Steeps needed to move forward in Spain

Transcripción

1 Steeps needed to move forward in Spain 3rd European Symposium in rare anaemias Dra. Ana Villegas Presidente grupo español estudio Talasemias y hemoglobinopatias Eritropatología 19 Noviembre 2010

2 Steeps needed to move forward in Spain Estudios epidemiológicos Diagnóstico de talasemias Consejo genético Diagnóstico prenatal Manejo terapéutico de las talasemias

3 Talasemias Disminución o ausencia de síntesis de una o mas cadenas de globina Hemoglobinopatias Estructurales Síntesis de una cadena estructuralmente anormal. Variantes de Hb normal

4 talasemia x 10 6 portadores de β-talasemia nuevos casos/año 250 x 10 6 α + talasemia 26 x 10 6 α 0 talasemia

5 Datos epidemiológicos en España Talasemias Incidencia β-talasemia 0,2 2% Incidencia α-talasemia 4,79% * α + talasemia 4,49% α 0 talasemia 0,29% ααα genes 0,72% *determinado mediante biología molecular Baiget M. Biol Clin Hematol 1981;251:8-10 *Sanchez J Tesis Doctoral Madrid 1997 Martin Nuñez G Sangre 1995;40: Oliva E Med Clin 1998;110:361-4 *Villegas A Hematologica 1998;83:99-103

6 Datos epidemiológicos en España Hemoglobinopatias estructurales Incidencia 0,77% HPLC variant * 1,08% HPLC fase reversa (cadenas de globina)* 1,47% HPLC variant** Población española no Hb S, C, D * Gonzalez AF Haematologica 2002;87: ** Mañu M Med Clin 2006;126(8)181-5 * Joyanes B Med Clin 2006;126(8)290-2

7 Talasemias α talasemia β talasemia δβ talasemia γδβtalasemia εγδβ talasemia δ talasemia γ talasemia hemoglobinopatías estructurales con fenotipo talasémico

8 Talasemias Talasemia mayor Talasemia minor Talasemia intermedia Talasemia silente

9 TIPOS DE α-talasemias Y BASE MOLECULAR Tipo de lesión Genotipo Fenotipo Deleción Talasemia α + heterocigota Talasemia α 0 heterocigota Talasemia α + homocigota Enfermedad de la HbH Hidropesia fetal por Hb Bart (α 0 -talasemia homocigota) No deleción -α/αα --/αα -α/- α -α/-- --/-- Portador silente Rasgo talasémico Rasgo talasémico Enfermedad de la HbH Hidropesía fetal por Hb Bart

10 Diagnóstico de la talasemia Cómo? 1º nivel de sospecha (clínica, hematimetria, frotis SP) 2º nivel presunción (EEF, Hb A2, Hb F, Hb H, Hb Bart, cuerpos de inclusión) 3º nivel de confirmación molecular

11 Tratamiento de soporte Complicaciones Transfusión leucoeplección tests virales Sobrecarga férrica deferoxamina deferiprona deferasirox Endocrinopatas tto hormonal sustitutivo Osteoporosis bifosfonatos vitamina D Tratamiento curativo Traspalnte de progenitores médula ósea cordon umbilical no relacionado no mieloablativo trasmisión de infecciones expansión ósea hipopituitarismo hiperpigmentación hipotiroidismo hipoparatiroidismo hipertensión pulmonar y embolismo miocardiopatía trombosis venosa hemosiderosis y cirrosis hepática hemopoyesis extramedular esplenomegalia Tratamiento experimental eritropoyetina moduladores de Hb F (hidroxiurea, butiratos) antioxidantes Tratamiento futuro Terapia génica diabetes mellitus artropatía Retraso puberal hipogonadismo osteoporosis baja estatura

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13 ANEMIA Microcítica (VCM<80fl) (HCM<27pg) Historia familiar, raza,edad,sexo gestación, sangrado. Ferritina,Sideremia, TBIC, IST. Ferritina N o, Sideremia N o, TBIC N. Ferritina, Sideremia, TBIC. Ferritina N o, Sideremia N o, TBIC. Ferritina, Sideremia N o, TBIC N. Talasemia Ferropenia Enf. crónica A sideroblástica Estudio de hemoglobinas Estudio de causa digestivo, ginecológico Signos de E:C: VSG, rouleaux, neutrofilia, linfopenia, albumina MO: hemosiderina sideriblastos en anillo Consejo genético Tratamiento Diagnóstico enf. de base Investigar causa

14 Hematimetría RBC (10 12 /L) Hb (g/dl) Hto (%) VCM (fl) HCM (pg) CHCM (g/dl) RDW (%) β + β 0 β + β 0 β + β 0 β + β 0 β + β 0 β + β 0 β + β 0 Media 5,7 5,6 12,3 11,4 37,2 34,8 65,1 61,9 21,5 20,2 33,1 32,7 15,1 15,8 D.E 0,7 0,7 1,3 1,3 4,0 3,9 5,7 5,1 1,8 2,3 1,0 1,2 3,8 2,1 V. Mínimo 3,9 3,4 8,5 7,8 26,0 22,0 56,3 32,9 18,4 2,0 30,7 30,1 12,4 13,6 V. Máximo 7,3 7,9 15,7 16,2 47,2 48,4 82,0 78,4 27,0 27,2 35,4 36,5 36,9 29,4 Rango 3,4 4,5 7,2 8,4 21,2 26,4 25,7 45,5 8,6 25,2 4,7 6,4 24,5 15,8 C.V 12,3 12,5 10,6 11,4 10,7 11,2 8,7 8,2 8,4 11,4 3,0 3,7 25,2 13,3 E.E.M 0,1 0,05 0,2 0,1 0,6 0,3 0,9 0,4 0,3 0,2 0,2 0,1 0,6 0,2 P 0,258 0,000 0,001 0,001 0,001 0,083 0,162

15 β-talasemia heterocigota Hb A2: >3,5% Microcolumna; EEF y elución; HPLC; EEF capilar

16 alfa-talasemia VCM (fl) Nº casos: 76 74,2 75,9 70,2 69,2 67,7 68,2 65,9 63,9 61,3 61,7 61,1 -a/aa -a/-a --/aa -a/ hombres mujeres niños

17 alfa-talasemia HCM (pg) ,1 25,8 26,5 23,3 23,9 22,2 22,8 21,3 21,5 19,6 18,5 19,5 hombres mujeres niños Nº casos: -a/aa -a/-a --/aa -a/

18 Aplicaciones de la Biología Molecular al Diagnóstico de las Talasemias

19 Estudio molecular (β-talasemia) PCR-ARMS CD39 (C T)

20 Estudio molecular (α-talasemia deleción) : -α 3.7 /αα 2: ααα 3.7 /αα 3: -α 3.7 /-α 3.7 4: αα/αα Southern blot, con las endonucleasa de restricción Bam HI y sonda α (1,5 Kb. Pst I).

21 Estudio molecular (α-talasemia delecion) 5,46 3,7 = 1,76 kb Directo 1,76 kb Reverso normal Reverso Mutado Ψα 1 α 2 α 1 3,7 kb PCR-gap φ M N M N M N 1,76 kb

22 Estudio molecular (α-talasemia no delecion) PCR-RFLP (Hph y Nco I) C8: 5 -GAGCCTGGCCAAACCATCAC-3 / C3: 5 -CCATTGTTGGCACATTCCGG-3 φ bp - * * * * * * * 1094 bp bp bp bp * * * * α Nco α/αα α Nco α/α Nco α α Hph α/αα α Hph α/α Hph α Codon iniciación (α Nco α): ATG ACG IVS-1 (-5 nt) donador (α Hph α): GGTGAGGCT GGCT

23 Utilidad de la biología molecular en el estudio de las talasemias Esencial en el diagnóstico de la α talasemia Diagnóstico con expresión severa de β- talasemia Asociación β-talasemia y hemoglobinopatias estructurales Asociaciones de α y β talasemia Permitir un consejo genético adecuado Indispensable para realizar el diagnóstico prenatal y preimplantación

24 Diagnostico Prenatal Enero 1996-Abril 2008 Mayo 2008-Octubre 2010 Total Dx. prenatales Procedencia Españoles β T /β T 23 (63,9%) 9 (42,8%) Marroquíes β T /β T 4 (11,1%) Sub-saharianos β S /β S 9 (25%) 12 (57,0%) Cuándo pidieron asesoramiento genético? Antes del embarazo Durante el embarazo 1 Resultados β T /β T 4 2 β S /β S 2 3

25 Agradecimientos Fernando Ataúlfo González Paloma Ropero Lara Vinuesa Félix de la Fuente Jorge Martínez Personal del Laboratorio Grupo Español de Eritropatología de la SEHH