DIAGNÓSTICO PRENATAL CITOGENÉTICO TICO. Carolina Cruz Maricel Cuello Centro Nacional de Genética MédicaM

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1 DIAGNÓSTICO PRENATAL CITOGENÉTICO TICO Carolina Cruz Maricel Cuello Centro Nacional de Genética MédicaM

2 DIAGNÓSTICO PRENATAL Todas aquellas acciones prenatales que tienen por objeto diagnosticar la ocurrencia de un defecto congénito nito, entendiendo por tal toda anomalía del desarrollo morfológica, estructural, funcional o molecular presente al nacer o de comienzo tardío, externa o interna, familiar o esporádica, hereditaria o no, única o múltiple - O.M.S.

3 Técnicas de diagnóstico prenatal TÉCNICAS NO INVASIVAS: 1-Tamizaje Bioquímico de Cromosomopatías as: a) Triple Marcador (AFP, HCG, Estriol). b) Marcadores de primer Trimestre. 2-Tamizaje Ecográfico fico: a) Eco semanas. b) Eco semanas. c) Eco Tridimensional. 3-Células fetales en sangre materna.

4 TÉCNICAS INVASIVAS: a) Biopsia de Vellosidades Coriales b) Amniocentesis Temprana c) Amniocentesis Clásica d) Cordocentesis e) Embriofetoscopía f) Cardiocentesis g) Biopsia fetal

5 Indicación n de DNP citogenético tico Edad Materna Avanzada (>35 años). Hijo previo con Anomalía Cromosómica. Padres portadores de ACE balanceadas. Hallazgos ecográficos patológicos. Screening bioquímico patológico. Antecedentes de abortos a repetición, subfertilidad o muertes perinatales sin diagnóstico. Antecedentes de enfermedades monogénicas.

6 Biopsia de Vellosidades Coriales Permite obtener tejido del corion frondoso, que contiene células c en activa división n mitótica. tica. Semana de gestación Aproximadamente entre mg Aumenta 0.8% el riesgo de AE con respecto a la amniocentesis Falsos (+): 1-3% 1 Falsos (-):( 0.1% Incidencia de mosaicismo del 1.5-2%

7 Punción n Transcervical

8 Punción n Transabdominal

9

10

11 Biopsia de vellosidades coriales Posibilidades diagnósticas

12 blastocito Macizo celular interno trofoblasto Tejidos extraembrionarios feto citotrofoblasto Amnios y saco vitelino Core mesenquimatoso de la vellosidad corial Cultivo a largo termino directo

13 Método directo

14 Complicaciones debidas a la BVC Sangrado vaginal (1.3 % %) Hematoma subcoriónico ( 0.3%) Pérdida de Líquido Amniótico (0.5%) Infecciones 0.03 % (vía TA) Reacción peritoneal Hemorragia fetomaterna Complicaciones perinatales

15 Análisis citogenético tico de vellosidades coriales Interpretación n de los resultados: Cariotipo normal: 46,XX; 46,XY Trisomías autosómicas:47,xx+21; 47,XY,+18; 47,XX,+13 Triploidías:69,XXX o 69,XXY Trisomías sexuales: 47,XXY Monosomías:45,X (con hallazgos ecográficos) Rearreglos estructurales balanceados o desbalanceados, heredados o de novo.

16 Mosaico Confinado a Placenta Mosaico cromosómico: mico: Presencia de 2 o más m líneas celulares en un individuo. Los mosaicismos confinados a placenta (CPM,confined placental mosaicism) Se definen como la discrepancia entre la constitución n cromosómica mica de la placenta con los tejidos embrionarios/fetales. Fueron reportados por Kalouseck en 1983, como discrepancias numéricas entre el cariotipado de células de la placenta y el feto. 0,8-2% de los embarazos viables estudiados por biopsia de córion c presentan MCP. 0,1% o menos, en amniocentesis.

17 Mecanismos de producción n de mosaicos en vellosidades coriales Los mosaicos confinados a placenta se originan por un evento de no disyunción n temprana, que ocurren durante la embriogénesis y generan la presencia de células aneuploídes en los tejidos extraembrionarios. Rescate de una cigota trisómica. Células provenientes de un mellizo muerto.

18 Tipos de mosaicos placentarios Los mosaicos placentarios más m s comunes son: Mosaico de trisomías no comunes Mosaico de cromosomas sexuales Mosaico de trisomías comunes (13,18,21) Mosaico de marcadores Mosaico de anomalías as estructurales

19 Consecuencias del mosaicismo confinado al corion Retardo de crecimiento intrauterino Pérdida del embarazo Aumento de peso corporal Muerte intrauterina

20 Resultados que necesitan estudios complementarios (líquido amniótico o sangre fetal) Mos.T13,18,21.Alrededor.Alrededor de un 30% de ellas presentan anomalía a fetal.confirmar con LA. Anomalías as de los cromosomas sexuales en línea l pura: son genuinas (más s 95%) Mosaico de los cromosomas sexuales: : 45,X/46,XX o 45,X/46,XY son fetos normales. Confirmar con LA

21 Monosomía a X: Ante este hallazgo en preparaciones directas, sin anomalía a ecográfica en el feto, se sugiere LA, a pesar que hay fuerte evidencia que el mismo será normal. Mosaico de anomalías as estructurales: LA para confirmar

22 A M N I O C E N T E S I S MONITOREO ECOGRÁFICO

23 Estudio citogenético de LA Amniocentesis Clásica : Toma demuestra a partir de semana 16 a la 20. Cultivos de largo término. t Vía a TA. Aproximadamente ml. Aspecto (líq.claro y cristalino). Características bioquímicas.

24 Punción n transabdominal

25 Punción n transabdominal

26 Complicaciones debidas a la Amniocentesis Riesgos Fetales: Pérdida fetal 1/ ( %) dependientes de: 1) La experiencia del operador 2) Características de la muestra estudiada 3) Calidad de la evaluación ecográfica. 4) El motivo de indicación del procedimiento 5) Evolución del embarazo

27 Complicaciones debidas a la Amniocentesis Riesgos Maternos: Amnionitis 1/1000 Hemorragia abdominal Injuria de vísceras abdominales Sensibilización Rh Sangrado vaginal Pérdidas de líquido amniótico Oligoamnios Contracciones

28

29 Morfología Tipos celulares en cultivo de liquido amniotico y sus características epiteliales intermedias fibroblastos Origen Vejiga, piel fetal Mb fetal, trofoblasto Tej. conectivo fibroso Proporción 20% >70% <10% Carac. de crecimiento Pequeñas colonias Perdida de malla intercel. Líneas paralelas de célulasc Eficiencia de clonado pobre intermedia excelente Mitosis rara mod / frec frecuente Tripsinización resisten intermedia Sub cultivos Cel. multinucleadas algunas intermedia raras

30 Cuantas metafases analizar? Para cultivos tripsinizados: Analizar al menos dos cultivos primarios con técnicast de bandeo. Contar 20 metafases (10 metafases en cada frasco).

31 Interpretación n de los resultados 46,XX y 46,XY. Trisomías 13, 18, 21 y trisomías que involucran a los cromosomas sexuales son diagnostico genuino de anomalía cromosómica mica fetal. Rearreglos estructurales balanceados o desbalanceados, heredados o de novo.

32 Qué hacer cuando se detecta una anomalía a en mosaico? Un mosaico diagnosticado en un cultivo celular puede estar presente en el feto y/o tejidos extrafetales (mosaico verdadero) o ser un artefacto de laboratorio no presente en el feto (pseudomosaico). Mosaico de nivel III: hallado en al menos dos cultivos independientes. Suele corresponder a los mosaicos verdaderos. Mosaico de nivel II: hallado en un único cultivo o colonia, suele corresponder a pseudomosaicos. Mosaico nivel I: hallado en una única célula, c generalmente es un artefacto de laboratorio.

33 Si la anomalía a ha sido observada en dos cultivos independientes debe considerarse como un mosaicismo verdadero. Si la anomalía a ha sido observada en un solo cultivo:

34 Indicación Una o varias cel. en un solo cultivo con trisomia, 9, 12, 13, 14, 15,18, 20, 21 y 22. Tipo de estudio Estudio Intensivo Analizar 10 células c del 2do frasco y 20 mas del tercer frasco. Varias cel. con reorganización estructural desbalanceada. Cromosoma sexual extra. Trisomía a autosómica 1, 3, 7, 10, 11,17 y , X, o monosomias que no sean 45,X Rearreglo estructural balanceado. Estudio moderado Analizar 10 células c mas en el primer frasco donde se encontró la anomalía

35 45,X (una cel). Rearreglo estructural desbalanceado (una cel) Rearreglo estructural balanceado (una cel). Rotura cromosómica mica con perdida de brazo. Estudio estándar No realizar estudios adicionales. 20 metafases pertenecientes a dos cultivos independientes, (10 en cada uno).

36 Caso Nº1: N CENAGEM año a o 2006 Motivo: 2 AE y EMA. Muestra: VC en embarazo de 15 semanas de gestación. Feto de sexo femenino portadora de translocación balanceada. Cariotipo: 46,XX, t(1;8)(p32;p21.1). No se asocia con manifestaciones fenotipícas. der (8) 8 1 der (1)

37 Estudio parental. Cariotipo en sangre periférica. rica. Padre: 46,XY Madre: 46,XX, t(1;8)(p32;p21.1) Incremento de riesgo de tener descendencia afectada por RM y/o malformaciones del 5.5%. 8 der (8) 1 der (1)

38 Caso Nº2: N CENAGEM año a o 2006 Motivo: 2 AE del 1t e hijo fallecido malformado sin diagnostico. Estudio: Cariotipo en sangre periférica. rica. Padre:46,XY Madre: 46,XX, t(11;22)(q24;q11.2). Incremento del riesgo de tener descendencia afectada por RM y/o malformaciones del 4%. der (11) der (22) 22 11

39 Muestra: VC en embarazo de 16 semanas. Feto de sexo femenino portador de la traslocación n balanceada de origen materno. Cariotipo: 46,XX, t(11;22)(q24;q11.2)mat. No se asocia con manifestaciones fenotípicas. 22 der(22) der(11) 11

40 Conclusiones Material Vellosidad corial Líquido amniótico Semanas de gestación 10 a a 20 Riesgo de aborto 1-2% 0,5% Técnica Directa.. Cultivo de corto término (citotrofoblasto) Cultivo: : mesénquima. Cultivo a largo término

41 Mosaico confinado 0,8%-2% 0,1-0,3% 0,3% Contaminación n con células maternas: Contaminación n de la muestra Número de metafases analizadas Mosaico verdadero En cultivo:0,2% En el cultivo 12 a 15 1% 0,15-0,24% 0,24% En el cultivo 15 a 20 de # frascos 0,2%

42 Desafíos Futuros Desarrollo de técnicas t menos invasivas, más m precoces, más m s específicas y accesibles

43 MUCHAS GRACIAS

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