Dossier Técnico. Federica Burgio Technical Manager MSD Animal Health

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1 Dossier Técnico

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3 Dossier Técnico Federica Burgio Technical Manager MSD Animal Health

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5 El empleo de las vacunas en la práctica diaria veterinaria ha ido evolucionando en las últimas décadas desde una aventura experimental hasta llegar a convertirse en una práctica rutinaria muy segura. El uso de vacunas eficaces ha sido responsable del control y de la erradicación de numerosas enfermedades infecciosas y se ha convertido en la mejor herramienta al alcance del veterinario clínico para la reducción de la morbilidad y mortalidad en los animales domésticos. Las vacunas actualmente comercializadas se ajustan a los estándares de calidad, eficacia y seguridad, y gran parte de los recursos de I+D del los laboratorios farmacéuticos que se dedican al desarrollo de especialidades biológicas, se dirige hacia la producción y al estudio de vacunas cada vez más eficaces para la prevención y protección frente a enfermedades infecciosas emergentes y reemergentes. Estas son amenazas que se deben a la aparición de nuevas cepas, a la mutación de cepas ya existentes o a la expansión geográfica que pueden sufrir algunas de ellas. Las vacunas de la gama Nobivac, desde su aparición a finales de los años 80, han sido objeto de numerosos estudios, de laboratorio y de campo, que han demostrado a lo largo de los años, su eficacia y su seguridad en múltiples situaciones de edad, de raza y frente a diversos desafíos. En este dossier científico se van a presentar algunos de estos estudios destinados a evaluar la eficacia y la seguridad de las vacunas de la gama Nobivac. Es un hecho comprobado que la mayoría de los fallos vacunales en la profilaxis de los cachorros se debe a la presencia de inmunidad pasiva. Las vacunas Nobivac permiten vacunar de forma temprana al cachorro, produciendo inmunización activa incluso en presencia de anticuerpos maternos. Es además conocido cómo algunas razas de perros son más sensibles frente a patologías como la Parvovirosis, una profilaxis eficaz frente a este patógeno ha sido demostrada a través del uso de la fracción Parvo en cachorros de Rottweileres. La duración de la inmunidad de algunas de las vacunas de la gama Nobivac se extiende hasta 3 años permitiendo un protocolo de vacunación flexible. Cada mascota tiene un estilo de vida diferente y una historia de vacunación diferente. Por lo tanto animales individuales pueden necesitar antígenos diferentes en momentos diferentes. La gama de vacunas Nobivac permite dar protección optimizada, individual para cada perro. MSD Animal Health tiene un firme compromiso con la seguridad, a través de la línea de vacunas Nobivac que ha estado velando por las mascotas durante los últimos años, controlando y previniendo las enfermedades más dañinas y peligrosas. Este compromiso también se centra en la mejor formación del veterinario clínico, ayudándole a adaptarse a todas las situaciones que un propietario pueda tener. Cada mascota se encuentra en un contexto diferente, con unas necesidades diferentes, y por eso necesita unas vacunas que se adapten en todo momento a estas necesidades. Todavía un elevado número de mascotas en España no acuden a la clínica para la vacunación, y esta tendencia se repite en otros países de Europa y del mundo. La comunidad veterinaria, en la que estamos reunidos tanto los clínicos como las empresas que nos dedicamos a la salud animal, tiene que asumir el deber de transmitir a los propietarios sobre la responsabilidad que se asume cuando se decide tener a una mascota como otro miembro de la familia. El objetivo como siempre será el bienestar de nuestros animales, y esperemos que dossieres como estos puedan ayudar al veterinario clínico a conocer más y mejor las herramientas que tiene a su alcance para poder proporcionar el mejor cuidado a sus pacientes. Federica Burgio Technical Manager MSD Animal Health 5

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7 Índice Cómo los cachorros con inmunidad pasiva responden a tres vacunas frente al parvovirus canino 9 Comparación de vacunas caninas escogidas por su capacidad para inducir una inmunidad protectora frente a la infección por parvovirus canino 11 Desempeño de una vacuna de nueva generación frente al parvovirus canino en cachorros de Rottweiler 15 La protección precoz de los cachorros frente al parvovirus canino: una comparación entre dos vacunas 17 Una comparación de los títulos de anticuerpos frente a los parvovirus en cachorros vacunados en condiciones de campo a las 9-11 o a las semanas de vida 19 Ensayo comparativo de las fracciones del parvovirus canino, el virus del moquillo canino y el adenovirus canino tipo 2 dos vacunas vivas modificadas disponibles comercialmente 21 La vacuna del parvovirus tipo 2 protege contra la exposición virulenta al virus tipo 2c 23 Porcentajes de respuesta frente a 3 vacunas vivas modificadas contra el parvovirus canino (CPV) 27 Estudio comparativo con 5 vacunas distintas frente al moquillo 29 Eficacia de una vacuna viva modificada (MLV) con un título elevado frente al virus del moquillo canino (CDV) en cachorros con anticuerpos de origen materno 31 Nobivac DHPPI aporta protección frente a la infección por el CDV y el CPV al cabo de 7 días después de la vacunación 33 Una vacuna viva modificada inyectable protege a los cachorros jóvenes frente a la exposición con adenovirus canino tipo 1 o adenovirus canino tipo 2 siete días después de una única vacunación 35 Una vacuna viva modificada tiene una duración de la inmunidad frente al CDV, al CAV2 y al CPV de por lo menos 36 meses 39 Duración de la inmunidad (DOI) de tres años proporcionada por una vacuna inactivada frente a la rabia y viva frente al virus del moquillo canino, el parvovirus canino, el adenovirus canino y el virus de la parainfluenza canina 41 Protección contra el estado de portador de L. canicola renal tras la vacunación con Nobivac Lepto 45 Compatibilidad de una vacuna viva modificada (MLV) frente al CPV, al CDV y al CAV-2 y de una vacuna intranasal frente a la tos de las perreras 47 Los estudios y artículos referenciados en este documento están a disposición de cualquier persona que lo solicite. 7

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9 Cómo los cachorros con inmunidad pasiva responden a tres vacunas frente al parvovirus canino Generalmente se acepta que la interferencia de los anticuerpos de origen materno es responsable de un elevado porcentaje de fracasos vacunales al vacunar a los cachorros frente al parvovirus canino (CPV). Parece haber una laguna en la inmunidad en la cual los cachorros son susceptibles a la infección por cepas de campo del CPV, pero los anticuerpos de origen materno interfieren con la inmunización. Se ha reportado que unos títulos de anticuerpos de origen materno de entre 10 y 80 (medidos mediante la prueba de la inhibición de la hemaglutinación [HI]) interfieren con la vacuna frente al CPV en los cachorros. Los títulos en la prueba de la HI que se encuentran por encima de 80 interfieren con la vacunación, pero también se consideran protectores frente a la infección de campo. Se desarrolló un estudio en el que se incluyeron 39 cachorros de raza Beagle de cuatro semanas de vida que se dividieron en cuatro grupos, 3 vacunados con 3 diferentes vacunas comercializadas y un grupo control. Cada una de las vacunas utilizadas era una vacuna contra el moquillo canino, el adenovirus tipo 2, el parvovirus, y la parainfluenza rehidratada con una bacterina contra la Leptospira. Los resultados de seroconversión posteriores (muestras de sangre obtenidas 3 semanas después de cada vacunación) a la primera y a la segunda dosis de vacuna se exponen en las Fig. 1 y 2. Tres semanas después de la tercera dosis vacunal, los animales que pertenecen a los otros grupos no alcanzaron los niveles de seroconversión de los animales del grupo A que habían seroconvertido frente a CPV en un 100% después de la segunda dosis. Porcentaje de cachorros que experimentaron seroconversión Figura 1. Porcentaje de cachorros que experimentaron seroconversión tras la primera vacunación administrada a las seis semanas de vida % 0 % 0 % 0 % Grupo A Grupo B Grupo C Controles Porcentaje de cachorros que experimentaron seroconversión Figura 2. Porcentaje de cachorros que experimentaron seroconversión tras la segunda vacunación administrada a las nueve semanas de vida % 18% 0 % 0 % Grupo A Grupo B Grupo C Controles 9

10 Los resultados de este estudios demostaron que las vacunas frente al CPV varían en cuanto a su capacidad para inducir una respuesta inmunitaria en presencia de anticuerpos pasivos frente al CPV. De las tres vacunas evaluadas, la vacuna que contenía la cepa de CPV 154 indujo, de forma constante, unos títulos más elevados frente al CPV a una edad más temprana. Dos inyecciones de esta vacuna a las seis y las nueve semanas de vida indujeron la seroconversión en todos los cachorros, respaldando así un programa de vacunación en el que la última dosis de la vacuna que contiene la cepa de CPV 154 puede administrarse a las 12 semanas de vida. Debido a las diferencias significativas entre las respuestas frente a las vacunas comerciales contra el CPV, los autores del estudio sugieren que los protocolos de vacunación se adapten de acuerdo con el producto utilizado. Porcentaje de cachorros que experimentaron seroconversión Figura 3. Porcentaje de cachorros que experimentaron seroconversión tras la tercera vacunación, administrada a las 12 semanas de vida % 82% 50% 0 % Grupo A Grupo B Grupo C Controles 10 Referencia: Mocket, A.P. and Stahl, M.S. Comparing how puppies with passive immunity respond to three canine parvovirus vaccines. Veterinary Medicine, 1995; 90:

11 Comparación de vacunas caninas escogidas por su capacidad para inducir una inmunidad protectora frente a la infección por parvovirus canino En un intento por comparar la eficacia de las vacunas caninas más comúnmente usadas, se diseñó un estudio para determinar la eficacia de las vacunas para estimular la producción de anticuerpos en cachorros con cantidades variables de anticuerpos de origen materno frente al CPV y para determinar si la inmunidad engendrada por las vacunas era protectora cuando los cachorros vacunados eran expuestos por vía oral/intranasal a una combinación de CPV-2a y CPV-2b. Los títulos de anticuerpos de origen materno de los cachorros en cada grupo vacunal de este estudio, se encontraban entre 1:20 y 1:320 cuando se administró la primera dosis de la vacuna, siendo sólo los títulos más elevados capaces de proteger frente a la infección con patógenos virulentos. Las diferencias en la inmunidad protectora entre las vacunas indicaron que algunas eran capaces de estimular una protección completa frente a la infección y la enfermedad, mientras que otras vacunas no lograron estimular una respuesta en forma de anticuerpos y los cachorros fueron completamente susceptibles al CPV cachorros de raza Beagle de entre 5 y 6 semanas (la mitad machos y la otra mitad hembras) con un título de anticuerpos de origen materno frente a CPV de entre 1:20 y 1:320 se dividieron en 7 grupos. Cada grupo homogéneo, estaba compuesto por 9 cachorros, 1 control y 8 vacunales. A 8 de los cahorros de cada grupo se les inocularon las vacunas A, B, C, D, E o F o solución salina a la edad de entre 6 y 7 semanas y una vez más a la edad de entre 9 y 10 semanas. El noveno cachorro de cada grupo se dejó como control de contacto no vacunado. Cinco semanas después de la segunda vacunación se retiró el alimento durante 24 horas para potenciar la susceptibilidad al CPV, y luego se expuso a los cachorros a una combinación de 10 6 dosis infectivas de CPV-2a de cultivo tisular al 50% y de 10 6 de dosis infectivas de CPV-2b de cultivo tisular administradas por vía oral/intranasal. Se sabe que estos dos aislados provocan una parvovirosis canina clínica similar a la vista en los brotes de campo graves. La sangre para los análisis serológicos se extrajo de todos los cachorros antes: el mismo día en el que llegaron a las instalaciones, el día de la primera vacunación y, a partir de ahí, semanalmente hasta el final del estudio. Se obtuvieron muestras fecales a diario durante 2 semanas tras la exposición, tras lo cual se valoró diariamente a los cachorros con respecto a los signos clínicos de la enfermedad, entre los que se incluyen deshidratación, letargia, anorexia, vómitos y diarrea. A los cachorros con signos de deshidratación se les administró solución de Ringer lactato. Los cachorros con un aletargamiento grave o con una diarrea hemorrágica o con ambos, fueron eutanasiados. Todos los cachorros que murieron o que fueron eutanasiados fueron necropsiados y su contenido intestinal fue analizado con respecto al CPV-2 mediante el uso de la prueba de la hemaglutinación. Las 6 vacunas comerciales difirieron sustancialmente con respecto a su capacidad para superar a los anticuerpos de origen materno y para inducir una inmunidad activa (Fig. 1 y 2). Nos encontramos con que 3 de los 8 (el 38%) cachorros que recibieron la vacuna F y un cachorro (el 13%) de los grupos a los que se inoculó la vacuna D o la vacuna E desarrollaron una inmunidad activa que se midió en forma de un incremento sustancial en el título de anticuerpos en el transcurso de las 3 semanas posteriores a la primera vacunación. Ninguno de los cachorros del grupo control ni aquellos que recibieron la vacuna A, la B o la C desarrollaron anticuerpos tras la primera vacunación. 11

12 Figura 1. Porcentaje de cachorros que desarrolló una respuesta en forma de anticuerpos tras la primera vacunación con vacunas polivalentes que contenían parvovirus canino. Respuesta (%) % 0% 0% 0% 0 Control A B C D E F Vacunas 13% 13% 38% Figura 2. Porcentaje de cachorros que desarrollaron una respuesta en forma de anticuerpos tras la segunda vacunación con vacunas polivalentes que contenían parvovirus canino. Respuesta (%) Control A B C D E F Vacunas 75% 100% 100% Tras la segunda vacunación, todos los cachorros de los grupos de la vacuna E y la vacuna F, el 75% de los perros del grupo vacunal D y uno (el 13%) del grupo vacunal C desarrollaron anticuerpos frente al CPV, tal y como detectó la prueba de la HI. Ningún cachorro del grupo control o de los grupos vacunales A y B desarrollaron anticuerpos tras la segunda vacunación. Cinco semanas después de la segunda vacunación, los cachorros fueron expuestos al CPV-2a y al CPV-2b, tras lo cual se registraron evaluaciones diarias de los signos clínicos de enfermedad y la mortalidad (Fig. 3 y 4). Los resultados indican que las 3 vacunas que indujeron una producción baja o nula de anticuerpos tras la segunda vacunación no lograron proporcionar una inmunidad protectora apreciable, con una morbilidad del 100% y una mortalidad de entre el 75 y el 100%. El grupo vacunal D tuvo un 50% de morbilidad y un 13% de mortalidad. Las vacunas E y F protegieron completamente a los cachorros porque no hubo morbilidad ni mortalidad. Además, no se aisló el virus de las heces de los cachorros de estos dos grupos y no hubo cambios en el título de anticuerpos de los cachorros de estos dos grupos en ningún momento después de la exposición. Como contraste, en los grupos con cachorros que tuvieron signos clínicos de enfermedad se aisló el virus de las heces y los títulos de anticuerpos se vieron incrementados de forma sustancial como resultado de la infección vírica. Según los resultados de este estudio, existen diferencias significativas entre las distintas vacunas caninas comerciales que contienen CPV-2 en cuanto a su capacidad de inducir la formación de anticuerpos y una inmunidad protectora frente al CPV-2 cuando los anticuerpos de origen materno están presentes. La diferencia en la eficacia entre las vacunas en cuanto a la superación de la inhibición Figura 3. Porcentaje de cachorros vacunados con signos clínicos de enfermedad tras la exposición a parvovirus canino virulento. Morbilidad (%) % 100% 100% 100% 50% Figura 4. Porcentaje de cachorros vacunados que murieron tras la exposición a parvovirus canino virulento. Morbilidad (%) % 100% 75% 63% 25 0 Control 0% 0% A B C D E F 25 13% 0% 0% 0 Control A B C D E F 12 Vacunas Vacunas

13 por parte de los anticuerpos maternos es probablemente atribuible a la inmunogenicidad del virus vacunal y al título de virus en la vacuna. En estudios previos, se demuestra que la cantidad de virus infectivos en una vacuna es un factor importante en cuanto a su capacidad de superar la inhibición por parte de los anticuerpos maternos. También se conoce como la inmunogenicidad de una cepa vacunal también está relacionada con su infectividad. Un CPV-2 que haya sufrido muchos pases por cultivos celulares puede perder infectividad y, por lo tanto, inmunogenicidad. Las cepas con un menor número de pases tienen un mayor grado de infectividad in vivo. Es crítico utilizar vacunas que puedan inmunizar lo más precozmente posible, para así reducir el periodo de vulnerabilidad. Esta es la edad a la cual se dan las mayores pérdidas atribuibles al CPV-2 y cuando la inmunidad vacunal es más crítica. Los mejores productos son aquellos que reducen el tiempo de vulnerabilidad tanto como sea posible con el objetivo de eliminar este periodo totalmente. Una ventaja adicional de las vacunas más eficaces es la capacidad de completar antes el programa de vacunación. Referencia: Larson L., Schultz R.D. Comparison of selected canine vaccines for their ability to induce protective immunity against canine parvovirus infection.ajvr, Vol 58. Nº4 April

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15 Desempeño de una vacuna de nueva generación frente al parvovirus canino en cachorros de Rottweiler Poco después de la aparición del parvovirus canino tipo 2 en 1978, se hizo evidente que ciertas razas parecían más susceptibles a la enteritis parvovírica aguda que otras. El análisis retrospectivo de los registros de los hospitales veterinarios universitarios desde 1981 hasta 1983 indicaba que los Rottweiler y los Dobermann Pinscher corrían un riesgo significativamente superior de desarrollar una enteritis por parvovirus canino tipo 2. Se ha sugerido que la vacuna ideal frente al parvovirus canino tipo 2 sería eficaz incluso en las razas que corren un riesgo alto (es decir, Rottweiler, Dobermann Pinscher, Labrador Retriever y perros de trineo de Alaska) a verse afectadas por la parvovirosis. Se llevó a cabo un estudio para determinar el desempeño de una vacuna de nueva generación frente al parvovirus canino tipo 2 (Progard Vaccine; Intervet, Inc.; Millsboro, DE) en la raza Rottweiler. Se incluyeron en el estudio a cachorros de Rottweiler no vacunados de cuatro semanas de vida de todo EE.UU. Los cachorros fueron vacunados por el veterinario de los criadores a las 4, las 6, las 9 y las 12 semanas de edad con la vacuna de nueva generación contra el parvovirus canino tipo 2. Se tomaron muestras de suero en el momento de cada vacunación y 3 semanas después de la vacunación a las 12 semanas de vida para someterlas a la prueba de la inhibición de la hemaglutinación (HI). Un incremento del cuádruple, o mayor, del título con la prueba de la HI entre las muestras de suero se consideró indicativo de una respuesta protectora a la vacunación. Noventa y ocho de 100 (el 98%) de los cachorros de Rottweiler que habían completado este protocolo de vacunación habían desarrollado unos títulos séricos de anticuerpos protectores con la administración de la última vacuna de parvovirus canino tipo 2 a las 12 semanas de vida. Los títulos de respuesta en forma de anticuerpos con la prueba de la HI oscilaron entre 1:320 y 1:5120 (Tabla 1). El nivel de anticuerpos de origen materno presente a las 4 semanas de vida osciló entre 1:<10 y 1:1280. La respuesta frente a la vacunación a las 4 semanas de vida fue del 80% (80/100), fue del 81% (81/100) frente a la vacunación a las 6 semanas de edad, fue del 90% (90/100) frente a la vacunación a las 9 semanas de vida y fue del 98% (98/100) frente a la vacunación a las 12 semanas. Tabla 1. Resultados de la respuesta serológica tras la vacunación. Edad Número de cachorros vacunados Número de cachorros que respondieron Porcentaje de respuesta 4 semanas semanas semanas semanas

16 Tal y como se ha visto en este estudio con el uso de una vacuna de nueva generación de una cepa del parvovirus canino en una una raza bien conocida por su elevado riesgo a verse afectada por la parvovirosis (el Rottweiler), los cachorros, incluso en presencia de unos niveles entre bajos y moderados de anticuerpos de origen materno adquiridos pasivamente, pueden empezar a responder a una edad tan temprana como la de 4 semanas y estar inmunizados activamente a las 12 semanas de vida. Además, este estudio añade respaldo a la más reciente recomendación de que la edad del cachorro para recibir la última dosis de la vacuna contra el parvovirus canino puede ahora modificarse debido a la mayor eficacia de estas vacunas de nueva generación. 16 Referencia: Johnny D. Hoskins, DVM, PhD, Dipl. Performance of a new generation canine parvovirus vaccine in Rottweiler puppies. ACVIM. Canine Practice, Vol. 22, Nº4, July/August 1997.

17 La protección precoz de los cachorros frente al parvovirus canino: una comparación entre dos vacunas El abatimiento, la falta de apetito, los vómitos, la diarrea y, posiblemente, la muerte en un cachorro de entre seis semanas y seis meses de vida son los signos y las características más frecuentemente relacionados con la infección por el parvovirus canino. Cuando se identificó por primera vez el virus en 1978, la infección estaba relacionada con una elevada morbilidad y mortalidad porque la población canina era susceptible. En la actualidad, casi todos los perros adultos son inmunes debido a la vacunación o a la exposición natural. La inmunidad frente al CPV puede correlacionarse con los títulos de anticuerpos en el suero. Los títulos de anticuerpos de 1:80 o superiores utilizando la prueba de la inhibición de la hemaglutinación (HI) se consideran protectores. Aunque la vacunación ha reducido el número de casos, la enteritis provocada por la parvovirosis sigue siendo una enfermedad importante, especialmente en los cachorros. Los cachorros corren el riesgo de infectarse porque los anticuerpos de origen materno interfieren con la respuesta a las vacunas pero no protegen al cachorro frente a la enfermedad natural. Las vacunas se usan comúnmente en medicina veterinaria para evitar enfermedades. Se recomienda una serie de vacunas para proteger al cachorro a una edad lo más temprana posible. La respuesta a las vacunas no se dará hasta que los anticuerpos de origen materno hayan disminuido. En el caso de la parvovirosis canina, el nivel de anticuerpos maternos que evita una respuesta adecuada a las vacunas es inferior al necesario para evitar la enfermedad natural, lo que deja a casi todos los cachorros susceptibles a la infección natural durante un cierto periodo de tiempo. Es muy importante reducir el periodo de tiempo de susceptibilidad relacionado con la presencia de los anticuerpos maternos a través del uso de vacunas altamente inmunógenas, dado que la inmunidad frente al CPV puede correlacionarse con los títulos de anticuerpos y por lo tanto de las vacunas. Para determinar si existe una diferencia en la producción de anticuerpos entre diferentes vacunas cuando son administradas a cachorros en un entorno doméstico, se desarrolló un estudio en el que participaban 123 cachorros con propietario, aunque 20 de éstos no consiguieron completar el estudio y fueron excluidos durante la prueba. Se determinaron los títulos de anticuerpos frente al parvovirus antes de la vacunación, antes de cada vacunación posterior y aproximadamente cuatro semanas después de la última vacunación. Para estas pruebas se utilizó el método de hemoaglutinación (HI). El método de la HI para la detección de anticuerpos frente al parvovirus no discrimina entre los anticuerpos de origen materno y los estimulados de forma activa. Se consideró que un incremento de los anticuerpos tras la primera muestra fue resultado de la producción activa. Un título de anticuerpos que incrementó hasta 1:160 o un valor superior se consideró un título de anticuerpos protector y una respuesta a la vacunación. Los cachorros (edad: nueve o menos semanas de vida) fueron vacunados durante la primera consulta. Las vacunas volvieron a administrarse aproximadamente a las 12 y las 16 semanas de vida. Si durante la consulta inicial el cachorro tenía siete o menos semanas de vida, se tomaban muestras y se vacunaba al animal durante esa primera visita y se repetían estas operaciones a las nueve semanas de edad, para posteriormente seguir el protocolo descrito. Los cachorros fueron aleatoriamente distribuidos en dos grupos que recibieron 2 vacunas de diferentes laboratorios. No se hallaron diferencias significativas en los grupos con respecto a la raza (p = 0,215) o al sexo (p = 0,680) (Tabla 1). Antes de la vacunación no hubo diferencias en los títulos de anticuerpos frente al CPV (p = 0,6948). No obstante, en todas las visitas posteriores (segunda visita, p = 0,0001; tercera visita, p = 0,0001; cuarta visita, p = 0,0001; y para los 19 cachorros que acudieron a una 17

18 Tabla 1. Resultados del análisis estadístico. Grupo vacunal A Grupo vacunal B p Cachorros de pura raza (%) ,68 Machos (%) ,22 Título en la 1ª visita (media geométrica ± SEM) 3,5 ± 1,0 3,8 ± 1,1 0,69 Título en la 2ª visita (media ± SD) 1.047,2 ± 471,1 64,3 ± 36,2 0,0001 Título en la 3ª visita (media ± SD) 1.952,2 ± 662,7 279,7 ± 112,0 0,0001 Título en la 4ª visita (media ± SD) 2.717,6 ± 407,4 542,5 ± 172,1 0,0001 Título en la 5ª visita (media ± SD) 4.158,7 ± 732,4 786,6 ± 622,8 0,0094 (n = 10) (n = 9) Protegidos después de la 1ª visita (%) ,005 Edad a la que estaban protegidos (días) 85 ± ± 24 0,020 Protegidos a las 12 semanas (%) ,001 Protegidos a las 16 semanas (%) ,050 Protegidos a las 20 semanas + (%) ,361 * SEM = error estándar de la media; SD = desviación estándar Cachorros vacunados a las nueve semanas de vida; muestras de suero obtenidas a las 12 semanas de vida. Cachorros vacunados a las 12 semanas de vida; muestras de suero obtenidas a las 16 semanas de vida. + Cachorros vacunados a las 16 semanas de vida; muestras de suero obtenidas a las 20 semanas de vida. quinta consulta, p = 0,0094), los cachorros del grupo vacunal A tuvieron unos títulos de anticuerpos significativamente superiores. Se determinó que un título protector de anticuerpos equivalía a un título de 1:160 o superior. Cuando se compararon los grupos vacunales con respecto al número de cachorros que obtuvieron unos títulos protectores de anticuerpos, se dieron diferencias significativas (es decir, un título protector de anticuerpos tras la primera visita [p = 0,005]; un título protector de anticuerpos a una edad más temprana [p = 0,02]; un título protector de anticuerpos a las 12 semanas de vida [p = 0,001] y un título protector de anticuerpos a las 16 semanas de vida [p = 0,05]), teniendo el grupo vacunal A el resultado más deseable. No hubo diferencias significativas al comparar entre machos y hembras y entre cachorros de pura raza y mestizos. La vacuna A produjo un título protector de anticuerpos en una mayor proporción de los cachorros tras la primera visita y antes de las 12 semanas de vida. 18 Referencia: Dudley L. et al. Early protection of puppies against Canine Parvovirus: A comparison of two vaccines. J Am Anim Hosp. Assoc 1997; 33:

19 Una comparación de los títulos de anticuerpos frente a los parvovirus en cachorros vacunados en condiciones de campo a las 9-11 o a las semanas de vida Aunque las recomendaciones con respecto a una vacunación de los cachorros en forma de un programa básico han preconizado la administración la inoculación final no antes de las 12 semanas de vida, un cierto número de vacunas ha recibido la autorización para que la inoculación final del programa básico se administre a una edad tan temprana como la de 10 semanas. Cualquiera de tales vacunas habrá demostrado su capacidad para estimular una respuesta inmunitaria activa teniendo en cuenta los niveles relativamente bajos de anticuerpos de origen materno (MDA) que pueden seguir estando presentes a las 10 semanas de vida. Se considera una ventaja ser capaz de inmunizar a los cachorros a una edad lo más precoz posible, para así permitir una protección temprana contra la enfermedad y para así potenciar un contacto más temprano entre animales y el acceso de los mismos al exterior para su socialización y habituación antes de las 14 semanas de vida. Mientras los estudios realizados en el laboratorio tienden a demostrar la eficacia en circunstancias ideales frente a unos niveles esperados de anticuerpos de origen materno (MDA), se reconoce que en el campo la situación puede, en ocasiones, variar, dando lugar a una pequeña proporción de cachorros que podrían no responder al programa básico de vacunación, debido a parasitismo, estrés, terapia farmacológica concurrente así como niveles moderados de anticuerpos maternos. En un estudio realizado en el Reino Unido, se analizaron los porcentajes de respuesta en cachorros vacunados una vez a alrededor de las 9-11 semanas de vida y se compararon con los de los cachorros vacunados alrededor de las semanas de vida en una única consulta con una única marca de vacuna autorizada para un final a las 10 semanas. A los cachorros que fueron llevados con una edad de entre 9 y 14 semanas para recibir la primera dosis de un programa básico rutinario de vacunación (Nobivac DHPPi y Nobivac Lepto2 Intervet) en una consulta veterinaria del Reino Unido se les extrajo sangre cuando llegaron a la consulta y, de nuevo, 2-4 semanas más tarde, cuando volvieron para completar su programa básico de vacunación. Figura 1. Distribución de los títulos prevacunales en 188 cachorros. Cachorros (%) semanas semanas Títulos 19

20 Todas las muestras de suero se analizaron con respecto a los títulos de inhibición de la hemaglutinación (HI) frente a la parvovirosis canina. Una pequeña cantidad de cachorros con unos títulos postvacunales entre bajos e intermedios (<1:128) fueron revacunados y posteriormente se les volvió a extraer una muestra de sangre. Se tomaron muestras de sangre a un total de 188 cachorros en el momento de la administración de su primera dosis de vacuna. Se volvió a tomar una muestra de todos los cachorros 2-4 semanas más tarde. Para la facilidad del análisis, los cachorros fueron divididos en dos grupos de edad: 9-11 semanas (139 cachorros) y semanas (49 cachorros). La distribución de los títulos prevacunales en los dos grupos fue similar. Tras la administración de una única dosis de vacuna aplicada a las 9-11 semanas, se midieron los títulos en 139 perros. Un total del 94% de estos perros consiguió unos títulos iguales o superiores a 1:64 tras una única dosis de vacuna multivalente. En el grupo de 49 perros a los que se administró una única dosis de vacuna, a las semanas de vida, el 96% desarrolló unos títulos postvacunales de 1:64 o superiores. La distribución de los títulos prevacunales en los dos grupos fue similar, no hubo diferencias significativas en los porcentajes de respuesta en los cachorros vacunados entre las 9 y las 11 semanas de edad en comparación con los cachorros vacunados por vez primera entre las 12 y las 14 semanas de vida. La proporción de perros que desarrolló unos títulos bajos (<1:64) tras la vacunación fue similar a la de los datos de campo reportados previamente (Thompson, H., 2006) y fue similar independientemente. Figura 2. Títulos postvacunales frente al CPV en 188 cachorros a los que se administró una única vacuna multivalente entre las 9 y las 14 semanas de vida. Cachorros (%) semanas semanas Títulos Referencia: A comparison of parvoviral antibody titres in puppies vaccinated under field conditions at either 9-11 or weeks of age. J. Helps, C. Bradley, D. Sutton. Proceedings 40th Voorjaarsdagen congress, 27th-29th April 2007, Amsterdam, NL.:p (Puede ver el poster del estudio en la página 49)

21 Ensayo comparativo de las fracciones del parvovirus canino, el virus del moquillo canino y el adenovirus canino tipo 2: dos vacunas vivas modificadas disponibles comercialmente La mayoría de los cachorros son vacunados por primera vez contra el parvovirus canino (CPV), el virus del moquillo canino (CDV), el adenovirus canino tipo 2 (CAV-2), el virus de la parainfluenza canina (CPi) y la leptospirosis cuando tienen entre seis y ocho semanas de vida, con la administración de una segunda vacuna entre dos y cuatro semanas después. Es práctica común intentar evitar el contacto directo o indirecto con fuentes potenciales de infección, como por ejemplo otros perros, hasta una o dos semanas después de la finalización de este programa de vacunación. Hasta 1999 todas las vacunas disponibles en el mercado del Reino Unido disponían de una recomendación oficial de que la segunda vacunación no debería administrarse a cachorros de menos de 12 semanas de vida. Como resultado de ello se mantuvo de forma eficaz a muchos cachorros aislados de otros perros, con una restricción del acceso al mundo exterior hasta que tenían por lo menos 13 ó 14 semanas de vida, un periodo crucial de la vida de un cachorro para su adecuada socialización y habituación (Bower, 2000). Los problemas comportamentales debido a una socialización insuficiente son comunes en los perros. Una encuesta llevada a cabo por la Association of Pet Behaviour Counsellors (Asociación de Asesores en el Comportamiento de las Mascotas) en 1998 reveló que el 20% de los perros del Reino Unido tienen problemas comportamentales (Magnus et al., 1998), y el 80% de los perros eutanasiados antes de los dos años de vida son sacrificados bajo petición de su propietario como resultado directo de un problema comportamental (Bower, 2000). En el año 1999 una vacuna viva atenuada (Nobivac DHPPi Intervet UK) recibió autorización para vacunación final a las 10 semanas de vida y varios estudios han mostrado que puede inmunizar con éxito a los cachorros contra estas enfermedades en presencia de niveles de anticuerpos de origen materno a las 10 semanas de vida (Hoskins et al., 1995; Mocket y Stahl, 1995; Bergman y Stahl, 1996; Bergman, 1997; Larson y Schultz, 1997; W. S. K. Chalmers, comunicación personal). En un estudio se comparó con otra vacuna viva modificada (que contiene CPV tipo 2b), frente a los mismos patógenos que la anterior, para determinar la capacidad de las dos vacunas para sobreponerse a los anticuerpos de origen materno a las seis semanas de vida y el porcentaje de animales que respondían a las fracciones CPV, CDV y CAV-2 de las dos vacunas a las 10 semanas de vida. Se utilizaron cuarenta cachorros de raza Beagle de cuatro semanas de vida y de ambos sexos, nacidos de hembras vacunadas regularmente contra el CPV, el CAV-2 y el CDV. Se midieron los niveles de anticuerpos de origen materno de los cachorros contra el CPV, el CDV y el CAV-2 a las cuatro semanas de vida, y se les dividió en dos grupos con distribuciones equivalentes de estos anticuerpos. Uno de los grupos (1) fue vacunado con Nobivac, y el otro grupo (2) con la otra vacuna a las 6 y a las 10 semanas de vida. Se alojó a los cachorros en una unidad convencional junto con sus madres hasta que se les destetó a las seis semanas de vida y se les trasladó a dos salas convencionales diferentes, donde permanecieron desde tres días antes de la primera vacunación hasta que se finalizó la prueba a las 14 semanas de vida. Se tomaron muestras de sangre de los cachorros a las 4, 6, 7, 10, 11, 12 y 14 semanas de vida, y se midieron las respuestas serológicas de cada cachorro frente al CPV, al CDV y al CAV-2. Un título de inhibición de la hemaglutinación de más de 80 frente al CPV y unos títulos de neutralización vírica (VN) de más de 8 frente al CDV y al CAV-2 se consideraron positivos. Se compararon los títulos de las muestras de sangre extraídas cuatro semanas después de cada vacunación con los títulos de las muestras de sangre obtenidas inmediatamente después de la vacunación. Los cachorros que mostraron un incremento del cuádruple en el título entre las dos 21

22 muestras fueron considerados respondedores ; los cachorros que tenían un título en la segunda muestra que era por lo menos igual al título en la muestra anterior y por encima del nivel considerado protector se clasificaron como respondedores lentos ; y los cachorros que tenían un título en la segunda muestra que era inferior al título de la muestra anterior fueron considerados no respondedores. Respuestas frente a la primera vacunación a las seis semanas de vida Los 19 cachorros del grupo 1 respondieron frente a los componentes CPV y CDV de la vacuna, pero dos de las respuestas frente al CDV se consideraron lentas ; 14 de los cachorros del grupo 1 respondieron al componente CAV, cuatro de ellos con una respuesta lenta. Tres de los 20 cachorros del grupo 2 no lograron responder frente al componente CPV, y uno no logró responder frente al componente CDV; 15 de ellos respondieron frente al componente CAV, mostrando uno de ellos una respuesta lenta. Respuestas frente a la segunda vacunación a las 10 semanas de vida Los cinco cachorros del grupo 1 que no respondieron frente al componente CAV con la primera vacunación respondieron con la segunda vacunación, uno de ellos con una respuesta lenta. Los tres cachorros del grupo 2 que no respondieron frente al componente CPV y el cachorro que no respondió frente al componente CDV con la primera vacunación respondieron con la segunda vacunación. Los cinco cachorros que no respondieron frente al componente CAV con la primera vacunación respondieron. La respuesta final frente a la fracción CPV de ambas vacunas se consideró satisfactoria. Todos los cachorros de ambos grupos mostraron un incremento del cuádruple en el título tras la segunda vacunación a las 10 semanas de vida y desarrollaron unos títulos de HI de 256 o más frente al CPV. Los títulos de 80 o superiores se consideran protectores (McCartney et al., 1988). Todos los cachorros del grupo 1 respondieron frente a la fracción CPV tras la primera vacunación a las seis semanas de vida, pero tres de los cachorros del grupo 2 no lograron responder. Las respuestas frente a las fracciones del CDV de ambas vacunas se consideraron satisfactorias. Todos los cachorros de ambos grupos mostraron un incremento del cuádruple en el título tras la segunda vacunación a las 10 semanas y desarrollaron unos títulos de VN de 32 o superiores frente al CDV. Tradicionalmente, unos títulos de entre 16 y 32 se han considerado protectores (Olson et al., 1988, 1997; Coyne et al., 2001). Todos los cachorros del grupo 1 respondieron al componente CDV a la primera vacunación, pero un cachorro del grupo 2 no logró responder. Cachorros respondedores (%) Vacuna D Nobivac Ambas vacunas produjeron una protección del 100% después de la segunda vacuna a las 10 semanas, mientras que se describen diferencias en el porcentaje de protección de las dos vacunas después de la primera dosis a las 6 semanas. Respuesta 6 semanas Respuesta 10 semanas 22 Referencia: Bergman J.G.H.E., Muniz M, Sutton D, Fensome R, Ling F, Paul G. Comparative trial of the canine parvovirus, canine distemper virus and canine adenovirus type 2 fractions of two commercially available modified live vaccines. The Veterinary Record, November 25, 2006.

23 La vacuna del parvovirus tipo 2 protege contra la exposición virulenta al virus tipo 2c El parvovirus canino (CPV2) es un virus ADN monocatenario responsable de una enteritis aguda y a veces fatal en los perros. El virus, que apareció por primera vez en 1977/1978, surgió, probablemente, a partir de un virus muy cercanamente emparentado que afecta a los gatos: el virus de la panleucopenia felina (FPLV) mediante un pequeño números de mutaciones en la proteína de la cápside única. Ya en 1979 aparecieron las primeras variantes del CPV2, y se les dio el nombre de CPV2a, y se vieron seguidas rápidamente de la aparición de las CPV2b en Los cambios aminoacídicos en la proteína de la cápside (VP2), que caracterizan el cambio de 2 a 2a y 2b, son muy limitados. Más recientemente han aparecido en Italia cepas en las que el aminoácido de la posición 426 (Asn en la 2a y Asp en la 2b) se ha convertido en un residuo de ácido glutámico (Glu). Estas variantes que coexisten con los otros tipos de CPV se han denominado CPV 2c. En la actualidad, las vacunas vivas atenuadas derivan de aislados de CPV2b o del virus tipo 2 original. Como el virus de tipo 2 se ha visto completamente reemplazado en el campo por los virus 2a, 2b y ahora los 2c, ha habido preocupación por el nivel de protección aportado por las vacunas de tipo 2 atenuadas. Se ha demostrado, con anterioridad, que la vacuna CPV2 viva atenuada es capaz de proteger a los perros frente a las exposiciones de campo con las variantes 2a y 2b. El objetivo de este estudio fue el de investigar la capacidad de una vacuna viva atenuada de tipo 2 (Nobivac-Intervet) para proteger a los perros frente a la exposición a la variante más reciente del CPV: la CPV2c. Se administró a seis perros SPF de raza Beagle la pauta mínima recomendada de vacunación, que comprendía una única inoculación de vacuna (Nobivac Lepto + Nobivac Pi) a las 8-10 semanas de vida seguida, 3 semanas más tarde, de una vacuna contra el parvovirus en combinación con virus del moquillo, del adenovirus y de la parainfluenza (Nobivac DHPPi) y una repetición de la vacuna contra la leptospirosis. El grupo vacunado recibió, por tanto, una única vacunación con la vacuna contra el parvovirus. Se mantuvo a seis perros control sin vacunar. Todos los animales fueron expuestos, por vía oral, a un aislado tipo 2c del CPV y se les monitorizó en busca de signos clínicos, propagación de virus, fluctuaciones de glóbulos blancos y respuestas serológicas. Las observaciones clínicas se presentan en la Tabla 1. Los animales control empezaron a mostrar signos clínicos a partir del 4º día tras la exposición, y para el 6º día tras la exposición tres de los perros control mostraron signos clínicos graves y fueron eutanasiados por motivos humanitarios. El resto de los animales control mostraron signos menos graves aunque fueron necesarios electrolitos por vía oral para ayudar a su recuperación. Todos los animales control mostraron una grave diarrea mucoide que también fue hemorrágica en los tres perros que debieron ser eutanasiados, mientras que el grupo vacunado no mostró ningún signo clínico de enfermedad en ninguna de las etapas durante el experimento. Los hisopos rectales tomados después de la exposición fueron sometidos a análisis con respecto al contenido en virus mediante el cultivo en células CrFK (Tabla 2). Se pudieron detectar virus en los hisopos tomados de todos los animales control desde el día 3 hasta el día 7 después de la exposición, mientras que no se hallaron pruebas de excreción vírica en ninguno de los perros vacunados. No hubo respuesta anamnésica tras la exposición en los perros vacunados (Tabla 3), lo que indica que disponían de una inmunidad esterilizante frente al CPV. Además, las respuestas con la HI en el grupo vacunado no mostraron una diferencia destacada en los títulos, tanto si la prueba se llevaba a cabo con el antígeno tipo 2c como si se hacía con el antígeno vacunal de tipo 2. No obstante, las res- 23

24 Tabla 1. Observaciones clínicas en perros expuestos al CPV Glu-426. Animal Grupo Observación clínica (días tras la exposición) número Vacunados N N N N N N N N N N N N N N N 5260 N N N N N N N N N N N N N N N 9815 N N N N N N N N N N N N N N N 9819 N N N N N N N N N N N N N N N 9823 N N N N N N N N N N N N N N N 9829 N N N N N N N N N N N N N N N 5254 Controles N N N N M, RA, BF M, RA, BF E N N N N M, RA, BF 9813 N N N N M, RA, BF 9817 N N N N M, RA, BF 9821 N N N N M, RA, BF 9827 N N N N M, RA, BF M, RA, BF M, RA, BF M, RA, BF M, RA, BF M, RA, BF E M, RA, BF PC, RA RA N N N N N N E M, RA, BF M, RA, BF PC, RA PC, RA PC, RA RA N N N N N RA N N N N N N N = normal; M = malestar; RA = reducción del apetito; BF = sangre en las heces; PC = mal estado general; E = eutanasiado Tabla 2. Excreción de virus tras la exposición. 24 Grupo/número del animal Título frente al CPV (días después de la exposición) Controles ,30 6,70 6,30 5,45 (eutanasiado) ,45 6,20 7,45 7,10 (eutanasiado) ,45 5,54 7,20 6,20 5, ,30 7,10 6,45 3,30 (eutanasiado) ,95 5,70 5,85 5,85 6, < 1,45 4,20 7,95 6,30 6,70 Vacunados Los títulos se proporcionan en TCID50/ml

25 puestas de los 3 perros control que sobrevivieron a la exposición mostraron diferencias con respecto a la HI cuando la medición se realizaba frente al antígeno 2c en comparación con el antígeno vacunal. Todos los perros vacunados estuvieron completamente protegidos, no mostraron signos clínicos ni eliminaron en las heces el virus al que se vieron expuestos, en contraste con los animales control, que mostraron todos los signos típicos de la infección con un CPV patógeno y eliminaron en las heces el virus al que se vieron expuestos. Estos datos indican que aunque pueda haber diferencias antigénicas entre el virus tipo 2c y el virus tipo 2 precursor utilizado en la vacuna, estas diferencias no tienen una importancia material en términos de protección frente a la enfermedad: es decir, existe una reactividad cruzada eficaz de la vacuna de tipo 2 frente al virus 2c. Grupo Tabla 3. espuestas de la seroneutralización y de la HI. Identificación del animal HI Tras la vacunación c VN (neutralización del virus) Después de la exposición a 2 c Vacuna 2 c Vacuna 2 c Vacuna 2 c Vacuna Controles 5254 < 10 < 10 < 3 < b 320 b b b 9813 < 10 < 10 < 3 < < 10 < 10 < 3 < b 640b b b 9821 < 10 < 10 < 3 < < 10 < 10 < 3 < b 640 b b b 9827 < 10 < 10 < 3 < Vacunados > > ~ ~ Control positivo a Muestras tomadas 7 días después de la exposición b Muestras tomadas en el momento de la eutanasia c Muestras tomadas 4 semanas después de la vacunación HI VN Referencia: N. Spibey, N.M. Greenwood, D. Sutton, W.S.K. Chalmers, I. Tarpey. Canine parvovirus type 2 vaccine protects against virulent challenge with type 2c virus. Veterinary Microbiology 128, (2008)

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27 Porcentajes de respuesta frente a 3 vacunas vivas modificadas contra el parvovirus canino (CPV) J. G. H. E. Bergman 1, P. Boyden 1, M. Stahl 2, T. Gore 2 BSAVA 47th Annual Congress, 1-4 April 2004, Birmingham, UK:526 1 Intervet UK Ltd, Milton Keynes; 2 Intervet Inc, Millsboro Tras la introducción de una nueva vacuna viva modificada que contiene una cepa del CPV tipo 2b, ha habido un mayor interés por la eficacia de las vacunas frente al CPV. Dos grupos de 12 y de 11 animales fueron vacunados con dos vacunas disponibles comercialmente que contenían una cepa del CPV tipo 2 (grupos A y B, respectivamente), y un grupo de 12 animales fue vacunado con una vacuna disponible comercialmente que contenía una cepa del CPV tipo 2b (grupo C) a las 6, 9 y 12 semanas de vida. Se incluyó a 5 animales como controles no vacunados. Se tomaron muestras de suero antes y 3 semanas después de cada vacunación, y se averiguaron los títulos frente al CPV medidos con la prueba de la inhibición de la hemaglutinación (HI) en un laboratorio universitario independiente. Todos los cachorros se habían visto privados de calostro y, en lugar de tomarlo se les inocularon anticuerpos frente al CPV antes del estudio para asegurarse de que cada grupo dispusiera de títulos de anticuerpos pasivos suficientes antes de la vacunación. Debido a los elevados niveles de anticuerpos pasivos, ninguno de los animales respondió a la vacunación a las 6 semanas de vida. No obstante, a las 9 semanas de edad, el 100% de los animales del grupo A, el 91% de los animales del grupo B y el 75% de los animales del grupo C respondieron a la vacunación. El título medio geométrico en el grupo A fue de 2.650, en el grupo B fue de 682 y en el grupo C fue de 320. Ninguno de los animales que no respondió en la semana 9 de vida en los grupos B y C, respondió a la vacunación a las 12 semanas de vida. 27

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29 Estudio comparativo con 5 vacunas distintas frente al moquillo Se han documentado brotes de moquillo canino (CDV) en varios países europeos a finales de los años 90. Estudiando los informes de los brotes se pudo concluir que el moquillo se produjo en animales que habían seguido el protocolo recomendado por cada laboratorio y que debían haber estado protegidos por la vacunación. Se llevó a cabo un estudio en EE.UU para comparar la respuesta frente a 6 vacunas para perros disponibles comercialmente, para determinar el nivel de protección de cada una de ellas frente a la fracción moquillo. Se organizaron 5 grupos de 8 cachorros que fueron vacunados con 5 vacunas distintas, a las 6-7 y a las 9-10 semanas de vida. Un sexto grupo sirvió a modo de control. Se tomaron muestras de suero en el momento de cada vacunación y tres semanas después de la última vacunación y se analizaron con respecto a los anticuerpos medidos con la prueba de la seroneutralización (SN) frente al virus del moquillo canino. Un incremento del cuádruple o superior en el título 3 semanas después de la vacunación se consideró como una respuesta frente a la vacunación. Todos los grupos tenían rangos similares de títulos de anticuerpos de origen materno (MDA) que oscilaban entre 1:<2 y 1:128 en el momento de la primera vacunación. Los porcentajes de respuesta frente a la primera vacunación oscilaron entre el 0% y el 38%, y en el caso de la segunda vacunación oscilaron entre el 50 y el 100%. (Tabla 1) Los resultados de este estudio muestran que el porcentaje de animales que responden a la vacunación a las 10 semanas de vida no siempre es del 100%. Esta puede ser una posible explicación de los brotes en animales vacunados que se reportaron en varios países. Tabla 1. Respuestas serológicas frente a 5 vacunas distintas a la edad de 6-7 y de 9-10 semanas. La respuesta a las 6-7 semanas de vida se midió comparando el título medido mediante la prueba de la SN de la muestra tomada a las 6-7 semanas de edad con el título obtenido con la prueba de la SN de la muestra extraída a las 9-10 semanas de edad. La respuesta a las 9-10 semanas de vida se midió comparando el título medido con la prueba de la SN de la muestra tomada a las 9-10 semanas de edad con el título obtenido con la prueba de la SN de la muestra extraída a las 13 semanas de edad. Un incremento del cuádruple o superior en los títulos medidos con la prueba de la SN se consideró como indicativo de una respuesta frente a la vacunación. Vacuna % de respuesta a las 6-7 semanas % de respuesta a las 9-10 semanas Vacuna A 38% 100% Vacuna B 25% 50% Vacuna C 13% 50% Vacuna D 0% 75% Vacuna E 25% 50% Controles 0% 100% A: Nobivac DHPPi+L, MSD Animal Health Referencia: J.G.H.E. Bergman. Comparative Study with 5 different distemper vaccines.veterinary Quarterly, Vol. 19. Supplement 1, April