiendo obtenido un tratamiento efectivo a bajo costo. De la misma manera, producirá un efecto inmediato en el tratamiento de los virus que no poseen envoltura, debido al cambio paradigmático que esto producirá como tratamiento tópico en estas enfermedades virales. Igualmente conducirá irremediablemente hacia un nuevo pensamiento porque exaltará que los tratamientos más eficaces no son aquellos que quizás sean producidos con altas tecnologías y a altos costos, sino que alrededor de todos los seres humanos, existe un mundo que no ha sido descubierto y para encontrarlo solo se debe cambiar la percepción de la

18 vista y observar que todo sirve para todo, sólo hay que buscar la mejor y la más fácil solución de los problemas. 18 Delimitación de la Investigación Para realizar el estudio de efectividad del alcohol isopropílico como tratamiento innovador en el herpes labial, el presente estudio será realizada en pacientes diagnosticados con herpes bucal simple, y que tengan manifestaciones clínicas de la misma. Estos pacientes serán de diferentes municipios del estado Zulia, y serán tratados durante el período Septiembre 2006 hasta Noviembre Su delimitación teórica con respecto a su etiología, características, prevalencia, duración de la enfermedad, tratamiento será basada bajo los teóricos de Neville y Daws (2002).

19 19 C A P Í T U L O II M A R C O T E Ó R I C O. Antecedentes de la Investigación. Para efectos en ésta investigación se realizó una revisión de las fuentes de información accesibles hoy día, para reforzar y ampliar los conocimientos en este estudio. Es de saber, que en dichas revisión se utilizaron investigaciones previas realizadas en el ámbito cinético internacional, la cual dará refuerzo a las variables en estudio. En este sentido de ideas, Van Engelenburg y colaboradores (2002), formularon como objetivo de su investigación el determinar el efecto de una mezcla de alcohol de etanol 80% e isopropílico al 5 % en la eliminación de virus con envolturas lípidicas (EL) y sin ella( SEL). Se realizo en pacientes afectados con estos virus, los cuales estaban presentes en su sangre y fueron atendidos en consultorios odontológicos. Los virus con envoltura lipídica fueron virus de la hepatitis C (HCV), el virus de los pseudorabia (PRV), y el virus del vaccinia, los virus sin envoltura lipídica fueron el virus humano de inmunodeficiencia (VIH), el virus viral de la diarrea de los bóvidos (BVDV). Los instrumentos odontológicos contaminados en la atención a estos pacientes, contenían sangre infectada por estos virus, a ellos, se le aplico la mezcla de alcohol etanol isopropílico en diferentes lapsos de tiempos y a los diferentes virus con y sin envolturas lípidicas. Los resultados encontrados fueron que la mezcla de alcohol después de tratar los instrumentos en 5 minutos se determino la reducción

20 20 de los agentes virales EL en un 60% y los virus SEL en un 40%. Luego se aplico esta mezcla de alcohol a instrumentos contaminados en 20 Segundos de duración observando el mismo resultado. Los resultados demuestran que la desinfección de los instrumentos odontológicos con una mezcla de alcohol reduce considerablemente los virus con envoltura lipídica, ocasionando una desinfección rápida y frecuente en la practica dental la cual no es peligrosa y no es tóxica. Igualmente Günter Kampf, Axel Kramer, formularon como objetivo la eficacia en la elección del producto de higiene como pauta de control y prevención de la enfermedad de la mano. La mejor eficacia antimicrobiana se puede alcanzar con el etanol (60 a el 85%), el isopropanol (60 a el 80%), y el n-n-propanol (60 a el 80%). La actividad es amplia e inmediata. El etanol en las altas concentraciones (e.g., el 95%) es el tratamiento más eficaz contra virus desnudos, mientras que el n-n-propanol se parece ser más eficaz contra la flora bacteriana residente. La combinación de alcoholes puede tener un efecto sinérgico. La eficacia antimicrobiana del chlorhexidine (2 a el 4%) y el triclosan (1 a el 2%) es más bajas y más lentas. Además, ambos agentes tienen un riesgo de la resistencia bacteriana, que es más alta para el chlorhexidine que triclosan. Su actividad es apoyada a menudo por el retiro mecánico de patógeno durante el lavado de la mano. Tomando la eficacia antimicrobiana y el retiro mecánico junto, siguen siendo menos eficaces que los alcoholes. El jabón y el agua llanos tiene la eficacia más baja de todos. Los

21 21 resultados demuestran que la desinfección de las manos con estos son mas eficaces etanol, isopropanol y el n-n-propanol. Así mismo, Sattar S y Ansari S. realizaron una investigación para evaluar el efecto de los jabones antobacterianos para las manos en la eliminación de los agentes virales en cuidadores y manipuladores de alimentos. Muchos tipos de virus se pueden identificar en las manos de cuidadores y de manipuladores de alimentos, y la descontaminación regular y apropiada de las manos es crucial en el trabajo de éstos. Los métodos estandardizados para determinar el potencial de la eliminación de los virus en la utilización de los agentes jabones de manos y jabones antibacterianos. Cada cuidador y manipulador recibe 10 microl de suspensión del virus de la prueba y del inoculum permitidos secarse. El área contaminada entonces se expone a 1 ml de un control o el agente de la prueba por el tiempo y el virus deseados del contacto restantes en las manos, se enjuaga, y las manos se identifican los virus infeccioso junto con los controles requeridos. El método puede también permitir la determinación del retiro adicional del virus debido a aclarar post-tratamiento de las manos con agua y/o su toalla subsecuente o al secado al aire. Las reducciones de los por ciento en las cantidades de virus infeccioso después del tratamiento con los agentes del control y de la prueba entonces se determinan. El método da los resultados que son comparables a ésos obtenidos usando la entero-mano. Las actividades de todas las clases importantes de los productos químicos germicidas usados en los antisépticos higiénicos de la mano se han probado contra varios envueltos y los virus no-envueltos del origen humano.

22 Los resultados obtenidos fueron una alta efectividad en la reducción de los virus en pacientes cuidadores y manipuladores de alimentos. 22 Bases teóricas de la investigación En esta investigación, se incluyeron como variable de estudio la efectividad del alcohol isopropílico como tratamiento del herpes labial simple, para lograr alcanzar los objetivos planteados dentro de la misma, apoyado por una fundamentación teórica por parte de diferentes autores, los cuales proponen diferentes aspectos teóricos, algunos de ellos son de concordancia otros de discrepancias, sin embargo, durante el desarrollo de este apartado, se reflejan los aportes científicos en el área de estudio, dándole valor científico al mismo. Aspectos Generales de los Virus Es importante precisar, que la posición de los virus como frontera entre lo vivo y lo inerte, le plantea a la comunidad científica un problema en su origen. Para muchos científicos, entre ellos Collier (2006), Rabiza (2000) los virus serían los primeros seres en la historia de la evolución de lo inerte a lo vivo que lograrían reunir con eficacia las funciones de replicación, transcripción del material genético y traducción; serían pues, los organismos menos evolucionados. Así mismo, para otros científicos, entre ellos Stanfery (2001), el hecho de que los virus solamente puedan realizar esas tres funciones vitales en el interior de células vivas, les lleva a pensar que los virus no pudieron existir antes de que aparecieran las primeras células, por muy simples que éstas fueran, entonces, los

23 23 virus serían las formas regresivas de organismos celulares que se han adaptado de forma extrema al parasitismo. Collier L, (2006), cita que el descubrimiento de otras formas acelulares ha aportado nuevas luces al origen de los virus, pero no ha servido para solucionar la disyuntiva planteada por la comunidad científica para el esclarecimiento del origen de los virus. Estas formas celulares son. Las otras formas acelulares son: Los provirus. Los plásmidos. Los viroides Algunos científicos (como Temin, en 1969) han postulado que los virus serían el resultado de la evolución de estas formas acelulares: los virus de ADN procederían de provirus y plásmidos, y los de ARN, de los viroides. La cápsida de los virus sería un logro evolutivo, por el que el material genético se vería protegido en su desplazamiento de una célula otra y garantizaría el éxito de la infección. Por otra parte, las formas acelulares podrían haber nacido en el seno del medio celular, cuando unos determinados genes lograran autonomía respecto al funcionamiento del genoma celular; de esta manera, el origen de los virus no estaría ligado necesariamente a los episodios que acompañan a la aparición de la vida sobre la tierra. Pero también podría hablarse de un proceso inverso: una pérdida de la cápsida reduciría a las unidades autónomas de replicación-transcripción-traducción a la condición de provirus, plásmidos o viroides. En conclusión, el descubrimiento de formas acelulares más sencillas que los virus nos ayuda a comprender mejor su naturaleza y significado biológico, pero nos mantiene en la duda de si estamos frente a los primeros organismos salidos de la

24 materia inerte, o frente a formas regresivas resultantes de la especialización del parasitismo. 24 Collier L, (2006) define al virus como una entidad biológica capaz de autorreplicarse utilizando la maquinaria celular de otro organismo. Es un agente potencialmente patógeno compuesto por una cápside (o cápsida) de proteínas que envuelve al ácido nucleico, el cual puede ser de Ácido Desoxirribonucleico (ADN) o Ácido Ribonucleico (ARN), dicha estructura puede, a su vez, estar rodeada por una envoltura vírica, compuesta por una capa lipídica con diferentes proteínas, esto dependerá del tipo de virus. El ciclo vital de un virus siempre necesitará de la maquinaria metabólica de la célula invadida para poder replicar su material genético, produciendo luego muchas copias del virus original dentro del organismo. En este proceso, reside la capacidad destructora de los virus, ya que pueden perjudicar tanto a la célula que puede llegar hasta destruirla. Los virus, pueden infectar células eucarióticas o procarióticas (en cuyo caso se les llama bacteriófagos o fagos). Algunos virus necesitan de enzimas poco usuales, debido a esto, los virus las cargan dentro de su envoltorio como parte de su equipaje. Con respeto al tamaño, los virus son estructuras extraordinariamente pequeñas. Su tamaño oscila entre los 24 nanómetros, (virus de la fiebre aftosa) hasta los 300 nanómetros (virus poxvirus). Su pequeño tamaño explica lo tardío del descubrimiento de estos agentes. La primera referencia sobre la existencia de los virus se debe al botánico ruso Dimitri Ivanovski en Este investigador buscaba el

25 25 agente causante de la enfermedad denominada mosaico del tabaco, y llegó a la conclusión de que debía tratarse de una toxina o de un organismo más pequeño que las bacterias, pues el agente atravesaba los filtros que retenían las bacterias, denominando a estos agentes patógenos como virus filtrables. En 1935, W. Stanley demostró, que los virus son cristalizables. Esto depende del hecho de que las partículas víricas tienen formas geométricas precisas y que son idénticas entre sí, lo cual las separa de la irregularidad característica de los organismos, las células o los orgánulos, y las acerca a las características de los minerales y de agregados de macromoléculas como los ribosomas. Al tener un volumen y forma idénticos, las partículas víricas tienden a ordenarse en una pauta tridimensional regular, periódica, es decir, tienden a cristalizar. Collier (2006), Stanfery (2001), Rabiza (2000), citan que desde los años treinta, se sabe que los virus se componen principalmente de ácido nucleico y proteínas, estas últimas forman la cápside, que se conoce también como envoltura proteínica. Los virus son considerados parásitos intracelulares obligados, esto quiere decir, que necesitan un huésped para poder vivir, replicarse y producir una enfermedad, ya que en vida libre no sobrevivirían, aunque se sabe, que existen algunos tipos de virus que pueden vivir alrededor de unos cuarenta días sin que tengan algún huésped en que se continúen reproduciendo.

26 26 Collier (2006), cita que todos los virus que se conocen presentan un solo tipo de ácido nucleico (ya sea ADN o ARN), el cual puede ser de una o de dos cadenas y puede ser segmentado. Para que el ácido nucleico del virus pueda replicarse, necesita utilizar la maquinaria enzimática y estructural de una célula viva, y por otra parte, solamente dentro de una célula viva tienen los virus las funciones de autoconservación, que junto con la de reproducción, caracterizan a los seres vivos. Esta condición es la causa de que muchísimos virus sean conocidos como gérmenes patógenos que producen enfermedades en plantas y animales, e incluso en las bacterias. Con respecto a la estructura, el virus está compuesto de una molécula de ácido nucleico y una envoltura proteínica. Ésta es la estructura básica de un virus, aunque algunos de ellos pueden añadir a esto, la presencia de algunas enzimas, bien junto al ácido nucleico, como la transcriptasa inversa como es el caso de los retrovirus o bien en la envoltura, para facilitar la apertura de una brecha en la membrana de la célula huésped. En síntesis, a la unidad formada por el ácido nucleico y la envoltura proteínica se le denomina también virión. Por otra parte, Collier (2006), afirma que el ácido nucleico del virus es solamente de un tipo, ya sea ADN o ARN nunca los dos. Atendiendo al tipo de ácido nucleico se distinguen cuatro clases de virus: ADN de cadena doble ADN de cadena sencilla ARN de cadena doble

27 27 ARN de cadena sencilla Igualmente, la envoltura proteínica recibe el nombre de cápsida, la cual está formada por unas subunidades idénticas denominadas capsómeros. Los capsómeros son proteínas globulares que en ocasiones tienen una parte glicídica unida. Se ensamblan entre sí dando a la cubierta una forma geométrica. Atendiendo la forma de la cápsida, se pueden distinguir los siguientes tipos de virus: Cilíndricos o helicoidales: los capsómeros, que son de un solo tipo, se ajustan entorno una hélice simple de ácido nucleico. Un ejemplo lo constituye el virus del mosaico del tabaco. Icosaédricos: los capsómeros, que suelen ser de varios tipos, se ajustan formando un icosaedro regular (es decir, 20 caras triangulares y 12 vértices), y dejando un hueco central donde se sitúa el ácido nucleico fuertemente apelotonado. Algunos forman poliedros con más caras que el icosaedro, y algunos presentan fibras proteicas que sobresalen de la cápsida. Complejos: con pequeñas variantes, responden a la siguiente estructura general: o o o o Una cabeza de estructura icosaédrica que alberga el ácido nucleico. Una cola de estructura helicoidal que constituye un cilindro hueco. Un collar de capsómeros entre la cabeza y la cola. Una placa basal, al final de la cola, con unos puntos de anclaje que sirven para fijar el virus a la membrana celular. De la placa salen

28 también unas fibras proteicas que ayudan a la fijación del virus sobre la célula hospedadora. 28 Asimismo, Collier (2006), afirma que muchos virus, por fuera a la cápsida, presentan una envoltura de características similares a una membrana plasmática, es decir, conformada por una doble capa fosfolipídica y proteínas, muchas de estas glicoproteínas que se proyectan salientes hacia el exterior son llamados espículas. La cápsida de estos virus suelen ser icosaédrica, aunque también los hay con cápsida helicoidal. Se interpreta que la envoltura lipoproteica es un resto de la membrana plasmática de la célula infectada donde se ha formado el virus. Un ejemplo de éste tipo de virus lo constituye el de la gripe. De la misma forma, es muy difícil aplicarles de forma consistente los criterios de clasificación y nomenclatura que sirven tan bien para la clasificación de los organismos celulares o verdaderos organismos, debido por una parte a la falta de autonomía para el desarrollo y su probable carácter polifilético, por lo antes expuestos los virus se han tratado de clasificar tomando en consideración diferentes aspectos, sin embargo la clasificación más común es la utilizada de acuerdo al tipo de ácido nucleico que posean, a las características de la envoltura del virión, cuando existe, a la posición taxonómica de sus huéspedes, a la patología que producen, etc. Combinando caracteres como los enumerados, y por ese orden de importancia, se han reconocido unos 30 grupos de virus internamente bien definidos.

29 29 Con respecto al ciclo reproductivo de los virus, éstos tienen un objetivo básico: producir copias de sí mismos en gran cantidad sirviéndose de la maquinaria que tiene una célula viva para los procesos de replicación, transcripción y traducción. El ciclo vital de los virus consta de las siguientes fases: a) Entrada en la célula. b) Eclipse. c) Multiplicación. d) Liberación del virus. Primeramente, la entrada en la célula consta a su vez de dos etapas: la absorción o fijación del virus en la superficie celular, y la penetración a través de la membrana. Por un lado, hay una alta especificidad en la fijación de un virus a la membrana de su célula huésped, porque se ha de producir la unión entre determinadas proteínas de la cápsida vírica y determinadas glicoproteínas de la membrana plasmática, esto se observa a lo largo de un proceso evolutivo, donde cada virus ha ido adquiriendo sitios de unión específico para anclarse en la membrana de un determinado tipo celular; y por el otro lado la penetración del virus a través de la membrana plasmática ocasiona varias situaciones, bien sea el virus ingresa completo, puede ser solamente su ácido nucleico, o puede lograr invadir el citoplasma celular. Sin embargo, por regla general, se necesita el esfuerzo de muchos virus para que alguno de ellos logre penetrar en la célula.

30 30 Así mismo, existen otras modalidades de penetración del componente viral a la célula huésped, entre ellos, los virus complejos producen una ruptura en la membrana bacteriana en uno de los puntos de anclaje, gracias a la presencia de algunas moléculas de enzimas hidrolíticas que se encuentran en las proteínas de la cápsida. A través de la ruptura, el tubo central inyecta el ADN viral, quedando la cápsida vacía en el exterior de la bacteria. La presencia de cápsidas en la superficie bacteriana es un buen indicio de que la bacteria ha sufrido una infección vírica. En este orden de ideas, existen otros virus sin envoltura lipídica, los cuales se introducen en la célula con cápsida y todo, lo cual puede realizarse de dos maneras: a) Por penetración directa: después de la fijación, el virus abre una brecha en la membrana y se introduce en el citoplasma. b) Por endocitosis: la membrana forma una invaginación en torno al virus, llegando a formar una vesícula que penetra en la célula. Formada la vesícula, el virus abre una brecha en la membrana de la misma con ayuda de algunas enzimas hidrolíticas que él mismo transporta, penetrando así en el citoplasma. Los virus con envoltura lipídica burlan la barrera de la membrana celular porque su cubierta lipídica se funde con la membrana, ya que tienen la misma naturaleza. Esta fusión de membranas puede realizarse en dos lugares distintos: a) Fusión en la superficie celular: de manera que el virión penetra directamente en el citoplasma.

31 31 b) Fusión con un lisosoma: se forma una vesícula por endocitosis, a la que se une a un lisosoma para digerir la partícula introducida; entonces, la cubierta lipídica del virus se funde con la membrana del lisosoma y el virión escapa hacia el citoplasma. Seguidamente, a la etapa de entrada, empieza la fase de eclipse la cual corresponde a un tiempo, después de la penetración, en que el virus parece desaparecer, pues aparentemente no se advierte ningún indicio de su presencia ni de su actividad, sin embargo, lo que ocurre en esta fase es que se da un desensamblaje de las piezas del virus (si es que ha penetrado completo), y su ácido nucleico queda asimilado en las estructuras celulares aptas para los procesos de replicación y transcripción. Esta fase, varia de unos tipos de virus a otros y termina con la síntesis de los ARN mensajero (ARNm), necesarios para que se sinteticen las proteínas que actuarán en la multiplicación del virus. Según la duración de la fase de eclipse, se suelen distinguir dos modalidades del ciclo infeccioso de un virus: a) Ciclo ordinario: el ácido nucleico vírico procede inmediatamente a la transcripción de su mensaje genético en los ARNm necesarios para su multiplicación, y prosigue rápidamente el ciclo vital. Este tipo de ciclo es el más extendido en la naturaleza. b) Ciclo lisogénico: fue descubierto por Lwolff en bacteriófagos. El ADN vírico se cierra por sus extremos generando un ADN circular. Este ADN se inserta en el

32 ADN bacteriano en un lugar específico en el que la secuencia de nucleótidos bacterianos es semejante alguna región del ADN vírico. 32 La bacteria prosigue sus funciones vitales sin que el virus realice ninguna acción, y cuando el ADN bacteriano se duplica también lo hace el ADN vírico, de manera que el genoma del virus pasa a las dos bacterias hijas. La multiplicación bacteriana puede seguir durante generaciones sin que el virus se manifieste. Pero ante una alteración de las condiciones ambientales, el ADN vírico se separa del bacteriano y prosigue entonces las restantes fases de ciclo infeccioso, produciendo la muerte de la bacteria y nuevos ejemplares del virus. Collier (2006), cita que algunos virus que infectan células animales siguen también el ciclo lisogénico, como los virus de las verrugas y algunos retrovirus que producen algunos tipos de cáncer. En el caso de los retrovirus, conviene recordar que el ácido nucleico es ARN monocatenario, por lo que la transcriptasa inversa ha de copiar el genoma vírico en forma de ADN antes de que pueda insertarse en el ADN celular. Posteriormente, sigue la etapa de la multiplicación del virus, donde se observa no solo la replicación de su ácido nucleico, sino también se produce la síntesis de las proteínas de la cápsida. Estos dos componentes, los ácidos nucleicos y las proteínas recién sintetizadas se ensamblan rápidamente, produciéndose nuevas partículas víricas. La multiplicación del virus consta de la replicación de su material genético, de la transcripción de su mensaje en una molécula de ARNm y de la traducción del mensaje para producir proteínas víricas, tanto las que formarán parte de la cápsida

33 33 como las proteínas enzimáticas necesarias para el ensamblaje de las piezas del virión y para algunas de las funciones anteriores. Los ribosomas y la mayor parte de las enzimas que los ácidos nucleicos víricos utilizan en estos procesos son los de la célula infectada. Los virus con ADN realizan la replicación del material genético de la misma manera que las células; en el caso de los virus con ADN monocatenario, previamente a la replicación se sintetiza una cadena de ADN complementario para formar la doble hélice. Los virus con ARN replican el material genético sin necesidad de pasar por ADN, actuando cada cadena de ARN como molde para la síntesis de su complementaria. Los retrovirus constituyen una excepción a lo dicho anteriormente, ya que su ARN sintetiza un ADN bicatenario, que será el que posteriormente realice la síntesis de nuevos ejemplares de RNA vírico. Los virus con ADN y los retrovirus sintetizan el ARNm a partir de la cadena molde de ADN de forma similar a como lo hacen las células. Los virus con ARN, excepto los retrovirus, sintetiza en el ARNm copiando la cadena molde de ARN, sin necesidad de pasar por ADN. Posteriormente a estos procesos, tiene lugar el ensamblaje de las piezas para construir nuevos viriones. En muchos virus, como el del mosaico del tabaco, el ensamblaje es automático y depende de la concentración salina del medio. En otros virus, en el ensamblaje intervienen enzimas codificadas en el ácido nucleico del virus. Por ultimo, se produce la liberación del virus dentro de la célula huésped, esta etapa se observa la salida de las nuevas partículas víricas, que podrán

34 34 posteriormente infectar nuevas células iniciando un nuevo ciclo de la enfermedad ocasionando signos y síntomas propios de ellas. Después de la multiplicación del virus tiene lugar la salida de los nuevos individuos, que saldrán con capacidad de infectar nuevas células. Las principales modalidades de liberación da nombre a nuevas variantes del ciclo vital de los virus: a) Ciclo lítico. b) Ciclo lisogénico. Éstos dos ciclos configuran las etapas reproductoras de un virus bacteriófago. En referencia al ciclo lítico, éste se inicia con el anclaje del cuerpo vírico a la superficie de la bacteria y la posterior inyección de parte de su material genético en el interior de la bacteria. El paso posterior es el aprovechamiento del medio interno de la bacteria para sintetizar más virus a partir de componentes citoplasmáticos, tales como proteínas. Cuando se han fabricado los suficientes cuerpos víricos, la bacteria se lisa (rompe) y se liberan. En cuanto al ciclo lisogénico, el proceso se inicia con la inyección del material genético del virus en la bacteria, del mismo modo del proceso anteriormente expuesto; los filamentos de ADN inyectados a presión del cuerpo vírico se combinan con el material genético de la bacteria, denominándose éste proceso recombinación génica. Dicha combinación da como resultado una secuencia de nucleótidos bacteriana y vírica, con la cual se sintetizan nuevos virus. Éste ciclo puede dar a su vez un nuevo ciclo lítico.

35 35 Por otro lado, los virus tienen la capacidad de producir una infección persistente o constante. Los nuevos virus no esperan a la muerte de la célula huésped para abandonarla, sino, van saliendo de la célula al mismo tiempo que se van reproduciendo, de manera que la célula puede seguir viva y produciendo nuevas partículas víricas. La liberación puede hacerse de dos maneras: a) Los virus sin envoltura lipoproteica salen directamente, sin arrastrar ningún resto de la membrana plasmática, bien sea abriendo una brecha en la membrana, o bien aprovechando los mecanismos de exocitosis o salida de sustancias al exterior de la célula. b) Los virus con envoltura lipoproteica salen por gemación, es decir, se rodean de una porción de membrana plasmática que acaba separándose de la célula y constituye la cubierta lipoproteica del nuevo virus. La familia de los virus Herpesviridae De esta gran familia de virus, debido al objeto de estudio en esta investigación, se tomó el grupo de los herpesvirus para su estudio. Los Herpesvirus forman un grupo muy numeroso de virus de animales. Algunos producen importantes alteraciones en el hombre, pero todos producen lesiones cutáneas de diversa índole. De acuerdo con Collier (2006), la anatomía, las características del virión del herpervirus, poseen una envoltura relativamente flexible, la forma del virión, no es siempre la misma y su diámetro varía de 120 a 200 nm. En ella se encuentran los

36 36 peplómeros, que son más de 10 glicoproteínas distintas cuya función es la adsorción y la penetración en la célula hospedadora. Su cápsida icosaédrica de 100 nm de diámetro está compuesta por 162 capsómeros de los cuales, 150 son hexagonales (hexámeros) y 12 son pentagonales (pentámeros). Alrededor de la cápsida y bajo la envoltura se encuentra el tegumento. De acuerdo con el genoma está unido a la parte interna de la cápsida y se compone de ADN bicatenario y lineal que puede adoptar forma de protuberancia redondeada. Su tamaño oscila entre 125 y 240 kilopares de bases (kpb) y su contenido en moles de guanina-citosina (G+C) es del 32 al 75 %. Presenta dos secuencias únicas (U) unidas covalentemente: la larga (U L ) y la corta (U S ). Puede presentar secuencias repetidas (R) que generalmente se localizan en los extremos (TR) o internamente (IR). Las secuencias R permiten la inversión de las no repetidas (U) de manera que durante la replicación vírica se obtienen isómeros del genoma en cantidades equimolares, así no sobran cadenas de ADN. Codifica por lo menos 100 proteínas distintas. Igualmente, su peso molecular supera los y su densidad en CsCl varía de 1,20 a 1,29 g/ml. Son bastante sensibles a la desecación. A ph bajo, el virus se inactiva con solventes lipídicos y detergentes. Con respeto a su replicación, la Adsorción y penetración de la partícula vírica contacta con receptores de la célula huésped. Las glicoproteínas de la cápsida contribuyen a que el virus penetre en el citoplasma por dos mecanismos; por un lado, por la fusión de la envoltura con la membrana citoplasmática de la célula huésped, o bien por la formación de vacuolas fagocíticas en cuyo interior se encuentra el virión. Posteriormente, prosigue la decapsidación o denudación, donde se rompe la cápsida

37 37 del virus y se libera un complejo de ADN vírico y proteínas que van a emigrar hacia el núcleo, donde se va a producir la transcripción. Luego sigue la síntesis, es decir, la polimerasa II celular, cuyo molde es ADN, transcribe tres clases de ARNm (α, β y γ) de forma coordinada. Primeramente, se procesa el ARN α (temprano e inmediato, aproximadamente un tercio del genoma) que da lugar a proteínas α (reguladoras), tras lo cual, se inicia la transcripción de ARN β (temprano, aproximadamente el 40% del genoma), que se traduce en proteínas β (encargadas de realizar la replicación de ADN vírico), y se suprime la transcripción de ARN α. Por la acción de las proteínas α y β se inicia la replicación de ADN vírico con la participación de proteínas del hospedador. Posteriormente se inicia la transcripción de ARN γ por lo que resultan proteínas γ que son estructurales, que dan lugar a las cápsidas inmaduras. Todas las proteínas víricas dan lugar a la aparición de cuerpos de inclusión intranucleares. Por su parte mecanismo de ensamble y la maduración del virus, se debe a que las cápsidas inmaduras del núcleo adquieren ADN y más proteínas que se unen a la superficie de la cápsida. Adquiere la envoltura de la membrana nuclear, no de la citoplasmática, como es habitual. Desde este momento, el virión es ya maduro e infectante. Por su parte la liberación o salida del virus, se produce por exocitosis al citoplasma y de ahí pueden atravesar directamente la membrana citoplasmática sin causar daños aparentes. Por lo que una célula infectada puede trabajar para estos virus durante mucho tiempo. No obstante, algunos virus miembros de esta familia pueden liberarse por citolisis.