11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : C07D 233/94

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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : C07D 233/94 A61K 31/4168 A61P 43/00 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 knúmero de solicitud europea: k Fecha de presentación: k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Derivados de nitroimidazol como potenciadores de la sensibilidad para quimioterapia y radioterapia. kprioridad: CN k Titular/es: S & H Pharm Technology Co. Ltd No 139 Hedong Nan Lu, Conghua Guangdong 92, CN k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Yu, Ruihong k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Carpintero López, Francisco ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCION Derivados de nitroimidazol como potenciadores de la sensibilidad para quimioterapia y radioterapia La presente invención se refiere a compuestos del nitroimidazol, particularmente un Glicididaagolc metálico, que es útil como intensificador de la sensibilidad anticancerosa en la quimioterapia y la radioterapia. Una variedad de factores contribuye a la eficacia de la radioterapia y la quimioterapia. Uno de las principales es una fracción (-0 %) de células anaerobias presentes en tumores, cuya tolerancia hacia la radiación o productos quimioterapéuticos es 2,-4 veces mayor que las células aerobias en tumores o células normales. Así, las células anaerobias no pueden matarse eficazmente a dosis radioterapéuticas o quimioterapéuticas normales, y podrían inducir una metástasis tumoral o una recaída. El intensificador de sensibilidad es un producto químico que puede aumentar el efecto de la radiación y de los productos quimioterapéuticos en las células anaerobias tumorales, pero tiene un efecto mucho más débil sobre el tejido aerobio normal. Zangongroff informó sobre el daño aumentado de la radiación en ratones por el ácido yodoacético en 194, que es la primera vez que se demostró el efecto del intensificador de sensibilidad. En la siguiente década, se hizo mucho esfuerzo para investigar el efecto del intensificador de sensibilidad en las células. Como resultado, se seleccionaron varios compuestos, pero el aumento de sensibilidad no es siempre positivo. A principios de los, Adams y col., establecieron el método para investigar los intensificadores de sensibilidad y demostraron que los compuestos de nitroimidazol tienen un efecto de intensificación de sensibilidad. Sin embargo, en la dosis requeridas de administración se produjo un efecto insuficiente de intensificación de la sensibilidad y unos efectos secundarios gastrointestinales graves, lo que limitaba la aplicación clínica de estos compuestos. Desde 1974, se ha investigado el 2-nitroimidazol (MISO) en ensayos clínicos durante más de diez años. El resultado indica que el 2-nitroimidazol tiene un efecto de intensificador de sensibilidad significativo, tiene una neurotoxicidad grave y, por tanto, no es aplicable clínicamente. Después de los 80, se han sintetizado gran cantidad de nuevos productos, por medio de la modificación estructural del MISO, por ejemplo, SR-280, RSU-69, Al-2123, DMM, RO La patente china N describe un métodoparalapreparación de un fármaco anticanceroso, llamado ácido metilnitroimidazolamino. Todos los compuestos mencionados anteriormente mostraron efectos secundarios inesperados, y solamente unos pocosdeellosestán bajo investigación adicional. Así, los intensificadores de sensibilidad anticancerosa no son todavía aplicables hasta ahora. Un objetivo de la presente invención es proporcionar un compuesto que sea capaz de aumentar la sensibilidad de las células tumorales a la radiactividad y la quimioterapia, y por lo tanto, aumentar el daño de la radiación y productos quimioterapéuticos a las células tumorales. Otro objetivo es de la presente invención es proporcionar un procedimiento para la preparación de un compuesto que sea capaz de aumentar la sensibilidad de las células tumorales a la radioterapia y la quimioterapia, y por lo tanto, aumentar el daño de la radiación y los productos quimioterapéuticos a las células tumorales. Los intensificadores de sensibilidad para la radioterapia y la quimioterapia de la presente invención, es decir, el Glicididaagolc metálico, son compuestos de fórmula general (I): 0 (I) en la que Me es un ión metálico monovalente, un ión metálico bivalente, un ión metálico multivalente o 2

3 un quelato del mismo, que se conecta al resto orgánico por medio de un enlace iónico. Preferiblemente, el ión metálico es Na +,K +,Ca 2+,Al 3+,Mg 2+,Zn 2+ oba 2+ ;más preferiblemente, el ión metálico es Na + ok La presente invención además proporciona un métodoparalapreparación de los compuestos de la presente invención, que comprende las etapas de: a) Llevar a cabo una reacción de anhidridación en caliente utilizando ácido nitrilotriacético y anhídrido acético, resultando un producto intermedio de anhídrido nitrilotriacético. b) Esterificar el producto intermedio obtenido en la etapa a) con -nitroimidazol en caliente para producir un ácido glicididaagolc; o c) Salificar el ácido glicididaagolc obtenido en la etapa b) en caliente con una sal que contiene un ión metálico apropiado. En una realización de la presente invención, la anhidrididación y la esterificación se llevan a cabo en N,N -dimetilformamida como disolvente a 4 C. En una realización adicional de la presente invención, la esterificación se lleva a cabo a -4 C, y el ácido glicididaagolc se obtiene ajustando el ph de la mezcla de reacción a 3,-4,0 con HCl y enfriando. En otra realización de la presente invención, la salificación se lleva a cabo por debajo de 70 C, y se añaden etanol y sal para controlar el ph de la mezcla de reacción en el intervalo de 7-8 y una concentración de etanol de 70-7% en peso. En otra realización de la presente invención, la reacción de anhídrido acético y ácido nitrilotriacético se lleva a cabo en presencia de N,N -dimetilformamida a 4 C, de ese modo se obtiene un producto intermedio. La mezcla del producto intermedio y el -nitroimidazol se ajusta hasta ph 3,-4,0 con HCl 6N y seguidamente se enfría hasta una temperatura inferior a C. El ácido glicididaagolc se obtiene después de enfriar. El ácido glicididaagolc así obtenido reacciona con la sal que contiene un ión metálico apropiado por debajo de 70 C para dar un glicididaagolc metálico. El etanol y la sal metálica se añaden en lotes a la mezcla de reacción en el proceso de reacción. El ph de la mezcla de reacción se controla a 7-8. La concentración de etanol preferida para el producto de cristalización es 70-7 %. La presente invención proporciona además los usos de los compuestos en la producción de los intensificadores de sensibilidad utilizados en la radioterapia y la quimioterapia. Los compuestos de la presente invención son capaces de inhibir la reparación de las células anaerobias tumorales dañadas, así son útiles como intensificadores de sensibilidad en la radioterapia y la quimioterapia. El compuesto también es capaz de matar bacterias anaerobias y mónadas anaerobias. El compuesto de fórmula (I) puede administrarse en forma líquida o sólida por vías oral, parenteral o tópica en todos los vehículos, adyuvantes y aditivos comunes. El compuesto puede también combinarse con vehículos apropiados para lograr una liberación retardada del compuesto. La cantidad que se administra es generalmente de 0 a 1.0 mg/metro cuadrado de área de superficie corporal, preferiblemente 800 mg/metro cuadrado de área de superficie corporal. Los compuestos de la presente invención son solubles en agua, y están indicados para administrarse como intensificadores de sensibilidad en la quimioterapia y la radioterapia de tumores. El resultado del experimento muestra que el compuesto de la presente invención puede aumentar significativamente la sensibilidad de una diversidad de tumores sólidos a la radioterapia y la quimioterapia, y reducir significativamente los efectos secundarios nocivos de la radioterapia y la quimioterapia. Debido a su bajo coeficiente de distribución aceite - agua, los compuestos tienen una afinidad al tejido cerebral menor que otros intensificadores de sensibilidad y, por lo tanto, tienen menor neurotoxicidad. Además, se ha demostrado: 1. El efecto del incremento de la sensibilidad radioterapéutica sobre células V 79 in vitro: lasld 0 de los compuestos para las células aerobias y anaerobias son 3,70 mmoles/l y 23,0 mmoles/l respectivamente. Esto demuestra que la toxicidad de los compuestos para las células anaerobias es significativamente más alta que para las células aerobias. 2. El efecto de incremento de sensibilidad radioterapéutica sobre células anaerobias irradiadas: los resultados experimentales muestran que los compuestos no tienen efecto de incremento de sensibilidad 3

4 radioterapéutica sobre las células aerobias irradiadas, el valor de C 1,6 es 0,48 mmoles/l. La relación de aumento de sensibilidad (valor SER) de los compuestos a una concentración no tóxica de 0,1-1,38 mmoles/l es 1,26-2,32, lo que demuestra que el compuesto incrementa selectivamente la sensibilidad radioterapéutica en las células anaerobias. 3. En las mismas condiciones experimentales, el efecto de incremento de la sensibilidad radioterapéutica de los compuestos es mayor que el de cualquier MISO o metilnitroimidazol. Los valores SER son 1,76, 1,2 y 1,07 respectivamente. 4. En la terapia de un cáncer de pulmón, melanoma, cáncer de mama y S 180, comparando con el resultado del experimento control, la aplicación de los compuestos de la presente invención rebaja significativamente la relación de crecimiento tumoral, incrementa la eficacia de la inhibición tumoral y prolonga el tiempo de retraso del crecimiento tumoral.. El efecto sobre tejidos normales y tejidos normales irradiados: los resultados de los experimentos sobre animales muestran que los compuestos no tienen ningún efecto perceptible sobre los tejidos normales, las células hematopoyéticas medulares, avoirdupois o exponente esplénico. Ejemplo 1 Preparación de glicididaagolc sódico Se agitó una mezcla de ácido nitrilotriacético (A.R., 70 g), anhídrido acético (A.R., 10 g) y N,N - dimetilformamida (0 ml) a 4 C durante 4 horas en un matraz de reacción de cuatro bocas. Seguidamente se añadió el -nitroimidazol (90 g) a la mezcla de reacción. Después de una agitación adicional a -4 C durante 2 horas, se obtuvo una solución color marrón pálido que contenía ácido glicididaagolc. Se eluyó la mezcla con 00 ml de agua, se ajustó el ph a 3,-4, 0 con HCl 6N. Después se incubó la mezcla en una baño de agua por debajo de C durante 1 hora, el ácido glicididaagolc se cristalizó con la solución. El ácido glicididaagolc crudo se obtuvo por filtración y se lavó con agua destilada hasta que el ph sea de 4,0. Para una purificación posterior, el producto crudo se disolvió en etanol 9 % a ebullición (la relación de producto crudo y disolvente es de 1:1). Después de una decoloración con carbono activo yfiltración, se obtuvo un filtrado amarillo. El filtrado se colocó en un frigorífico durante la noche y el producto se cristalizó con la solución. El producto cristalino se obtuvo por filtración, se lavó varias veces con etanol y se secó a C. Se obtuvo ácido glicididaagolc purificado (70 g aproximadamente). El ácido glicididaagolc purificado (70 g) y bicarbonato sódico (A.R., 0 g) se mezclaron bien en un vaso de precipitados de 00 ml, seguidamente se añadieron a la mezcla agua destilada (0 ml) y etanol (00 ml). El vaso de precipitados se colocó rápidamente en un baño de agua a una temperatura inferior a70 C. Con agitación, se añadió bicarbonatosódico (0 g) a la mezcla de reacción. En este proceso, también se añadió al vaso de precipitados etanol adicional para evitar el exceso de espuma en el vaso de precipitados. Después de que desapareciera la espuma y la solución de reacción se hiciera transparente, se midió elphquefuede7-8.seañadió carbonoactivoalasolución y se mantuvo la mezcla de reacción a -6 C durante minutos, seguidamente se filtró através de pasta de papel como medio de filtro. Se obtuvo una solución de color marrón pálido. Después de enfriar a temperatura ambiente, se añadió etanol anhidro (0 ml aproximadamente) a la solución para comenzar la cristalización. Seguidamente se ajustó la concentración de etanol de la solución hasta un 70-7 % con etanol. Después de colocar la solución en un frigorífico durante más de 12 horas, se recogió el producto por filtración. La pasta del filtro se lavó con etanol dos veces. El polvo blanco o amarillento así obtenido se secó durante más de 12 horas en un horno de vacíoa C, se obtuvo el producto glicididaagolc sódico (80 g aproximadamente). El producto así obtenido es un polvo cristalino blanco o amarillento. Es soluble en agua, metanol o ácido acético, e insoluble en cloroformo o ciclohexano. El ph de su solución acuosa es 6,-7,. Propiedades espectrales: A = 0,03c-0,0021, UVλ max (H 2 O)/nm: 227, 319; IRV max (KBr)/cm 1 : 34, 3180, 314, 1762, 173, 14, 0, 147, 1428, 1370, 1273, 12, 996, 83. Ejemplo 2 Efecto clínico del glicididaagolc sódico como intensificador de la sensibilidad de la quimioterapia y de la radioterapia Se incluyeron en esta investigación 96 pacientes que padecían cáncer de pulmón, los cuales se dividieron arbitrariamente en un grupo control (quimioterapia convencional) y un grupo de ensayo (pauta quimioterapéutica idéntica, glicididaagolc sódico y 80 % de dosis de agente quimioterapéutico). Las cifras de los pacientes en el grupo control y el grupo de ensayo son respectivamente 33 y 24 de citoma escamoso, 14 y de cáncer de mama, 3 y 12 de cáncer de pulmón. A todos los pacientes se les diagnosticó cáncer 4

5 de pulmón por una patología clínica y pruebas de células desarraigadas. Se acreditaron como de período avanzado IIIa - IV según el estándar TNM de cáncer de pulmón de abril de La quimioterapia convencional para el grupo control es como sigue: para citoma escamoso, régimen Cope-m: Me-CCNU 80 mg/m 2 IV, d; CTX IV, d (I); VCR 1 mg/vez IV, d (I); DDP mg, d (1-); MTX - mg, IV, d (1, 3, ); para cáncer de mama, régimen Mevp 16: MMC 6-8 mg/m 2 IV, d (I); CTX 0,8 g/m 2 IV, d (I); VP 16 0,1, IV, d (1-); para cáncer de células indiferenciadas, régimen COVAP 16: CTX 0,8 g/m 2 ome-ccnu80mg/m 2 IV, d (I); VCR 1 mg IV, d (I); E-AIDM - mg/m 2 IV, d (I); VP 16 0,1, IV, d (1-). El grupo de ensayo se trató como el grupo control excepto que el glicididaagolc sódico se administró a una dosis de 800 mg/m 2 de área de superficie corporal en 0 ml de solución de NaCl al 0,9 % mediante el IV, en los días0,1,3,. Antes y después de la terapia, se examinó el hemograma periférico de los pacientes de ambos grupos dos veces por semana. La eficiencia de la terapia se clasificó en alivio completo (CR), alivio parcial (PR), estable (S) y fallecimiento (P) según el estándar de evaluación de agentes antitumorales y el estándar de identificación de tumores sólidos promulgados por el Ministerio de Salud Nacional de China. El efecto del glicididaagolc sódico en los leucocitos y las plaquetas sanguíneas periféricos se muestran en la tabla I. TABLA I Comparación de leucocitos y plaquetas sanguíneas periféricos en dos grupos de pacientes (X ± DE) Como puede verse en la Tabla I, los leucocitos y las plaquetas sanguíneas disminuyeron significativamente después de la terapia en ambos grupos, mostrando un efecto secundario del agente quimioterapéutico. Sin embargo, la disminución de los leucocitos y plaquetas sanguíneas periféricos en los grupos de ensayo fue significativamente relevante comparado con el del grupo control (p < 0,01). Se demostró que el glicididaagolc sódico tiene el efecto de inhibir la disminución de leucocitos y plaquetas sanguíneas periféricos. A los dos grupos de pacientes se les hicieron radiografías antes y después de la terapia. La eficacia de la terapia de los dos grupos se midió según el cambio del tamaño del tumor mediante radiografías y otras indicaciones clínicas. TABLA II Efecto del glicididaagolc sódico en la terapia del citoma escamoso

6 TABLA III Efecto del glicididaagolc sódico en la terapia del cáncer de pulmón 1 TABLA IV Efecto del glicididaagolc sódico en la terapia del cáncer de células indiferenciadas 2 3 Aunque la dosis del agente quimioterapéutico se redujo un %, la eficacia de la terapia del grupo de ensayo se incrementó significativamente debido a la administración combinada de glicididaagolc sódico. La eficacia (CR + PR) fue del 27,3 % para el citoma escamoso, el 14,3 % para el cáncer de mama y el 66,7 % para el cáncer de células indiferenciadas en el grupo control, mientras que, la eficacia (CR + PR) era del 70,8 %, el,0 % y el 66,7 %, respectivamente en el grupo de ensayo. El efecto del compuesto no era significativo en el régimen COAVP 16, ya que este régimen por sí mismo tiene muy buen efecto en el tratamiento del cáncer de células indiferenciadas

7 REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I) (I) en la que Me es un ión metálico o un quelato del mismo. 2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Me es Na +,K +,Ca 2+,Al 3+,Mg 2+,Zn 2+ o Ba Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Me es Na + ok Un procedimiento para la preparación de los compuestos según la reivindicación 1, que comprende las etapas de: a) Llevar a cabo la reacción de anhidridación en caliente utilizando ácido nitrilotriacético y anhídrido acético, resultando un producto intermedio de anhídrido nitrilotriacético; b) Esterificar el producto intermedio obtenido en la etapa a) con -nitroimidazol en caliente para producir un ácido glicididaagolc; c) Salificar el ácido glicididaagolc obtenido en la etapa b) en caliente con una sal que contiene un ión metálico apropiado.. Un procedimiento según la reivindicación 4, en el que la anhidridación y la esterificación se llevan a cabo en N,N -dimetilformamida como disolvente a 4 C Un procedimiento según la reivindicación 4, en el que la esterificación se lleva a cabo a -4 C, y el ácido glicididaagolcse obtiene ajustando el ph de la mezcla de reacción a 3,-4,0 con HCl y enfriando. 7. Un procedimiento según la reivindicación 4, en el que la salificación se lleva a cabo por debajo de 70 C, y se añaden etanol y sal para controlar el ph de la mezcla de reacción en el intervalo de 7-8, y una concentración de etanol al 70-7 % en peso. 8. Usos de los compuestos de la reivindicación 1 en la producción de intensificadores de sensibilidad utilizados en radioterapia y quimioterapia. 0 NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 7