11 kn. de publicación: ES kint. Cl. 6 : G01N 21/31

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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 kn. de publicación: ES kint. Cl. 6 : G01N 21/31 A61B /00 G01N 33/48 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 knúmero de solicitud europea: k Fecha de presentación : k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Procedimiento y aparato para controlar la concentración de glucosa. k Prioridad: GB k 73 Titular/es: Johnson & Johnson Professional Products Limited The Braccans, London Road Bracknell, Berkshire RG12 2AT, GB k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Eagles, Obreon; Wall, Peter y Parker, Dawood k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Carpintero López, Francisco ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 1 ES T3 2 DESCRIPCION Esta invención se refiere a un procedimiento y a un aparato para medir la concentración de glucosa en una disolución acuosa. El cerebro usa la glucosa casi exclusivamente como una fuente de energía y, por lo tanto, es extremadamente importante mantener los niveles de glucosa en sangre dentro de un intervalo muy estrecho. En condiciones normales, los niveles de glucosa en el torrente sanguíneo se mantienen mediante una serie elaborada de mecanismos y circuitos de retroalimentación. Estos elementos sirven para neutralizar las fluctuaciones en la glucosa y restaurarla al nivel correcto. En los pacientes normales, los altos niveles de glucosa provocan la liberación de insulina al interior del torrente sanguíneo, desde el páncreas y, por el contrario, los bajos niveles de glucosa suprimen la liberación de la insulina, regulando de esta forma el nivel normal de glucosa en sangre. La diabetes mellitus está causada por una falta de insulina en el paciente, falta que conduce a un nivel crónicamente elevado de glucosa en sangre, lo que causa síntomas desagradables a corto plazo, tales como orinar frecuentemente y tener sed también con mucha frecuencia, así como también problemas más serios de largo plazo en forma de lesiones en los riñones, en los vasos sanguíneos, en los nervios y en los ojos. Los niveles bajos de glucosa en sangre provocan un estado conocido como hipoglucemia que produce a corto plazo una confusión mental y, si se prolonga, puede producir un coma e incluso la muerte. Un procedimiento conocido para detectar y tratar a los pacientes diabéticos implica el análisis de sangre extraída del paciente. Esto implica punzar un dedo del paciente con una lanceta estéril para obtener una muestra de sangre capilar que se coloca sobre una banda de ensayo impregnada con productos químicos apropiados para producir un cambio de color cuya intensidad se compara con una tarjeta estándar impresa. Más recientemente se ha desarrollado una técnica (EXACTECH Pen) que proporciona una lectura digital de concentración de glucosa en sangre, algunos segundos después de que se ha colocado una muestra sobre un detector desechable de película delgada impresa. Si se diagnostica diabetes, se puede prescribir insulina. Como el nivel de glucosa de cada individuo es variable, si no se efectúan mediciones continuas de la glucosa en sangre, es imposible proporcionar la insulina exactamente apropiada para las necesidades fisiológicas en todos los momentos. Como consecuencia, los pacientes diabéticos todavía tienen períodos de niveles altos de glucosa en sangre. Por otra parte, la administración de insulina en exceso puede producir un nivel bajo de glucosa en sangre. Para medir la concentración de sustancias particulares en la sangre se conocen algunas técnicas espectrométricas con rayos casi infrarrojos. Por ejemplo, la solicitud de patente europea describe una técnica de reflectancia que utiliza longitudes de onda preseleccionadas de ensayo y de referencia. La patente U.S. 42 des- 2 4 cribe una técnica que utiliza el análisis espectrofotométrico de ondas de ensayo casi infrarrojas para averiguar la presencia de glucosa. Se describe absorción de la glucosa cerca de los infrarrojos con una longitud de onda pico para absorción de la glucosa de 98 nm y una longitud de onda de referencia de 10 nm. Además, la solicitud de patente PCT WO90/0790 describe una técnica en la que se usan 980 nm como longitud de onda pico para detección de glucosa. La selección de la longitud de onda de la radiación es crítica por las siguientes razones: 1. La concentración de glucosa tiene sólo un promedio de alrededor del 0,1%, en peso, del suero sanguíneo. Para cualquier medición significativa de concentración de glucosa se requiere una precisión de ppm. 2. Otros componentes de la sangre absorben en las regiones casi infrarrojas y podrían interferir la medición de glucosa, por ejemplo, las concentraciones de proteínas del suero son significativamente más altas que las de la glucosa, lo que provoca, por lo tanto, el problema de interferencia. 3. Las mediciones de absorción de las disoluciones acuosas son difíciles debido a la fuerte absorción básica del agua. Esta fuerte absorción limita severamente la aplicación y el uso de un espectrómetro convencional en la resolución de este problema. El hecho de que el agua es un elemento constitutivo principal del tejido es un factor significativo en la elección de la longitud de onda para medir la concentración de glucosa en sangre. El agua presenta fuertes bandas de absorción en la zona casi infrarroja, con máximos alrededor de 11 nm, 14 nm y 19 nm. Las ventanas de transmisión para el agua se abren a alrededor de nm, 10 nm y 20 nm. Por estas razones, la longitud de onda elegida debe ser lo más corta posible y deberá estar dentro de las ventanas de transmisión para el agua. Actualmente, hemos inventado una técnica y un aparato, mejorados, para medir la concentración de glucosa en sangre. Según un primer aspecto de la invención, se proporciona un aparato, tal como se define en las reivindicaciones, para determinar la concentración de glucosa en un medio de ensayo de sangre, aparato que comprende: (a) una primera fuente de radiación para generar un primer rayo de radiación electromagnética de una longitud de onda situada sustancialmente en el ancho de banda de 00 a 1700 nm; (b) una segunda fuente de radiación para generar un segundo rayo de radiación electromagnética de una segunda longitud de onda situada en el ancho de banda de a 10 nm; (c) medios detectores dispuestos para detectar la radiación electromagnética de dichos rayos de radiación, primero y segundo; y

3 3 ES T3 4 (d) medios dispuestos para dirigir dichos rayos de radiación electromagnética, primero y segundo, a lo largo de trayectorias respectivas através de un medio de ensayo de dicha sangre, hasta dichos medios detectores. Además, el aparato comprende medios de calefacción dispuestos para elevar la temperatura de la sangre bajo ensayo. Los medios detectores están separados de dichos medios de radiación, primero y segundo, de forma que la sangre a ensayar (es decir, el medio de ensayo) que puede estar contenida en un recipiente con paredes transparentes o, alternativamente, en una parte del cuerpo (tal como un dedo), puede estar interpuesta entre los medios detectores y las fuentes de radiación primera/segunda. Ventajosamente, la primera longitud de onda está dentro del ancho de banda comprendido entre 47 nm a 77 nm, y más preferiblemente dentro del ancho de banda comprendido entre 47 a 7 nm. Se prefiere que la segunda longitud de onda esté dentro del ancho de banda comprendido entre 129 nm a nm, y más preferiblemente dicha segunda longitud de onda es sustancialmente de nm. Se prefiere que se dispongan en el aparato medios de producción de impulsos, de forma que al menos uno de los rayos de radiación se pueda producir por impulsos. Preferiblemente, los medios de producción de impulsos facilitanque ambosrayos de radiación, primero y segundo, se produzcan por impulsos, ventajosamente alternados. La producción de impulsos de los rayos facilita la utilización de alta potencia de radiación y, por lo tanto, aumenta la posibilidad de que los rayos de radiación penetren suficientemente a través del medio de ensayo para llegar a los medios detectores. Este es particularmente el caso en el que el aparato se usa para mediciones in vivo, utilizando por ejemplo el dedo de una persona que contiene el medio de ensayo (es decir, la sangre). Se prefiere que las trayectorias respectivas de los rayos de radiación sean sustancialmente rectilíneas a través del medio de ensayo. Ventajosamente, las trayectorias de los rayos de radiación son efectivamente co-lineales a través del medio de ensayo. Las fuentes de radiación, primera y segunda, pueden ser dispositivos láser (preferiblemente monocromáticos). Más preferiblemente, se disponen diodos láser para emitir rayos láser respectivos de la frecuencia requerida. Alternativamente, las fuentes de radiación pueden estar combinadas en una sola fuente láser (o diodo láser) dispuesta para emitir dos rayos de las frecuencias requeridas (correspondientes a los rayos primero y segundo de radiación). Los medios detectores pueden comprender un detector discreto para cada rayo de radiación; sin embargo, se prefiere que los medios detectores tengan la forma de un detector unitario dispuesto para detectar ambos rayos, primero y segundo, de radiación electromagnética. Los medios detectores producen preferiblemente señales eléctricas de salida que dependen 4 de la intensidad de la radiación electromagnética que entra en el detector y que representa la intensidad de los medios de radiación, primero y segundo. Ventajosamente, se proporcionan medios de procesado y de acondicionamiento de la señal, dispuestos para procesar las señales de salida de los medios detectores y para proporcionar un valor correspondiente a la diferencia de las intensidades de los rayos respectivos de radiación que entran en los medios detectores, facilitando con ello la determinación de un valor de la absorción de la glucosa (y por lo tanto de la concentración de glucosa). Preferiblemente, el detector tiene la forma de un fotodiodo, por ejemplo, un fotodiodo de germanio, y está acopladopre- feriblemente a través de una circuitería eléctrica apropiada para el aparato de procesado y acondicionamiento de la señal, de forma que se puede obtener un valor de la concentración de glucosa en la sangre. Ventajosamente, los medios de calefacción pueden elevar la temperatura de la sangre hasta grados Celsius. Típicamente se proporcionan medios colimadores para el aparato, dispuestos para dirigir los rayos de radiación electromagnética, primero y segundo, a lo largo de sus trayectorias respectivas através del medio de ensayo. Los medios colimadores pueden comprender una disposición de lente y/o prisma, dispuestos para dirigir los rayos de radiación a lo largo de trayectorias efectivamente co-lineales. En una forma de realización preferida, las guías ópticas de ondas pueden comprender al menos una parte de los medios colimadores. En particular, en esta forma de realización se pueden usar guías de onda de fibra óptica dispuestas una al lado de otra de forma que los rayos de radiación, primero y segundo, sigan efectivamente la misma trayectoria (es decir co-lineal) a través del medio de ensayo. En una forma de realización del aparato de acuerdo con el primer aspecto de la invención, el aparato está adaptado para la determinación in vitro de la concentración de glucosa en una muestra de sangre. En esta forma de realización, el aparato preferiblemente comprende además un receptáculo con paredes dentro del cual puede estar contenida la muestra. Las paredes del receptáculo están preferiblemente compuestas por una sustancia transparente y, ventajosamente, se puede usar una cubeta espectrofotométrica de vidrio. Ventajosamente, también se dispone una cubierta para el receptáculo, disponible para impedir que la luz ambiental entre en el receptáculo. En una segunda forma de realización de acuerdo con el primer aspecto de la invención, el aparato está adaptado para uso en la medición no invasora de concentración de glucosa. En esta forma de realización, se prefiere que se disponga un miembro con forma de manguito adecuado para alojar un dedo de un paciente, y alojamiento para al menos algunos de los componentes del aparato, y particularmente para los medios detectores. Ventajosamente, el manguito también está dispuesto para alojar los medios colimadores, y también las fuentes de radiación, primera y segunda, cuando sea practicable, por ejemplo, 3

4 ES T3 6 cuando se utilizan diodos láser. De acuerdo con un segundo aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento, tal como se define en las reivindicaciones, para determinar la concentración de glucosa en un medio de ensayo de sangre, método que comprende dirigir un primer rayo de radiación, de longitud de onda sustancialmente comprendida dentro del ancho de banda de 00 a 1700 nm, a lo largo de una primera trayectoria desde una fuente hasta unos medios de detección de radiación; dirigir un segundo rayo de radiación, de longitud de onda sustancialmente comprendida dentro del ancho de banda de a 10 nm, a lo largo de una segunda trayectoria desde una fuente hasta dichos medios de detección, pasando dichas trayectorias, primera y segunda, a través de dicho medio de ensayo, situado en una región intermedia entre dicha(s) fuente(s) y dichos medios de radiación. Se prefiere que las respectivas trayectorias de los rayos de radiación sean rectilíneas cuando pasan a través del medio de ensayo, ventajosamente, las respectivas trayectorias de los rayos de radiación son efectivamente co-lineales cuando pasan a través del medio de ensayo. Se prefiere que al menos uno de los rayos de radiación, primero y segundo, sea por impulsos, de forma que se proporcione un rayo de radiación intermitente. Preferiblemente, ambos rayos de radiación, primero y segundo, son por impulsos alternativos entre sí. La temperatura de la sangre se eleva preferiblemente hasta aproximadamente grados Celsius, antes de, o durante, la determinación de la concentración de glucosa por el método de acuerdo con la invención. A continuación se describe adicionalmente la invención en una forma de realización particular, únicamente a título de ejemplo, con referencia a los dibujos adjuntos, en los que: La Figura 1 es una representación esquemática del aparato de acuerdo con la invención que es adecuado para ejecutar el procedimiento de acuerdo con esta invención; LaFigura2esunavistaesquemática en planta de una parte del aparato de la Figura 1; y La Figura 3 es una representación esquemática de un aparato alternativo de acuerdo con la invención. En relación con los dibujos, el aparato, designado generalmente como 1, está dispuestopara determinar la concentración de glucosa en una muestra de sangre contenida en una cubeta 2 de vidrio espectrofotométrica de alta precisión. Dosdiodosláser 3, están accionados mediante circuitería 4 normal de accionamiento de láser. De los diodos láser 3 usados en el aparato, uno está seleccionado para emitir un rayo de longitud de onda de 2 nm (que es absorbido por la glucosa y, por lo tanto, actúa como el rayo de ensayo), y el otro diodo está seleccionado para emitir un rayo de longitud de onda de 13 nm (que no es absorbido por la glucosa y, por lo tanto, actúa como un rayo de referencia). La temperatura de funcionamiento de los diodos láser se puede controlar mediante el uso de 4 4 un accionador Peltier 12. La temperatura de funcionamiento de los diodos se puede variar para cambiar las longitudes de onda emitidas de los rayos respectivos en ± nm. Por consiguiente, el aparato funciona óptimamente a temperatura constante. Los diodos láser 3 están montados uno a cada lado del prisma pulido de reflexión. La luz emitida desde cada diodo 3 se refleja por el prisma ypasaatravés de una lente de colimación 6. Así pues, el prisma y la fuente de colimación 6 comprenden un sistema óptico que dirige y enfoca los rayos emitidos desde los diodos láser 3, de forma que siguen la misma trayectoria rectilínea (es decir, las dos trayectorias son co-lineales) a través de la muestra de sangre existente en la cubeta 2 de vidrio. La alineación de los respectivos diodos láser 3 con el sistema óptico se controla mediante el Microposicionador 11 de ejes XYZ. Alternativamente, los rayos se pueden dirigir desde los diodos láser respectivos mediante guías de ondas de fibra óptica dispuestas una al lado de otra en sus extremos de emisión. Como el diámetro de las fibras ópticas sería del orden de 0 micrómetros, los rayos láser seguirían efectivamente la misma trayectoria co-lineal. Además, los diodos láser 3 separados se pueden sustituir por un solo dispositivo semiconductor tal como un solo diodo dispuesto para emitir rayos separados de longitudes de onda requeridas. Para garantizar que los dos rayos emitidos desde los respectivos diodos láser3nosesuperponen mientras que siguen la misma trayectoria, representada mejor en la Figura 2, a través de la muestra de sangre, la circuitería4deaccio- namiento de los diodos láser está dispuestapara suministrar energíaacadadiodo3demanera cíclica, de forma que los respectivos rayos láser emitidos por ellas tengan impulsos de manera alternada. La provocación de impulsos de los rayos facilita que se utilicen rayos con intensidad más alta que la que sería posible ordinariamente con un rayo constante, sin producir daños a la estructura de la sangre. La posibilidad de utilizar rayos con alta intensidad garantiza que el rayo de luz se desplace correctamente a través de la muestradeensayoenlacubetadevidrio2. Los diodos láser usados en este instrumento se pueden impulsar con un ciclo de servicio de 0,1 milisegundos, y una duración de impulso de 4 microsegundos. Estos parámetros son dependientes de las características de los diodos láser y se pueden modificar en consecuencia. Para recoger la luz de los rayos láser que se transmite a través de la muestra de sangre de la cubeta de vidrio 2, se dispone un fotodiodo detector 7 adyacente a dicha cubeta de vidrio 2. El fotodiodo detector puede ser un diodo de germanio; alternativamente, se puede usar un detector de Arseniuro de Indio Galio. El fotodiodo detector 7 produce una señal eléctrica de salida, que es proporcional a la intensidad de luz detectada, y esta señal se retransmite a través de una circuitería electrónica convencional apropiada al aparato 8 de procesado y acondicionamiento de la señal, dispuesto para proporcionar un valor digital de salida relacionado con la intensidad de luz

5 7 ES T3 8 detectada por el fotodiodo detector 7. Durante el uso, como los diodos 3 se impulsan alternativamente, los rayos láser respectivos generados pasan alternativamente a lo largo de la misma trayectoria a través de la muestra de sangre contenida en la cubeta de vidrio 2. Por lo tanto, la luz de los respectivos rayos se transmite alternativamente al fotodiodo detector 7, donde se generan alternativamente señales eléctricas respectivas de salida. El rayo de luz de longitud de onda de 2 nm es altamente absorbido por la glucosa disuelta en la muestra de sangre, y, por lo tanto, la luz transmitida de esta longitud de onda está relacionada con la concentración de glucosa dentro de la muestra de sangre. El rayo de luz de longitud de onda de 13 nm no es absorbido por la glucosa disuelta en la muestra de sangre, y, por lo tanto, la intensidad de esta longitud de onda detectada por el fotodetector 7 está relacionada con la absorción básica del agua y ningún otro constituyente de la sangre. La comparación apropiada y el procesado de estas señales de salida respectivas alternativas por el aparato 8 de procesado y acondicionamiento de señales facilita que se obtenga un valor para la concentración de glucosa en la muestra de sangre. Inesperadamente, se observó que si la temperatura de la sangre de la cubeta se elevaba a aproximadamente C, la amplitud de los rayos de luz transmitidos al fotodetector 7 aumentaba considerablemente para el rayo de ensayo. Esto es extremadamente ventajoso en términos de sen- sibilidad de medición de la concentración de glucosa en la muestra de sangre y, por lo tanto, en este aparato se incorporó un calefactor de cubeta. Sin embargo, para comparar de manera significativa una muestra con otra, la temperatura a la que se efectúa la medición tiene que ser constante e idéntica en cada caso. Sin este efecto de calefacción la resolución no es lo suficientemente buena como para diferenciar con precisión y de forma reproducible muestras de diferentes contenidos en glucosa, dentro de los intervalos de significado clínico. En relación con la Figura 3, se representa una forma de realización alternativa de un aparato adaptado para uso in vivo. Un manguito (o alojamiento) 13, calentado eléctricamente, define una cavidad para alojamiento de un dedo, dentro de la cual se aloja el dedo 14 del paciente cuya temperaturaseelevaa C aproximadamente. En el manguito 13 se coloca un solo diodo 3 semiconductor láser que emite los dos rayos de radiación de longitudes de onda de ensayo y de referencia (anteriormente definidos) respectivamente. Los rayos penetran y pasan a través del dedo del usuario y son recibidos por el detector 7 queproducelasseñales de salida respectivas, que posteriormente se envían al aparato apropiado de procesado de señales (no representado) a lo largo de la circuitería apropiada 16. El diodo láser 3 está conectado a un aparato accionador y de obtención de impulsos (no representado) mediante la circuitería apropiada 17. 4

6 9 ES T3 REIVINDICACIONES 1. Aparato (1) adaptado para la medición no invasiva de la concentración de glucosa en la sangredeunpaciente,quecomprende: una primera fuente (3) de radiación para generar un primer rayo de radiación electromagnética de una longitud de onda sustancialmente comprendida en el ancho de banda de a 1700 nm; una segunda fuente (3) de radiación para generar un segundo rayo de radiación electromagnética de una segunda longitud de onda comprendida en el ancho de banda de a 10 nm; medios detectores (7) dispuestos para detectar la radiación electromagnética de dichos rayos de radiación, primero y segundo; medios (, 6) dispuestos para dirigir dichos rayos de radiación electromagnética, primero y segundo, a lo largo de trayectorias respectivas a través de un medio de ensayo de dicha sangre hasta dichos medios detectores (7); caracterizado porque se disponen medios de calefacción () capaces de elevar la temperatura del medio de ensayo. 2. Aparato (1) según la reivindicación 1, en el que las respectivas trayectorias de los rayos de radiación son sustancialmente rectilíneas a través de dicho medio de ensayo. 3. Aparato (1) según la reivindicación 2, en el que las trayectorias de los rayos de radiación son efectivamente co-lineales a través de dicho medio de ensayo. 4. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se disponen medios para provocar pulsaciones para el aparato (1), de forma que al menos uno de los rayos de radiación es por impulsos.. Aparato (1) según la reivindicación 4, en el que ambas fuentes (3) de radiación funcionan por impulsos. 6. Aparato (1) según las reivindicaciones 4 y, en el que los medios de producción de impulsos están dispuestos de forma que los impulsos de las radiaciones primera y segunda son alternativos. 7. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la primera fuente (3) de radiación está dispuesta para generar una longitud de onda comprendida dentro del ancho de banda de 47 nm a 77 nm. 8. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la segunda fuente (3) de radiación está dispuesta para generar una longitud de onda comprendida dentro del ancho de banda de 129 a nm. 9. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que las fuentes (3) de radiación, primera y segunda, son dispositivos láser.. Aparato (1) según la reivindicación 9, en el que los dispositivos láser, primero y segundo, son diodos láser. 11. Aparato (1) según la reivindicación 9 ó, en el que se dispone un solo dispositivo láser para emitir ambos rayos de radiación, primero y segundo. 12. Aparato (1) según cualquiera de las rei- 6 4 vindicaciones anteriores, en el que los medios detectores (7) tienen la forma de un detector unitario dispuesto para detectar la radiación de ambos rayos, primero y segundo, de radiación electromagnética. 13. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los medios detectores (7) están dispuestos para producir una señal eléctrica de salida dependiente de la intensidad de la radiación electromagnética que entra en el detector (7). 14. Aparato (1) según la reivindicación 13, en el que el detector (7) es un fotodiodo.. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se disponen medios colimadores para dirigir los rayos de radiación, primero y segundo, a lo largo de sus trayectorias respectivas a través del medio de ensayo. 16. Aparato (1) según la reivindicación, en el que los medios colimadores comprenden lentes (6) y/o prismas () ópticos dispuestos para dirigir los rayos de radiación electromagnética, primero y segundo, a lo largo de sus trayectorias respectivas. 17. Aparato (1) según la reivindicación, en el que los medios colimadores comprenden medios ópticos de guía de ondas. 18. Aparato (1) según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que además comprende un receptáculo (2) con paredes en cuyo interior está contenido el medio de ensayo. 19. Aparato (1) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, que además comprende un miembro con forma de manguito (13), dimensionado para alojar un dedo (14) de un paciente.. Aparato (1) según la reivindicación 19, en el que el miembro con forma de manguito (13) está adaptado para alojar una o varias de las fuentes (3) de radiación, detectores (7) y/o medios colimadores. 21. Un procedimiento para determinar la concentración de glucosa en sangre, que comprende dirigir un primer rayo de radiación de una longitud de onda sustancialmente en el ancho de banda comprendido entre 00 a 1700 nm a lo largo de una primera trayectoria desde una fuente (3) hasta unos medios de detección (7) de radiación, dirigir un segundo rayo de radiación de longitud de onda sustancialmente en el ancho de banda comprendido entre a 10 nm, a lo largo de una segunda trayectoria desde una fuente (3) hasta dichos medios de detección (7) de radiación, pasando dichas trayectorias, primera y segunda, a través de un medio de ensayo situado en una región intermedia entre dicha(s) fuente(s) (3) y dichos medios de detección (7). caracterizado porque el procedimiento comprende adicionalmente la elevación de la temperatura del medio de ensayo. 22. Un procedimiento según la reivindicación 21, en el que las trayectorias respectivas de los rayos de radiación son rectilíneas, cuando pasan através del medio de ensayo. 23. Un procedimiento según la reivindicación 22, en el que las trayectorias respectivas de los rayos de radiación son efectivamente co-lineales cuando pasan a través del medio de ensayo. 24. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en el que al menos

7 11 ES T3 12 uno de los rayos de radiación, primero y segundo, es por impulsos.. Un procedimiento según la reivindicación 24, en el que ambos rayos de radiación, primero y segundo, son por impulsos. 26. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 21 a, en el que la temperatura del medio de ensayo se eleva hasta aproximadamente Celsius. 4 NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluída en la mencionada reserva. 7

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