PLATELIA HSV 1+2 IgM 96 PRUEBAS DETECCIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM ANTI-HSV 1+2, EN SUERO O PLASMA HUMANO, POR MÉTODO INMUNOENZIMÁTICO

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1 PLATELIA HSV 1+2 IgM 96 PRUEBAS DETECCIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS IgM ANTI-HSV 1+2, EN SUERO O PLASMA HUMANO, POR MÉTODO INMUNOENZIMÁTICO

2 1. CAMPO DE APLICACIÓN Platelia HSV 1+2 IgM es una prueba inmunoenzimática por inmunocaptura para la detección cualitativa de anticuerpos IgM dirigidos contra el virus Herpes simplex tipo 1 y tipo 2 en suero o plasma humano. 2. INTERÉS CLÍNICO El virus Herpes simplex (HSV) es un patógeno humano común que existe en todo el mundo. Se han descrito dos subtipos serológicos de HSV: HSV-1 y HSV-2. HSV-1 se asocia principalmente con infecciones de la lengua, la boca, los labios, la faringe y los ojos; mientras que HSV-2 se asocia principalmente con las infecciones genitales y neonatales. Sin embargo, ambos tipos pueden causar infecciones genitales, y el HSV-1 es cada vez más reconocido como causa de síntomas genitales. El virus Herpes simplex se transmite mediante el contacto directo con secreciones de una persona infectada, la cual puede presentar o no los síntomas en ese momento. De hecho, la mayoría de las infecciones genitales se transmiten sin que se presenten síntomas. La infección primaria con HSV puede ocurrir a cualquier edad, afecta a recién nacidos, a niños y a adultos. Después de la primera infección, el HSV establece una latencia de por vida en los ganglios nerviosos sensoriales, causando una posterior recurrencia de los síntomas cuando el virus latente se reactiva. Las mujeres embarazadas que contraen HSV de tipo-1 o de tipo-2 durante el embarazo pueden transmitir el virus al bebé antes de que éste nazca o durante el parto. Las infecciones en el útero se asocian con aborto espontáneo y parto prematuro. El mayor riesgo de herpes neonatal es para los bebés cuyas madres contraen la infección genital en el último trimestre de embarazo. El HSV congénito y neonatal puede ocurrir con infección materna primaria o recurrente, sintomática o asintomática, y puede provocar infecciones de la piel, los ojos o la boca y daño al sistema nervioso central. En las infecciones primarias por HSV, los anticuerpos IgM aparecen generalmente entre el tercer y séptimo día tras el comienzo de los síntomas. El título de anticuerpos IgM alcanza su pico en cuatro a seis semanas y por lo general disminuye hasta niveles indetectables después de dos meses. Los anticuerpos IgM contra el HSV pueden encontrarse algunas veces en infecciones recurrentes. Sin embargo, la producción y detección de anticuerpos anti-hsv-igm en pacientes con infecciones recurrentes es menos predecible y puede asociarse con la gravedad de la infección. Los anticuerpos IgG contra HSV aparecen entre una y dos semanas después del inicio de la infección, y persisten a distintos niveles de por vida. La presencia de anticuerpos anti-hsv IgG no puede discriminar entre una infección reciente o una exposición previa ( infección tardía o reactivación ) al virus herpes simple. 34

3 En esta situación, se pueden observar anticuerpos IgM residuales y su detección no ser relevante. Sin embargo, la detección de anticuerpos HSV IgM son clínicamente importantes durante una infección reciente aguda cuando los anticuerpos HSV IgG no están todavía presentes (2). 3. PRINCIPIO Platelia HSV 1+2 IgM es una prueba que permite la detección cualitativa de los anticuerpos IgM antihsv 1+2 en suero o plasma humano mediante un método inmunoenzimático por captura de las IgM en fase sólida. Se utilizan anticuerpos anti-cadena µ humana para sensibilizar la microplaca. Se utiliza como conjugado un antígeno HSV marcado con peroxidasa. La aplicación de la prueba consta de las etapas siguientes: Etapa 1 Las muestras a estudiar, el calibrador y los controles se diluyen en proporción 1/21 y se depositan en los pocillos de la microplaca. Durante la incubación de 1 hora a 37ºC, las IgM son captadas por los anticuerpos anti-µ fijados a las cúpulas de los pocillos de la microplaca. Las IgG y el resto de las proteínas séricas son eliminadas mediante lavados al final de la incubación. Etapa 2 Se coloca el conjugado (antígeno HSV marcado con la peroxidasa) en todos los pocillos de la microplaca. Durante esta incubación de 1 hora a 37 C, si la muestra probada contiene anticuerpos IgM específicos de HSV, éstos se fijarán al conjugado. El conjugado sobrante que no se une es eliminado mediante lavados al final de la incubación. Etapa 3 La presencia de los complejos inmunes (anti-cadena µ humana / IgM antihsv / Antígeno HSV marcado con peroxidasa) que se forman eventualmente es revelada mediante la adición de una solución enzimática de revelado en cada pocillo. Etapa 4 Tras incubación a temperatura ambiente (+18-30ºC) la reacción enzimática se detiene mediante la adición de una solución de ácido sulfúrico 1N. La densidad óptica leída a 450/620 nm, interpretada en relación con un valor umbral, permite confirmar o informar de la presencia de IgM antihsv en la muestra probada. 35

4 4. COMPOSICIÓN DEL KIT Los reactivos son suministrados en cantidad suficiente para realizar 96 determinaciones. Todos los reactivos están destinados para utilizarse únicamente en el diagnóstico in vitro. Etiquetado Naturaleza de los reactivos Presentación R1 Microplate Microplaca (Lista para el uso): 12 tiras de 8 pocillos separables, sensibilizadas con anticuerpos anti-cadenas µ humanas 1 R2 R3 Concentrated Solución Concentrada de Lavado (20x) : Washing Tampón TRIS-NaCl (ph 7,4), 2% Tween 20. Solution (20x) Conservante: < 1,5% ProClin 300 Negative Control Control Negativo : Suero humano negativo a IgM antihsv, a antígeno HBs y a anticuerpos anti-vih1, anti-vih2 y anti-vhc Conservante: < 1,5% ProClin 300 R4 Calibrator Calibrador : Suero humano reactivo a las IgM antihsv, y negativo al antígeno HBs y a anticuerpos anti-vih1, anti-vih2 y anti-vhc Conservante: < 1,5% ProClin 300 R5 Positive Control Control positivo : Suero humano reactivo a las IgM antihsv, y negativo al antígeno HBs y a anticuerpos anti- VIH1, anti-vih2 y anti-vhc Conservante: < 1,5% ProClin 300 R6 Conjugate Conjugado ( Listo para el uso) : Lisado del antígeno viral y proteína gg1 HSV-1 marcada con peroxidasa. Conservante: < 1,5% ProClin 300 R7 Diluent Diluyente para muestra (Listo para el uso) : Tampón Tris-NaCl, leche, fenol rojo Conservante: < 1,5% ProClin x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 2 x 13 ml 1 x 40 ml 36

5 R9 R10 Etiqueta Naturaleza de los reactivos Presentación Chromogen Cromógeno (Listo para el uso) : 1 x 28 ml TMB tetramethylbenzidine (< 0.1%), H 2 O 2 (<1%) Stopping Solution Solución de Parada (Lista para el uso) : 1 x 28 ml Solución de ácido sulfúrico 1N Selladores de placa 4 Consultar las indicaciones que aparecen en la caja para conocer las condiciones de conservación y la fecha de caducidad de los reactivos. 5. PRECAUCIONES DE USO La calidad de los resultados depende del respeto de las siguientes Buenas Prácticas de Laboratorio: No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad. No mezclar, ni asociar durante una misma serie, reactivos procedentes de kits con números de lote diferentes. OBSERVACIÓN: Es posible utilizar otros lotes de solución de lavado (R2 identificado 20x en color verde), de cromógeno (R9 identificado TMB en color turquesa) y de solución de parada (R10 identificado 1N en color rojo) que los que se suministran en el kit, a condición de utilizar reactivos estrictamente equivalentes de un mismo y único lote en el transcurso de una misma serie. OBSERVACIÓN: Además, la Solución de Lavado (R2, identificación en la etiqueta: 20X color verde) se puede mezclar con las otras 2 soluciones de lavado incluidas en los distintos kits de reactivos de Bio-Rad (R2, identificaciones en la etiqueta : 10X color azul o 10X color naranja) cuando se reconstituyen debidamente, siempre que se use sólo una mezcla en cada tanda de pruebas. Antes de utilizar, esperar 15 minutos a que los reactivos adquieran la temperatura ambiente ( C). Reconstituir o diluir minuciosamente los reactivos, evitando cualquier contaminación. No realizar la prueba en presencia de vapores reactivos (ácidos, alcalinos, aldehídos) o de polvos que pudieran alterar la actividad enzimática del conjugado. Utilizar preferentemente material de un solo uso. En su defecto, utilizar artículos de cristal lavados y enjuagados con agua destilada. 37

6 El lavado de las microplacas es una etapa esencial de la manipulación: respetar el número de ciclos de lavado prescrito y asegurarse de que todas las microplacas se rellenan perfectamente y luego se vacían por completo. Un mal lavado puede provocar resultados incorrectos. No dejar secar la microplaca entre el final de los lavados y la distribución de los reactivos. No utilizar nunca el mismo recipiente para distribuir el conjugado y la solución reveladora. RECUERDE: El conjugado está concentrado en peroxidasa, cualquier contacto con la solución de TMB (salpicadura, derrame) podría dar reacciones falso positivos. Evitar dispensar el conjugado cerca de cualquier material (puntas, racks) que se usen en la dispensación de TMB. La reacción enzimática es muy sensible a todos los metales o iones metálicos. Por consiguiente, ningún elemento metálico debe entrar en contacto con las diferentes soluciones que contienen el conjugado o el cromógeno. El cromógeno (R9) debe ser incoloro. La aparición de un color azul indica que el reactivo no es utilizable y debe reemplazarse. Utilizar un cono de distribución nuevo para cada muestra. Comprobar la exactitud de las pipetas y el correcto funcionamiento de los aparatos utilizados. INSTRUCCIONES DE SALUD Y SEGURIDAD Los componentes de origen humano que se utilizan en la preparación de los reactivos se han sometido a tests y han resultado no reactivos para el antígeno de superficie de la hepatitis B (Ag HBs), los anticuerpos dirigidos contra el virus de la hepatitis C (anti-vhc) y los anticuerpos dirigidos contra el virus de la inmunodeficiencia humana (anti-vih1 y anti-vih2). Dado que ningún método es capaz de garantizar de manera absoluta la ausencia de agentes infecciosos, ha que considerar los reactivos de origen humano y las muestras de los pacientes como potencialmente infecciosos y manipularlos con las precauciones habituales: Considerar el material que está directamente en contacto con las muestras y los reactivos de origen humano así como las soluciones de lavado, como productos contaminados. Utilizar guantes de un solo uso para manipular reactivos y muestras. No pipetear con la boca. Evitar las salpicaduras de muestras o de soluciones que las contengan. Limpiar las superficies manchadas con lejía diluida al 10%. Si el líquido contaminante es un ácido, neutralizar previamente con bicarbonato sódico las superficies manchadas y a continuación limpiar con lejía y secar con papel absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá desecharse en un contenedor especial para desechos contaminados. 38

7 Eliminar las muestras, los reactivos de origen humano y el material y los productos contaminados después de su descontaminación: - ya sea mediante inmersión en lejía a una concentración final de 5% de hipoclorito de sodio durante 30 minutos. - o bien mediante autoclave a 121ºC durante al menos 2 horas. CUIDADO: no introducir en el autoclave soluciones que contengan hipoclorito de sodio Evitar todo contacto de los reactivos, incluidos los considerados como no peligrosos, con la piel y las mucosas. La manipulación y la eliminación de desechos químicos y biológicos deben hacerse siguiendo las Buenas Prácticas de Laboratorio. Todos los reactivos del kit están destinados a un solo uso diagnóstico in vitro. Xi - Irritante CUIDADO: Algunos reactivos contienen Proclin TM 300 < 1,5% R43: Puede causar sensibilización por contacto con la piel S28-37: Tras contacto con la piel lave inmediatamente con abundante agua y jabón. Use los guantes adecuados. 6. MUESTRAS 1. Las pruebas se realizan sobre muestras de suero o de plasma recogido sobre anticoagulante de tipo EDTA, heparina o citrato. 2. Respetar las instrucciones siguientes para la extracción, el tratamiento y la conservación de las muestras de sangre: Extraer una muestra de sangre siguiendo las prácticas en uso. Para los sueros, dejar que se forme el coágulo totalmente antes de centrifugar. Conservar los tubos cerrados. Después de la centrifugación, extraer el suero o el plasma y conservarlo en tubo cerrado. Si la prueba se realiza en el plazo de 7 días, las muestras se conservarán a +2-8 C. Si la prueba no se realiza en el plazo de 7 días, o para cualquier envío, las muestras se congelarán a -20 C (o más frío). Se recomienda no proceder a más de cinco ciclos de congelación/ descongelación. Las muestras deberán homogeneizarse minuciosamente (vórtex) después de descongelar y antes de realizar la prueba. 3. Los resultados no se ven afectados por muestras que contengan 90 g/l de albúmina o 100 mg/l de bilirrubina no conjugada, las muestras lipémicas que contengan el equivalente de 36 g/l de trioleína (triglicérido) o muestras hemolizadas que contengan 10 g/l de hemoglobina. 4. No calentar las muestras. 39

8 7. MODO DE ACTUACIÓN MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Agitador tipo vórtex. Lector de microplacas equipado con filtros 450/620 nm (*). Incubador de microplacas que admite termostato a 37 C ± 1 C (*). Sistema de lavado automático, semiautomático o manual para microplacas (*). Agua destilada o desionizada estéril. Guantes de un solo uso. Gafas de protección. Papel absorbente. Pipetas o multipipetas, automáticas o semiautomáticas, ajustables o fijas, que pueden medir de 10 µl a µl, y 1 ml, 2 ml y 10 ml. Probetas graduadas de 25 ml, 50 ml, 100 ml y ml. Hipoclorito de sodio (lejía) y bicarbonato de sodio. Contenedor de desechos contaminados. Tubos de un solo uso. (*) Para obtener una información más detallada sobre los aparatos validados por nuestros servicios técnicos, consúltennos. 7.2 RECONSTITUCION DE LOS REACTIVOS R1: Esperar a que adquiera la temperatura ambiente ( C) antes de abrir la bolsa. Sacar el soporte y volver a poner inmediatamente en la bolsa las tiras no utilizadas, comprobando que esté presente el secante. Volver a cerrar minuciosamente la bolsa y poner de nuevo a +2-8 C. R2: Diluir a 1/20 la solución R2 con agua destilada: 50 ml de R2 en 950 ml de agua destilada. Se obtiene de este modo la solución lista para usar. Tener previstos 350 ml de solución de lavado diluida para una placa entera de 12 tiras en modo de lavado manual. R3, R4, R5: Diluir a 1/21 en el diluyente (R7) (ejemplo: 15 µl R µl R7) 7.3 CONSERVACION Y VALIDEZ DE LOS REACTIVOS ABIERTOS Y/O RECONSTITUIDOS El kit debe almacenarse a +2-8 C. Cuando el kit es almacenado a +2-8 C antes de abrirlo, cada componente puede utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta externa del kit. R1: Después de abrir, las tiras conservadas correctamente de nuevo en la bolsa cerrada permanecen estables durante 8 semanas a +2-8 C (comprobar que esté presente el secante).

9 R2: Después de la dilución, la solución de lavado se conserva 2 semanas a C. Después de abrir y si no hay presencia de contaminación, la solución de lavado concentrada puede conservarse a C hasta la fec ha indicada en la etiqueta. R3, R4, R5, R6, R7: Después de abrir y si no hay presencia de contaminación, los reactivos conservados a +2-8 C son estables durante 8 semanas. R9: Después de abrir y si no hay presencia de contaminación, el reactivo conservado a +2-8 C es estable durante 8 semanas. R10: Después de abrir y si no hay presencia de contaminación, el reactivo conservado a +2-8 C es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. 7.4 MODO DE ACTUACION Seguir al pie de la letra el protocolo propuesto y aplicar las Buenas Prácticas de Laboratorio. Antes de usar, esperar a que todos los reactivos se pongan a temperatura ambiente ( C). El uso de pocillos frágiles requiere especial cuidado durante la manipulación. Utilizar el calibrador y los sueros de controles en cada dosificación para validar la calidad de la prueba. 1. Establecer cuidadosamente el plan de distribución y de identificación del calibrador, de los sueros de control y de las muestras de pacientes. 2. Preparar la solución de lavado diluida (R2) [Consultar el Capítulo 7.2]. 3. Sacar el soporte y las tiras (R1) del envase protector [Consultar el Capítulo 7.2] 4. Disolver el calibrador, los sueros de control R3, R4, R5 y las muestras de pacientes a someter a prueba (S1, S2, etc.) a 1/21 en el diluyente (R7), es decir 15 µl de muestra y 300µL de diluyente (R7) [Consultar el Capítulo 7.2]. Homogeneizar correctamente (vórtex). 5. Distribuir en cada pocillo 200 µl del calibrador, de los sueros de control y de las muestras diluidas según el esquema siguiente: A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 41

10 6. Cubrir la microplaca con una película adhesiva apoyando bien sobre toda la superficie para garantizar la estanqueidad, a continuación incubar inmediatamente la microplaca al baño maría con termostato o en una incubadora seca de microplacas durante 1 hora ± 5 minutos a 37 C ± 1 C. 7. Al final de la primera incubación, retirar el film adhesivo, aspirar el contenido de todos los pocillos en un contenido para desechos contaminados (que contienen hipoclorito de sodio) y proceder a 5 lavados con 350 µl de la solución de lavado (R2). Secar las tiras empapándolas en una hoja de papel absorbente y golpear ligeramente para eliminar la totalidad de la solución de lavado. 8. Distribuir 200 µl de la solución de trabajo del conjugado (R6) en todos los pocillos [Precaución : consultar el Capítulo 7.2]. 9. Tapar la microplaca de un film adhesivo apoyando bien sobre toda la superficie para garantizar la estanqueidad. Incubar la microplaca al baño maría con termostato o en una incubadora seca de microplacas durante 1 hora ± 5 minutos a 37 C ± 1 C. 10. Al final de la primera incubación, retirar el film adhesivo, aspirar el contenido de todos los pocillos en un contenido para desechos contaminados (que contienen hipoclorito de sodio) y proceder a 5 lavados con 350 µl de la solución de lavado (R2). Secar las tiras empapándolas en una hoja de papel absorbente y golpear ligeramente para eliminar la totalidad de la solución de lavado. 11. Distribuir rápidamente, y al abrigo de la luz viva, 200 µl del cromógeno (R9) en todas las cúpulas. Dejar la reacción desarrollarse en la oscuridad durante 30 ± 5 minutos a temperatura ambiente ( C). Durante esta incubación, no utilizar el film adhesivo. 12. Detener la reacción enzimática añadiendo 100 µl de la solución de parada (R10) en cada pocillo. Adoptar la misma secuencia y el mismo ritmo de distribución que para la solución de revelado. 13. Secar minuciosamente la parte de abajo de las placas. Leer la densidad óptica a 450/620 nm con ayuda de un lector de placas en los 30 minutos que siguen a la parada de la reacción. Las tiras deben conservarse siempre al abrigo de la luz antes de la lectura. 14. Asegurarse, antes de la transcripción de los resultados, de la concordancia entre la lectura y el plan de distribución de las placas y de las muestras. 8. CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS 8.1 CALCULO DEL VALOR UMBRAL (VU) El valor umbral VU corresponde a la media de las densidades ópticas (DO) de los duplicados del Calibrador (R4): VU = media DO R4 42

11 8.2 CALCULO DE LA RATIO DE LA MUESTRA Los resultados para una muestra dada se expresan bajo forma de una ratio con ayuda de la fórmula siguiente: Ratio Muestra = DO muestra/vu 8.3 CONTROL DE CALIDAD Analizar los resultados de DO obtenidos con el calibrador, los sueros de control en cada microplaca y para cada serie. Para validar la manipulación, hay que respetar los criterios siguientes: Valores de las densidades ópticas: - VU 0,200-0,80 x VU < DO R4 Repl.1 < 1,20 x VU - 0,80 x VU < DO R4 Repl.2 < 1,20 x VU (La DO individual de cada uno de los duplicados del Calibrador R4 no debe separarse más de 20% del valor umbral) Informes de las densidades ópticas: - Ratio R3 (DO R3 / VU) 0,60 - Ratio R5 (DO R5 / VU) 1,50 Si estos criterios no se cumplen, volver a empezar la manipulación. 8.4 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Ratio muestra Resultado Interpretación Ratio < 0,90 Negativo La muestra se considera negativa para la presencia de anticuerpos IgM antihsv 1 and 2. 0,90 Ratio < 1,10 Dudoso La muestra se considera dudosa para la presencia de anticuerpos IgM antihsv 1 and/or 2. El resultado debe ser confirmado por una nueva prueba. Ratio 1,10 Positivo La muestra se considera positiva para la presencia de anticuerpos IgM antihsv 1 and/or POSIBLES CAUSAS DE ERROR El origen de las reacciones no validadas o no reproducibles guarda a menudo en relación con las causas siguientes: Lavado insuficiente de las microplacas. Contaminación de las muestras negativas por un suero o un plasma que contenga un título elevado de anticuerpos. Contaminación puntual de la solución de revelado por agentes químicos oxidantes (lejía, iones metálicos, etc.). Contaminación puntual de la solución de parada. 43

12 9. PRESTACIONES Se evaluó Platelia HSV 1+2 IgM en 2 centros diferentes con un total de 595 muestras. Los resultados con Platelia HSV 1+2 IgM fueron comparados con los resultados obtenidos con otros ensayos EIA comercializados. 9.1 PREVALENCIA La prevalencia de anticuerpos IgM contra el Virus Herpes Simplex Tipo 1 y 2 en suero humano fue estimada utilizando un panel de 89 muestras obtenidas a partir de mujeres embarazadas. Se obtuvieron los siguientes resultados: 66 sueros negativos, 7 dudosos y 16 positivos. La prevalencia utilizando el ensayo Platelia HSV 1+2 IgM se establece en 18,0% (16/89). 9.2 ESPECIFICIDAD RELATIVA La especificidad se estimó en un total de 480 muestras: en el centro 1, un panel de 233 muestras de donantes de sangre, mujeres embarazadas, peticiones de serología de HSV y panel comercial (BBI (A) ). en el centro 2, un panel de 247 muestras de pacientes hospitalizados. En ambos centros las muestras fueron seleccionadas a partir de los resultados negativos obtenidos con un ensayo EIA comercializado y considerado aquí como referencia. Panel de muestras Negativo Dudoso (1) Positivo Especificidad Centro 1 N = Centro 2 N = Total N = ,3% (180/211) [79,8%-99,8%] 87,7% (207/236) [82,8%-91,6%] 86,6% (387/447) [83,0%-89,6%] (1) los resultados dudosos fueron excluidos para el cálculo de la especificidad [IC 95%] : Intervalo de confianza del 95%. (A) Panel de HSV con título BBI mezclado Es destacable que de los 60 sueros que se encontraron positivos con Platelia HSV 1+2 IgM, 47 fueron también positivos con Platelia HSV 1 IgG y/o Platelia HSV 2 IgG. Además, uno de los paneles BBI fué positivo con Platelia HSV 1+2 IgM y negativo con los EIA IgM comercializados y Platelia HSV 1 IgG & Platelia HSV 2 IgG se encontró positivo con 6 ensayos diferentes de IgM. 44

13 9.3 SENSIBILIDAD RELATIVA La sensibilidad se estimó en un total de 87 muestras: en el centro 1, un panel de 71 muestras de donantes de sangre, mujeres embarazadas, peticiones de serología de HSV y panel comercial (BBI (A) ). en el centro 2, un panel de 16 muestras de pacientes hospitalizados. En ambos centros las muestras fueron seleccionadas a partir de los resultados positivos obtenidos con un ensayo EIA comercializado y considerado aquí como referencia. Panel de muestras Negativo Dudoso (1) Positivo Sensibilidad Centro 1 N = Centro 2 N = Total N = ,0% (66/71) [84,3%-97,7%] 86,7% (13/15) [59,5%-98,3%] 91,9% (79/86) [84,0%-96,7%] (1) para el cálculo de la sensibilidad se excluyeron los resultados dudosos Es destacable que, de los 7 sueros que se encontraron negativos con Platelia HSV 1+2 IgM, 3 fueron positivos con Platelia HSV 1 IgG (72820) y/o Platelia HSV 2 IgG (72821). 9.4 SEROCONVERSIONES De un panel de 33 pacientes presentando seroconversión, 22 se encontraron simultaneamente positivos o dudosos con Platelia HSV 1+2 IgM y los otros EIA IgM ensayos comercializados, 7 fueron primero detectados con Platelia HSV 1+2 IgM, 3 se encontraron positivos sólo con el otro ensayo EIA IgM comercializado y 1 suero no fue detectado por ningún ensayo. 9.5 PRECISIÓN Precisión intra-análisis (repetibilidad): Con el fin de evaluar la repetibilidad intra-análisis, una muestra negativa y tres muestras positivas han sido testadas en 30 ocasiones, en una misma serie. La ratio (DO muestra /VU) se ha determinado para cada muestra. La media de la ratios, la desviación estándar (DS) y el coeficiente de variación (%CV) para cada muestra se ofrecen en el cuadro siguiente. 45

14 Precisión intra-análisis (repetibilidad) N=30 Muestra negativa Muestra positiva débil Muestra positiva fuerte Ratio (DO muestra / valor umbral) Mean 0,32 2,22 4,06 DS 0,01 0,20 0,10 % CV 2,8% 9,0% 2,4% Precisión inter-análisis (reproducibilidad): Con el fin de evaluar la reproducibilidad inter-análisis, las cuatro muestras (una negativa y tres positivas) se han evaluado cada una en duplicado, en dos series al día, durante un periodo total de 20 días. La ratio (DO muestra /VU) se ha determinado para cada muestra. La media de la ratios, la desviación estándar (DS) y el coeficiente de variación (%CV) para cada muestra se ofrecen en el cuadro siguiente. Precisión inter-análisis (reproducibilidad) N=80 Muestra negativa Muestra positiva débil Muestra positiva Muestra positiva fuerte Cociente (DO muestra / valor umbral) Mean 0,40 1,63 3,48 6,68 SD 0,09 0,12 0,22 0,43 % CV 21,9% 7,6% 6,3% 6,4% 46

15 9.6 REACTIVIDAD CRUZADA Se probaron con el ensayo Platelia HSV 1+2 IgM 129 muestras con características que podrían potencialmente dar lugar a reacciones específicas. Los resultados se presentan en la siguiente tabla: Número de muestras Número de muestras positivas HIV 10 0 CMV IgM 9 0 Rubeola IgM 10 0 EBV IgM 10 0 Toxoplasmosis IgM 9 1 Chlamydia trachomatis 10 3 VZV IgM 19 4 Sarampión IgM 10 0 Anticuerpos heterófilos (ANA) 10 0 Paperas IgM 10 3 Factor Reumatoide 10 2 HHV6 9 0 HPV 3 2 Observación : Para la evaluación de reactividad cruzada se excluyeron los resultados equívocos. Todos los resultados positivos con Platelia HSV 1+2 IgM fueron negativos con los ensayos EIA IgM comercializados. Todos los sueros positivos con Platelia HSV 1+2 IgM fueron positivos con HSV 1 y/o 2 IgG indicando un estado infeccioso de HSV excepto para 2 muestras de VZV. 47

16 10. LÍMITES DE USO Sólo puede establecerse el diagnóstico de infección por HSV basándose en una combinación de datos clínicos y biológicos. El resultado de un test simple de titulación de anticuerpos IgM anti-hsv no constituyen prueba suficiente para un diagnóstico de infección reciente por Herpes simple, debido a que IgM HSV puede estar presente también en infecciones recurrentes (2). Considerando la homología antigénica de los virus de la familia herpes, no debemos excluir posibles reacciones cruzadas entre los miembros de la familia. 11. CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad están bajo un sistema de garantía de la calidad desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización de los productos acabados. Cada lote de producto acabado es objeto de un control de calidad y sólo se comercializa si cumple con los criterios de aceptación. La documentación relativa a la producción y al control de cada lote queda en manos del fabricante. 12- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Ver la versión Inglesa. 48

17 12- REFERENCES 1. Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines MMWR 2002:51 (No. RR-6). 2. R. Morrow and D. Friedrich, Clin. Microbiol. Infect, 2006, 12 : Performance of a novel test for IgM and IgG antibodies in subjects with culture-documented genital herpes simplex virus-1 or -2 infection.

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