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1 FORMATO 1. ASIGNATURA Nombre de la asignatura: MCBA-0707-ITEL Técnicas Biotecnológicas de Diagnóstico Línea de investigación o trabajo: Biotecnología en Ciencia Animal - Horas prácticas - Horas trabajo adicional - Horas totales Créditos HISTORIAL DE LA ASIGNATURA. Establece información referente al lugar y fecha de elaboración y revisión, quiénes participaron en su definición y algunas observaciones académicas. Fecha revisión / actualización Julio de 2012 Participantes Nombres de los participantes Dra. Leticia E. Medina Esparza Dr. Carlos R. Cruz Vázquez Observaciones, cambios o justificación Se revisó y actualizó el contenido 2. PRE-REQUISITOS Y CORREQUISITOS. Se establecen las relaciones anteriores y posteriores que tiene esta asignatura con otras. Pre-requisito: Biología Molecular y Bioquímica 3. OBJETIVO DE LA ASIGNATURA. Objetivo General El conocerá y manejará la metodología para llevar a cabo el diagnóstico de enfermedades mediante la aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa. Objetivos específicos El conocerá las bases conceptuales de la reacción en cadena de la polimerasa y su uso en el diagnóstico de enfermedades. El manejará en el laboratorio la técnica de PCR para el diagnóstico de enfermedades 4. APORTACIÓN AL PERFIL DEL GRADUADO Contar con el conocimiento y habilidades metodológicas para emplear la herramienta fundamental del diagnóstico molecular 5. CONTENIDO TEMÁTICO. Se establece el temario (temas y subtemas) que conforman los contenidos del programa de estudio, debiendo estar organizados y secuenciados. Además de que los temas centrales conduzcan a lograr el objetivo de la materia.

2 I. Generalidades de la Reacción en Cadena de la Polimerasa y su aplicación en el diagnostico de enfermedades. OBJETIVO: El conecerá las bases de la reacción en cadena de la polimerasa y su uso en el diagnóstico de enfermedades. I 1.1. Fundamentos de la Reacción en Cadena de la Polimerasa 1.2. Uso de la PCR en el diagnóstico de patógenos (6 horas) Bases moleculares de la PCR Importancia de los espaciadores internos transcritos La biotecnología aplicada a la producción animal en las Américas Diagnóstico de enfermedades virales mediante PCR Diagnóstico de enfermedades bacteriana mediante PCR Diagnóstico de enfermedades parasitarias mediante PCR. (9 hrs) IV OBJETIVO: El conocerá la técnica de PCR en tiempo real V OBJETIVO: El conocerá de la aplicación de la PCR para atender otros problemas sanitarios 4. La PCR en tiempo real (RT-PCR) 5. Aplicaciones de la PCR en el diagnóstico de la resistencia a fármacos 4.1. Consideraciones conceptuales de la técnica RT-PCR 4.2. Usos en diagnóstico de fitopatógenos 4.3. Usos en diagnóstico de patógenos en animales (10 hrs) 5.1. Aplicación en el diagnóstico de resistencia a insecticidas 5.2. Aplicación en el diagnóstico de resistencia a los antibióticos (7hrs). Desarrollo de los diferentes métodos de extracción de ADN genómico para la aplicación de la Técnica de PCR. OBJETIVO: El conocerá los diferentes metodos de extracción de ADN genómico en el laboratorio la técnica de PCR para el diagnóstico de enfermedades 2.1 Métodos de Lisis, Extracción y concentración de A.D.N Extracción de ADN casera Extracción de tejidos embebido

3 en parafina Extraccion de ADN Fenolcloroformo-alcohol isoamilico Extracción mediante utilización de Kits diferentes tipos de tejidos (Sangre, órganos congelados y heces) 2.2. Deferentes medios de la preparación de Electroforesis en geles Preparación de geles de de agarosa Preparación de geles de SB Preparación de geles de acrilamida 2.3. Amplificación de secuencias nucleotídicas (PCR- convencional) (6 hrs) (7 hrs) I Metodología de Amplificación mediante la Técnica de PCR OBJETIVO: El conocerá los diferentes protocolos de amplificación mediante las técnicas de PCR (Ventajas y Desventajas) I 3.1 Diferentes métodos de amplificación Molecular 3.2 Método de amplificación de secuencias nucleotídicas (PCRconvencional) 3.2. Método de amplificación de secuencias nucleotídicas mediante PCR tiempo real (qpcr) Ensayos de hibridización de pares de bases PCR transcriptasa reversa (RT- PCR), PCR inversa, PCR alelo específica, prueba de ARMS, Tecnología AMPLICOR PCR Convencional PCR anidad en un solo tubo PCR anidada en dos pasos qpcr SBYBR Green qpcr Beacons moleculares qpcr TaqMan qpcr o sondas de hibridacion (6 hrs) (7 hrs) IV: Diagnóstico de enfermedades de los animales domésticos mediante el uso de PCR OBJETIVO: El conocerá de la utilización de PCR para el diagnostico de enfermedades en animales domésticos, así como, su aplicación en otros problemas sanitarios. IV 4.1. Aplicaciones de la PCR en el diagnóstico de enfermedades Uso de PCR para enfermedades parasitarias.

4 4.2 Aplicación de PCR en problemas de fitopatogenos 4.3 Aplicación en el diagnóstico de resistencia a insecticidas 4.4 Aplicaciones de la PCR en el diagnóstico de la resistencia a fármacos (8hrs) Uso de PCR para enfermedades bacterianas Usos en diagnóstico de fitopatógenos Ventajas y desventajas de la PCR en el disgnostico de la resistencia a insecticidas Ventajas y desventajas del uso de la PCR en el diagnostico de resistencia a fármacos (17hrs) 6. METODOLOGÍA DE DESARROLLO DEL CURSO. Se establecen las estrategias y las actividades que sean funcionales y adecuadas para lograr el aprendizaje de los estudiantes. El curso se desarrollará mediante las siguientes estrategias y actividades: a) temas expuestos por el docente; b) lectura y análisis de material bibliográfico entregado a los estudiantes; c) prácticas de laboratorio; d) entrega de reportes, tareas y otros materiales solicitados por el docente. 7. SUGERENCIAS DE EVALUACIÓN. Se expondrán las estrategias, los procedimientos y las actividades de evaluación que, retomados de la experiencia de los cuerpos académicos, sean adecuados para una evaluación correcta. La evaluación del curso se llevará a cabo de la siguiente forma: a) exámenes escritos; b) exposición temática; c) asistencia y entrega de reportes de prácticas; d) participación en clase. 8. BIBLIOGRAFÍA Y SOFTWARE DE APOYO. Se enumerarán la bibliografía y el software de apoyo recomendado, además de las fuentes de información de distinta índole (hemerográficas, videográficas, electrónicas, etc.). Bibliografía ordinaria 1. Lewin, B. Genes VII. Oxford University Press Sambrook, J. et al. Molecular cloning, a laboratory manual. 3nd. ed. Cold Spring harbour Laboratory Press Innis, MA, et al. PCR Protocols, a guide to methods and applications. Academic Press Escobar, GA. Manual de Técnicas de Laboratorio, Vol III. INDRE-Secretaría de Salud, México Persing, DH., Smith, TF. Tenover, FC. Diagnostic molecular microbiology, principles and applications. American Society for Microbiology. USA Revistas científicas 1. Veterinary Parasitology 2. Plant Pathology 3. Canadian Journal of Plant Pathology 4. Enfermedades Infecciosas Microbiología Clínica 5. Journal of Clinical Microbiology 6. Veterinary Research

5 7. Applied and Environmental Microbiology Páginas electrónicas para búsqueda de artículos recientes 1. www. pubmed.org 2. www. nalusda.gov 3. www. fao.org/agris 9. PRÁCTICAS PROPUESTAS. Se deberán desarrollar las prácticas que se consideren necesarias por tema. Unidad Horas Prácticas (4hrs) I I I ( 4 hrs) Prácticas Lisis, extracción y concentración de ADN Electroforesis en agarosa Electroforesis en acrilamida Amplificación de secuencias nucleotídicas (PCR) Diagnóstico de un fitopatógeno Diagnóstico de un microorganismo ambiental Diagnóstico de un patógeno de animales domésticos IV V Diagnóstico mediante el uso de la RT-PCR Diagnóstico de resistencia a insecticidas 10. Nombre y firma del catedrático responsable. Dra. Leticia E. Medina Esparza

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