SEGURIDAD ALIMENTARIA: DETECCIÓN DE ALÉRGENOS Metodologías para la detección de alérgenos

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Benito Navarro Sandoval
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1 SEGURIDAD ALIMENTARIA: DETECCIÓN DE ALÉRGENOS Metodologías para la detección de alérgenos Sra. Juliana Roca. Responsable departamento técnico, Bioser, S. A. DERIO, martes 16 de Junio de

2 Alérgenos y marco normativo La etiqueta constituye un elemento imprescindible de seguridad alimentaria para aquellos consumidores que sufren alergias y/o intolerancias alimentarias. Las personas que presentan alergia y/o intolerancia alimentaria tienen que disponer de información completa sobre la composición de los alimentos para poder elegir los productos y eliminar el riesgo de sufrir una reacción adversa. Por qué analizar alérgenos? Protección de marca Legislación y Estándares Devoluciones de producto Mercado Allergen-free Interés mediático Alérgenos alimentarios = riesgo seguridad alimentaria 2

Las personas que presentan alergia y/o intolerancia alimentaria tienen que disponer de información completa sobre la composición de los alimentos para

3 Alérgenos alimentarios Los alérgenos son proteínas o glicoproteínas que están presentes de forma natural en los alimentos, tanto en los de origen animal como vegetal. Estables al calor, al ácido y a las proteasas Métodos de control alérgenos Inmunoensayo Otros LFD Elisa PCR LCMS 3

4 Actualmente, a nivel de industrias Análisis en laboratorios: kits Elisa o PCR Auto monitorización durante el procesado: tiras de flujo lateral (LFD) Métodos por inmunoensayo LFD y ELISA 4

5 Tiras rápidas para el control de alérgenos Tiras Agrastrip Definición y Aplicaciones Las tiras AgraStrip son un test rápido de flujo lateral para el análisis de alérgenos en matrices alimentarias, superficies y aguas de aclarado en poco más de 10 minutos. Aplicaciones: Análisis de materia prima (pre producción) Verificación de la limpieza/validación CIP 5

matrices alimentarias, superficies y aguas de aclarado en poco más de 10 minutos.

6 Protocolo AgraStrip 0,2 gr 1 min 12 gotas Interpretación de resultados Positivo: niveles Alérgeno superiores o iguales al nivel de cutoff (dos líneas) T C Negativo: niveles Alérgeno inferiores al nivel de cutoff (solo línea control) T C T C Resultados Inválidos: no línea control 6

(dos líneas) T C Negativo: niveles Alérgeno inferiores al nivel de

7 Interpretación de resultados Nueva AgraApp, para resultados semicuantitativos de las AgraStrip : almendras avellanas nueces nueces del Brasil nueces de Macadamia cacahuete pistacho anacardo Interpretación de resultados 7

almendras avellanas nueces nueces del Brasil nueces de

8 AgraStrip Alérgenos Muy específicos y sensibles Fáciles de usar Muy rápidos Rango de productos muy amplio Flexibilidad No requieren material adicional Estabilidad Kits elisa para el control de alérgenos Kits AgraQuant 8

amplio Flexibilidad No requieren material adicional

9 Los kits AgraQuant son kits elisa para el análisis cuantitativo de alérgenos en matrices alimentarias, superficies y aguas de aclarado. AgraQuant AgraQuant PLUS Definición y Aplicaciones AgraQuant : protocolo de extracción Alimento + solución extracción Homogenización Centrifugación/Filtración ANÁLISIS 9

AgraQuant AgraQuant PLUS Definición y Aplicaciones AgraQuant : protocolo de

10 AgraQuant PLUS: protocolo extracción 1. 1g muestra + aditivo extracción 1 y 2 2. Añadir 20ml agua destilada (80 100ºC) 3. Agitar vigorosamente 15 seg 4. Filtrar o centrifugar (8000g, 5min) Procedimiento de análisis Incubar 100µl extractos muestra/estándares Lavados x 5 100µl conjugado Incubar Incubar En la oscuridad 100µl Solución Stop 100µl sustrato Lavados x 5 10

Filtrar o centrifugar (8000g, 5min) Procedimiento de análisis Incubar 100µl extractos

11 OD450nm 1,600 1,400 1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 Interpretación de los resultados Elisa Sándwich directo S5 S3 S4 S2 S1 0,200 0, M Peanut conc. [ppm] Intensidad color concentración AgraQuant vs AgraQuant PLUS AgraQuant AgraQuant PLUS Rango productos Más amplio (20 referencias) 8 referencias LOD Muy bajos 2ppm en producto Rango cuantificación En función del alérgeno 1 25ppm Tiempo extracción ~ 30 min ~ 1 min Tiempo incubación 60 min 30 min Vida útil 12 meses 12 meses 11

[ppm] Intensidad color concentración AgraQuant vs AgraQuant PLUS AgraQuant AgraQuant PLUS Rango productos Más amplio (20

12 AgraQuant Rápidos Elevada sensibilidad y especificidad Facilidad de uso Per a la mayoría de los alérgenos de declaración obligatoria Otros Métodos PCR y LCMS 12

13 Métodos por PCR Detección de secuencias de ADN correspondientes a especies que contienen alérgenos. Método de detección indirecto Elevada especificidad Permite analizar muestras muy procesadas ELISA, LFD PCR Resumen Especificidad Posible reacción cruzada Altamente específico Detectabilidad Mayoría de alérgenos o grupos de proteínas Fragmento ADN LOD bajos ppm Teóricamente 1-10 moléculas Cuantificación Proteínas detectadas por Ab Número de copias de ADN Efecto Matriz Procesado Inhibidores pueden interferir con los anticuerpos Proteínas desnaturalizadas Matrices pueden tener inhibidores de la PCR DNA más estable 13

Altamente específico Detectabilidad Mayoría de alérgenos o grupos de proteínas Fragmento ADN LOD bajos ppm Teóricamente 1-10 moléculas Cuantificación

14 Todavía queda mucho camino por recorrer: Distintos métodos y kits de análisis dan distintos resultados Falta de material de referencia certificado Falta de método de referencia (MS?) Falta de límites máximos permitidos Alguna Pregunta? Juliana Roca Rbledpt. técnico Bioser, S. A. jroca@bioser.com 14

certificado Falta de método de referencia (MS?

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