Título: Lesiones ligamentosas de la rodilla. Autor: Dra. Isabel Guillén y Dra. Marta Guillén. Clínica CEMTRO, Madrid

Transcripción

1 Título: Lesiones ligamentosas de la rodilla. Autor: Dra. Isabel Guillén y Dra. Marta Guillén. Clínica CEMTRO, Madrid

2 Lesiones Ligamentosas de la rodilla Ligamento lateral interno Ligamento lateral externo Ligamento cruzado anterior Ligamento cruzado posterior. Lesiones combinadas

3 HTH RI hace 5 a LCA roto agudo Inflamación xantogranul. Macrófagos. Célula gigante LCA- Prótesis Hemorragia reciente Tej. Reparativo (depósitos fibrina, trombosis vascular y tej. Granulación) Plastia T2 rota Cubierta sinovial (pannus) Foco degeneración mixomatosa Plastia T2 Necrosis y tej. deshilachado

4 HTH RD T2M a los 17 a Pérdida de haces de colágeno Calcificación multifocal ST en LCA RD H. colág.(gruesos y finos)desorg. Tricrómico de Masson (azul) HTH cadáver Estructura fina, delgada Haces colágenos finos paralelos, con fibrocitos intercalados Granulomas a cuerpo extraño Macrófagos y Cel. Gigantes multinucleadas

5 L.C.A RMN: RI 2003, Regeneración de pata de ganso, 11 años después de la plastia.

6 Tendones ST y G 2ª Cirugía con nueva toma de plastia de ST y G de la misma rodilla (Nuevamente técnica T2, 12 años después)

7 LCA Cultivo celular. Quiste de Ligamento cruzado

8 Sala Blanca o Estéril, Terapéutica.

9

10 ? RECONSTRUCCION REPARACION

11 1st ESTADÍO: ESTUDIO PILOTO DESARROLLO DE CULTIVOS CELULARES DE LCA PARA TRATAMIENTO DE SUS ROTURAS Aislamiento y cultivo de fibroblastos de biopsias de LCA 100 biopsias de LCA de pacientes intervenidos de la rodilla Edad media de 32 años Mayor crecimiento celular en lesiones agudas y en pacientes jóvenes

12 HIPOTESIS Método basado en la terapia celular para el desarrollo de Reconstrucciones del LCA tratadas con Cultivos de Fibroblastos Autólogos extraídos del LCA y sembrados en una membrana de colágeno I/III La membrada sembrada de células, se aplica en la lesión del LCA. El estudio es realizado en modelo animal: Oveja Merino

13 PROPÓSITO 1. Examinar el uso de tipos celulares para Transplante de fibroblastos autólogos 2. Examinar el uso de nuevos Biomateriales combinados con cultivos celulares para favorecer la reparación del LCA, por regeneración de nuevo tejido con adecuadas características biomecánicas

14 CARACTERÍSTICAS ANATÓMICAS LCA

15 Fibroblastos Fibrocitos Características Histológicas Células irregulares con núcleo ovalado grande. Gran capacidad de división. Pequeño tamaño, fusiforme. Núcleo elongado, oscuro. Baja capacidad de división (mature Stage)

16 ESTRATEGIAS BASADAS EN LA TERAPIA CELULAR APLICADAS A LA RECONSTITUCIÓN DE LCA DOS LINEAS DE INVESTIGACIÓN COMPLEMENTARIAS LÍNEAS CELULARES BIOMATERIALES Transportadores de células Reproduzcan las propiedades biomecánicas del LCA.

17 LCA: Matriz Extracelular Agua: principal componente. Fibras de Cólageno: Tipo I collagen (70% ) Tipo III collagen (10% ) Mucopolisacáridos: Proteoglicanos Otras proteinas: fibronectina, elastina

18 Inicio de cultivo PROTOCOLO Biopsia 1º CIRUGIA Expansión in vitro Conseguimos adecuado número de células(15 days) 2º CIRUGIA Sembramos las células en la membrana de colágeno Implantación NECROPSIA

19 MODELO ANIMAL: ovejas Merinas DISEÑO EXPERIMENTAL TAMAÑO DE LA MUESTRA : 12 anima 6: Control 6: LCA Implantado

20 PRIMERA CIRUGÍA DISEÑO EXPERIMENTAL Biopsia de LCA de rodilla Aislamos Fibroblastos y los cultivamos. SEGUNDA CIRUGIA Hacíamos la lesión y suturamos el LCA, sembramos la membrana de células y las implantamos.

21 NECROPSIA Después de 3 meses, los animales eran sacrificados. Estudio Histológico Estudio Molecular: Expresión génica de células

22 PRIMERA CIRUGÍA

23 PRIMERA CIRUGÍA Abordaje antero-lateral. Artrotomia Luxación medial de patela

24 PRIMERA CIRUGÍA Biopsia De LCA

25 Resumen del proceso Aislamiento de células por digestión enzimática. Estimar viabilidad de las células. Cultivo en DMEM + FBS Cambio de medio cada 3 días. Tripsinizacion y subcultivo a 80% de confluencia. Sembramos las células en membrana de colágeno. Implantacion (Segunda Cirugía)

26 RESULTADOS Expresión génica de las células sembradas en la membrana. Expresion β-actin RED: Fibrobalstos GREEN: Células mesenquimales BLUE, BLACK: Membrana sin células.

27 SEGUNDA CIRUGÍA Sutura Proximal y distal de LCA.

28 Cortamos el LCA

29 Grupo 1: Con Células Grupo 2: Sin células

30 Cerramos membrana

31 NECROPSIA 3 meses desde la segunda cirugía. Sacrificamos los animales. Estudio Histológico Estudio Moleculas: expresión génica de los ligamentos. Se realizaba estudio a dos servicios independientes

32 CONCLUSIONES La reconstrucción del LCA debe ser mejorada Los Fibroblastos Autólogos se pueden cultivar in vitro y sembrarse en membrana de colágeno tipo I/III El futuro está en la Terapia Celular,

33 CONCLUSIONES 1. La lesion del LCA es una lesión frecuente y grave que hace necesaria la reconstrucción quirúrgica dadas las propiedades anatómicas, fisiológicas y funcionales, siendo el resultado de la misma quien condicionara su función y por tanto la posibilidad de volver a la actividad deportiva. 2. El resultado depende a su vez más de factores relacionados con la técnica y presencia de lesiones asociadas que de parámetros clínicos y epidemiológicos. 3. Las lesiones asociadas que más contribuyen al resultado es la presencia de afectación meniscal externa y lesiones osteocondrales.

34 GRACIAS POR SU ATENCIÓN Clínica CEMTRO

35 Signo de la Diástasis (Guillén) Prof. P. Guillén García Dra. I. Guillén Vicente Dra. M. Guillén Vicente Dr. T. Fdez Jaén

36 Signo de la Diástasis en quistes primarios de Ligamento Cruzado Anterior P. Guillén, M. Leyes, R. Torres, I. Guillén

37 Epidemiología Primera descripción en 1924 Caan P Deut Zeitschr Z Chir 1924;186: Prevalencia: 0.45% en 6500 artroscopias 1% en 1710 RNM Brown. Arthroscopy 1990;6: McLaren DB, Skeletal Radiol 1992;21:

38 G.G.G. (24/1/02) Quiste entre Ligamentos Cruzados SIGNO DE LA DIASTASIS ( Guillen, 1998).

39 Etiopatogenia. Teorías. Degeneración mucinosa del tej. conectivo Herniación de tejido sinovial Traumatismo Congénito

40 Clínica La mayoría son asintomáticos Correlación con tamaño y localización Dolor en últimos grados de flexión Derrame Limitación de la movilidad- pseudobloqueo Chasquido

41 Diagnóstico RM Aumento homogéneo de la señal en T2WI Aumento de grosor de LCA Diagnóstico diferencial: Lesión menisco interno Rotura parcial de LCA Quiste poplíteo

42 G.G.G. (24/1/02) Quiste entre Ligamentos Cruzados SIGNO DE LA DIASTASIS ( Guillen, 1998).

43 Tratamiento Abstención en asintomáticos Infiltración Desbridamiento y extirpación artroscópica. Menor recidiva que extraarticulares

44 Material y Método 15 pacientes, 14 M y 1 F 8 derechos y 7 izquierdos Edad años Dolor póstero-externo Comienzo insidioso Incapacidad para ponerse de cuclillas

45 Estudio Histológico Pared fibrosa y contenido mucinoso

46 Resultados Desaparición del dolor tras Cirugía (100%) No recidivas clínicas. Seguimiento > 2 años Signo de la diástasis positivo (Guillén):100%

47 SIGNO DE LA DIASTASIS

48 Aumento de la distancia entre fémur y tibia de 3 a 5 mm

49 La colocación de la mano en el hueco poplíteo separa la superficie posterior del fémur de la de la tibia y evita la compresión del quiste entre los ligamentos cruzados y la cápsula posterior

50 GRACIAS POR SU ATENCIÓN Clínica CEMTRO