Mini curso: Sífilis y Chagas. Octubre, Lima Perú Amadeo Sáez-Alquezar
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- Esperanza Pereyra Aguirre
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1 Mini curso: Sífilis y Chagas Octubre, Lima Perú Amadeo Sáez-Alquezar
2 Enfermedad infecciosa causada por el Treponema pallidum Enfermedad sexualmente transmisible Índices crecientes de incidencia o En nivel mundial SÍFILIS Incidencia creciente de sífilis congénita
3 Distribución de la Sífilis en el Mundo milhões 4 milhões 4 milhões
4 Sífilis Formas de Transmisión Contacto sexual Transplacentaria Sangre
5 Sífilis Formas de Transmisión Se transmite a través de la piel lesionada o de las membranas mucosas. La transmisión ocurre con mayor frecuencia por contacto sexual. La sífilis afecta principalmente adultos sexualmente activos entre 20 y 29 años de edad. Puede ocurrir transmisión vertical de las madres infectadas a los recién nacidos: Sífilis congénita.
6 SÍFILIS Curso de la enfermedad FASES DURACIÓN MANIFESTACIONES INCUBACIÓN 2 3 semanas Silencioso SÍFILIS PRIMARIA 1-3 semanas Cancro, pústulas SÍFILIS SECUNDARIA 3 meses SÍFILIS LATENTE 2 12 meses Asintomático SÍFILIS TARDIA 1 4 años Sistémicas, erupciones en la piel Lesiones cardiológicas y mentales
7 Sífilis Congénita A pesar de que esta enfermedad puede ser curada con antibióticos si detectada prematuramente, las crecientes tasas de sífilis entre mujeres embarazadas en los Estados Unidos han llevado a un aumento del número de bebes nacidos con sífilis congénita CDC
8 FASES SÍFILIS CONGÉNITA Transmitida por madres no tratadas o tratadas inadecuadamente INCUBACIÓN DURACIÓN 2 3 semanas TASA DE TRANSMISIÓN SÍFILIS PRIMARIA 1-3 semanas >70% SÍFILIS SECUNDARIA 3 meses >70% SÍFILIS LATENTE 2 12 meses 10% -30% SÍFILIS TARDIA 1 4 años 10% - 30%
9 Sífilis Congénita Irritabilidad Atraso en el desarrollo Fiebre inespecífica Anomalías óseas y en la dentición Comprometimiento neurológico Ceguera Sordez TAMIZAJE OBLIGATÓRIO EN EMBARAZADAS
10 TAMIZAJE SEROLÓGICO PARA SÍFILIS EN DONANTES DE SANGRE Início em 1950 Ningún caso de sífilis pos-transfusional desde 1966
11 TAMIZAJE SEROLÓGICO PARA SÍFILIS EN DONANTES DE SANGRE Se considera que el T.pallidum pierde la viabilidad en bolsas de sangre conteniendo citrato y almacenadas entre 4º y 8º C. Fue usado, sin suceso, como marcador indirecto para la infección por el HIV en donantes de sangre. No se confirmo el DNA del T.pallidum en muestras positivas confirmadas para sífilis de donantes de sangre.
12 TAMIZAJE SEROLÓGICO PARA SÍFILIS EN DONANTES DE SANGRE PLAQUETAS Mayor riesgo de transmisión MENOR PLAZO PARA QUE SEÁN UTILIZADAS CONCENTRACIÓN MÁS BAJA DE CITRATO TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO: 22º C
13 Pruebas para Sífilis en Donantes de Sangre Sífilis es un indicador de PROMISCUIDAD SEXUAL y refleja un perfil de riesgo por parte del donante. Es un marcador de las conductas asociadas a enfermedades sexualmente transmisibles (EST) Es un indicador de alto riesgo para enfermedades de transmisión sexual como Hepatitis B y HIV Se estima que en un contacto sexual con HIV, las personas que tienen EST poseen 5 X más riesgo de infectarse. (
14 Diagnóstico Pruebas directas Pruebas indirectas
15 Pruebas Directas RIT (Rabitt Infectivity Test) Única prueba para aislar y multiplicar el T.pallidum; Más sensible; lenta (3 9 meses); no se aplica para el diagnóstico Microscopia directa Examen directo en campo oscuro; técnicos bien entrenados; Práctico para uso en el consultorio; Fluorescéncia directa Ac marcados y lectura con fluorescencia; Muy sensible y específico; PCR (Polymerase Chain Reaction)
16 Pruebas Indirectas para diagnóstico de Sífilis 1- Pruebas No-Treponémicas (Reagínicas)* Mezcla antigénica estándar: Cardiolipina colesterol - lecitina Respuesta a la destrucción de tejidos aguda o crónica Detecta Reaginas que no son específicas para Sífilis Títulos: Útiles para el seguimiento terapéutico 2- Pruebas Treponémicas Detectan anticuerpos específicos contra el T.pallidum Anti T.pallidum (IgG e IgM) (*) o Cardiolipínicas o de Floculación
17 Pruebas serológicas indirectas TPHA ELISA / CLIA PRUEBAS TREPONÉMICAS Hematies sensibilizados com Ag rec o Lys IgG + IgM o solo IgM FTA abs (IFI) Prueba de referencia (?) Western Blot (WB) Pruebas Rápidas VDRL USR TRUST RPR TmpA; Tmp37; Tmp17; Tmp15. Inmunocromatografia PRUEBAS NO-TREPONÉMICAS Venereal Deseases Research Laboratory Unheated Serum Reagin Toluidine Red Unheated Serum Test Rapid Plasma Reagin
18 Pruebas de floculación* Composición antigénica PRUEBAS VDRL RPR COMPOSICIÓN ANTIGÉNICA Cardiolipina (0,03%) Colesterol (0,9%) Lecitina (0,21 ± 0,1%) Cardiolipina; colesterol; lecitina; Cloruro de colina para eliminar la necesidad de inactivación de la muestra EDTA para aumentar la estabilidad de la suspensión antigénica Carbón para permitir la lectura visual (*): Reagínicas o No treponémicas
19 Pruebas Reagínicas o No-Treponémicas
20 Sífilis Pruebas Cardiolipínicas Testes Cualitativos o Suero puro (1/1) y (1/10) pro-zona Testes Cuantitativos o Diluciones dobladas a partir de 1/2
21 Sífilis Testes Cardiolipínicos Principales características o Bajo costo. o Procedimiento manual. o Detectan infección activa o Sirven para acompañar el tratamiento o Dificultad de interpretación (lectura visual) o RFP Otras enfermedades; embarazadas; reciénvacunados. o RFN Sífilis latente o tardía, no tratados, Pro zona
22 Falso-Positivos en testes No-Treponémicos o Hepatitis aguda o Mononucleosis infecciosa o Neumonías virales o Malaria o Vacunaciones o Varicela o Sarampión o Otras infecciones o Embarazo 1r semestre o TB (Tuberculosis) o Linfomas Endocarditis Errores técnicos Enfermedades del tejido conjuntivo Enfermedades autoinmunes Defecto en la producción de inmunoglobulinas Adictos en drogas Edad avanzada Lepra Enfermedades malignas
23 Sífilis Pruebas Treponémicas Lectura con instrumentos Costo más elevado que el de las pruebas cardiolipínicas. Puede aumentar el % de descarte, debido a resultados por cicatriz serológica. Testes inmunológicamente más específicos. Detectan anticuerpos anti-t.pallidum
24 % de Reactividad en distintas fases Pacientes No tratados PRUEBAS PRIMARIA SECUNDARIA LATENTE TARDIA VDRL/RPR FTA abs TPHA ELISA ELISA IgM Jorjelina Blejer et al, 2008
25 % de Reactividad en distintas fases Pacientes Tratados PRUEBA PRIMARIA SECUNDARIA LATENTE TARDIA VDRL/RPR 23,5 14,3 33,3 36,8 FTA abs 88,2 85,7 77,8 100 TPHA 94,1 90, ELISA 94,1 90,25 94,5 100 Jorjelina Blejer et al, 2008
26 Algoritmo de Tamizaje en donantes (1) Teste No-Treponémico VDRL/RPR REACTIVO NO-REACTIVO RFP; Casos tratados, no se detectan; Dilución para evitar el fenómeno de Pro zona; Confirmar los resultados;
27 Algoritmo de Tamizaje en donantes (2) Treponémico TESTES No-Treponémico COMENTARIOS NR NR Negativo para Ac anti-t.pallidum R NR RFP o Sífilis tratada o sífilis no tratada tardía NR R RFP o Sífilis tratada o Sífilis primaria R R Sífilis no trata (en cualquier fase)
28 Tamizaje serológico para sífilis en donantes de sangre - Consideraciones DESCARTE EN EL TAMIZAJE SEROLÓGICO PARA SÍFILIS ELISA + RPR/VDRL RPR/VDRL BANCO 1 1,14% BANCO 2 1,28% BANCO 3 0,23% BANCO 4 0,33% Las pruebas por ELISA o CLIA deben contener Como fracciones antigénicas: p15, p17 y p47 p15 p17 p47 and/or p15 p17 p47
29 ESTUDIO EM DONANTES DE SANGRE Pruebas N0-Treponémicas Tabela nº 3. Títulos observados em 20 amostras para os trestes não treponêmicos. VDRL RPR Amostras Laborclin Wiener (USR) Wama (USR) Laborclin Bras (USR) Laborclin (TRUST) Wama 1 1/4 1/32 1/8 1/8 1/2 1/4 2 1/2 1/4 1/2 Reagente Reagente 1/2 3 1/2 1/4 1/2 1/2 1/4 1/2 4 NR 1/8 1/8 1/4 1/2 1/2 5 1/2 1/2 1/2 1/1 NR NR 6 1/1 1/1 1/1 1/1 NR NR 7 1/2 1/2 1/1 1/1 NR NR 8 1/1 1/1 1/1 1/1 NR NR 9 NR 1/1 1/1 1/1 NR NR 10 1/1 1/2 NR NR NR NR 11 1/1 NR NR NR NR NR 12 1/1 NR NR NR NR NR 13 1/1 NR NR NR NR NR 14 1/1 NR NR NR NR NR 15 1/1 NR NR NR NR NR 16 1/1 NR NR NR NR NR 17 NR NR NR 1/1 NR NR 18 NR NR NR 1/1 NR NR 19 NR 1/1 NR NR NR NR 20 NR NR NR NR 1/1 NR Total NR: Não Reagente Reagente: Material insuficiente para titulação Sáez-Alquezar A, et al. Rev Patol Trop. 2007; 36(3):
30 Algoritmo utilizado para confirmar muestras repetidamente reactivas por un ELISA (IgG+IgM) Sáez-Alquezar, A Rev. Patol. Tropical Vol. 36 (3): set.-dez. 2007
31 Normativa Nº (30 /12/2011) MS/Brasil Metodologías no-treponémicas: VDRL RPR USR TRUST Nuevas metodologías registradas en el MS.
32 Normativa Nº (30 /12/2011) MS/Brasil Metodologías treponémicas: o Ensayo inmunoenzimático - ELISA/EIA; o Ensayo inmunológico quimioluminescente (CLIA) y sus derivaciones - ECLIA; o Inmunofluorescéncia indirecta - FTA-Abs; o Aglutinación y hemaglutinación (TPPA, TPHA, MHATP); o Inmunocromatografía - teste rápido; o Western blot - WB; o Nuevas metodologías registradas en el MS.
33 Muestras para detección de sífilis Suero Plasma Sangre total Liquido cefalorraquídeo O recolectadas en papel filtro o p/ test treponémico; si reactivo: o Nueva muestra de sangre venoso para test no-treponémico o Papel filtro especificado por el fabricante
34 Neurosifilis Para detección en laboratorio de neurosífilis se recomienda el uso de testes no-treponémicos que tengan indicación del fabricante para muestras de LCR. También es permitido el uso del FTA abs para pesquisar neurosífilis como metodología treponémica.
35 Normativa Nº (30 /12/2011) MS/Brasil TEST 1: NO-TREPONÉMICO o Sin dilución y con dilución 1/8 TEST 2: TREPONÉMICO TEST 3: TREPONÉMICO o Con metodología diferente del T2
36 Muestra de suero 1-No-Treponémico Resultado POS 2-Treponémico Resultado NEG NEG Muestra No Reactiva Muestra No Reactiva 3-Treponémico con metodología distinta del 2-Treponémico 1-No-Treponémico puro y dilución 1/8 Si hay sospecha clínica y/o epidemiológica de infección Por T.pallidum, solicitar nueva muestra en hasta 21 días Reportar los resultados obtenidos en las etapas: 1ª, 2ª, 3ª. POS/IND 3-Treponémico* Neg o Pos*
37 Normativa Nº (30 /12/2011) MS/Brasil TESTE 1: TREPONÉMICO TESTE 2: NO-TREPONÉMICO o Sin dilución y con dilución 1/8 TESTE 3: TREPONÉMICO o Con metodología diferente del T1
38 Muestra de suero 1-Treponémico Resultado POS 2-No-Treponémico NEG Muestra No Reactiva* 3-Treponémico con metodología distinta del 1-Treponémico 2-No-Treponémico puro y dilución 1/8 Si hay sospecha clínica y/o epidemiológica de infección Por T.pallidum, solicitar nueva muestra en hasta 21 días Resultado NEG Muestra No Reactiva* Reportar los resultados obtenidos en las etapas: 1ª, 2ª, 3ª. POS/IND 3-Treponémico* Neg o Pos*
39 Resultado El resultado del laboratorio indica el estado serológico del individuo y debe ser asociado a su historia clínica y/o epidemiológica"
40 Prueba Rápida Treponémica en situaciones especiales La detección de sífilis utilizando prueba rápida treponémica en situaciones especiales será realizada, exclusivamente, con testes rápidos que estén registrados y evaluados por el MS.
41 Prueba Rápida Treponémica en situaciones especiales a) Localidades y servicios de salud sin infraestructura de laboratorio o regiones de difícil acceso; b) CTA - Centro de Testeo y orientación; c) Grupos de la población más vulnerables a las EST, de acuerdo con la situación epidemiológica local; d) Población indígena; e) Embarazadas y sus parejas en unidades de atendimiento básico de salud,
42 Pruebas Rápidas El Resultado deberá incluir las siguientes observaciones: "Una muestra de sangre venoso deberá ser recolectada, inmediatamente, para realizar el algoritmo Laboratorial de la Sífilis." El resultado de laboratorio indica el estado serológico del individuo y debe ser asociado a su historia clínica y/o epidemiológica". PORTARIA Nº 3.242
43 Pruebas serológicas: Interpretación ELISA/CLIA/ TPHA/FTA Negativo VDRL/RPR Negativo Interpretación Ausencia de infección Periodo de incubación Positivo Positivo Sífilis reciente o anterior Positivo Negativo Sífilis primaria o latente Previamente tratada o no tratada (*) (*): Si hay sospecha clínica y/o epidemiológica de infección por el T.pallidum, solicitar nueva muestra en hasta 21 días
44 Distribución de Testes Rápidos para Sífilis em Brasil (
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48 POC Treponémico y No Treponémico Clin Infect Dis Jul 15;61(2):
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50 Enfermedad de Chagas American Trypanosomiasis Carlos Chagas (1909) Trypanosoma cruzi
51 Mecanismos de transmisión del T. cruzi Vectorial Silvestre Domiciliar Peri domiciliar Transfusión sanguínea Trasplante de órganos Congénita Por vía oral (alimentos: caña de azúcar, açaí) Accidentes en laboratorio
52 PERIODOS DE INCUBACIÓN Transmisión vectorial: 4 15 días Transmisión transfusional: días... Transmisión oral: 3 22 días
53 Enfermedad de Chagas en la América Latina - actualización epidemiológica con estimativas de 2010 Población N o estimado de personas infectadas por elt.cruzi N o anual de nuevos casos por transmisión vectorial Mujeres (15 44 años) infectadas por el T.cruzi N o anual de casos de infección congénita Incidencia vectorial/congénita 0,0050 / 0,089 Prevalencia en donantes de sangre 0,931 Población en riesgo para infección por el T.cruzi Weekly epidemiological record. No.6, 2015, 90, 33-40
54 Migración desde las áreas endémicas Migración Países Endémicos RIESGO DE TRANSMISIÓN POR TRANSFUSIÓN SANGUINEA TRASPLANTE DE ÓRGANOS Y TRANSMISIÓN CONGÉNITA EN PAÍSES NO ENDÉMICOS.
55 Individuos infectados por T. cruzi en Europa
56 Fases Clínicas y Formas de la Enfermedad de Chagas Fase Aguda Forma Asintomática Forma Moderada Forma Severa Forma Congénita Aborto Prematuros Lesiones Orgánicas Fase Crónica Forma Indeterminada Forma Cardíaca Forma Digestiva Forma Cardíaca e digestiva Forma Neuroautonomica Formas en inmunodeprimidos Parasitemia evidente Lesiones del sistema Nervioso central Miocarditis difusa y meningoencefalitis
57 Pruebas de laboratorio para el diagnóstico de la infección por T. cruzi
58 Pruebas parasitológicas Dependen de la presencia de parásitos circulantes Directos o Cuando se sospecha de fase aguda, independientemente del mecanismo de transmisión. o Requieren profesionales bien entrenados. Indirectos (Xenodiagnóstico, Hemocultivo y PCR) o Valor real cuando el resultado es positivo o Limitaciones técnicas o PCR: alta sensibilidad Detección de infección en el Chagas Congénito
59 Pruebas Parasitológicas Indirectas Técnicas Resultados Positivos em la forma crónica de la infección por T.cruzi (%) Xenodiagnóstico 9,0 87,5 Hemocultivo 0 94 PCR 3,8-100 Portela-Lindoso AABP and Shikanay-Yasuda MA, Rev Saúde Pública 37(1): , 2003.
60 Técnica del Micro hematocrito (MHT) Niños menores de 7 meses Criterio: Identificar el parásito Prueba parasitológica directo Positiva Freilij H, et al. J.Clin. Microbiol. 18(2): (1983)
61 PCR x MH >90% de las madres infectadas: 10 parásitos / ml 76% de los recién nacidos: parásitos / ml Capacidad de detección PCR: hasta 2 parásitos / ml MHT: 40 parásitos / ml Virreira H et al. (2007) Am. J. Trop. Med. Hyg 77(1):
62 Aplicación de la prueba de PCR Aunque la técnica de PCR sea la más sensible para la detección precoz en recién nacidos infectados por T.cruzi, no se recomienda para uso en los sistemas públicos de salud de Países Endémicos por no estar disponible en el escenario del atendimiento primario. La técnica de PCR quedaría reservada para Centros Especializados Russomando et al, (2010) Expert. Rev. Mol. Diagn. 10(6)
63 Serología para la infección por T.cruzi Pruebas convencionales o ELISA, HAI, IFI Pruebas convencionales modificadas o ELISA Antígenos recombinantes / PS o CLIA Antígenos recombinantes Pruebas no-convencionales o Testes rápidos Pruebas complementarias o RIPA, WB, IB (TESA Blot)
64 Pruebas Serológicas: Importancia para el Diagnóstico de la Infección por T.cruzi Para Tamizaje o Donantes de sangre, órganos y tejidos o Prevención del Chagas Congénito Identificar las madres infectadas Para diagnóstico Para seguimiento pos-tratamiento (?) Para confirmación de resultados
65 Diagnóstico serológico anti-t.cruzi Recomendaciones de la OMS Laboratorio clínico o Realizar dos pruebas ELISA HAI IFI No convencionales Banco de sangre Realizar um teste o ELISA* de alta sensibilidad Seguir estrictamente los procedimientos de Control de Calidad Externo e Interno
66 Control de Calidad Externo e Interno Participar de por lo menos un programa de evaluación externa Usar un SCI* diariamente en cada corrida analítica o Establecer un criterio mínimo para aceptación y usarlo Realizar evaluaciones lote a lote LABORATORIOS DE DIAGNÓSTICO O DE TAMIZAJE (*): Suero Control Interno de baja reactividad
67 Estrategias para el Tamizaje Serológico en Donantes de Sangre para anti-t.cruzi WHO: 2 testes, 1991 WHO: 1 test, 2002 Argentina: 2 testes, 2004 Brasil: hasta 2002, 2 testes Brasil: Desde 2003, 1 test ELISA/CLIA Costa Rica: , 2 testes (rec + lis) Costa Rica: Desde 2011, 1 test España: 2008, 2 testes. Ahora 1 test USA: 2007, 1 test (lis) Francia: 2007, 2 testes (rec + lis) Ahora 1 test UK: 2006, 1 test rec
68 TAMIZAJE EM DONANTES DE SANGRE Perfil ELISA1/CLIA* ELISA 2 Positivo (2-3) prueba complementaria TESA blot / Inmunoblot / IFI (*): Fracciones antigénicas proteínas rec o PS ELISA 2: Lys
69 Pruebas usadas en el tamizaje serológico p/ anti- T.cruzi en donantes de sangre: Brasil ( )
70 Pruebas serológicas más utilizadas en el tamizaje serológico para T.cruzi en donantes de sangre ( ) Pruebas convencionales Hemaglutinación indirecta (HAI) Inmunofluorescéncia indirecta (IFI) ELISA (Lisado parasitário) Pruebas modificadoas ELISA, CLIA Proteínas recombinantes / PS Donantes: Unidades descartadas: (1,7 %) Salles NA et al, Transfusion, 36: , 1996
71 Pruebas Convencionales p/ Detectar la Infección por T. cruzi (*): Resultados Falsos-negativos (**): Resultados Falsos-positivos
72 Inmunoensayos para anti-t.cruzi [Lys] Marca comercial Mét Sensibilidad Especificidad BioMérieux Ag Lys (epimastigotas) [1] ELISA 100% 99,6% Bioschile Ag Lys (Y, Talahuen, MNV2) [2] ELISA Chagatek Ag Lys Purif. [3] ELISA Ortho Ag Lys (epimastigotas) [4] ELISA 100% 99,4% 100% 99,4% 99,7% 98,9% 100% 100% 99,62 90% 99,24 100% 99,4% 100% Wiener Ag Lys [5] ELISA 100% 99,6% [1]: Instrucciones técnicas [2-3]: Instrucciones técnicas / Otani M, et al,transfusion, 2009 [4] Instrucciones técnicas / Transfusion 2007; 47:90-96 / Transfusion 2008; 48(3) [5]: Instrucciones técnicas
73 Inmunoensayos para anti-t.cruzi [Rec] Marca comercial Mét Sensibilidad Especificidad Abbott (TcF, FP3, FP6 y FP10) [1] ARCHITECT CLIA BioKit (TcD, TcE, PEP-2 y TcLo1) [2] ELISA 100% 99,36% 99,74% 100% 100% 99,94% 99,96% >99,73 99,5% 99,24% BioKit BIO-FLUSH [3] CLIA 100% 99,86% Wiener 3.0 (Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag36) [4] ELISA 100% 99,6% Wiener 4.0 (Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag36) [5] ELISA 100% 99,7% [1]: Transfusion 2006; 46(10): / Diag. Microb. Infect. Dis. 2011, 69: [2]: Sáez-Alquezar A, 2000 / Otani M et al Transfusion, 2009 [3]:Sáez-Alquezar A, 2012 [4]:Sáez-Alquezar A, 2004 [5]:Sáez-Alquezar A, 2009
74 Pruebas ELISA Lisado Lab. Lemos Bioschile In house biomérieux Clinical and Vaccine Immunology, (2007); 14(8):
75 Pruebas ELISA recombinantes Wiener Omega Clinical and Vaccine Immunology, (2007); 14(8):
76 PRUEBAS CONFIRMATORIAS Hasta el momento, ningún teste ha sido aceptado universalmente como gold standard para el diagnóstico serológico de la infección por T. cruzi.
77 Pruebas Complementarias ( confirmatorias ) Métodos Fracciones antigénicas Sens Espec RIPA & Concordância Ab glucoproteins kd 89% con IFI Western blot* TESA (Excreted-secreted antigens) 100% 98,5% Inmunoblot**?? 100% 99,3% CRA, FRA, Tc-24, SAPA, MAP, TcD, Ag39 99,4% 98,1% Inmunoblot*** FP10, FP6, FP3, TcF 100% 100% (&): Leiby DA et al. JCM (*): IMTSP/bioMérieux; Umezawa ES et al.1996 (***): Abbott: Cheng KY et al (**): 1- Oelemann WN et al. 1999; 2- Sáez-Alquezar A 2000
78 Performance del TESA-blot Sensibilidad: 100% Especificidad: 99.6% Como prueba confirmatoria para muestras reactivas o indeterminadas del tamizaje serológico en donantes de sangre: VPP: 98 % VPN: 100 % Trypomastigotes Excreted/secreted antigens 205 kd 120 kd Umezawa ES et al, J Clin Microbiol 34: , 1996
79 Serología para infección por T.cruzi
80 Pruebas para detección de anti-t.cruzi Teste ELISA Teste CLIA BIO-FLASH Chagas
81 ELISA x CLIA ELISA CLIA Soporte Micro placa Partícula magnética Posibilidades Sensibilidad Especificidad Semejante Semejante Acceso aleatorio Velocidad Opciones Pequeño porte Gran porte Pequeño porte Gran porte Equipamientos Abiertos / Cerrados Cerrados Tendencia em los próximos años Disminución, principalmente en grandes rutinas Aumentar
82 Chagas Congénito Identificar el estado de infección pre-natal y durante el embarazo Infectados con síntomas Infectados asintomáticos Identificar el estado de infección (0 9 meses) Hijos no infectados Embarazadas Infectadas por el T.cruzi
83 Negativo Ausencia de infección Tamizaje serológico embarazadas / parto Positivo Recién nacido Negativo Evaluar la parasitemia Micro hematocrito + PCR Positivo 1 o mês; MHT + PCR Negativo 9 o mês; MHT + Serología Comunidad Autonoma de Madrid Negativo Positivo Ausencia de infección Tratamiento
84 Tratamiento Benznidazol 7-10 mg/kg/día en 2 dosis diarias días Nifurtimox mg/kg/día en 2 dosis diarias días
85 Cura parasitológica en individuos infectados por el T.cruzi
86 Procedimientos de CC Evaluación de testes Comparative Evaluation of 11 Commercialized Rapid Diagnostic Tests for Detecting Trypanosoma cruzi Antibodies in Serum Banks in Areas of Endemicity and Nonendemicity; Sánchez-Camargo CL, Albajar-Viñas P, Wilkins PP, Nieto J, Leiby DA, Paris l,scollo k, Flóre z C, Guzmán- Bracho A, Luquetti AO, Calvo N, Tadokoro K, Saez-Alquezar A, Palma PP, Martin M, Flevaud L. J.C.M; p July 2014 Vol 52 Number 7 Fueron evaluados 11 Pruebas Rápidas para anti-t.cruzi en 10 Laboratorios de Referencia Nacional de 9 países, endémicos (Japón, Francia, España, USA) y no-endémicos (Argentina, Brasil, Colombia, Costa Rica, México)
87 Testes Rápidos Evaluados
88 Procedimientos de CC Evaluación de testes Cada Laboratorio de Referencia Nacional (LRN) analizo 50 muestras de suero (25 Positivas y 25 Negativas para anti-t.cruzi) previamente caracterizadas. CONTROL DE CALIDAD: Un panel ciego de 4 muestras de suero liofilizadas enviado a cada uno de los LRN para que fuesen procesados juntamente con las muestras de la evaluación
89 Procedimientos de CC Evaluación de testes
90 Procedimientos de CC Evaluación de testes
91 Procedimientos de CC Evaluación de testes
92 Uso de Biological Reference Standards Herramienta desenvolvidos para comparación pela de OMS resultados entre diferentes ensayos y para facilitar el desarrollo de nuevos productos diagnósticos Dr Ana Padilla, Quality Assurance & Safety: Blood Products & related Biologicals Medicines Policy and Standards Department Health Technology and Pharmaceuticals Cluster WHO, Geneva, Switzerland
93 Distribución de TCI y TCII en América Latina Guhl, 2007
94 Evaluation of two International Reference Standards for antibodies to Trypanosoma cruzi in a WHO collaborative study - WHO/BS/ Two freeze dried preparations of defibrinated human plasma containing anti-trypanosoma cruzi (T. cruzi) antibodies, coded 09/186 and 09/188, were assessed for their suitability as International Reference Standards for the serodiagnosis of Chagas disease. Dos Estándars: 09/186, representativo del área con mayor prevaléncia de Tc2 09/188, representativo del área con mayor prevalncia de Tc1 Deben usarse con diluciones, hasta 1/64 Marcia Otani, Jason Hockley, Carmen Guzmán Bracho, Sjoerd Rijpkema, Alejandro O. Luquetti, Robert Duncan, Peter Rigsby, Pedro Albajar-Viñas, Ana Padilla
95 Comportamiento de pruebas ELISA y CLIA frente a los Biological Standards de la OMS
96 Consideraciones finales Escoger criteriosamente las pruebas serológicas o Fracciones antigénicas (Lys o rec) o Desempeño en evaluaciones Tipos de plataformas o metodologías no son criterios definitivos Aplicación de procedimientos de Control de Calidad o CCE, CCI, Evaluación inicial y lote a lote
97 Muchas gracias
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