Diagnosticando el dengue. Juan E. Ludert Departamento de Infectómica y Patogénesis Molecular CINVESTAV-IPN; Ciudad de México

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Rosa Maestre Quintana
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1 Diagnosticando el dengue Juan E. Ludert Departamento de Infectómica y Patogénesis Molecular CINVESTAV-IPN; Ciudad de México

3 , Casos de Dengue (Región de las Américas, ) Fuente:

4 El dengue se expande a nuevos habitats

5 Curso clínico de la infección: n: Síntomas clínicos y hallazgos de laboratorio durante la infección por el virus dengue y sus posibles complicaciones, fiebre hemorrágica y síndrome de choque por dengue.

6 Contra el dengue: NO HAY: Vacunas Tratamientos específicos PERO SI HAY: Diagnóstico específico

7 Síntomas de la fiebre por dengue: Malaria Fiebre amarilla Leptospirosis Tifus

8 Diagnóstico de dengue: Aislamiento del virus en cultivos celulares Detección del genoma viral Detección de la antígenos virales (proteína NS1 circulante) Detección de inmuglobulinas específicas (IgM,IgA, IgG)

Detección de la antígenos virales (proteína NS1

9 NS1 circula en los sueros de pacientes a altas concentraciones: Peeling et al. 2010

10 Aislamiento viral: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Usos Cultivos celulares (C6/36 o Vero); Ratones lactantes Sueros Sangre completa Especificidad Identificación de serotipos Costos altos Tiempo (1 semana) Periodo de recolección de la muestra ( 5 días) No distingue entre infección primaria o secundaria Vigilancia epidemiológica Ensayos de vacunas

Sueros Sangre completa Especificidad Identificación de serotipos Costos altos Tiempo (1

11 Detección n del genoma viral: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Usos PCR (simple, anidada, multiplex) Sueros Sangre completa Tejidos Especificidad y sensibilidad Identificación de serotipos Resultados rápidos Costos altos Periodo de recolección de la muestra ( 5 días) Requiere de experticia Requiere laboratorios bien equipados No distingue entre infección primaria o secundaria Vigilancia epidemiológica Ensayos de vacunas Inoculaciones experimentales

sensibilidad Identificación de serotipos Resultados rápidos Costos altos Periodo de recolección de la muestra ( 5

12 Tasas de detección de distintos marcadores en relación al curso de la infección: IgM NS1 RT-PCR Aislamiento viral Kumarasamy et al., 2007

13 Relación inversa entre viremia y positividad a IgM específica Viral load [DENV (PFU eq/ml)] IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) IgM (-) IgM (+) n=26 n=7 n=48 n=14 n=51 n=26 n=53 n=44 n=18 n=47 n=5 n= Day after onset of fever

14 Diagnóstico de dengue: Aislamiento del virus en cultivos celulares Detección del genoma viral Detección de la antígenos virales (proteína NS1 circulante) Detección de inmuglobulinas específicas (IgM,IgA, IgG)

15 Proteínas codificadas por el virus del dengue Lumen RE Citoplasma

16 Proteína NS1 de dengue: Muller y Young, 2013

17 NS1 circula en los sueros de pacientes a altas concentraciones (µg/ml): Peeling et al. 2010

18 Detección n de NS1: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Usos Ensayos comerciales (ELISA, inmunocromatografía) Sueros Sangre completa Especificidad Resultados rápidos Facilidad de realización Periodo de recolección de la muestra ( 6 días) Sensibilidad (distintos serotipos, infección primaria versus secundaria) No distingue entre infección primaria o secundaria Diagnostico clínico Inoculaciones experimentales

completa Especificidad Resultados rápidos Facilidad de realización Periodo de recolección de la muestra

19 Variaciones en sensibilidad según el serotipo: Ramírez et al., 2009

20 Variaciones en los niveles de NS1 circulantes: De La Cruz Hernández et al. 2013

21 Felix et al. 2012

22 Niveles de NS1 en suero como marcador de riesgo? Libraty et al. 2000

23 Niveles de NS1 en suero como marcador de riesgo? Avirutnan et al. 2006

24 Niveles de NS1 en suero como marcador de riesgo? De La Cruz Hernández et al. 2013

25 Detección n de IgM/IgA: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Ensayos comerciales (ELISA, inmunocromatografía) Sueros Sangre completa Resultados rápidos Facilidad de realización Periodo de recolección de la muestra (> 6 días) Especificidad Sensibilidad en infecciones secundarias Usos Diagnostico clínico Vigilancia epidemiológica

26 Detección de IgA específica en sueros: De la Cruz Hernández et al. 2012

27 Tasas de detección de distintos marcadores en relación al curso de la infección: IgM NS1 RT-PCR Aislamiento viral Kumarasamy et al., 2007

28 Detección combinada de NS1 e IgM para el diagnóstico del dengue: La combinación n de pruebas = 91,9% de sensibilidad Dussart et al. 2006

29 Medición n de la relación n IgM/IgG: Cómo se realiza? Muestra Ventajas Desventajas Ensayos comerciales (ELISA) Sueros Sangre completa Permite distinguir infecciones primarias de secundarias Sensibilidad en infecciones secundarias (IgM) Usos Diagnostico clínico Vigilancia epidemiológica

30 NS1 circula en los sueros de pacientes a altas concentraciones: Peeling et al. 2010

31 Resumiendo: Métodos directos Métodos indirectos IgA Peeling et al. 2010

32 Resumiendo: Métodos directos Métodos indirectos IgA NS1+ IgM o IgA Peeling et al. 2010

33 Necesidades en diagnóstico de dengue: Desarrollo de estuches capaces de reconocer a la NS1 de los 4 serotipos con igual eficiencia. Aumentar la sensibilidad para la detección de NS1 en infecciones secundarias. Desarrollar estuches de NS1 cuantitativos? Desarrollo de estuches que combinen la detección de NS1 con IgM, IgA ó IgG. Evaluación/validación externa e independiente de estuches comerciales desarrollados por las compañías de biotecnología.

35 Muchas gracias por su atención

36 Muchas gracias por su atención

38 Curso de la infección: n: Xia, 2008

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