Metaloproteinasas como marcadores de progresión tumoral y futuros blancos de terapias en patologías linfoides*

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1 Bioquímica Clínica Actualización Metaloproteinasas como marcadores de progresión tumoral y futuros blancos de terapias en patologías linfoides* Laura Alaniz 1, Mariana García 2, Paula Cabrera 3, Marina Cápula 4, Elida Álvarez 5, Silvia E. Hajos 6 1. Bioquímica, estudiante de doctorado de la Universidad de Buenos Aires. Ayudante de 1ra. 2. Bioquímica, estudiante de doctorado de la Universidad de Buenos Aires. Becaria UBACYT. 3. Dra. de la Universidad de Buenos Aires. Ayudante de 1ra. 4. Estudiante de bioquímica. Ayudante de 2da. 5. Dra. en Bioquímica. Investigador del CO- NICET. Prof. Adjunto. 6. Dra. en Bioquímica. Investigador del CO- NICET. Prof. Titular Plenario. * Cátedra de Inmunología, Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral (IDEHU), UBA- CONICET. Resumen En las últimas décadas la medicina evolucionó hacia un enfoque molecular en la búsqueda de blancos específicos que permitan seguir adecuadamente la progresión de las patologías neoplásicas y desarrollar terapias exitosas. El conocimiento y comprensión de que la matriz extracelular (MEC) que rodea a un tumor influye sobre el comportamiento del mismo, reveló la importancia que cumplen las metaloproteinasas (MMPs) en la regulación de los componentes de la MEC, y por lo tanto en el desarrollo tumoral. Es por ello que actualmente se está evaluando la eficacia de inhibidores sintéticos de estas enzimas en ensayos clínicos, algunos ya en fase clínica III de investigación. También se propone que estas MMPs podrían ser utilizadas como marcadores bioquímicos, permitiendo evaluar la progresión de la enfermedad en pacientes que sufren patologías neoplásicas, e incluso dar un valor pronóstico. Es en este punto en que el laboratorio de análisis clínicos cumplirá un papel fundamental y deberá contar con los conocimientos y las herramientas necesarios para evaluar la presencia y actividad de estas enzimas. En este trabajo se expone el conocimiento actual acerca de la estructura y funciones biológicas de las MMPs así como los antecedentes que muestran el papel que cumplen en las enfermedades neoplásicas, en especial en leucemias y linfomas. Palabras clave: metaloproteinasas * marcadores de progresión tumoral * blancos terapéuticos * leucemias * linfomas. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana Incorporada al Chemical Abstract Service. Código bibliográfico: ABCLDL. ISSN Summary METALLOPROTEINASES AS MARKERS OF TUMORAL PROGRESSION AND FUTURE TARGETS FOR THERAPIES IN NEOPLASMS OF LYMPHOID TISSUE In the last decades Medicine strongly evolved to a molecular focus searching for specific targets which allow to follow up appropriately the progression of neoplasic pathologies and to develop successful therapies. The knowledge and comprehension that the extracellular matrix (ECM) which surrounds the tumor cells also influences their behavior, revealed the importance of metalloproteinases (MMPs) to regulate the turnover of ECM components. Several investigations are carried out to evaluate the effectiveness

2 364 Alaniz L y col. of synthetic inhibitors of these enzymes, and some of them are in clinical phase III of investigation. It is also proposed that MMPs may be used as biochemical markers, allowing monitoring the progression of patients with neoplasic pathologies and offering prognostic value. The clinical laboratory will play an important role at this point and will need the knowledge and training to evaluate the presence and activity of these enzymes. In this work we describe the current knowledge on the structure and biological functions of MMPs as well as background that show their role in neoplasic diseases, specially concerning to leukemias and lymphomas. Key words: metaloproteinases * markers of tumoral progression * therapeutic target * leukemias * lymphomas. Introducción Los linfocitos son células que participan activamente en la respuesta inmune y por su rol en la vigilancia inmunológica poseen la capacidad intrínseca de migrar y llegar a diferentes tejidos del organismo. La infiltración de linfocitos a los órganos y tejidos requiere varias etapas, entre las cuales se encuentran la degradación focal de la membrana basal y de la matriz extracelular (MEC). Diferentes investigaciones han demostrado que las metaloproteinasas (MMPs) están involucradas en el proceso de transmigración linfocitaria desde el compartimiento vascular hacia los tejidos (1). El papel de estas enzimas en el desarrollo, invasión y metástasis de tumores sólidos ha sido bien establecido, tanto en estudios in vitro como in vivo (2-6); es por ello que se postula que también estarían involucradas en la progresión de neoplasias de origen linfoide y mieloide por lo cual serían blancos adecuados para la terapia antitumoral, o podrían ser utilizadas como marcadores bioquímicos para evaluar la progresión de la enfermedad en pacientes con estas patologías. Características estructurales y funcionales de las metaloproteinasas En el hombre las MMPs constituyen una familia de más de 21 endopeptidasas dependientes de zinc, sintetizadas como zimógenos o pro-enzimas inactivas, que se clasifican de acuerdo a sus características funcionales y estructurales. Por su funcionalidad y según el sustrato que son capaces de degradar pueden ser agrupadas en: colagenasas, gelatinasas, estromalisinas o matrilisinas (Tabla I). De acuerdo con su estructura se distinguen las que se secretan al medio extracelular en forma soluble y las que permanecen ancladas a la superficie celular como metaloproteinasas de membrana (MT-MMPs) (Figura 1). La actividad de estas enzimas está regulada tanto a nivel de la expresión como de la secreción y controlada a través de sus activadores e inhibidores, permitiendo la adecuada función en situaciones fisiológicas. Están expresadas en bajos niveles en los tejidos normales, pero se sintetizan y activan rápidamente en situaciones que requieren la remodelación de los tejidos. El contacto con componentes de la MEC, factores de crecimiento y citoquinas también influye sobre la actividad de las MMPs. Entre estos moduladores se encuentran el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), el factor de crecimiento transformante beta (TGF-β), el factor de crecimiento endotelial-vascular (VEGF) y el inductor de metaloproteinasas de matriz extracelular (EMMPRIN). La activación de la forma latente de la enzima puede iniciarse por acción de otras MMPs o serino proteasas que degradan el pro-dominio de las mismas (7). Un ejemplo de activación entre las MMPs es la activación de MMP-2 por efecto de la metaloproteinasa de membrana MT1-MMP, que parecería ser el principal mecanismo de activación de esa enzima en procesos tumorales (8). La inactivación de las MMPs se produce por medio de sus inhibidores endógenos, entre los que se halla la α2-macroglobulina, proteína abundante en plasma, que juega un rol muy importante en el clearence irreversible de MMPs; en forma similar actúa la proteína trombospondina-2. También se encuentran otros inhibidores de tipo tejido-específico denominados TIMPs (inhibidores de metaloproteinasas tisulares) que inhiben determinadas MMPs en forma reversible (7). Estas enzimas se las encuentra altamente expresadas en algunos tumores ya sea en estadios tempranos o terminales de la enfermedad. Inicialmente se les atribuyó un papel importante en la invasión y metástasis tumoral, debido a la capacidad que presentan de degradar distintos componentes de la MEC, tales como colágeno, proteoglicanos y glucoproteínas, y permitir la invasión a través de las discontinuidades de la membrana basal de distintos tejidos. Actualmente se conoce que estas enzimas cumplen múltiples funciones que favorecen la progresión tumoral debido a que participan en el crecimiento, migración y angiogénesis (9)(10). Las MMPs pueden ejercer estas funciones por clivaje

3 Metaloproteinasas y progresión tumoral 365 Tabla I.Clasificación de MMPs según sus sustratos in vivo. MMP Sustratos Matrilisina (MMP-7) Colágeno IV, gelatina,elastina, fibronectina, laminina, pro-mmp-1,-2 y -9 Colagenasa-1 (MMP-1) Colágeno, gelatina, pro-mmp-2 y -9 Colagenasa-3 (MMP-3) Colágeno I, II, III y IV, gelatina Estromalisina-1 (MMP-3) Colágeno III y IV, gelatina, proteoglicanos, fibronectina, pro-mmp-1, -7, -9 y -13 Estromalisina-2 (MMP-10) Colágeno III, IV y V, gelatina, fibronectina, pro-mmp-1 Estromalisina-3 (MMP-11) Laminina, fibronectina Gelatinasa A (MMP-2) Gelatina, colágeno, elastina, fibronectina, laminina, pro-mmp-9 y -13 Gelatinasa B (MMP-9) Gelatina, colágeno III, IV y V, fibronectina MT1-MMP (MMP-14) Pro-MMP-2 y -13, colágeno I, II y III, gelatina, elastina, fibronectina, vitronectina, proteoglicanos MT2-MMP (MMP-15) Gelatina, fibronectina, pro-mmp-2 MT3-MMP (MMP-16) Pro-MMP-2, colágeno tipo III, fibronectina * Se incluyeron las MMPs implicadas en los tumores. Compilado de referencias (9) y (41). de diversos sustratos, los cuales no sólo incluyen los componentes estructurales de la MEC, sino también proteínas que se unen a factores de crecimiento, receptores de tirosina kinasas, moléculas de adhesión celular y otras proteinasas (7). Las MMPs pueden promover el crecimiento de las células tumorales a través de varios mecanismos: por clivaje de proteínas de unión a factores de crecimiento que los mantienen inactivos, liberando de la superficie celular factores como el TGF-α, que luego pueden interactuar con su receptor e inducir señales de crecimiento, y también pueden ejercer efectos proliferativos por la capacidad que presentan de regular la composición de la MEC. Diferentes investigaciones relacionan MMP-3, MMP-7, MMP-9, MMP-11 y MMP-13 con el establecimiento y crecimiento tumoral (9)(10). Las MMPs pueden ejercer efectos antiapoptóticos dado que son capaces de clivar receptores de muerte de la superficie celular, producir la maduración de factores de sobrevida y provocar cambios en la matriz, liberando componentes capaces de interaccionar con integrinas celulares que median señales anti-apoptóticas. Dentro de las MMPs relacionadas directamente con la regulación de la angiogénesis están MMP-2, MMP-9, MMP-14 y MMP-19. Estas clivan componentes de la matriz, como colágeno tipo I, que promueve la invasión de células endoteliales; también la liberación de colágeno tipo I, IV y fibrina desde la matriz contribuye a la angiogénesis, dado que estos compuestos interaccionan con integrinas del endotelio favoreciendo la invasión y formación de nuevos vasos. Además, incrementan la biodisponibilidad de los factores pro-angiogénicos (VEGF, TGF-β, etc) que están involucrados en la neovascularización (9)(10). Se ha descripto el efecto de MMP-9 sobre la activación de TGF-β (al degradar la proteína de unión que lo mantiene inactivo) en células de carcinoma mamario promoviendo la angiogénesis e invasión (11). Zn Bisagra Pre Pro Catalítico Hemopexina Furina Fibronectina Col V GPI/Transmembrana Figura 1. Estructura proteica de MMPs. Tres dominios son comunes a todas las MMPs secretadas: el pre-dominio (es clivado durante la síntesis), el pro-dominio (es clivado durante la activación de la enzima) y el dominio catalítico. Algunas contienen un dominio hemopexina símil, en relación con la unión al sustrato. Otros dominios: glicofosfatidil inositol (GPI) y transmembrana que les permiten el anclaje en membrana celular; furina símil para la activación intracelular; de unión a sustrato (fibronectina, colágeno tipo V).

4 366 Alaniz L y col. Dado que las MMPs son capaces de degradar distintos componentes de la membrana basal y la MEC y además clivar moléculas de adhesión relacionadas con la migración celular, pueden regular la migración, invasión y metástasis tumoral. Se ha descripto que MMP-2 y MT1-MMP clivan laminina-5 (12)(13) y que MT1-MMP cliva CD44, hecho que promueve la migración celular (14)(15). Sumado a esto, MMP-3 y MMP-7 pueden liberar E-cadherina permitiendo la invasión tumoral (16). Distintas MMPs están relacionadas con la capacidad de las células tumorales de evadir el sistema inmune. En linfocitos T, MMP-9 es capaz de clivar la cadena α del receptor de IL-2, inhibiendo la proliferación de los mismos, mientras que tanto MMP-9 como MMP-11 clivan el inhibidor α1-proteinasa (α1-pi) generando un péptido que disminuye la capacidad de las células natural killer de reaccionar contra células tumorales (9). El procesamiento por parte de las MMPs de distintas quemoquinas del tipo CC y CXC puede: a) producir un aumento de sus actividades, atrayendo células inflamatorias y llevando a un estado de inflamación crónico que favorece la progresión tumoral, b) disminuir la actividad quimioatractante en los tejidos invadidos por las células tumorales impidiendo la llegada de células del sistema inmune que reaccionen contra el tumor (9-17). Por otra parte, las quemoquinas pueden estimular la expresión de las propias MMPs; como ejemplo de esto, estudios en melanomas humanos demostraron que la quemoquina IL-8 indujo la expresión de MMP-2 (18). En las enfermedades neoplásicas no sólo las células tumorales son capaces de secretar MMPs, sino también las células estromales, fibroblastos, monocitos y macrófagos. Ha sido propuesto que existe una interrelación de tipo parácrina entre la célula tumoral y las células adyacentes, por ejemplo, la expresión de MT1- MMP en la superficie de las células tumorales no sólo activa a la MMP-2 que ellas secretan sino también a la enzima liberada por las células proximales no neoplásicas (19)(20). Metaloproteinasas en modelos experimentales Numerosos estudios demuestran un papel definido de las MMPs en el desarrollo y progresión de distintos tipos de tumores tales como carcinoma mamario, pancreático, de colon, melanoma, etc. (2-6). En leucemias y linfomas el rol de estas enzimas no está totalmente aclarado aunque varias de las investigaciones realizadas sugieren que al igual que en el resto de los tumores, las MMPs también serían factores importantes que influyen en la progresión de estas enfermedades linfoproliferativas. En la última década existen publicaciones que demuestran que las MMPs están involucradas en la transmigración y extravasación de linfocitos a los tejidos donde deben cumplir con su función en la respuesta inmune por lo cual se ha postulado que los linfocitos neoplásicos podrían utilizar este mecanismo en la invasión y metástasis (21)(22). Entre las MMPs involucradas y directamente relacionadas con un fenotipo maligno en las células linfoides están las gelatinasas MMP-9, MMP-2 así como MMP-7 y MT1-MMP. Contradictoriamente, en algunos linfomas y leucemias se ha observado una sobre-expresión de TIMPs, postulando que actuarían en forma autócrina como activadores del crecimiento de las células tumorales (23)(24). Los resultados expuestos ponen en evidencia la complejidad del sistema MMPs/TIMPs. En un estudio realizado sobre dos líneas celulares derivadas de una leucemia mieloide crónica en crisis blástica y de una leucemia promielocítica aguda, la primera mostró ser más invasiva que la derivada de la leucemia promielocítica. Al analizar la expresión de MMPs, la más invasiva presentó mayor expresión de TIMP-1 y MMP-7 sugiriendo que ambas moléculas cumplirían un rol importante en la invasión de este tipo de células leucémicas (25). Cuando se utilizaron células derivadas de una leucemia T humana se encontró una elevada expresión de la colagenasa MMP-8, poniendo en evidencia por primera vez que estas células son capaces de expresar esa colagenasa que normalmente sólo es sintetizada por neutrófilos (26). Por otra parte, en células T leucémicas con diferente capacidad infiltrante se encontró que aquellas que mostraron mayor capacidad de infiltración fueron las que expresaron MMP-9 y TIMP-1 mientras que las no infiltrantes no expresaron esas moléculas (27). Resultados similares fueron demostrados en este laboratorio en líneas derivadas de un linfoma T murino con diferente capacidad migratoria, evaluada in vitro e in vivo (28). Cuando se evaluó la actividad gelatinolítica, la línea más invasiva LBLa, mostró actividad de MMP-9 en los sobrenadantes de cultivo, a diferencia de la no invasiva LBLc. Ninguna de estas líneas mostró actividad de MMP-2, sugiriendo que MMP-9 estaría en relación directa con la capacidad infiltrante de estas líneas celulares. Un trabajo realizado in vivo con una línea derivada de un linfoma T murino con alta capacidad metastática en hígado confirmó el papel importante que juega MMP-9 en la capacidad invasiva, dado que se encontró que el empleo de inhibidores específicos para MMP-9 utilizados en clínica (Ro , Ro ) redujo significativamente las metástasis en hígado, no así un inhibidor de amplio espectro (batimastat) (29). Distintos factores son capaces de estimular la expresión y secreción de las MMPs, entre ellos citoquinas y componentes de la MEC. Entre estos factores, TNF-α y

5 Metaloproteinasas y progresión tumoral 367 VEGF pueden estimular especialmente MMP-9 (30)(31). También se observó que distintos componentes de la MEC pueden modular la actividad de las MMPs a través de integrinas y moléculas de adhesión. Los componentes proteicos tales como fibronectina y vitronectrina son capaces de modular la síntesis de MMP-2, MMP-9 y MT1-MMP a través de distintos tipos de integrinas (32)(33). Otra molécula capaz de estimular la activación de las MMPs es el ácido hialurónico (AH), un glucosamino glicano ampliamente distribuido en la MEC y en la superficie celular. En este laboratorio se está investigando la modulación en la expresión de MMPs como consecuencia de la interacción entre CD44 y AH. Se pudo demostrar que en la línea celular LBLa, mencionada anteriormente, el tratamiento con AH produce un aumento en la actividad tanto de la pro-enzima como de la forma activa de MMP-9; esta estimulación estaría mediada por CD44, dado que el bloqueo con un anticuerpo anti-cd44 reduce la actividad enzimática a los valores basales (Fig. 2). Una forma de potenciar el efecto catabólico de las MMPs es mediante la localización en la superficie celular, ya sea por medio de sus dominios de unión a membrana (aquellas que lo poseen) o como en el caso de las MMPs solubles, que aún siendo secretadas al medio extracelular son capaces de permanecer ancladas en la superficie a través de distintas moléculas. En líneas celulares de carcinoma mamario y de melanoma humanos se ha demostrado que MMP-9, siendo una enzima de secreción, se asocia a la membrana celular a través de CD44 sólo luego del tratamiento previo con AH, confiriendo a las células una mayor capacidad invasiva (34). Este hecho, demostrado previamente en estos tipos de tumores, no había sido evaluado en células neoplásicas linfoides. En este laboratorio se analizó la capacidad de AH, a través de CD44, de inducir la asociación de MMP-9 a la membrana celular, demostrando que el tratamiento con AH aumentó significativamente la actividad basal de la enzima a nivel de las membranas en la línea LBLa. En forma similar a lo observado en líneas de carcinoma mamario, este efecto fue mediado por CD44 sugiriendo que las células LBLa utilizan este mecanismo para potenciar su fenotipo invasivo. La función de las MMPs en la angiogénesis en tumores linfoides se evaluó en líneas murinas derivadas de una leucemia mieloide crónica, en la que se analizaron distintos factores angiogénicos y su relación con la translocación bcr-abl. Los resultados mostraron que la secreción de MMP-9 estuvo en relación con la expresión de VEGF y que la actividad y expresión de ambas moléculas fue significativamente mayor en las líneas que expresaban la translocación. Por lo cual se postuló que en las leucemias Bcr-Abl+ no sólo VEGF sería un factor angiogénico importante sino también MMP- 9, y que ambas moléculas serían buenos blancos de futuras terapias en dichas leucemias (35). Metaloproteinasas en estudios clínicos El nivel de expresión y actividad de MMPs en líneas linfoides humanas o murinas se correlaciona con los datos obtenidos en estudios clínicos realizados sobre pacientes con distintos tipos de leucemias y linfomas. Por ejemplo, en el suero de individuos con leucemia linfocítica crónica B (B-CLL), se encontró una elevada concentración de VEGF y bfgf (factor de crecimiento fibroblástico básico) así como de MMP-9 respecto de los dadores sanos, dosados mediante la técnica de ELISA. Además confirmaron por RT-PCR, ELISA y zimografía que las células de pacientes con B-CLL expresaron y liberaron MMP-9 en mayor concentración que los linfocitos B de dadores normales. También se demostró que la expresión de VEGF moduló la secreción de MMP-9 en dichas células (36). En sueros de pacientes con leucemia T del Adulto (ATL), iniciada por el virus HTLV-1, también se observó un aumento significativo de MMP-9 en plasma, particularmente en aquellos pacientes con infiltraciones malignas, sin va- Control AH-BPM AH-APM AH-BPM AH-APM AH-APM + IM IM Control Isotipo Figura 2. Zimografía de sobrenadantes de cultivo de LBLa y LBLc. Los sobrenadantes fueron sometidos a electroforesis en geles de SDSpoliacrilamida al 10% que contenían 1 mg/ml de gelatina. Las bandas muestran actividad gelatinolítica. Líneas 1; 3; 5; 7; 9; 11: LBLa. Lineas 2; 4; 6; 8; 10; 12: LBLc. AH: ácido hialurónico; APM: alto peso molecular; BPM: bajo peso molecular, IM7.8.1: Ac. anti-cd44.

6 368 Alaniz L y col. riaciones en los niveles de MMP-2. Además se encontró que estas células ATL fueron capaces de sintetizar y secretar MMP-9, y que su incremento estaba en relación con VEGF. Esto indicaría que MMPs y factores angiogénicos (VEGF) actuarían en cooperación en la infiltración y metástasis tisular (37). Se atribuyó a MMP-9 un rol importante en la invasividad de células ATL, demostrando que la expresión de esta enzima estaría bajo la regulación de la proteína viral Tax del virus HTLV, que actuaría a través de los factores de transcripción NFkB y SP-1. Al analizar MMP-2, como en los trabajos citados previamente, no se observaron variaciones importantes en el nivel de esta enzima en suero. Esto llevó a proponer que particularmente MMP-9 podría ser utilizada como un blanco molecular para el desarrollo de estrategias terapéuticas en individuos con ATL (38). En un estudio realizado en pacientes con leucemia linfoblástica aguda (ALL) y leucemia mieloide aguda (AML) se evaluaron los niveles en medula ósea de TIMP-1, 2, MMP-2 y 9 luego del tratamiento con quimioterapia, encontrándose que después del tratamiento tanto los individuos con ALL como con AML presentaron altos niveles de TIMP-1 y 2 y bajos niveles de MMP-9 respecto del control, mientras que los niveles de MMP-2 fueron altos solamente en los pacientes con ALL. En los individuos con AML que presentaron remisión completa, los niveles de MMP-9 fueron significativamente más bajos respecto de aquellos que no presentaron remisión, permitiendo concluir que MMP-9 podría ser utilizado como marcador para el seguimiento de las AML y considerado un factor de pronóstico (39). Investigaciones realizadas sobre pacientes con AML y CML, en las que se analizó el patrón de expresión de MMPs y TIMP en células mononucleares de médula ósea, revelaron que MMP-9 se expresó y liberó constitutivamente en todos los pacientes estudiados, inclusive en dadores sanos, en cambio MMP-2 no se encontró en estos últimos ni en pacientes con CML, salvo en dos casos que evolucionaron a crisis blástica. Por el contrario, sí fue hallada en pacientes con AML, lo que indicaría que MMP-2 sería producida por las células leucémicas blásticas, sugiriendo que esta enzima podría ser considerada como un marcador de diseminación de enfermedades malignas mieloproliferativas (40). Perspectivas En vista de los antecedentes expuestos se puede concluir que tanto MMPs como sus inhibidores TIMPs forman parte de los factores que favorecen la progresión de leucemias y linfomas, no sólo porque permiten la invasión y metástasis, sino también porque están involucradas en el crecimiento, sobrevida y angiogénesis tumoral. El desarrollo de investigaciones sobre el papel de estas enzimas en leucemias y linfomas muestra que ciertas MMPs están en relación con la malignidad y capacidad invasiva de las mismas y que se repite un patrón de expresión y niveles de secreción según el tipo y el estadio de progresión del tumor. Por lo tanto, esto debe ser tomado en cuenta al momento de desarrollar terapias que inhiban la acción de estas enzimas para lograr el éxito de las mismas, así como para utilizar a las MMPs como marcadores pronóstico de la evolución de la enfermedad, hecho que permitirá finalmente aplicar la terapia correcta según el paciente, de acuerdo al estadio de iniciación, remisión o terminal de la enfermedad. Los conceptos expuestos ponen en evidencia la importancia de determinar la presencia y actividad de estas MMPs en suero u otro material biológico, como médula ósea, para el pronóstico y seguimiento de pacientes que sufren de estas afecciones neoplásicas. Además, el uso en clínica de inhibidores de MMPs requerirá un análisis bioquímico adecuado que demuestre la eficacia de los mismos en los pacientes tratados. Ello significa que el laboratorio de análisis clínicos deberá incrementar sus conocimientos acerca de estas enzimas y metodologías (técnicas de enzimoinmunoanálisis, inmunohistoquímicas, biología molecular) que permitan su detección y cuantificación en forma rápida y eficiente. CORRESPONDENCIA LAURA ALANIZ Cátedra de Inmunología, Facultad de Farmacia y Bioquímica (UBA) Junín 956, 4to piso 1113 CIUDAD DE BUENOS AIRES, Argentina laualaniz@ffyb.uba.ar AGRADECIMIENTOS Este trabajo fue realizado con parte del Subsidio B081 otorgado por UBACYT. Referencias bibliográficas 1. Goetzl EJ, Banda MJ, Leppert D. Matrix metalloproteinases in immunity. J Immunol 1996; 156: Hofmann UB, Westphal JR, Van Muijen GN, Ruiter DJ. Matrix metalloproteinases in human melanoma. J Invest Dermatol 2000; 115: Yang W, Ari S, Gorrin-Rivas MJ, Mori A, Onodera H, Imamura M. Human macrophage metalloelastase gene expression in colorectal carcinoma and its clinicopathologic significance. Cancer 2001; 91: Belien AT, Paganetti PA, Schwab ME. Membrane-type 1 matrix metalloprotease (MT1-MMP) enables invasive migration of glioma cells in central nervous system white matter. J Cell Biol 1999; 144 (2):

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