BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood BD Wilkins-Chalgren Agar

Transcripción

1 INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR PA Rev.: Junio de 2003 with 5% Horse Blood USO PREVISTO with 5% Horse Blood (agar BD Wilkins-Chalgren con sangre de caballo al 5%) se utiliza para el aislamiento, el cultivo y las pruebas de sensibilidad de las bacterias anaerobias estrictas. se utiliza para pruebas de sensibilidad de bacterias anaerobias estrictas. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. El medio Wilkins-Chalgren se ha descrito para las pruebas de sensibilidad de las bacterias anaerobias 1-3. Mientras que la sensibilidad de las bacterias anaerobias no debe determinarse con el método de difusión en agar (disco), se demostró que el agar Wilkins-Chalgren y el agar Wilkins-Chalgren suplementado con sangre eran medios adecuados para la determinación de la sensibilidad de anaerobios mediante el método de E test 4-8. Asimismo, se ha descrito una modificación de la prueba de difusión en disco para los anaerobios de crecimiento rápido 6. Dado que el medio Wilkins-Chalgren es semisintético y contiene suplementos tales como arginina, piruvato, hemina y vitamina K1, es adecuado para el crecimiento de numerosos anaerobios estrictos pertenecientes a diversos tipos metabólicos, incluidos Bacteroides, Prevotella, Eubacterium, Clostridium, Veillonella y otros. Por tanto, se recomienda para el aislamiento y cultivo de anaerobios estrictos Se ha observado que este medio, al utilizarse sin sangre, no favorece mucho el crecimiento de Porphyromonas y Peptostreptococcus. Por consiguiente, no se recomienda utilizar BD Wilkins- Chalgren Agar para el aislamiento primario de anaerobios estrictos a partir de muestras clínicas. with 5% Horse Blood es un medio general para el crecimiento y aislamiento de bacterias anaerobias estrictas involucradas en infecciones humanas 12,13. Las peptonas y otros compuestos contenidos en el medio base proporcionan los nutrientes y las vitaminas necesarios para los anaerobios estrictos. La sangre de caballo de BD Wilkins- Chalgren Agar with 5% Horse Blood suministra nutrientes adicionales para favorecer el crecimiento de anaerobios exigentes tales como Porphyromonas y Peptostreptococcus. REACTIVOS Fórmulas* por litro de agua purificada Digerido pancreático de caseína 10,0 g Digerido pancreático de gelatina 10,0 Extracto de levadura 5,0 Glucosa 1,0 Cloruro sódico 5,0 L-Arginina 1,0 Piruvato sódico 1,0 Hemina 0,005 Agar 15,0 Vitamina K1 0,5 mg ph 7,1 ± 0,2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. with 5% Horse Blood, además de los elementos enumerados anteriormente, contiene sangre de caballo al 5% desfibrinada. PA

2 PRECAUCIONES. Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 8 C, en su envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se almacenan en un área limpia a una temperatura de 2 8 C. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante h en una atmósfera anaerobia (por ejemplo, con el sistema anaerobio BD GasPak) a C. Cepas BD Wilkins-Chalgren Agar with 5% Horse Blood Porphyromonas levii ATCC Crecimiento de débil a bueno Bacteroides fragilis ATCC Clostridium perfringens ATCC Fusobacterium nucleatum ATCC Peptostreptococcus anaerobius ATCC Crecimiento de regular a bueno Sin inocular Ambar Rojo (de color sangre) PROCEDIMIENTO Materiales suministrados o with 5% Horse Blood, ambos suministrados en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente. Materiales no suministrados Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras with 5% Horse Blood es un medio general para el aislamiento y cultivo de anaerobios estrictos a partir de todo tipo de muestras. Emplear las técnicas aprobadas para la recogida y el transporte de muestras anaerobias 13. Se deben utilizar medios de transporte adecuados, por ejemplo, BD Port-A-Cul. fue utilizado principalmente para las pruebas de sensibilidad de anaerobios estrictos mediante el sistema E test. Este medio no se recomienda para el aislamiento primario de anaerobios estrictos a partir de muestras clínicas (véase también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Es necesario tener en cuenta que las pruebas de sensibilidad se deben realizar sólo con cultivos puros. Para las pruebas de sensibilidad, estos medios no deben inocularse directamente con la muestra clínica. Procedimiento de análisis Extender la muestra inmediatamente después de recibirla, utilizando una técnica de extensión aprobada, en with 5% Horse Blood. Inmediatamente después de PA

3 extender la muestra, colocar las placas en jarras anaerobias provistas de atmósfera anaerobia. Se recomienda utilizar jarras BD GasPak y sobres de H 2 /CO 2 BD GasPak junto con el catalizador. Incubar durante 2 3 días o más, en caso necesario, a C. Independientemente del sistema anaerobio utilizado, es importante incluir un indicador de anaerobiosis tal como el indicador anaerobio desechable BD GasPak. Si se extienden en el medio muestras con flora mixta, se recomienda incluir además medios selectivos tales como BD Schaedler Kanamycin-Vancomycin Agar with 5% Sheep Blood y/o with Amikacin and 7% Sheep Blood. Asimismo, en la muestra podrían estar presentes anaerobios facultativos. Por consiguiente, se recomienda incluir siempre un medio aerobio (tal como BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood) cuando se realizan cultivos primarios. Esta placa se incuba en atmósfera aerobia enriquecida con dióxido de carbono junto con los cultivos anaerobios 13. Permite la detección de los organismos facultativos en la muestra. Para utilizar y with 5% Horse Blood para realizar pruebas de sensibilidad anaerobias con el E test, consultar las referencias o las instrucciones del fabricante 4-8,14. Resultados Después de la incubación, se examinan las placas para determinar el crecimiento. Se consideran presuntivamente de anaerobios estrictos las colonias que aparecen en este medio si dichos organismos no crecen en placas de agar sangre incubadas en atmósfera aerobia. Se requiere un examen adicional bioquímico o al microscopio para lograr la identificación de los géneros y las especies de los anaerobios estrictos. Para leer los resultados del sistema E test obtenidos en este medio, consultar las referencias o las instrucciones del fabricante 4-8,14. CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO with 5% Horse Blood se utiliza para el aislamiento no selectivo de anaerobios estrictos a partir de muestras clínicas Este medio y BD Wilkins-Chalgren Agar también se utilizaron para pruebas de sensibilidad de anaerobios estrictos con el E test 4-8,14. Resultados de rendimiento 15 with 5% Horse Blood se evaluó internamente con aislados clínicos y cepas recogidas de las siguientes especies anaerobias estrictas (mencionadas en la tabla siguiente) y se compararon con BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood como medio de referencia: Bacteroides fragilis, B. distasonis, Prevotella bivia, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas levii, Porphyromonas gingivalis, Campylobacter (Bacteroides) gracilis, Peptostreptococcus anaerobius, Clostridium perfringens, Mobiluncus mulieris, Eggerthella lenta (Eubacterium lentum). Ambos medios se inocularon con 10 3 a 10 4 UFC por placa y se incubaron en atmósfera anaerobia durante 3,5 días. El número de colonias en el medio de prueba fue igual o superior que el registrado en el medio de referencia de la prueba para todas las cepas analizadas. Limitaciones del procedimiento Dado que y with 5% Horse Blood no son selectivos para anaerobios estrictos, también crecerán organismos facultativos. Por consiguiente, es importante comparar el resultado de los cultivos anaerobios con el de una placa incubada en atmósfera aerobia. Aunque numerosos anaerobios estrictos tales como los clostridios y el grupo Bacteroides fragilis crecen bien en, este medio no debe utilizarse para su aislamiento primario a partir de muestras clínicas. La prueba de sensibilidad con difusión en disco no debe aplicarse para las pruebas de sensibilidad de bacterias anaerobias. Consultar las excepciones en las referencias 10. PA

4 REFERENCIAS 1. Wilkins, T.D., and S. Chalgren Medium for use in antibiotic susceptibility testing of anaerobic bacteria. Antimicrob. Agents Chemother. 10: National Committee for Clinical Laboratory Standards Methods for antimicrobial susceptibility testing of anaerobic bacteria - 3 rd edition. Approved standard M11-A3. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, PA. 3. DIN : Methoden zur Empfindlichkeitsprüfung anaerober bakterieller Krankheitserreger gegen Chemotherapeutika - Agar-Dilutionsmethode und Mikro-Bouillon- Dilutionsmethode, Deutsches Institut für Normung (DIN), Berlin. 4. Appelbaum, P.C., et al Comparison of the E test and conventional agar dilution methods for susceptibility testing of Gram-negative anaerobic rods. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 18: Pierard, D., et al Use of the E test for determining antimicrobial susceptibility of anaerobic bacteria. Pathol. Biol. 44: Wüst, J., and U. Hardegger Comparison of the E test and a reference agar dilution method for susceptibility testing of anaerobic bacteria. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 11: Barbut, F., et al Antimicrobial susceptibilities and serogroups of clinical strains of Clostridium difficile isolated in France in 1991 and J. Clin. Microbiol. 43: Citron, D.M., et al Evaluation of the E test for susceptibility testing of anaerobic bacteria. J. Clin. Microbiol. 29: Spangler, S.K., et al E test for susceptibility testing of anaerobes to ß-lactams and ß- lactamase inhibitors. Proceedings from the 18 th Int. Congr. of Chemother., Recent Advances in Chemotherapy, Stockholm, Sweden, June 27 to July 2, Barry, A.L., et al Multilaboratory evaluation of an agar diffusion disk susceptibility test for rapidly growing anaerobic bacteria. Rev. Infect. Dis. 2: S210-S MacFaddin, J.F Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London 12. Atlas, R.M Handbook of Microbiological Media. CRC Press, Boca Raton, FL. USA. 13. Engelkirk, P.G. et al.: Principles and Practice of Clinical Anaerobic Bacteriology; Star Publishing Comp., Belmont, Wexler, H.M., and G.V. Doern Susceptibility testing of anaerobic bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 15. Data on File. BD Diagnostic Systems Europe. Heidelberg, Germany. ENVASE/DISPONIBILIDAD with 5% Horse Blood Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas Nº de cat Medios en placa listos para usar, 20 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com PA

5 BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès Le Pont de Claix/France Tel: Fax: BD, BD logo, Stacker, GasPak and Port-A-Cul are trademarks of Becton, Dickinson and Company ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection E test is a registered trademark of AB Biodisk, Solna, Sweden 2003 Becton, Dickinson and Company PA