ACTUALIZACIONES EN PRUEBAS SEROLOGICAS Y MOLECULARES EN BANCO DE SANGRE
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- Julián Vargas Torregrosa
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1 FUNDACIÓN HEMOCENTRO BUENOS AIRES ACTUALIZACIONES EN PRUEBAS SEROLOGICAS Y MOLECULARES EN BANCO DE SANGRE IMPLEMENTACIÓN DENAT EN ARGENTINA Jorge Rey Jefe Div. ETT Hospital de Clínicas Universidad de Buenos Aires
2 CARACTERÍSTICAS DE LA DONACIÓN EN ARGENTINA Nº DE DONACIONES ANUALES COMUNICADAS AL ANLIS Nº DE DONACIONES ESTIMADO POR CONSUMO DE BOLSAS DE EXTRACCIÓN POR CIENTO DE DONACIONES REPETITIVAS < del 25%
3 PRUEBAS PARA LA SELECCIÓN DE DONANTES EN ARGENTINA MARCADOR HBsAg anti HBc anti HCV anti HIV1/2 Combo HIV/Ag p24 anti HTLV anti TC HAI anti TC EIE Anti-Cardiolipina/anti TP anti Bruc.
4 PREVALENCIA EN DONANTES DE SANGRE MARCADOR A (%) B (%) C (%) Anti HIV 0,19 0,23 P24 0, Combo HIV 0,51 Anti HCV 0,75 0, HBsAg 0,88 0, Anti HBc 3,17 2, A: ANLIS, Centro Nacional de Redes de Laboratorio, 2007: B: Proyecto Programa Nacional de Control de Hepatitis Virales. Epidemiología Informe N 8, 2008: C: Hospital de Clínicas. Universidad de Buenos Aires. Comunicación personal
5 CASOS DE HIV ADQUIRIDOS POR TRANSFUSIÓN EN ARGENTINA Total Transfusión TOTAL* % 1,04 0,70 0,57 0,54 0,78 0,34 0,65 *Número total de casos de HIV en Argentina Fuente: Dirección de Sida y ETS. Ministerio de Salud de la Nación Argentina: Boletín epidemiológico diciembre de 2005;
6 1,50 1,00 0,50 0,00 CASOS TRANSFUSIONALES DE HIV PORCENTUALES AÑO % T o t a l c a s o s c o m u n i c a d o s
7 NAT - INTRODUCCION En Argentina la industria realiza PCR desde Desde el año 2004 se comenzó a realizar NAT en Bancos de Sangre. En la actualidad hay 12 Centros que realizan NAT por distintos métodos. En nuestro país no existe obligatoriedad para la realización de NAT y por lo tanto se crean desigualdades en el suministro de sangre segura.
8 CÁLCULO DEL RIESGO RESIDUAL RRT = T i (casos x 10 6 ) Vs 365 d/año Donde: T i =tasa de incidencia= Incidencia Dadores/año (casos por 10 5 pac.) 10/06/09
9 Cálculo del rendimiento Rendimiento = RR x WPR WP RR= RIESGO RELATIVO WPR:REDUCCIÓN DEL PERÍODO DE VENTANA /WP:PERÍODO DE VENTANA 10/06/09
10 EJEMPLO Sensibilidad Analitica 50% LOD (copias/ml) HBsAg (no NAT) Numero de muestras en el pool Periodo de ventana infeccioso Incidencia = 3/10 5 pa RR en 10 6 Donaciones Rendimiento en 10 6 Donaciones Incidencia = 30/10 5 pa RR en 10 6 Donaciones Rendimiento en 10 6 Donaciones individual 38,3 3, , individual 22,0 1, donacione s 32,2 2,65 1,4 (1: ) 0,5 (1: ) 18 26,5 14 (1:71.000) 5 (1: ) Adaptacion de Busch MP et al. Transfusion (2005), 45(2), Kleinman S & Busch MP J Clin Vir (2006), 36(1) S23-S29
11 SUPONGAMOS: Incidencia=prevalencia=0.1%=100x10E-5 Período de Ventana=21 dí RR= 100x10E-5x21/365=57.5x10E-6 1 caso / Si Incidencia=0.2% 1 caso / 8695
12 ANTECEDENTES HISTÓRICOS Y LEGALES DE CASOS DE TRANSMISIÓN AÑO 1995: 2 PACIENTES HIV POST TRANSFUSIONAL (detectados por SC y clínica) TRANSMISION POR CGR. NO SE TRANSFUNDIERON CP NI PFC RESULTADOS DE DONANTES REPETIDOS EN PFC: p24 y anti HIV 3a Gen NEG (por ensayos de diferentes fabricantes) ESTUDIOS BM EN PFC: RNA HIV REACTIVOS ( Y cop/ml) JUICIOS. AMBOS FALLARON A FAVOR POR POSIBILIDADES METODOLOGICAS EXISTENTES
13 CAUSA N /96 A. H. C. JUZG. N 2 SECR. N 3 su reglamentación no impongan un determinado mecanismo de prueba aunque sí, como señalé, obligan a detectar la sangre infectada para evitar la transmisión del virus-; lo importante es que había pruebas más eficientes a los fines perseguidos, conocidas por la comunidad científica. Además, como ya sentenció este fuero, no es óbice para imputar responsabilidad que la conducta médica se ajuste a las prescripciones legales o reglamentarias, pues el saber y la prudencia médicas no surgen de los reglamentos administrativos. Imprudencia no necesariamente es sinónimo de infracción Reglamentaria (conf. Sala III, 2/06/2005, Chaves c/ Navarro y otros s/responsabilidad médica )
14 NAT para HIV y HCV en Hemocentros Argentinos Institución Marca DS/ pool Sens HCV UI/ml Sens HIV Cp/ml Inicio N Casos NAT+/ Serol- FUHESA NucliSens 48 NE NE 2004? 0 Hemocentro Buenos Aires NucliSens 48/96 NE NE CDCBios NucliSens 96/48 NE NE CIBIC Ampliscreen Congreso AAHI:2008
15 NAT para HIV y HCV en Hemocentros Argentinos Institución Marca DS/ pool Sens HCV UI/ml Sens HIV Cp/ml Inicio N Casos NAT+/ Serol- Hospital Italiano Rosario PCR in house 1 NE NE Fundación BS Cba Hospital Garrahan Ampliscreen 6 NE NE Ampliscreen Congreso AAHI:2008
16 EXPERIENCIA DEL HOSPITAL DE CLINICAS UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES
17 IMPLEMENTACIÓN EN EL ÁMBITO DE LA UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES (UBA) Se realiza mediante un protocolo de investigación aprobado por el Comité de Ética del Hospital de Clínicas y el Consejo Superior de la UBA y presentado ante la Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos Tecnología Médica (ANMAT)
18 PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN Características: REACTIVO COMERCIAL: PROCLEIX ULTRIO ENSAYO MULTIPLEX (HIV,HCV,HBV) AMPLIFICACIÓN ISOTÉRMICA: TMA TESTEO INDIVIDUAL EN PARALELO CON LA SEROLOGÍA
19 RESULTADOS OBTENIDOS Total de muestras: 5868 donantes Donantes BM reactiva: 6 HCV reactivos 6 HIV reactivos 3 HBV reactivos 1 No estudiado (muestra insuficiente)
20 DONANTES EIE + / NAT - MARCADOR Número de muestras HBsAg 2 anti HBc< anti HBc> anti HCV<3 2 7 anti HCV>3 2 1 HIV COMBO 13 COMBO + ahiv+ WB- 1 ahiv+ WB CO/S 2. S/CO
21 DONANTES EIE + / NAT + AÑO DADOR SEROLOGIA REACTIVA DISCRIMINATORIO Anti HCV /anti HBc Anti HCV HBsAg/anti HBc HBsAg/anti HBc Anti HIV/Combo HIV Anti HIV/Combo HIV Anti HIV/Combo HIV/anti HBc Anti HCV Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado Ultrio reactivo, discriminatorio no realizado
22 DONANTES EIE + / NAT + AÑO DADOR SEROLOGIA REACTIVA DISCRIMINATORIO Anti HIV/Combo HIV/anti HBc HIV HBsAg HBV Anti HCV HCV Anti HIV/Combo HIV HIV Anti HCV HCV HBsAg / anti HBc HBV Anti HCV HCV
23 DETECCIÓN DEL PRIMER PERÍODO DE VENTANA Donación de sangre: 03/06/08 Resultados: Anti-HIV 3rd generation Axsym : No Reactivo Anti-HIV/p24Ag Combo test Murex: No Reactivo Procleix Ultrio : Reactivo RP 17.0 Procleix Ultrio Discriminatorio: Reactivo para RNA de HIV, No Reactivo para HCV/HBV Anti-HCV Murex: No Reactivo HBsAg Murex: No Reactivo anti-hbc AxSym Abbott: No Reactivo anti HTLV I/II: No Reactivo HAI Chagas Polychaco: No Reactivo EIE Chagas Wiener: No Reactivo Sifilis USR Wiener: No Reactivo Brucelosis (Aglutinación en placa) Wiener: No Reactivo
24 Recitación: 23/06/08 DETECCIÓN DEL PRIMER PERÍODO DE VENTANA Resultados: Anti-HIV 3rd generation Axsym : Reactivo RP 10 Anti-HIV/p24Ag Combo test Murex: Reactivo RP7,0 Western Blott: Indeterminado (reactivo débil para gp 160) Procleix Ultrio : Reactivo RP 17.0 Procleix Ultrio Discriminatorio: Reactivo para RNA de HIV, No Reactivo para HCV/HBV Anti-HCV Murex: No Reactivo HBsAg Murex: No Reactivo anti-hbc AxSym Abbott: No Reactivo anti HTLV I/II: No Reactivo HAI Chagas Polychaco: No Reactivo EIE Chagas Wiener: No Reactivo Sifilis USR Wiener: No Reactivo Brucelosis (Aglutinación en placa) Wiener: No Reactivo
25 EIE- / NAT + FECHA MUESTRA RNA HIV 03/06/ cp/ml 1 1 Resultado obtenido usando Bayer Versant. Usando NASBA Real Time: 105 cp/ml. Usando Cobas Ampliprep/Cobas Taqman: 99 cp/ml Genotipificación: Summary Data: Sequence includes PR: codons 1-99 Sequence includes RT: codons There are no insertions or deletions Subtype and % similarity to closest reference isolate: PR: B (93,9%) RT: B (95,2%)
26 Detection of HIV-1 infection in blood donors during the immunological window period using the nucleic acid-amplification technology P. S. P. Scuracchio,* M. C. C. Poli,* M. M. M. Lemos,* A. G. Oliveira Filho,* N. A. Salles, D. A. F. Chamone, M. Magri, N. J. F. Cavalcante & R. Collela* * Banco de Sangue de Sa o Paulo, Fundacxa o Pro sangue/hemocentro de Sa o Paulo, Department of Hematology and Hemotherapy, Universidade de Sa o Paulo, and Reference and Training Center AIDS, Sa o Paulo, Brazil Received 1 November 2006; accepted for publication 2 February 2007 Transfusion Medicine, 2007, 17,
27 El número de NAT + / EIA negativo fue mayor que el estimado: 1,1 casos / CI 95% ( 7,1-14,5) estimado 4,18 casos / (encontrado) Aumento del riesgo puede ser explicado por dadores buscadores de pruebas, puede ser la explicación para este aumento del riesgo calculado. Ambos casos ocurrieron antes de los sintomas de fase aguda del HIV. Salles N., FSP, Congreso argentino de hemoterapia. 2007
28 Infección oculta por Virus Hepatitis B (HBV) en hemodonantes: detección y caracterización genómica parcial. Trinks, J 1 ; Gambino, G 2 ; Toledano, A 2 ; Bobillo, MC 3 ; Fernández Toscano, M 2 ; Cuestas, ML 1 ; Minassian, ML 1 ; Rivero, CW 1 ; Corach, D 3 ; Mathet, VL 1, Rey, J 2 ; Oubiña, JR 1. Población: 110 muestras de donantes de sangre, HBsAg NR, anti-hbc R 71 hombres, 39 mujeres Mediana de edad: 46 años Período: Mayo del Marzo del 2008 Ensayos utilizados: Procleix Ultrio en muestra individual, ensayo discriminatorio Amplificación de la región S por PCR anidada (Zheng y col W Jgastroenterol 2004.) Amplificación del genoma completo ((Sugauchi y col J of Gen Virol 2001) Amplificación de la región pre C (Birkenmeyer y col J Virol Met 994) Secuenciación nucleotídica Big Dye termination Chemistry, Applied Bio system Cuantificación DNA HBV, Roche Amplicor Monitor
29 Resultados: Procleix Ultrio: 3 muestras reactivas (2,7%) Ensayo discriminatorio: 2 muestras HBV DNA reactivas (1,82% IC 95%; 0,0%-4,31%). Cuantificación viral: Inferior a 50 copias/ml Otras amplificaciones génicas: bandas del tamaño esperado para las regiones genómicas del HBV comprendidas entre las posiciones 1736 a Secuenciación: El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica de la región Pre-core/core de una de las muestras reveló que ésta pertenece al genotipo E, oriundo de Africa y excepcional en nuestra población.
30 CONCLUSIONES: 1. Se documentó la presencia de infección oculta por HBV entre hemodonantes con anticuerpos anti-hbc (1,8% de la población estudiada). 2. La sensibilidad de la metodología empleada para detectar genomas virales es superior a la del enzimoinmunoensayo para pesquisar el HBsAg en la detección de portadores del HBV 3. El genotipo E exhibe la mayor divergencia aminoacídica entre los genotipos del HBV a nivel del determinante a del HBsAg, -lo cual puede afectar su detección mediante equipos comerciales que utilizan anticuerpos monoclonales- 4. La circulación y eventual propagación del genotipo E requeriría replanteos en los planes de inmunización
31 Al 2010 existen por lo menos 10 centros que procesan muestras de donantes por biología molecular para sus muestras y muestras de derivación. Estos centros se encuentran ubicados en Neuquén, Córdoba, Rosario y Gran Buenos Aires. No existe política oficial acerca de la obligatoriedad de la implementación. En aproximadamente muestras, utilizando single test o minipool, se han comunicado 6 períodos de ventana: 3 para HIV, 3 para HBV, y 1 para HCV.
32 Muchas gracias!!!!!
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