Instructivo para la derivación de material

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1 LABORATORIO ESPECIALIZADO DE HEMATOLOGÍA, ONCOLOGÍA Y GENÉTICA Instructivo para la derivación de material 1. Estudios de Anemia: Extendidos de sangre periférica con gota directa de la aguja (sin anticoagulante) Extraer 3 a 5 ml de sangre periférica y colocarla en tubos con EDTA (los mismos tubos que se utilizan para hemogramas). Embalarlos en cajas de cartón, protegidos con algodón y bien tapados conjuntamente con nota de derivación y datos de presunción diagnóstica. Rotularlos con remitente y destinatario correspondiente. Los tubos deben estar a temperatura ambiente. Los envíos se realizarán exclusivamente de lunes a jueves hasta las 16 hs, por correo 24 hs. 2. Material para diagnóstico de Leucemias Extendidos de sangre periférica y médula ósea para examen morfológico y técnicas citoquímicas. 3. Citometría de flujo Extraer 2 ml de médula ósea y/o sangre periférica y colocarla en tubos con EDTA (mezclar enseguida) Rotular correctamente los tubos con nombre y apellido y tipo de muestra Enviar de la misma manera que se detalla en el ítem 1.

2 4. Citogenética* Realizar la extracción con jeringa estéril de marca "BD" en lo posible, nunca "Prexajet", heparinizada con heparina estéril. Se debe usar cantidad suficiente de anticoagulante para bañar las paredes de la jeringa (no más de 3 gotas). Cabe aclarar que la jeringa debe enviarse con la aguja tapada con el capuchón de plástico, NO se debe doblar ni pinchar la aguja en un tapón. Para mantener las condiciones de esterilidad de la muestra, la misma tampoco debe ser trasvasada a tubos. Enviar en la misma jeringa, a temperatura ambiente dentro de las 24 horas de extraída (nunca refrigerada). La cantidad de muestra mínima requerida es de alrededor de 2 cm 3. Especificar en la misma jeringa, con una etiqueta, todos los datos del paciente: nombre completo, sexo, edad, Nº de HC (si lo tiene), diagnóstico. Estos datos son esenciales para identificar debidamente el material, y no se procesarán muestras que no cumplan con este requisito. Adjuntar a la jeringa un pedido médico debidamente firmado y sellado. En caso de tratarse de un control pos-trasplante, indicar el sexo del donante. En caso de tratarse de un paciente con una anomalía cromosómica constitucional conocida, registrarlo en el pedido médico. Especificar siempre la técnica solicitada (citogenética en médula ósea y/o FISH y/o genética molecular. En caso de solicitar cariotipo y FISH no es necesario enviar dos jeringas.

3 4.1 Material en parafina para FISH Tener en cuenta las normas anteriores en cuanto al pedido médico correspondiente, con todos los datos identificatorios del paciente y la firma y sello del médico solicitante. El material debe ser un taco de parafina del tumor, que debe remitirse con copia del informe del patólogo que realizó el diagnóstico. En caso de haberse realizado Cerb-2 previamente, es preferible remitir el mismo taco donde se realizó la IHQ. Adjuntar también el informe del Cerb-2. *Estas instrucciones corresponden a muestras de médula ósea o sangre periférica en pacientes con patologías hematológicas. Para estudios en otros materiales, lo ideal es realizar la extracción directamente en nuestro laboratorio. La información e instrucciones detalladas previamente son indispensables para la identificación del material y la correcta interpretación de los resultados en nuestro Laboratorio. Las muestras que no cumplan con estos requisitos no podrán ser procesadas.

4 Preparación y envío de la muestra: Citogenética en material de aborto Una vez extraído el material, colocarlo en un frasco estéril ( frasco de recolección de orina) con solución fisiológica estéril (0,9% NaCl),tratando de que ésta cubra todo el De no ser posible su envío inmediato al laboratorio, conservar la muestra en heladera a 4 C, evitando los cambios bruscos de temperatura. La muestra se conserva en la heladera solo por 48 hs. Condiciones causantes del rechazo de la muestra: El material no será apto para su procesamiento en los siguientes casos: muestra en formol, congelada, contaminada, más de 48 hs de extraídas. Información que se debe colocar en el pedido médico: Nombre y Apellido del paciente Datos de la obra social. Edad de la paciente. Edad gestacional. Motivo Hora y fecha de obtención de la muestra. Nombre del médico La muestra debe venir rotulada con nombre y apellido de la paciente. que deriva el Días y Horarios de recepción de las muestras en el Laboratorio: Lunes a Viernes, de 9 a 17 hs. Nota: Si la obtención del material se realiza durante un fin de semana, conservarlo en heladera y remitirlo el día lunes, a primera hora, al laboratorio. Importante: Por razones de procesamiento, se recomienda no enviar muestras los días Viernes antes de un fin de semana largo. En casos excepcionales, que requieran la derivación del material en estos días, contactarse previamente al TE: (Lunes a Viernes, 8 a 18 hs.).

5 Área de Biología Molecular Leuecemia Mileoide Crónica El 95% de las LMC se asocian a la presencia de la t(9;22); el protooncogen abl del cromosoma 9 es fusionado al gen bcr del cromosoma 22. EL producto de transcripción genera un gen de fusión aberrante (M-bcr); la expresión de este gen es la proteína quimérica p210. M-bcr debe ser evaluado al diagnostico y durante el seguimiento de la enfermedad para ser correlacionado con la respuesta molecular de la enfermedad. BCR-ABL (p210) Técnica: RQ-PCR y RT-PCR Muestra: Médula Ósea o Sangre Periférica anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea y 15 a 20mL de sangre periférica, refrigerado (4 C) dentro de las 24hs de extraído el Sindromes Mieloproliferativos Crónicos Policitemia Vera. Trombocitemia escencial. Mielofibrosis. JAK2 La mutación V617F presente en el exón 14 del gen JAK2 se expresa en el 95% de los pacientes con polictemia vera, 60% de las trombocitemias esenciales y 50% de las mielofibrosis aproximadamente. JAK2 es una tirosin kinasa citoplasmática que juega un rol esencial en la ruta de señalamiento de citoquinas y factores de crecimiento. Técnica: ARMS-PCR Cualitativa Muestra: Médula Ósea o Sangre Periférica anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea y 7ml de sangre periférica, refrigerado (4 C) dentro de las 24hs de extraído el

6 Leucemia Linfática Aguda La presencia de la t(9;22) formado por el protooncogen abl del cromosoma 9 fusionado al gen bcr del cromosoma 22 produce un gen de fusión minor aberrante (m-bcr) con la expresión de la proteína quimérica p190. Este se detecta en el 25-30% de los pacientes adultos y en el 2-5% de los niños. m-bcr debe ser evaluado al diagnóstico y durante el seguimiento de la enfermedad para ser correlacionado con la respuesta molecular de la enfermedad. BCR-ABL (p190 p210) Técnica: RQ-PCR y RT-PCR Muestra: Médula Ósea anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea, refrigerada (4 C) dentro de las 24hs de extraído el Leucemias Mieloides Agudas 1. t(8;21) Representa el 8-12% de las LMA y es la más frecuente en LMA M2, encontrado en el 20-40% de los casos. Se fusiona el gen AML1 del cromosoma 21 al gen ETO en el cromosoma 8. La evaluación del gen de fusión AML1-ETO debe ser efectuado al diagnóstico y durante el seguimiento de la enfermedad para ser correlacionado con la respuesta molecular de la enfermedad. Muestra: Médula Ósea anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea, refrigerada (4 C) dentro de las 24hs de extraído el Muestra: Médula Ósea anticoagulada con EDTA.

7 Condiciones de Envío: 5ml refrigerado (4 C) dentro de las 24hs de extraído el 2. t(15;17) El 10-15% de las LMA de novo son Leucemias Promielociticas agudas en pacientes adultos. Los dos genes fusionados en la t(15;17) son PML localizado sobre el cromosoma 15 y el gen del receptor α del Acido Retinoico en el cromosoma 17. La evaluación del gen de fusión PML-RARA debe ser efectuado al diagnóstico y durante el seguimiento de la enfermedad para ser correlacionado con la respuesta molecular de la enfermedad. Muestra: Médula Ósea anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea, refrigerada (4 C) dentro de las 24hs de extraído el Muestra: Médula Ósea anticoagulada con EDTA. Condiciones de Envío: 5ml refrigerado (4 C) dentro de las 24hs de extraído el 3. Inversión del cromosoma 16 Esta alteración se presenta en el 10% de los pacientes con LMA de novo. Tanto la t(16;16) como la Inv 16 contienen fusionado el gen CBFB localizado sobre el cromosoma 16 al gen MYH11 localizado sobre el mismo cromosoma. La evaluación del gen de fusión CBFB-MYH11 debe ser efectuado al diagnóstico y durante el seguimiento de la enfermedad para ser correlacionado con la respuesta molecular de la enfermedad. Muestra: Médula Ósea anticoagulada con EDTA 4. FLT3-ITD Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea, refrigerada (4 C) dentro de las 24hs de extraído el

8 Flt3-ITD se encuentra en el exón 11 del gen flt3 codificante para el dominio yuxtamembrana del receptor FMS-like tirosine Kinase 3. Juega un rol importante en la proliferación, diferenciación y sobrevida de la stem cell. La mutación se expresa en Leucemias Mieloides Agudas en el 20-30% de los pacientes adultos y en el 5-22% de los pacientes pediátricos. También se halla descripta en el 5-10% de de los pacientes con sindromes mielodisplásicos. Técnica: PCR cualitativa Muestra: Médula Ósea o Sangre Periférica (con una infiltración blástica >50%) anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea o 7 ml de Sangre Periférica refrigerada (4 C) dentro de las 24hs de extraído el 5. NPM1- mutación A Nucleofosmina es una proteína nucleocitoplasmática ubicada en el cromosoma 5, exón 12. Juega un amplio rol en procesos celulares incluyendo promoción de biogénesis de los ribosomas, mantenimiento de la estabilidad genómica, regulación de la transcripción y modulación de factores de transcripción. Las mutaciones en esta proteína se encuentran en el 50-60% de las LMA con cariotipo normal. Muestra: Médula Ósea o Sangre Periférica (con una infiltración blástica >50%) anticoagulada con EDTA Condiciones de Envío: 5ml de Medula Ósea o 7 ml de Sangre Periférica refrigerada (4 C) dentro de las 24hs de extraído el

9 Tumores Sólidos EGFR El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es una proteína de membrana cuya función es transmitir señales, promoviendo la proliferación y el crecimiento celular. Las mutaciones en el dominio Tirosin Kinasa (TK) de este receptor han sido identificadas en cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCL) y se asocian con respuesta a inhibidores Tirosin Kinasa. Técnica: Real Time PCR con Kit EGFR Mutation Analysis para mutaciones y deleciones en los exones 18, 19, 20 y 21 Muestra: Taco de Biopsia con informe de anatomía patológica Envío: Temperatura Ambiente LABORATORIO ESPECIALIZADO DE HEMATOLOGÍA, ONCOLOGÍA Y GENÉTICA Nuestras vías de contacto: Tel Mail:

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