DIAGNÓSTICO Y MANEJO DE MUESTRAS

Transcripción

1 DIAGNÓSTICO Y MANEJO DE MUESTRAS Dra. Valeria P. Martinez Servicio Biología Molecular Departamento Virología INEI - ANLIS Dr. C. G. Malbrán 1

2 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA DEL VIRUS Familia Filoviridae: Patógenos de primates Reservorio murciélagos frugívoros Partícula viral filamentosa, con envoltura. Genoma a RNA (ssrna): 7 Genes. Género Ebolavirus Zaire ebolavirus (ZEBOV) Sudán ebolavirus Reston ebolavirus Bundibugyo ebolavirus Tai Forest ebolavirus 2

3 Técnicas de diagnóstico de infección reciente Técnicas Diagnósticas: Detección de Antígenos Detección de RNA viral por RT-PCR y secuenciación Detección de IgM especifica Inmunohistoquimica en tejidos Aislamiento viral Towner J. et al.,

4 Diseño del Diagnóstico «in house» Genoma viral 3 N sg/g 3 0 VP24 L 5 2º - Secuenciación 600 nts 1000 nts 400 nts Gire et al., 2014 Leroy E. et al., 2002 Sanchez et al., º - RT-PCR 3º - Confirmación por % de identidad genética 4

5 PROCESO DIAGNOSTICO RNA RT-PCR VP24-NP-L RT-rtPCR Con Amplificación Secuenciación Sin Amplificación Nested-PCR VP24 Negativo Positivo Zaire ebolavirus Confirmación por identidad genética Con Amplificación < 5 días si Nueva muestra Zaire ebolavirus no Caso Descartado 5

6 ALGORITMO DE NOTIFICACION PARA EL DIAGNÓSTICO 6

7 FICHA DE NOTIFICACIÓN 7

8 MUESTRAS REQUERIDAS PARA EL DIAGNÓSTICO Muestras de pacientes con mas de 3 días desde el inicio de la fiebre. 2 tubos con sangre con EDTA o citrato (no heparina): 4 ml c/u. Ej: tubos de cierre hermético. Tubos Vacutainer DEBEN colocarse dentro de un tubo tapa a rosca de 50ml (ej) Contenedor primario Contenedor primario 2 tubos de 15 ml con solución de EDTA agregada previamente 2 tubos tapa lila (o celeste) 8

9 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS Diagnóstico virus Ebola en INEI Envío al CDC Inactivación y extracción de RNA en BSL-3 Gestión envío y empaque desde BSL-3 9

10 PROCESAMIENTO DE MUESTRAS Recepción UOCCB BSL-3 Inactivación Gestión Envío CDC Extracción RNA Envío al CDC RT-PCR Secuenciación SIVILA MINSAL Resultado CDC 10

11 TRIPLE ENVASE PARA ENVÍOS TRIPLE ENVASE PARA ENVÍOS 11

12 PREPARACIÓN DEL TRIPLE ENVASE Acondicionar con anticipación el triple envase: Colocar dentro del contenedor secundario abundante material absorbente Colocar material amortiguador y refrigerantes 12

13 TOMA DE LA MUESTRA RECOMENDACIONES PARA LA TOMA SEGURA Y MANIPULACIÓN APROPIADA DE MUESTRAS POTENCIALMENTE INFECCIOSAS CON AGENTES ALTAMENTE PATÓGENOS (Adaptado del documento How to safely collect blood samples from persons suspected to be infected with highly infectious blood-borne pathogens, OMS, 2014) 13

14 CONTENEDOR SECUNDARIO EMBALAJE DE LA MUESTRA FICHA DE NOTIFICACION ETIQUETAS CATEGORIA A UN 2814 Sustancia Infecciosa, afecta a humanos Remitente: Nombre Responsable envío Institución Dirección / Teléfono / Fecha CATEGORIA A UN 2814 Sustancia Infecciosa, afecta a humanos Remitente: Nombre Responsable envío Institución Dirección / Teléfono At. Dra. Valeria Martínez / Dra. V. Molina INEI - ANLIS Dr. C. G. Malbrán Av. Vélez Sarsfield 563 CP: 1281; CABA CONTENEDOR TERCIARIO At. Dra. Valeria Martínez / Dra. V. Molina INEI - ANLIS Dr. C. G. Malbrán Av. Vélez Sarsfield 563 CP: 1281; CABA ETIQUETAS 14

15 Rotular el embalaje externo: 1. Datos remitente: Nombre Responsable del envío Institución Dirección Teléfono Fecha 2. Datos destinatario: At. Dra. Valeria Martínez/Dra. Viviana Molina INEI - ANLIS Dr. C. G. Malbrán Av. Vélez Sarsfield 563 CP: 1281; CABA 3. CATEGORIA A (UN2814) NOTIFICACIÓN Y ENVÍO AL INEI Comunicar telefónicamente o por mail antes de realizar el envío: Servicio Biología Molecular Dirección INEI: Teléfonos: pmartinez@anlis.gov.ar; hantavirus@anlis.gov.ar Teléfono: vmolina@anlis.gov.ar 15

16 ENVÍO AL INEI DESDE LAS PROVINCIAS 16

17 UNIDAD DE CONTENCIÓN BIOLÓGICA BSL3 ANLIS «Dr. C. Malbrán» 17

18 GRACIAS!! Servicio Biología Molecular Departamento Virología INEI - ANLIS Dr. C. G. Malbrán Laboratorio Nacional de Referencia para Hantavirus Jefa de Servicio Dra. Valeria P. Martinez pmartinez@anlis.gov.ar hantavirus@anlis.gov.ar Tel/Fax: Lic. Carla Bellomo Lic. Ayelén Iglesias Ximena Doxandabarat Alicia Girard 18