Perfil mutacional de los carcinomas pulmonares no microcíticos diagnosticados en el Hospital Carlos Haya de Málaga

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1 Perfil mutacional de los carcinomas pulmonares no microcíticos diagnosticados en el Hospital Carlos Haya de Málaga D. Bautista, E. Prieto, M. Martínez, R. Fernández, A.I. de Hita, C. Gastelu

2 Mutaciones de EGFR en el cáncer de pulmón

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4 Mutaciones de EGFR en Cáncer de Pulmón 5-20% de los caucasianos con NSCLC, 20-40% de asiáticos 5-20% de los caucasicos con NSCLC, 20-40% de asiáticos Determinación por Secuenciación directa Determinación por PCR Secuenciación a tiempo directa real (DxS TheraScreen) PCR a tiempo real (TheraScreen Qiagen, Cobas 4800 Roche) 90% en el ATPbinding cleft del dominio tirosina quinasa (activación constitutiva) 90% en el ATPbinding cleft del dominio tirosina quinasa (activación constitutiva)

5 La mutacion de EGFR mutation produce un cambio conformacional que aumenta la activacion Wild Type EGFR EGFR mutante Ligand Extracellular domain Trans-membrane domain Tyrosine kinase domain ATP Tyrosine phosphorylation Ras-Raf-MAPK Proliferation Pi3K-AKT Survival EGFR internalisation Degradation/recycling EGFR signals for longer at the cell membrane Arteaga 2006, Gadzar et al 2004, Hendricks et al 2006, Sordella et al 2004

6 La distribucion de las mutaciones activadoras es similar en series asiáticas y occidentales Regulatory domain C-lobe ATP binding cleft N-lobe Transmembrane region Extracellular domain TK domain A-loop Chelix P-loop Distribution of mutation types (% of mutations) Literature review Asian studies Non-Asian studies Most prevalent mutation types Literature (n=1523) Literature (n=583) Exon 19 deletion 51% 58% Exon 21 point mutation L858R 42% 32% Exon 20 2% 6% Exon 18 G719A/C 3% 2% Exon 21 L861Q 1% 1% Some patients had more than one mutation type

7 Mutaciones de EGFR en Cáncer de Pulmón 40% de los NSCLC tienen alterada la vía EGFR/Kras/Braf/PI3K Mutaciones en EGFR y Kras Mutaciones activadoras o sobreexpresión Mutaciones no solapadas o excluyentes Driving mutations

8 Agentes Anti-EGFR en Cáncer de Pulmón Anticuerpos Monoclonales Cetuximab Panitumumab Inhibidores de la Dimerización Inhibidores de la Tirosin-Quinasa Erlotinib Gefitinib

9 Tratamiento del Carcinoma Pulmonar de Células No-Pequeñas Small Molecule Tyrosine Kinase Inhibitors Target the tyrosine binding domain. Block RTK phophorylation and activation. Erlotinib (Tarceva Roche) Gefitinib (Iressa Astra Zeneca)

10 Agentes Anti-EGFR en Cáncer de Pulmón Sólo algunos pacientes responden a la terapia anti-egfr 10-20% de pacientes caucasicos con NSCLC metastásico 40-50% de los pacientes asiáticos Importancia de selección adecuada de los pacientes Predictores clínicos de respuesta Paciente asiático, mujer, no fumador, adenocarcinoma Aparición de efectos tóxicos cutáneos

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12 Necesidad de determinación de mutaciones de EGFR Respuesta a la terapia Anti-EGFR 80% en mutados <10% en WT Presencia de mutación: Mejor supervivencia en tratados con Inhibidores de EGFR Mejor supervivencia general (?)

13 Tratamiento del Carcinoma Pulmonar de Células No-Pequeñas Literatura Paez et al., Science 2004 Lynch et al.,nejm 2004 Pao et al.,pnas 2004 Huang et al., CCR 2004 Tokumo et al., CCR 2005 Mitsudomi et al., JCO 2005 Han et al., JCO 2005 Kim et al., CCR 2005 Cotes-Funes et al., Ann Oncol 2005 Cappuzzo et al, JNCI 2005 Chou et al., CCR 2005 Taron et al., CCR % EGFR Mut 12% EGFR WT % de respuesta tumoral Takano et al., JCO 2005 Necesidad de selección de los pacientes a tratar

14

15 Causas de resistencia al tratamiento Anti-EGFR EGFR WT Mutación de Kras Mutación de EGFR T790M (50% de resistencias adquiridas) Amplificación de c-met 10-20% de resistencia adquirida Activación de PI3K a través de vías alternativas

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18 MUTACIONES DETECTADAS 1. T790M 2. Del L858R 4. L861Q 5. G719X 6. S768I 7. Ins 20

19 Detección de mutaciones por PCR a tiempo real Therascreen Qiagen -Detecta 29 mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR -A partir de 800 ng de ADN - Sensibilidad 1 %

20 -Necesita interpretación de los resultados

21 Detección de mutaciones por PCR a tiempo real cobas Roche -Detecta 41 mutaciones en los exones 18, 19, 20 y 21 de EGFR -A partir de un corte de 5 μm con > 10% de células tumorales (180 ng) -Sensibilidad 5% -Análisis automático e informe

22

23 Número de pacientes analizados n = Nº de muestras analizadas

24 Tipo Histológico y Mutaciones detectadas 35 (8.14%) % Tipo Histológico % 6% 0% 0 AdenocarcinomaC. EscamocelularC. de céls grandes C. Neuroendocrino 11.18% de Adenocarcinomas contienen mutación

25 Tipo Histológico y Mutaciones detectadas Tipo Histológico Pacientes Analizados Mutaciones Detectadas Adenocarcinoma % C. Escamocelular % C. Céls. Grandes % C. Neuroendocrinos 5 0 0% Otros (Adenoescamoso, Pleomorfico, NOS) 6 0 0% Total % %

26 Porcentaje de mutación en función del sexo 30,00% 25,00% 25,23% Sexo 20,00% 15,00% 10,00% 5,00% 3,81% 0,00% Mujer Hombre

27 Mutaciones detectadas 35 (8.14%)

28 Espectro de Mutaciones detectadas Alteración Mutaciones Detectadas Delección % L858R 8 23% Inserción % L861Q 3 9% G719X 0 0% S768I 0 0% T790M 0 0% %

29 Mutaciones detectadas en nuestro centro n = 35 (8.14%)

30 Estudio comparativo de sistemas Therascreen Qiagen cobas EGFR Mutation Test Roche -Análisis en paralelo de: -50 casos retrospectivos, previamente estudiados con Therascreen -52 casos prospectivos por orden de recepción -A partir de ADN extraido mediante: -Gentra Puregene Tissue Kit Qiagen Therascreen -cobas DNA sample preparation kit - cobas -102 resultados, 7 mutaciones y 95 WT (cobas 2 casos no válidos)

31 Control de calidad externo

32

33 2010: K-ras y EGFR 2011: K-ras, EGFR, BRAF, y HPV 2012: K-ras, EGFR, BRAF 2013: K-ras, EGFR, BRAF

34

35 Elisa Prieto Sánchez Anabel de Hita Santabaya Carmen Gastelu Cantero Macarena Martínez Moreno Ricardo Fernández Rubia

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