REF 5451 MANUAL DE INSTRUCCIONES
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- Juan Castillo Juárez
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1 HEMOTEST REF 5451 MANUAL DE INSTRUCCIONES All Diag 1 Version 13
2 Significado de los pictogramas Pictogramas Significado 4 C 30 C Atención, ver instrucciones de uso Solo para diagnóstico in vitro Conservar entre 4 y 30 C Pruebas por kit Caducidad Número de lote Fabricante No reutilizable Código Directiva 98/79/CE Version 13- Revisión Esp. 30/04/2014 FABRICACIÓN - ALLDIAG 10, rue Ettoré Bugatti - BP STRASBOURG Cedex 2 - France Site : info@alldiag.com All Diag 2 Version 13
3 HEMOTEST Ensayo inmunocromatográfico rápido, solo para uso de diagnóstico in vitro, para el cribado de pólipos y cánceres colo-rectales mediante la puesta en evidencia de hemoglobina humana en las heces. 1. Objetivo de la prueba Hemotest es un ensayo rápido y sencillo para la detección de hemoglobina humana en heces. La puesta en evidencia de sangre oculta en las heces se inscribe en el proceso de cribado masivo de pólipos y cánceres colorectales, que preconiza la inclusión de las personas mayores de 50 años. 2. Presencia de hemoglobina humana en las heces El método Guaiaco, desarrollado por Van Deen en 1864 ha permitido la detección de sangre en distintos medios. Boas inició el uso de este método en 1908 para la puesta en evidencia de sangre oculta en heces. Sin embargo, para obtener resultados precisos, las pruebas basadas en la prueba del guaiaco, requieren que se eviten ciertos alimentos, medicamentos y vitaminas antes y durante el período de la toma de muestras. Varios autores también han encontrado que algunos pacientes con cáncer o adenoma colorrectal dan resultados negativos con estas pruebas, debido a que no poseen la sensibilidad suficiente. Desde entonces, se han introducido numerosas mejoras en los ensayos que utilizan la actividad peroxidasa. Los desarrollos respectivos de métodos tales como las pruebas de aglutinación al látex (Adams et all, 1974), inmunodifusión radial (Songster et all, 1980) y la hemaglutinación reversa (Scito et all, 1984), han permitido la puesta a punto de métodos de detección mas sensibles. El kit Hemotest se ha desarrollado para detectar cantidades ínfimas de sangre en heces, que no son detectables por el método Guaiaco. Los resultados de los estudios clínicos indican que con el método Guaiaco solo se obtienen resultados positivos en el % de los pacientes con cáncer colorrectal y en el % de pacientes con pólipos. Hemotest es específico de la hemoglobina humana nativa no desnaturalizada: no reacciona ni con hemoglobinas animales, ni con la vitamina C, ni con otras peroxidasas. Por otro lado, no son necesarios ningún régimen ni restricción particular previamente a la realización de la prueba. 3. Principio de la prueba Hemotest es un ensayo inmunocromatográfico sobre membrana, que utiliza un método sándwich de captura. Combina un anticuerpo policlonal conjugado con oro coloidal y anticuerpos monoclonales fijados a la membrana. Durante la migración del líquido a lo largo de la membrana, el anticuerpo policlonal conjugado con oro coloidal se une a la hemoglobina presente en la muestra. El anticuerpo monoclonal específico de la hemoglobina, captura el complejo antígeno-anticuerpo en la zona reactiva produciendo una banda de color púrpura: el ensayo es positivo. La aparición de una banda de color púrpura en la zona de control de la prueba, demuestra que ésta ha funcionado correctamente. 4. Componentes del kit El kit Hemotest contiene los materiales necesarios para la realización de 20 pruebas.. 20 dispositivos, envasados en bolsas individuales con desecante.. 20 tubos de recogida de muestras con 2 ml de tampón de dilución.. Manual de instrucciones 5. Material no provisto. Cronómetro avisador. Controles: positivo y negativo 6. Información acerca de la prueba 6.1 Precauciones. Usar el kit respetando las condiciones de diagnóstico in vitro, antes de la fecha de caducidad.. No comer, beber o fumar durante la realización de la prueba.. Usar guantes de laboratorio desechables mientras se realiza la prueba. Considerar las muestras clínicas como potencialmente infecciosas y manipular de acuerdo con las habituales recomendaciones y buenas prácticas clínicas.. Para la obtención de unos resultados óptimos, seguir cuidadosamente el procedimiento del ensayo e instrucciones de conservación. All Diag 3 Version 13
4 . Para prevenir la formación de condensación, no abrir el sobre con el dispositivo hasta haber alcanzado la temperatura ambiente.. No usar dispositivos o tampones ya utilizados. Proceder a su eliminación siguiendo los procedimientos reservados a materiales potencialmente peligrosos.. Limpiar las salpicaduras utilizando un desinfectante adecuado. 6.2 Límites de la prueba. Para la fiabilidad de los resultados, respetar las precauciones de uso y seguir el procedimiento de uso. Referirse al apartado de interpretación de resultados.. Como en cualquier prueba diagnóstica, confrontar los resultados obtenidos con otras pruebas clínicas: fibroscopia, endoscopia o colonoscopia.. Atención a los resultados falsamente negativos, que pueden aparecer cuando la sangre no está uniformemente distribuida o cuando los sangrados debidos a las patologías intestinales son intermitentes o inexistentes.. Tener en cuenta que la presencia de sangre en las heces en caso de hemorroides, estreñimiento, hematuria, durante el período menstrual o por otras patologías (enfermedad de Crohn, rectocolitis hemorrágica, diarreas infecciosas o parasitarias), pueden dar lugar a resultados falsamente positivos.. Tener en cuenta que el kit Hemotest, no detecta concentraciones muy débiles de hemoglobina humana (inferiores a 0,2 µg/ml de tampón o a 20 µg/g de heces). 6.3 Conservación y estabilidad del kit. No utilizar después de la fecha de caducidad del kit.. Conservar el envase en un entorno seco a una temperatura entre 4 y 30ºC. No congelar. 6.4 Conservación de la muestra. Las heces frescas se pueden conservar durante 24 horas a temperatura ambiente o durante 3 días entre 4 y 8ºC. De esta manera, la hemoglobina contenida en las heces, permanece estable.. El tampón de dilución en cual se han recogido las muestras de heces se puede conservar durante 14 días a temperatura ambiente o durante 6 meses entre 4 y 8ºC. 6.5 Control de calidad del ensayo Alldiag realiza un control de calidad por cada lote de kits. Esto permite verificar el volumen de muestra necesario y suficiente, y supervisar todo el procedimiento de realización. Se recomienda encarecidamente la utilización de controles positivos y negativos para verificar las prestaciones de la prueba, sobre cada nuevo lote o envío. En el caso de utilización de controles liofilizados, es necesario reconstituir dichos controles de forma previa un día antes de su uso. 7. Procedimiento del ensayo. En caso de periodo menstrual, retrasar la recogida de la muestra durante 3 días. Abstenerse de ingerir alcohol, aspirinas u otros medicamentos irritantes gástricos, que podrían provocar sangrado, al menos durante las 48 horas previas a la toma de muestra.. Llevar el kit a temperatura ambiente al menos 30 minutos antes de su utilización. Colocar el dispositivo de ensayo en una superficie plana. Una vez abierta la bolsita que contiene el dispositivo, realizar la prueba antes del transcurso de una hora.. Sacudir el tubo con el tampón para que descienda de las paredes al fondo.. Recoger una pequeña muestra de heces frescas en un contenedor limpio. En caso de sangrado o heces negras, recoger una muy pequeña cantidad de muestra (del tamaño de una cabeza de alfiler). 1) Desenroscar el tapón azul del tubo hasta el final para retirar el bastón aplicador. All Diag 4 Version 13
5 2) Introducir el bastoncillo en la muestra de heces en diferentes lugares. Si fuese necesario, retirar el exceso de heces en un papel absorbente. 3) Volver a insertar el aplicador con el tapón azul en el tubo de recogida y enroscarlo firmemente. 4) Agitar sacudiendo enérgicamente el tubo de recogida para homogeneizar la solución. 5) Desenroscar el tapón rojo situado en la parte inferior del tubo de recogida. 6) Manteniendo el tubo en posición vertical, apretar la zona inferior para dispensar 3 gotas en el pocillo S del dispositivo. 7) Leer los resultados a los 5 minutos. No interpretar resultados después de 10 minutos. 8. Resultados e interpretación POSITIVO Banda de control C púrpura y Banda de test T púrpura (incluso con intensidad débil) La prueba es positiva. Presencia de hemoglobina humana en la muestra NEGATIVO Banda de control C púrpura y Ausencia de banda test T La prueba es negativa. Ausencia de hemoglobina humana en la muestra NO VÁLIDO Ausencia de banda control C (incluso con banda test T púrpura) La prueba es no válida: reiniciar el procedimiento con un nuevo dispositivo. Procedimiento erróneo o elevada viscosidad de la muestra All Diag 5 Version 13
6 9 Resultados clínicos 9.1 Sensibilidad La sensibilidad analítica de Hemotest es de 0,2 µg/ml de tampón o de 20 µg/g de heces. 9.2 Especificidad HEMOTEST es específico de la hemoglobina humana nativa, no desnaturalizada. El ensayo no reacciona con las hemoglobinas de caballo, cerdo, vaca, pollo, conejo, rata, cabra o ratón. Se han probado extractos acuosos de brócoli, coliflor, nabo o rábano rojo, así como la adición de una solución de rábano a hemoglobina humana, no encontrándose interferencias con el ensayo. 9.3 Precisión En estudios de 5 grupos de 20 muestras de heces negativas realizados, en el que a cada grupo se añadieron concentraciones de hemoglobina humana de: 0, 37,50,62 y 2000 ng/ml, los resultados obtenidos por Hemotest, se obtuvo una correlación del 97% con los valores esperados, 9.4 Estudio comparativo Hemotest / Hemotop Pacientes sin seguimiento de dieta previa al muestreo HEMOTEST HEMOTOP Positivo Negativo Total Positivo Negativo Total Evaluación en caso de detección generalizada HEMOTEST se ha evaluado en el caso de una campaña de detección masiva de una población de personas con más de 30 años, en una zona de Beijing (República Popular de China) personas entraron en la campaña de detección, con una adhesión del 74%. La media de edad fue de 50 años. 501 personas fueron positivas con HEMOTEST, el 5.6%, frente al 35.36% que dio la prueba del guaiaco. Las 501 personas positivas con HEMOTEST fueron analizadas con colonoscopia. Se encontraron lesiones positivas en el 77.8% de ellas. La siguiente tabla resume las patologías que se encontraron: Naturaleza de las lesiones encontradas en la colonoscopia Patología Número de casos Pólipo indefinido 127 Colon normal 111 Colitis crónica 107 Hemorroides 51 Adenoma 41 Pólipo inflamatorio 17 Rectocolitis hemorrágica 17 Cáncer colorrectal 14 Colon melanopático 5 Grieta anal 4 Pólipo proliferativo 3 Divertículo de colon 3 Angioma reticulado 1 De los 12 casos de cáncer colorrectal, 4 estaban en estado Dukes A, 7 en estado Dukes B y 1 en estado Dukes C. Se identificó una subpoblación de riesgo con el siguiente criterio: antecedentes familiares de cáncer colorrectal, cáncer colorrectal o adenoma preexistente, colecistectomía de mas de 10 años, rectocolitis hemorrágica severa de mas de 10 años, hemorragia desconocida. Dentro de la población de riesgo, se encontraron 2 cánceres colorrectales (0.28%). All Diag 6 Version 13
7 En la población si riesgo conocida, se identificaron 12 casos de cáncer colorrectal (0.05%). El 1.07% de los resultados positivos por HEMOTEST, correspondieron a cáncer colorrectal. El 91.66% de los casos de cáncer detectados por HEMOTEST fueron en un estadío relativamente temprano. Esto demuestra el interés de HEMOTEST como detector temprano del cáncer de colon, de manera más sensible y específica que el test Guaiaco. 9.6 Valores de referencia Los estudios que usan hematíes marcados con 51 Cr, muestran la existencia de hemorragias fisiológicas en sujetos sanos, que corresponde a un volumen de 0.5 a 2 ml por día. Considerando un volumen de heces medio de 150g por día, una hemorragia fisiológica corresponde hasta 2 mg de hemoglobina por gramo de heces. Un HEMOTEST positivo ofrece un dato esencial que permite una asistencia médica precoz de un cáncer colorrectal, pero no está diseñado para detectar e identificar el origen de la patología por si solo. 10. Bibliografía 1. Boas, I. Uber Okkulte Magenblutungen, Dtsch. Med. Wochenschr, Vol. 27 (1901) : Van Deen, J. Tincture Guaijaci, Und ein Ozontrager, Als reagens auf Sehr Geringe Blutmengen, Namentlich in Medicoforensischen Fallen, Arch. Holland Beitr Natura Heilk, Vol. 3 (1864) : Adams, E.C. and Layman, K.M. Immunochemical Confirmation of Gastrointestinal Bleeding, Ann. Elin. Lab. Sci., Vol. 4 (1974) : Saito, H. et al. An Immunological Occult Blood Test for Mass Screening of Cáncer colorrectal by Reverse-Passive Hemagglutination (RPHA), Japanese Jurnal of Gastroenterology, Vol. 81 (1984) : Simon, J. B. Occult Blood Screening for Colorectal Carcinoma : A Critical Review, Gastroenterology, Vol. 88 (1985) : Heinbrich, H.C. Ultrasensitiver Immunochemistery Okkulblutnachweis im Stuhl, in Fruhmorgen, P. (ed), Pravention und Fruherkennung des Lolorektalen Karzinoms, 1st Edn. (Springer, Berlin, Heidelberg : New York, 1984), pgs Mancini, G., Carbenara A.O., and Heremans J.F. Immunochemical Quantitation of Antigens by Single Radial Diffusion, Immunochemistery, Vol. 2 (1965) : Ribet, A., Frexinos, J., and Escourrou, J. Occult-blood Test and Colorectal Tumors, Lancet, Vol. 1 (1980) : Schwartz, S., Dahl, J., Ellefson, M., and Ahlquist, D. The Hemo Quant Test : A Specific and Quantitative Determination of Heme (Hemoglobin) in Feces and Other Materials, Clin. Chem. Wochenschr, Vol. 29 (1983) : Songster, C.L., Barrows, G.H., and Jarret, D.D. Immunochemical Detection of Fecal Occult Blood. The Fecal Smear Punch-Disk Test : A New Non-Invasive Screening test for Cáncer colorrectal, Cancer, Vol. 45 (1980) : Taranen, M.J., Lienwendahl, K., Partanen, P., and Aldercreutz, H. Immunological Detection of Fecal Occult Blood in Cáncer colorrectal, Br. J. Cancer, Vol. 49 (1984) : Winawer, S.J. Screening for Cáncer colorrectal : An Overview, Cancer, Vol. 45 (1980) : Launoy, G., Herbert, C. Dépistage de masse du cancer colorectal. L état actuel en France, In : Prévention, dépistage et prise en charge des cancers du colon. Texte des experts janvier 1998, 19 pages. 14. Kronborg, O. et al. Randomised Study of Screening for Cáncer colorrectal with Faecal-Occult-Blood-Test, Lancet, Vol. 348 (1996) : Tazi, M.A. et al. La recherche de saignements occultes dans les selles permet-elle de réduire la mortalité par cancer colorectal? Résultats d une étude cas-témoins, Gastronterol. Clin. Biol. Vol. 22 (1998) : A Cameron, A.D. Gastro-intestinal blood loss measured by radioactive chromium. Gut Vol. 1 (1960) : Ebaugh F.G. Jr., Clemens, T., Rodnan, G., et al. Quantitative measurement of gastrointestinal blood loss. The use of radioactive Cr 51 in patients with gastrointestinal hemorrhage. J. Am. Med. Vol. 25 (1968) : Directiva 98/79/CE Version 13- Revisión Esp. 30/04/2014 ALL DIAG S.A. 10, rue Ettoré Bugatti - BP Strasbourg Cedex 2 Tel Fax Info@alldiag.com All Diag 7 Version 13
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