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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 31/71 A61P 31/22 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 knúmero de solicitud europea: k Fecha de presentación: k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Uso de heparina o heparan-sulfato en combinación con quitosán para la prevención o el tratamiento de infecciones causadas por virus herpes. kprioridad: SE k Titular/es: Medicarb AB Annedalsvägen Bromma, SE k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Larm, Olle; Back, Marcus y Bergström, Tomas k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Elzaburu Márquez, Alberto ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 1 ES T3 2 DESCRIPCION Uso de heparina o heparan-sulfato en combinación con quitosán para la prevención o el tratamiento de infecciones causadas por virus herpes. Area técnica El presente invento se refiere a la utilización de determinados glucosaminoglucanos polianiónicos sulfatados para fabricar medicamentos que pueden emplearse para la prevención o el tratamiento de infecciones causadas por el virus herpes. Antecedentes del invento Herpes es el nombre común para una familia de virus que provocan enfermedades de tipo infeccioso en los mamíferos, incluido el hombre. Al contrario que la mayoría de las infecciones los virus herpes normalmente producen lo que se conoce con el nombre de infecciones latentes, de forma que permanecen en estado latente en las raíces de los nervios de sistema nervioso central para posteriormente causar la enfermedad una vez que son activados por algún factor desconocido. Hoy en día no se dispone de ningún método para el tratamiento de este tipo de infecciones. Los factores que causan la activación de la enfermedad son en su mayoría desconocidos pero se piensa que el estrés, la fiebre, la menstruación, la luz solar, etc., pueden ser la causa de la activación del virus. Desde un punto de vista práctico, los virus herpes generalmente se manifiestan en forma de erupciones cutáneas. Se conocen dos grandes tipos de virus simples, el HSV-1 que causa el herpes bucal y el HSV-2 que causa el herpes genital. Los virus provocan fenómenos recurrentes de dolor cutáneo y lesión de mucosas en cerca del % de la población. La principal preocupación para la mayoría de los pacientes son las consecuencias estéticas y la sensación de dolor provocados por la enfermedad, por lo que el alivio de dicho dolor y un proceso de curación más rápido representaríanungranavance de la técnica. Es importante destacar que en la mayoría de los pacientes el proceso de curación ocurre de forma espontánea y por tanto, el esfuerzo debe ir enfocado a acelerar ese proceso de curación y a suministrar un efecto analgésico. Sumario del invento El objetivo del presente invento es garantizar nuevas técnicas para la prevención o el tratamiento de enfermedades infecciosas causadas por el virus herpes en los mamíferos, incluido el hombre Ȯtro objetivo del invento es garantizar una nueva combinación de ingredientes activos que se emplee en la fabricación de un medicamento para la citada prevención o tratamiento. Otro objetivo del invento es aportar un proceso para el tratamiento de las infecciones causadasporelvirusherpesenlosmamíferos, incluido el hombre. Para estos y otros objetivos que quedarán claros a partir de la siguiente descripción, el invento garantiza nuevas técnicas que se basan en el empleo de heparina o heparan-sulfato en combinación con quitosán para la fabricación de un medicamento que permite prevenir o tratar las enfermedades infecciosas causadas por el virus herpes en los mamíferos, incluido el hombre En tal caso, es preferible que la fabricación del citado medicamento se base en una combinación de heparina y quitosán. Tanto la heparina como el heparan-sulfato se encuentran disponibles en el mercado y además existen varios fabricantes. Asimismo, pueden emplearse las formas parcialmente hidrolizadas de estos componentes siempre que su actividad biológica no cambie considerablemente. El medicamento que se emplea para prevenir o combatir las enfermedades infecciosas que causan los virus herpes, se encuentra disponible en diversas formas físicas, por ejemplo en forma de polvo, pomada, gel, suspensión o disolución. La forma a emplear se adapta, por supuesto, a la naturaleza del trastorno objeto de tratamiento. Uno de los principales componentes del presente medicamento es el quitosán, que es un polisacárido lineal 1,4 sustituido formado por unidades de β-d-glucosamina. El quitosán se prepara por N-desacetilación de la quitina, un polímero que constituye entre otros el exoesqueleto de insectos y del cangrejo. A escala comercial, la quitina se recupera a partir del exoesqueleto del cangrejo y el camarón, que constituyen productos residuales de la industria pesquera. Mediante el control del tratamiento alcalino resulta posible la preparación de quitosán con distinto grado de N- acetilación. Cuando se trata la quitina con una base, del tipo hidróxido sódico, tiene lugar la N- desacetilación, en la que los grupos acetamido se convierten en grupos amino, lo que da lugar a la formación del quitosán. Las propiedades físicas que afectan a la utilidad del quitosán dependen del grado de N-acetilación, peso molecular y homogeneidad. El quitosán es biodegradable, tanto por la quitinasa del sistema digestivo como por la lisozima de los fluidos corporales. Con respecto al presente invento, es preferible que el quitosán tenga un grado de N-acetilación como máximo alrededor del 90 % y preferiblemente como máximo alrededor del 0 %. Resulta especialmente preferible que el grado de N- acetilación se encuentre por debajo de aproximadamente 2 %. Los dos componentes del medicamento al que se refiere el presente invento, heparina o heparansulfato y quitosán, se emplean de forma adecuada en combinación con vehículos o excipientes convencionales de carácter medicinal aceptable. Generalmente, es preferible que la matriz sea de tipo acuoso,yqueelvehículo o excipiente contenga un polisacárido que aumente la viscosidad y que pueda escogerse entre hemicelulosas, por ejemplo arabino-xilanos y glucomananos, gomas vegetales, por ejemplo goma guar, goma de algarrobo, celulosas y derivados similares, por ejemplo metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, almidón y sus derivados, por ejemplo el hidroxietilalmidón o almidón ramificado, polisacáridos microbianos, por ejemplo goma xantán, goma curdlan, pululano y dextrano. De igual forma pueden emplearse como componentes del vehículo o excipiente, polisacáridos de algas, por ejemplo agar, carrageninas o ácido algínico. Un polisacárido preferido a emplear en el vehículo o excipiente es un derivado de la celu-

3 3 ES T3 4 losa, por ejemplo metilcelulosa. En el medicamento objeto de la invención, es preferible que la cantidad que se combina de polisacárido capaz de aumentar la viscosidad y de dicho quitosán sea inferior al % en peso con respecto al peso total del medicamento. Es preferible que el medicamento presente la forma física de gel, y que en dicho gel dicha cantidad combinada de polisacárido y quitosán se encuentre dentro del intervalo 0,- % en peso del medicamento, tomando éste como un todo. Es preferible que la heparina o heparan-sulfato se encuentren presentes en el medicamento en cantidades alrededor de 0,1-2 % en peso. El presente invento también garantiza un proceso para prevenir o tratar enfermedades infecciosas causadas por los virus herpes en mamíferos, incluido el hombre. Este proceso consiste en aplicar una cantidad de medicamento activo que contiene una combinación de heparina o heparansulfato y quitosán sobre la zona que necesite el tratamiento. Ejemplos de realizaciones En la siguiente descripción se ilustrará el presente invento junto con ejemplos no restrictivos. En los citados ejemplos, mientras no se diga lo contrario, las cantidades y porcentajes están referidos al peso. La ilustración se lleva a cabo en combinación con los dibujos adjuntos, cuya única figura: Se ha representado el efecto de las placas de HSV-1 frente a una serie de diluciones de la muestra para composiciones distintas, ilustrando el medicamento completo y composiciones que excluyen uno o más componentes. Ejemplo 1 Preparación del medicamento completo Se disuelve la sal de hidrocloruro de quitosán con un grado de N-desacetilación del 16 % (Pronova Biopolymers, Drammen, Noruega) en agua destilada y filtrada estérilmente para formar una disolución de quitosán al 3 %. Se prepara una disolución de heparina natural al 0,6 % que contenga metilcelulosa en concentración de 4 g/l. Ambas disoluciones se tratan en autoclave y se mezclan bajo condiciones estériles en partes iguales. Se añade ácido sórbico como conservante, en cantidad tal que permita prevenir la aparición de hongos. Ejemplo 2 manera similar pero excluyendo el ácido sórbico. Ejemplo 3 manera similar pero excluyendo el ácido sórbico y la heparina. Ejemplo 4 manera similar pero esta vez excluyendo el ácido sórbico y el quitosán. Ejemplo manera similar pero esta vez excluyendo, además del ácido sórbico y la heparina, también el quitosán Ejemplo 6 Procedimiento experimental El diluyente empleado en los experimentos es NaCl isotónico (0,136 M) y medio esencial mínimo de Eagle (EMEM). El virus empleado es el HSV-1, cepa KOS321. Las muestras se diluyen en placas de 24 pocillos. Se mezcla 1 ml de muestra con 1 ml de NaCl isotónicoy acontinuación se preparan series de diluciones a la mitad en NaCl isotónico hasta una dilución 1:32. El último pocillo de cada fila contiene únicamente NaCl isotónico. Se preparan las mismas disoluciones en EMEM en lugar de NaCl isotónico. Procedimiento detallado 1. Se añaden 0 unidades formadoras de placa (ufp) de HSV-1 en 0 µl denaclisotónico a la serie de diluciones de la muestra. 2. Se incuba durante minutos a temperatura ambiente. 3. Se lavan las células (células de riñón de mono Green (GMK AH1), monocapas confluentes, 3 días de edad, placas de 6 pocillos) 1 x con 2 ml bien de NaCl isotónico, bien de EMEM. 4. Se añade a las células 1 ml de la mezcla muestra-virus.. Se incuba durante 1 h a temperatura ambiente. 6. Se lavan las células 2 x con 2 ml de EMEM. 7. Se añaden 3 ml de disolución estándar de metilcelulosa. 8. Se incuban durante 3 días en un incubador con CO 2 a37 C. 9. Se tiñen las células con una disolución de violeta cristal y se recuentan las placas virales. Resultados La figura adjunta muestra los resultados en forma de diagrama, representando las placas de HSV-1 frente a la dilución de muestra (neg. Log2). Puede verse, a partir de la figura, que diluciones 1:2 y 1:4 dieron como resultado la inhibición en todas las preparaciones, debido probablemente a la presencia de metilcelulosa. En las diluciones 1:16 y 1:32 sólo se mostraron activas aquellas preparaciones que contenían heparina. Hasta una dilución de 1:32, se mantuvo el efecto inhibidor de las preparaciones que contenían heparina yquitosán. Los ensayos de toxicidad mostraron que ninguna composición era tóxica con relación a las células GMK. Ejemplo 7 Ensayos clínicos Se llevo a cabo el siguiente ensayo clínico empleando una composición en forma de gel de 3

4 ES T3 6 acuerdo con el Ejemplo 1 anterior. Todos los ensayos iban encaminados hacia la prevención o el tratamiento de la infección orolabial provocada por el virus HSV-1. Caso 1 Se trató repetidas veces a un joven de 1 años, tanto mediante un tratamiento profiláctico de los primeros síntomas como mediante el tratamiento de la infección ya establecida. La aplicación local de la composición del Ejemplo 1 hizo desaparecer los primeros síntomas en 24 horas y dio lugar a la curación en 72 horas, respectivamente. Caso 2 Se trataron profilácticamente los primeros síntomas de un varón de 48 años de edad, siendo el resultado el mismo que en el Caso 1 anterior. Caso 3 El medicamento fue utilizado con éxito por una niña de 9 años de edad, tanto en la faceta de hacer frente a la enfermedad ya establecida como en la del tratamiento profiláctico. Caso 4 Se trató con la composición del Ejemplo 1 anterior a un niño de 3 años de edad que tenía una infección totalmente desarrollada en el labio. Esto dio como resultado que la infección se detuvo en 2 días y se curó en4días. Caso Un varón de 2 años también hizo uso con éxito del gel del Ejemplo 1, tanto para el trata- 1 2 miento de la enfermedad ya establecida como para el tratamiento profiláctico de los primeros síntomas. Todos los resultados anteriores, que se refieren tanto a la inhibición del crecimiento de las células virales como a los ensayos clínicos, verifican el asombroso efecto que las presentes composiciones tienen sobre la enfermedad infecciosa causada por los virus herpes. El hecho de que, tales infecciones pudiesen ser tratadas con éxito empleando una combinación de heparina y quitosán resultó inesperado y sorprendente. Aunque el invento no se limite a ciertas teorías o mecanismos de acción particulares, puede ser que la matriz empleada en la composición garantice un lento aporte de la heparina en forma activa. Puede considerarse que la matriz, incluido el quitosán, fija la heparina mediante enlaces iónicos para que ésta no quede inactivada por la acción de las enzimas presentes en el entorno de tratamiento, como la enzima heparinasa. Esto no era de esperar a la vista de la sensibilidad que presenta la heparina frente a la degradación e inactivación enzimáticas. Debe notarse que el invento tal y como se ejemplifica anteriormente no se limita a las realizaciones expuestas, ya que las modificaciones son obvias para el experto en la técnica. Por tanto, el alcance del invento queda únicamente restringido por las reivindicaciones adjuntas

5 7 ES T3 8 REIVINDICACIONES 1. El uso de heparina o heparan-sulfato en combinación con quitosán para la preparación de un medicamento para prevenir o tratar las infecciones causadas por el virus herpes en mamíferos, incluido el hombre. 2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la preparación se basa en la combinación de heparina y quitosán. 3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que el quitosánpresenta un grado máximo de N-acetilación de alrededor del 90 % y preferiblemente como máximo alrededor del 0 %. 4. El uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el quitosán presenta un grado de N- acetilación por debajo de aproximadamente 2 %.. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho medicamento contiene además un vehículo o excipiente aceptable desde un punto de vista farmacéutico. 6. El uso de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el medicamento se encuentra en forma de polvo, pomada, pasta, gel, suspensión, disolución o película. 7. El uso de acuerdo con la reivindicación ó 6, en el que dicho vehículo o excipiente consta de 1 2 un polisacárido que aumenta la viscosidad. 8. El uso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que dicho polisacárido que aumenta la viscosidad está formado por un derivado de celulosa. 9. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho medicamento consta de una matriz acuosa.. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de la 6 a la 8, en el que dicho polisacárido que aumenta la viscosidad, junto con dicho quitosán, están presentes en dicho medicamento en una cantidad inferior a aproximadamente %. 11. El uso de acuerdo con la reivindicación, en el que dicho medicamento se encuentra en forma de gel. 12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que dicho polisacáridoqueaumentalaviscosidad, junto con dicho quitosán, están presentes en dicho medicamento en una cantidad de aproximadamente 0, - % en peso. 13. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dichos heparina o heparan-sulfato se encuentran presentes en el medicamento en una cantidad de aproximadamente 0,1-2 % en peso NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluída en la mencionada reserva.

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