PAPP-A. Siemens Medical Solutions Diagnostics

Transcripción

1 PAPP-A Siemens Medical Solutions Diagnostics

2 IMMULITE 2000 PAPP-A English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Analyzer for the quantitative measurement of pregnancy-associated plasma protein A (PAPP-A) in serum or heparinized plasma. Catalog Number: L2KPC2 (200 tests), L2KPC6 (600 tests) Test Code: PAA Color: Brown Summary and Explanation Pregnancy-associated plasma protein (PAPP-A) is a large molecular weight placenta-derived glycoprotein. 1 During pregnancy it is produced in high concentrations by the trophoblast and released into maternal circulation. PAPP-A levels in maternal serum rise steadily with gestational age, most noticeably during the last part of pregancy. 2 The functional significance of PAPP-A is unclear. However, some studies suggest that reduced PAPP-A concentrations in pregnancy are associated with chromosomal abnormalities in the fetus. 3 Maternal serum PAPP-A assessment, between 11 and 14 weeks of pregnancy, is reported to have significant utility in screening for Down syndrome and other chromosomal anomalies. A combination of maternal age-related risk, free β-hcg and fetal nuchal translucency (NT) measurements might substantially increase the efficiency of prenatal screening compared to second-trimester screening; using this approach, various investigators have reported detection rates for Down syndrome of 85 to 90 percent at a 5 percent false-positive rate. 6,7 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 PAPP-A is a solid-phase, enzyme-labeled chemiluminescent immunometric assay. Incubation Cycles: 1 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. EDTA plasma is not suitable for use. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 PAPP-A has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum or plasma. Storage: 24 hours at 2 8 C or 2 months at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. 2 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

3 PAPP-A Bead Pack (L2PC12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-papp-a. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPC2: 1 pack. L2KPC6: 3 packs. PAPP-A Reagent Wedge (L2PCA2) With barcode ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti- PAPP-A in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KPC2: 1 wedge. L2KPC6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. PAPP-A Adjustors (LPCL, LPCH) Two vials (Low and High) of lyophilized PAPP-A, in a nonhuman serum matrix. Reconstitute each vial with 2.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 30 days after reconstitution, or for 3 months (aliquotted) at 20 C. L2KPC2: 1 set. L2KPC6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For the on-board dilution of patient samples. One vial, concentrated (ready-touse), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Storage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LPCCM: Bi-level control module in a nonhuman serum matrix. Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of PAPP-A. Expected Values Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in miu/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 3

4 serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: Up to 10 miu/ml The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: miu/ml High-Dose Hook Effect: None up to 115 miu/ml. Precision: Samples were repeatedly assayed in duplicate over the course of several days, for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three PAPP-A solutions (20, 40 and 80 miu/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for PAPP-A. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Effects of the presence of hemoglobin were evaluated by spiking 10, 20, and 30 µl of a red cell hemolysate (corresponding to 157, 314, and 550 mg/dl hemoglobin) into 1 ml alliquots of 5 patient samples. Hemoglobin in concentrations up to 157 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Higher levels of hemoglobin may cause slight elevations in results (See "Hemoglobin" table). Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 20 volunteers into plain and heparinized tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of PAPP-A, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 PAPP-A procedure. (Heparin) = 1.08 (Serum) miu/ml r = Means: 4.72 miu/ml (Serum) 5.18 miu/ml (Heparin) In another study, blood was collected from 24 volunteers into plain and EDTA tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of PAPP-A, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 PAPP-A procedure. (EDTA) = 1.21 (Serum) miu/ml r = Means: 3.65 miu/ml (Serum) 4.43 miu/ml (EDTA) EDTA plasma is not suitable for use. Method Comparison 1: The assay was compared to a commercially available assay for PAPP-A (Kit A) on 152 patient samples. (Concentration range: approximately 0.3 to 10 miu/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.99 (Kit A) miu/ml r = Means: 3.82 miu/ml (IMMULITE 2000) 3.36 miu/ml (Kit A) Method Comparison 2: The assay was compared to IMMULITE PAPP-A on 283 samples. (Concentration range: approximately 0.3 to 10 miu/ml. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 1.03 (IML) 0.06 miu/ml r = Means: 3.70 miu/ml (IMMULITE 2000) 3.64 miu/ml (IMMULITE) References 1) Lin, T-M, et al. Characterization of four human pregnancy-associated plasma proteins. Am J Obstet Gynecol 1974; 118: ). Lin, T- M, et al. Measurment of pregnancy-associated plasma proteins during human gestation. J Clin Invest 1974; 54: ) Pederson, J. F. et al. Serum levels of human placental lactogen, pregnancy-associated plasma protein A and endometrial secretory PP14 in first trimester of diabetic pregnancy. Acta Obstet Gynecol Scand 1998; 77: ) Wald NJ, et al. Serum screening for Down's syndrome between 8 and 14 weeks of pregnancy. Br J Obstet Gynaecol 1996; 103: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. 4 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

5 NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, ) Bindra R, et al. One-stop clinic for assessment of risk for trisomy 21 at weeks: a prospective study of 15,030 pregnancies. Ultrasound Obstet Gynecol 2002;3: ) Wald NJ, Hackshaw AK. Advances in antenatal screening for Down syndrome. Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2000;14(4): Technical Assistance Available outside the United States only. For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Medical Solutions Diagnostics Limited is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precison (miu/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Linearity (miu/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % 5 8 in in % 2 in % 1 in % IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 5

6 Recovery (miu/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 ND A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Hemolysis Hemoglobin Added mg/dl 1 Observed 2 Expected 3 % O/E % % % % % % % % % % % % % % % Specificity Compound 1 Amount Added 2 % Cross reactivity 3 Alpha2-Macroglobulin 350 mg/dl ND Angiotensinogen 0.3 µmol/l ND Angiotensin pg/ml ND Angiotensin pg/ml ND SHBG 170 nmol/l ND HCG 60,000 miu/ml ND AFP 400 IU/mL ND Prolactin 200 ng/ml ND ND: Not detectable. 4 Method Comparison 1 IMMULITE 2000 PAPP-A Kit A, miu/ml (IML 2000) = 0.99 (Kit A) miu/ml r = IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

7 Method Comparison 2 IMMULITE 2000 PAPP-A Português. Precisão: 1 Entre-ensaios, 2 Total, 3 Média, 4 Desvio padrão, 5 Coeficiente de variação. Lineariedade: 1 Diluição, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E, 5 8 em 8. Recuperação: 1 Solução, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E. : 1 Composto, 2 Quantidade adicionada, 3 Percentagem de reacção cruzada, 4 ND: não detectável. Efeito de Hemólise: 10 Hemoglobina adicionada (mg/dl), 1 Solução, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E. Comparação do Método: PAPP-A: PAPP-A IMMULITE PAPP-A, miu/ml (IML 2000) = 1.03 (IML) 0.06 miu/ml r = Deutsch. Precision: 1 Intra-Assay, 2 Gesamt, 3 Mittelwert, 4 S (Standardabweichung), 5 CV (Variationskoeffizient). Linearity: 1 Verdünnung, 2 Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4 % B/E, 5 8 in 8. Recovery: 1 Lösung, 2 Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4 % B/E. Specificity: 1 Verbindung, 2 zugesetzte Menge, 3 % Kreuzreaktivität, 4 NN: Nicht nachweisbar. Effect of Hemolysis: 10 zugesetzte Hämoglobin (mg/dl), 1 Lösung, 2 Beobachtet (B), 3 Erwartet (E), 4 % B/E. Method Comparison: PAPP-A: PAPP-A. Español. Precision: 1 Intraensayo, 2 Total, 3 Media, 4 DS, 5 CV. Linearity: 1 Dilución, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E, 5 8 en 8. Recovery: 1 Solución, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E. Specificity: 1 Compuesto, 2 Cantidad añadida, 3 % Reacción cruzada, 4 ND: no detectable. Effect of Hemolysis: 10 Hemoglobina añadida (mg/dl), 1 Solución, 2 Observado (O), 3 Esperado (E), 4 %O/E. Method Comparison: PAPP-A: PAPP-A. Français. Precision: 1 Intraessai, 2 Total, 3 Moyenne, 4 SD, 5 CV. Linearity: 1 Dilution, 2 Observé (O), 3 Attendu (A), 4 %O/A, 5 8 dans 8. Recovery: 1 Solution, 2 Observé (O), 3 Attendu (A), 4 %O/A. Specificity: 1 Composé, 2 ajouté, 3 Réaction croisée%, 4 ND: non détectable. Effect of Hemolysis: 10 Hémoglobine ajouté (mg/dl), 1 Solution, 2 Observé (O), 3 Attendu (A), 4 %O/A. Method Comparison: PAPP-A: PAPP-A. Italiano. Precision: 1 Intra-serie, 2 Totale, 3 Media, 4 SD (Deviazione Standard), 5 CV (Coefficiente di Variazione). Linearity: 1 Diluizione, 2 Osservato (O), 3 Atteso (A), 4 %O/A, 5 8 in 8. Recovery: 1 Soluzione, 2 Osservato (O), 3 Atteso (A), 4 %O/A. Specificity: 1 Composto, 2 quantità aggiunta, 3 Percentuale di Crossreattività, 4 ND: non determinabile. Effect of Hemolysis: 10 Emoglobina aggiunta (mg/dl), 1 Soluzione, 2 Osservato (O), 3 Atteso (A), 4 %O/A. Method Comparison: PAPP-A: PAPP-A. Deutsch IMMULITE 2000 PAPP-A Anwendung: Zur in vitro Diagnostik unter Verwendung des IMMULITE 2000 für die quantitative Bestimmung von Pregnancy-Associated Plasma Protein A (PAPP-A) in Serum oder Heparin-Plasma. Artikelnummern: L2KPC2 (200 Tests), L2KPC6 (600 Tests) Testcode: PAA Farbe: braun Klinische Relevanz Das Schwangerschafts-assoziierte Plasmaprotein (PAPP-A) ist ein glykosiliertes hochmolekulares Protein, welches in der humanen Plazenta produziert wird. 1 Während der Schwangerschaft wird es in hohen Konzentrationen durch den Throphoblasten produziert und in die mütterliche Zirkulation abgegeben. PAPP- A Konzentrationen im mütterlichen Serum steigen bis zum Geburtstermin stetig an (vor allem im letzten Teil der Schwangerschaft). 2 Die physiologische Funktion von PAPP-A ist noch unbekannt. Trotzdem wird in einigen Studien darauf verwiesen, dass erniedrigte PAPP-A Konzentrationen in der Schwangerschaft mit chromosomalen Abnormalitäten im Fötus assoziiert sind. 3 Für die Bestimmung des PAPP-A im mütterlichen Serum wird eine signifikante Nützlichkeit im Screening auf DOWN- Syndrom und andere chromosomale Abnormalitäten berichtet. Eine Kombination des altersbezogenen Risikos, der Messung des freien-ß-hcg und der fötalen Nackenfaltentransparenz könnte substantiell die Effizienz des pränatalen IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 7

8 Screenings im Vergleich zum Zweit- Trimester-Screening verbessern. Diesen Ansatz nutzend, haben eine Reihe von Anwendern Detektionsraten von 85 90% bei einer falsch-positiven Rate von 5% für das DOWN-Syndrom berichtet. 6,7 Methodik IMMULITE 2000 PAPP-A ist ein festphasen-gebundener, enzymmarkierter, immunometrischer Chemilumineszenzassay. Inkubationszyklen: 1 30 min. Probengewinnung Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klärung von lipämischen Proben empfohlen. Bei hämolysierten Proben besteht die Möglichkeit einer unsachgemäßen Handhabung vor Eintreffen im Labor, daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu interpretieren. EDTA-Plasma ist zur Verwendung nicht zu empfehlen. Die Zentrifugation der Serumproben vor dem völligen Abschluss der Gerinnung kann zu Fibringerinnseln führen. Um fehlerhaften Analysenergebnissen infolge von Gerinnseln vorzubeugen, ist sicherzustellen, dass die Gerinnung vor der Zentrifugation der Proben vollständig abgeschlossen ist. Insbesondere Proben von Patienten unter Antikoagulantientherapie können eine verlängerte Gerinnungszeit aufweisen. Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen Herstellern könne zu unterschiedlichen Ergebnissen führen, abhängig vom Material und den Zusätzen (Gel- und physikalische Barrieren, Gerinnungsaktivatoren und / oder Antikoagulantien). Der IMMULITE 2000 PAPP-A wurde nicht mit allen möglichen Röhrchenvariationen getestet. Details über die getesteten Röhrchenarten entnehmen Sie bitte dem Abschnitt Alternative Probentypen. Erforderliche Menge: 10 µl Serum oder Plasma. Lagerung: 24 Stunden bei 2 8 C oder 2 Monate bei 20 C. Hinweise und Vorsichtsmaßnahmen Zur In-vitro-Diagnostik. Reagenzien: Bei 2 8 C lagern. Die Entsorgung muss nach den jeweils gültigen Gesetzen erfolgen. Die generell geltenden Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektiös zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflächenantigen und Hepatitis-C-Antikörper untersucht und negativ befundet. Chemilumineszenz-Substrat: Kontamination und direkte Sonneneinstrahlung vermeiden. Siehe Packungsbeilage. Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser benutzen. Im Lieferumfang enthalten Die Bestandteile sind aufeinander abgestimmt. Die Aufkleber auf der Innenverpackung werden zur Testdurchführung gebraucht. PAPP-A Kugel-Container (L2PC12) Barcodiert. 200 Kugeln beschichtet mit Anti-PAPP-A (monoklonal, Maus). Bei 2 8 C bis zum Verfallsdatum haltbar. L2KPC2: 1 Container. L2KPC6: 3 Container. PAPP-A Reagenzbehälter (L2PCA2) Barcodiert. 11,5 ml alkalische Phosphatase konjugiert mit Anti-PAPP-A (monoklonal, Maus) in Puffer. Bei 2 8 C bis zum Verfallsdatum haltbar. L2KPC2: 1 Behälter. L2KPC6: 3 Behälter. Vor Gebrauch den Aufkleber an der Perforation abreißen, ohne dabei die Barcodierung zu beschädigen. Die Folie von der Oberseite des Containers entfernen. Die Folie von der Oberseite des Containers entfernen. Den Schiebedeckel nach unten in die Führung des Reagenziendeckels einrasten lassen. PAPP-A Kalibratoren (LPCL, LPCH) Zwei Fläschchen (niedrig und hoch) mit lyophilisiertem PAPP-A in nicht humaner 8 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

9 Serum-Matrix. Die Fläschchen mit je 2,0 ml destilliertem oder deionisiertem Wasser rekonstituieren. Zum Mischen leicht schwenken oder umdrehen, bis das lyophilisierte Material vollständig aufgelöst ist. Nach Rekonstituierung 30 Tage bei 2 8 C, sonst 3 Monate (portioniert) bei 20 C haltbar. L2KPC2: 1 Set. L2KPC6: 2 Sets. Vor der Kalibrierung die entsprechenden Aufkleber (dem Kit beiliegend) auf Glasröhrchen kleben, so daß die Barcodes vom Barcodereader des Systems gelesen werden können. Separat erhältliche Testsystem- Komponenten Multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Zum automatischen Verdünnen der Patientenproben. Eine Flasche enthält eine konzentrierte nichthumane Protein/Puffermatrix (gebrauchsfertig), mit Konservierungsstoffen. Lagerung: 30 Tage (nach dem Öffnen) bei 2 8 C oder 6 Monate (aliquotiert) bei 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz (Diluents) werden Barcode Etiketten mitgeliefert. Vor Verwendung ein entsprechendes Etikett so auf ein mm Teströhrchen kleben, dass es vom eingebauten Barcode Reader gelesen werden kann. L2M2Z: 3 Etiketten L2M2Z4: 5 Etiketten L2SUBM: Chemilumineszenz-Substrat L2PWSM: Waschmodul L2KPM: Reinigungsmodul LRXT: (Einmal-) Reaktionsgefäße L2ZT: 250 Probenverdünnungs-röhrchen L2ZC: 250 Deckel für die Probenverdünnungsröhrchen LPCCM: Kontrollmodul (2 Konzentrationen) in einer nichthumanen Serummatrix. Ebenfalls benötigt Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser; Teströhrchen; Kontrollen. Testdurchführung Für eine optimale Funktion des Gerätes ist unbedingt zu beachten, dass die Wartungen, wie im IMMULITE Handbuch beschrieben, regelmäßig durchgeführt werden. Hinweise zur Vorbereitung, täglichen Inbetriebnahme des Systems, der Kalibrierung sowie Verfahren zur Testund Qualitätskontrolle entnehmen Sie bitte dem IMMULITE 2000-Handbuch. Empfohlenes Kalibrationsintervall: 4 Wochen. Qualitätskontrollseren: Kontrollen oder Pool-Seren mit PAPP-A in zumindest zwei Konzentrationen (niedrige und hohe) verwenden. Referenzwerte Jedes Labor sollte seine eigenen Referenzbereiche etablieren. Grenzen der Methode Heterophile Antikörper in Humanseren können mit Immunglobulinen aus den Assaykomponenten reagieren und Interferenzerscheinungen innerhalb des in vitro Immunoassays verursachen. (Clin. Chem. 1988:34:27-33) Proben von Patienten, die häufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten zu tun haben, können die erwähnten Interferenzen verursachen und zu anomalen Resultaten führen. Die verwendeten Reagenzien sind so konzipiert, dass das Risiko einer Interferenz mit den zu messenden Proben minimiert ist. Dennoch können potentiell Interaktionen zwischen seltenen Seren und den Testkomponenten auftreten. Zu diagnostischen Zwecken sollten die mit dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer in Kombination mit der klinischen Untersuchung, der Patientenanamnese und anderen Befunden gesehen werden. Leistungsdaten Siehe Tabellen und Grafiken mit repräsentativen Daten für den Assay. Die Ergebnisse sind als miu/ml ausgedrückt. (Alle Daten wurden - sofern nicht anders angegeben - aus Serumproben in Röhrchen ohne Gelbarrieren oder gerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.) Messbereich: bis 10 miu/ml Die Methode ist rückführbar auf einen internen Standard, der mittels qualifizierter Materialien und Messmethoden hergestellt wurde. IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 9

10 Analytische Sensitivität: 0,025 miu/ml High-Dose-Hook-Effect: keiner bis 115 miu/ml. Präzision: Proben wurden wiederholt innerhalb von mehreren Tagen in Doppelbestimmung gemessen (insgesamt 40 Bestimmungen und 80 Einzelmessungen). (Siehe Tabelle Precision.) Linearität: Proben wurden in verschiedenen Verdünnungen getestet. (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle Linearity.) Wiederfindung: Proben wurden mit drei PAPP-A-Lösungen (20, 40 und 80 miu/ml) im Verhältnis von 1:19 versetzt (Repräsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle Recovery.) Spezifität: Hochspezifischer PAPP-A- Antikörper. (siehe Tabelle Specificity.) Bilirubin: Konjugiertes und unkonjugiertes Bilirubin hat in Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die Messung, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Hämolyse: Effekte vorhandenen Hämoglobins wurden durch das Spiken von 1 ml Aliquots von 5 Patientenproben mit 10, 20 und 30 µl Hämolysat (entsprechend 157, 314 und 559 mg/dl) Hämoglobin) evaluiert. Hämoglobin bis zu einer Konzentration von 157 mg/dl hatte, innerhalb der Präzision des Assays, keinen Effekt. Höhere Level an Hämoglobin können eine geringfügige Erhöhung der Resultate bewirken (Siehe Tabelle Hemoglobin"). Lipämie: Triglyceride hat in Konzentrationen bis zu mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als die Impräzision des Assays selbst ist. Alternativer Probentyp: Um den Einfluss von alternativen Probentypen zu überprüfen, wurde 20 Freiwilligen Blut in Heparin-Röhrchen entnommen. Gleiche Volumen derselben Probe wurden mit verschiedenen Konzentrationen an PAPP- A versetzt, um Werte über den gesamten Kalibrationsbereich des Assays zu erhalten, und wurden anschließend mit dem IMMULITE 2000 PAPP-A Assay bestimmt. (Heparin) = 1,08 (Serum) + 0,08 miu/ml r = 0,996 Mittelwerte: 4,72 miu/ml (Serum) 5,18 miu/ml (Heparin) In einer weiteren Studie wurde Blut von 24 Freiwilligen in zusatzfreien und EDTA- Röhrchen gesammelt. Gleiche Volumina ausgewählter Proben wurden mit verschiedenen Konzentrationen an PAPP- A versetzt, um Werte über den gesamten Kalibrationsbereich des Assays zu erhalten, und wurden anschließend mit dem IMMULITE 2000 PAPP-A Assay bestimmt. (EDTA) = 1,21 (Serum) + 0,02 miu/ml r = 0,995 Mittelwerte: 3,65 miu/ml (Serum) 4,43 miu/ml (EDTA) EDTA-Plasma ist zur Verwendung nicht zu empfehlen. Methodenvergleich 1: Der Assay wurde anhand von 152 Patientenproben mit einem kommerziell erhältlichen PAPP-A Assay verglichen. (Konzentrationsbereich: ca. 0,3 10 miu/ml. Siehe Grafik.) Berechnung der linearen Regression: (IML 2000) = 0,99 (Kit A) + 0,5 miu/ml r = 0,973 Mittelwerte: 3,82 miu/ml (IMMULITE 2000) 3,36 miu/ml (Kit A) Methodenvergleich 2: Der Assay wurde anhand von 283 Proben mit dem IMMULITE PAPP-A Assay verglichen. (Konzentrationsbereich: ca. 0,3 10 miu/ml. Siehe Grafik.) Berechnung der linearen Regression: (IML 2000) = 1,03 (IML) 0,06 miu/ml r = 0,995 Mittelwerte: 3,70 miu/ml (IMMULITE 2000) 3,64 miu/ml (IMMULITE) Anwendungsberatung Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an Ihre Siemens Medical Solutions Diagnostics Niederlassung. Das Qualitätsmanagement-System der Siemens Medical Solutions Diagnostics Limited ist zertifiziert nach DIN EN ISO 13485: IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

11 Español IMMULITE 2000 PAPP-A Utilidad del análisis: Para uso diagnóstico in vitro con el Analizador IMMULITE 2000, para la medición cuantitativa de la proteína A plasmática asociada al embarazo (PAPP-A) en suero o plasma heparinizado. Referencia: L2KPC2 (200 tests), L2KPC6 (600 tests) Código del Test: PAA Código de Color: Marrón Resumen y Explicación del Test La proteína plasmática asociada al embarazo (PAPP-A) es una glicoproteína de alto peso molecular derivada de la placenta. 1 Durante el embarazo es producida en altas concentraciones por el trofoblasto y liberada a la circulación materna. Los niveles de PAPP-A en el suero materno se elevan en forma constante con la edad gestacional, más apreciablemente durante la última parte del embarazo. 2 La importancia funcional de PAPP-A no es clara. Sin embargo, algunos estudios sugieren que concentraciones reducidas de PAPP-A en el embarazo están asociadas con anomalías cromosómicas en el feto. 3 Se ha informado que la evaluación de PAPP-A en el suero materno entre las semanas 11 y 14 de embarazo tiene una utilidad importante en la detección del síndrome de Down y otras anomalías cromosómicas. Una combinación del riesgo materno relacionado con la edad, la β-hcg libre y mediciones de la translucencia nucal (NT) incrementa la eficacia de los exámenes de detección prenatales en comparación con los exámenes realizados en el segundo trimestre del embarazo; con esta aproximación, varios investigadores han informado porcentajes de detección para el síndrome de Down de 85 a 90 por ciento, con un 5 por ciento de falsos positivos. 6,7 Principio del análisis El IMMULITE 2000 PAPP-A es un ensayo enzimático inmunométrico quimioluminiscente en fase sólida. Ciclos de incubación: 1 30 minutos. Recogida de la muestra Se recomienda el uso de una ultracentrífuga para aclarar las muestras lipémicas. Las muestras hemolizadas podrían indicar una mala manipulación de las mismas antes de ser recibidas por el laboratorio; en este caso, los resultados deben interpretarse con precaución. El plasma EDTA no es apropiado para su uso. La centrifugación de las muestras de suero antes de que se forme el coagulo puede ocasionar la presencia de fibrina. Para evitar resultados erróneos debidos a la presencia de fibrina, asegurarse que se ha formado el coagulo completamente antes de centrifugar las muestras. Algunas muestras, particularmente aquellas de pacientes sometidos a terapia anticoagulante, pueden requerir mayor tiempo de coagulación. Los tubos para recoger sangre de distintos fabricantes pueden producir valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras ísicas, activadores de la coagulación y/o anticoagulantes. El PAPP-A IMMULITE 2000 no ha sido analizado con todos los distintos tipos de tubos. Para obtener detalles sobre los tipos tubos que se han analizado, consulte la sección de Tipos de Muestras Alternativos. Volumen requerido: 10 µl de suero o plasma. Conservación: 24 horas a 2 8 C o 2 meses a 20 C. Advertencias y precauciones Para uso diagnóstico in vitro. Reactivos: Mantener a 2 8 C. Desechar de acuerdo a la legislación en vigor. Seguir las precauciones universales y manipular todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 11

12 sangre humana han sido analizados y son negativos para sífilis; para anticuerpos frente al VIH 1 y 2; para el antígeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Sustrato quimioluminiscente: Evitar la contaminación y exposición a la luz directa del sol. (Ver el prospecto.) Agua: Usar agua destilada o desionizada. Materiales suministrados Los componentes representan un juego completo. Las etiquetas incluidas en la caja son necesarias para el ensayo. Cartucho de bolas de PAPP-A (L2PC12) Con código de barras. 200 bolas recubiertas con anticuerpo monoclonal murino anti-papp-a. Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad. L2KPC2: 1 cartucho. L2KPC6: 3 cartuchos. Vial de reactivo de PAPP-A (L2PCA2) Con código de barras. 11,5 ml de fosfatasa alcalina (de intestino de ternera) conjugada con monoclonal murino anti- PAPP-A en solución tampón. Estable a 2 8 C hasta la fecha de caducidad. L2KPC2: 1 juego. L2KPC6: 2 juegos. Antes de usar, cortar la parte superior de la etiqueta en la perforación, sin dañar el código de barras. Quitar el precinto del orificio del vial; encajar la cubierta deslizante en las rampas de la tapa del reactivo. Ajustadores de PAPP-A (LPCL, LPCH) Dos viales (bajo y alto) de PAPP-A liofilizada en una matriz no humana de suero. Reconstituya cada vial con 2,0 ml de agua destilada o desionizada. Mezcle por agitación o inversión suave hasta que se haya disuelto completamente el material liofilizado. Estable a 2 8 C durante 30 días después de la reconstitución o hasta 3 meses (alicuotados) a 20 C. L2KPC2: 1 juego. L2KPC6: 2 juegos. Antes de hacer un ajuste, colocar las etiquetas a las alícuotas apropiadas (suministradas con el kit) sobre tubos de ensayo, de forma tal que los códigos de barras puedan ser leídos por el lector. Componentes del kit que se suministran por separado Multidiluyente 2 (L2M2Z L2M2Z4) Para la dilución de las muestras de pacientes en el equipo. Un vial de un concentrado listo para usar de una matriz proteica no humana con conservantes. Conservación: 30 días (después de su apertura) a 2 8 C o 6 meses (alicuotado) a 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Se suministran etiquetas con códigos de barras para usarse con este diluyente. Antes de usar, colocar la etiqueta con el código de barras en un tubo de ensayo de mm, así los códigos de barras pueden ser identificados por el lector del instrumento. L2M2Z: 3 etiquetas L2M2Z4: 5 etiquetas L2SUBM: Substrato quimioluminiscente L2PWSM: Lavado de sonda L2KPM: Kit de limpieza de sonda LRXT: Tubos de reacción (desechables) L2ZT: 250 Tubos De Prueba Del Diluyente De la Muestra (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Casquillos Del Tubo Del Diluyente De la Muestra LPCCM: Módulo de control de dos niveles en una matriz de suero no humana. También necesarios Agua destilada o desionizada; tubos de ensayo; controles. Ensayo Aviso: para obtener el funcionamiento óptimo, es importante realizar todos los procedimientos del mantenimiento general según lo definido en el manual del operador de IMMULITE Consulte el Manual del operador de IMMULITE 2000 para: la preparación, instalación, dilución, ajuste, ensayo y procedimientos de control de calidad. Intervalo de ajuste recomendado: 4 semanas. Muestras de Control de Calidad: Usar controles o pools de muestras con dos niveles diferentes, como mínimo, de PAPP-A (bajo y alto). Valores esperados Cada laboratorio deberá establecer sus propios intervalos de referencia. 12 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

13 Limitación Los anticuerpos heterofílicos en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los componentes del ensayo provocando interferencias con los inmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Las muestras de los pacientes que frecuentemente están expuestos a animales o a productos séricos animales pueden presentar este tipo de interferencia que potencialmente ocasione un resultado anómalo. Estos reactivos han sido formulados para minimizar el riesgo de interferencia, no obstante, pueden darse interacciones anómalas entre sueros conflictivos y los componentes del ensayo. Con fines de diagnóstico, los resultados obtenidos con este ensayo siempre deben ser usados en combinación con el examen clínico, la historia médica del paciente y cualquier otro dato clínico relevante. Características analíticas Para ver resultados representativos de las cualidades del ensayo, consultar las tablas y los gráficos. Los resultados se expresan en miu/ml. (A no ser que se indique lo contrario, todos los resultados fueron generados en muestras de suero recogidas en tubos sin geles o activadores de la coagulación). Intervalo de calibración: Hasta 10 miu/ml El ensayo es trazable a un estándar interno fabricado usando procedimientos de medida y materiales cualificados. Sensibilidad analítico: 0,025 miu/ml Efecto de gancho a altas dosis: Ninguno hasta 115 miu/ml. Precisión: Se analizaron repetidamente muestras por duplicado durante varios días por un total de 40 tandas y 80 replicados. (Ver la tabla "Precision".) Linealidad: Las muestras fueron analizadas con varias diluciones. (Ver la tabla "Linearity" para resultados representativos.) Recuperación: Se han analizado las muestras cargadas 1 a 19 con tres soluciones (20, 40 y 80 miu/ml) de PAPP-A. (Ver la tabla "Recovery" para resultados representativos). Especificidad: El anticuerpo es altamente específico para PAPP-A. (Ver la tabla "Specificity".) Bilirrubina: La presencia de bilirrubina conjugada y libre en concentraciones hasta 200 mg/l no tiene efecto en el ensayo, en lo concerniente a la precisión del ensayo. Hemólisis: Se evaluó el efecto de la presencia de hemoglobina sobrecargando 10, 20 y 30 µl de glóbulos rojos hemolizados (correspondiente a 157, 314 y 550 mg/dl de hemoglobina) en alícuotas de 1 ml de 5 muestras de pacientes. Las concentraciones de hemoglobina de hasta 157 mg/dl no tienen ningún efecto sobre los resultados, dentro del la precisión del ensayo. Niveles mayores de hemoglobina podrían causar una elevación leve en los resultados. (Ver la tabla "Hemoglobin"). Lipemia: La presencia de triglicéridos en concentraciones de hasta mg/dl no tiene efecto alguno en los resultados, en lo correspondiente a la precisión del ensayo. Tipo de Muestra Alternativa: Para evaluar el efecto de los diferentes tipos de muestras alternativos, se recogió sangre de 20 voluntarios en tubos normales y tubos con heparina. Volúmenes iguales de las diferentes muestras fueron sobrecargados con diferentes concentraciones de PAPP-A, con la finalidad de cubrir todo el rango de calibración del ensayo, y luego procesados con el procedimiento PAPP-A IMMULITE (Heparina) = 1,08 (Suero) + 0,08 miu/ml r = 0,996 Medias: 4,72 miu/ml (Suero) 5,18 miu/ml (Heparina) En otro estudio se recogió sangre de 24 voluntarios en tubos normales y tubos con EDTA. Volúmenes iguales de las diferentes muestras fueron sobrecargados con diferentes concentraciones de PAPP-A, con la finalidad de cubrir todo el rango de calibración del ensayo, y procesados con el procedimiento PAPP-A IMMULITE (EDTA) = 1,21 (Suero) + 0,02 miu/ml r = 0,995 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 13

14 Medias: 3,65 miu/ml (Suero) 4,43 miu/ml (EDTA) El plasma EDTA no es apropiado para su uso. Comparación del método 1: El ensayo se comparó con un ensayo de PAPP-A disponible en el mercado (Kit A) en 152 muestras de pacientes. (Intervalo de concentración: aproximadamente 0,3 10 miu/ml. Ver el gráfico). Por regresión lineal: (IML 2000) = 0,99 (Kit A) + 0,5 miu/ml r = 0,973 Medias: 3,82 miu/ml (IMMULITE 2000) 3,36 miu/ml (Kit A) Comparación del método 2: El ensayo se comparó con el PAPP-A IMMULITE en 283 muestras. (Intervalo de concentración: aproximadamente 0,3 a 10 miu/ml. Ver el gráfico). Por regresión lineal: (IML 2000) = 1,03 (IML) 0,06 miu/ml r = 0,995 Medias: 3,70 miu/ml (IMMULITE 2000) 3,64 miu/ml (IMMULITE) Asistencia técnica Póngase en contacto con el distribuidor nacional. El Sistema de Calidad de Siemens Medical Solutions Diagnostics Limited está certificado por la ISO 13485:2003. Français IMMULITE 2000 PAPP-A Domaine d'utilisation: Réservé à un usage diagnostique in vitro avec l'analyseur IMMULITE 2000 pour la mesure quantitative de la protéine A plasmatique associée à la grossesse (PAPP-A) dans le sérum ou le plasma hépariné. Référence catalogue : L2KPC2 (200 tests), L2KPC6 (600 tests) Code produit : PAA Code couleur : marron Introduction La protéine A plasmatique associée à la grossesse (PAPP-A) est une glycoprotéine d'origine placentaire de haut poids moléculaire. 1 Pendant la grossesse, elle est produite en grande quantité par le trophoblaste et libérée dans la circulation maternelle. Les taux de PAPP-A dans le sérum maternel augmentent avec l'âge gestationnel, de façon plus importante en fin de grossesse. 2 La signification fonctionnelle de la PAPP-A n'est pas Claire. Cependant, quelques études suggèrent que des concentrations diminuées de PAPP-A pendant la grossesse sont associées avec des anomalies chromosomiques du foetus. 3 Le dosage de la PAPP-A dans le sérum maternel entre 11 et 14 semaines de grossesse aurait une utilité significative dans le dépistage de la trisomie 21 et d'autres anomalies chromosomiques. L'utilisation combinée du risque relatif à l'âge maternel, du dosage de la βhcg libre et de le mesure de la clarté nucale du foetus (NT) pourrait considérablement augmenter l'efficacité du dépistage pendant le 2 nd trimestre; grâce à cette approche, plusieurs équipes ont rapporté des taux de détection de Trisomie 21 de 85 à 90% avec un taux de faux positif de 5%. 6,7 Principe du test IMMULITE 2000 PAPP-A est un dosage immunométrique chimiluminescent, enzymatique, en phase solide. Cycle d'incubation : 1 30 minutes. Recueil des échantillons Il est recommandé de clarifier les échantillons hyperlipémiques par ultracentrifugation. Des échantillons hémolysés peuvent être révélateurs d'une préparation inadéquate du prélèvement avant son envoi au laboratoire ; il faudra donc interpréter les résultats avec prudence. Ne pas utiliser de plasma EDTA. La centrifugation des échantillons sériques avant la formation complète du caillot peut entraîner la présence de fibrine. Pour éviter les résultats erronés dûs à la présence de fibrine, s'assurer de 14 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

15 la formation complète du caillot avant de centrifuger les échantillons. Certains échantillons, en particulier ceux provenant de patients sous anti-coagulants, peuvent nécessiter un temps plus long pour la formation du caillot. Des tubes de prélèvements sanguins provenant de différentes fabricants peuvent donner des résultats différents, en fonction des matériaux et additifs utilisés, y compris les barrières de gel, les activateurs de coagulation et/ou les anticoagulants. Le dosage IMMULITE 2000 PAPP-A n'a pas été testé avec tous les types possibles de tubes. Consulter la section sur les Autres types d'échantillons pour des détails sur les tubes ayant été testés. Volume nécessaire : 10 µl de sérum ou de plasma. Conservation: 24 heures à +2 8 C ou 2 mois à 20 C. Précautions d'emploi Réservé à un usage diagnostique in vitro. Réactifs : Conserver les réactifs à +2 / +8 C. Éliminer les déchets conformément aux lois en vigueur. Respecter les précautions d'emploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les réactifs dérivés de produits humains et utilisés dans ce coffret ont subi un test sérologique pour la Syphilis et des tests de dépistage pour les anticorps anti- VIH1 et 2, anti-vhc et pour l'antigène de surface de l'hépatite B, qui se sont tous avérés négatifs. Substrat chimiluminescent : Éviter les contaminations et l'exposition directe à la lumière solaire (voir la fiche technique). Eau : utiliser de l'eau distillée ou désionisée. Matériel fourni Les composants de la trousse ne peuvent être utilisés que conjointement. Les étiquettes à l'intérieur du coffret sont nécessaires au dosage. Cartouche de billes PAPP-A (L2PC12) Avec code-barre. 200 billes revêtues d'anticorps monoclonal murin anti- PAPP-A. Stable à +2/ +8 C jusqu'à la date de péremption. L2KPC2: 1 cartouche. L2KPC6: 3 cartouches. Cartouche à réactif PAPP-A (L2PCA2) Avec code-barre. 11,5 ml d'anticorps monoclonal murin anti-papp-a conjugué à de phosphatase alcaline (intestins de veaux) dans un tampon. Stable à +2/ +8 C jusqu'à la date de péremption. L2KPC2: 1 cartouche. L2KPC6: 3 cartouches. Avant l'emploi, retirer la partie supérieure de l'étiquette au niveau des perforations en ayant soin de ne pas endommager le code-barres. Retirer le film protecteur situé sur la partie supérieure de la cartouche-réactif ; insérer le couvercle coulissant entre les glissières sur le dessus de la cartouche-réactif. PAPP-A Ajusteurs (LPCL, LPCH) 2 flacons de PAPP-A («haut» et «bas») dans une matrice lyophilisée de sérum non-humain. Reconstituer chaque flacon avec 2,0 ml d'eau distillée ou désionisée. Mélanger doucement jusqu'à complète dissolution de la substance lyophilisée. Stable à +2 C/+8 C pendant 30 jours après reconstitution ou 3 mois (aliquoté) à 20 C. L2KPC2: 1 jeu L2KPC6: 2 jeux. Avant de procéder à un ajustement, placer les étiquettes correspondant à l'aliquot (fournies avec le coffret) sur des tubes en verre de sorte que les code-barres soient lisibles par le lecteur. Composants du coffret fournis séparément Multi-diluant 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Pour la dilution par l'appareil des échantillons cliniques. Un flacon de matrice concentrée (prête à l'emploi) protéine non humaine/tampon, avec conservateur. Conservation: 30 jours (après ouverture) à +2 8 C ou 6 mois (aliquoté) à 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Les étiquettes code-barres sont fournies avec le Diluant. Avant utilisation, placer l'étiquette appropriée sur un tube de mm de façon que le code-barre puisse être lu par le lecteur de l'appareil. L2M2Z: 3 étiquettes L2M2Z4: 5 étiquettes IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 15

16 L2SUBM : Substrat chimiluminescent L2PWSM : Solution de lavage L2KPM : Coffret de décontamination de l'aiguille de prélèvement LRXT : Godets réactionnels (jetables) L2ZT: 250 Tubes À essai De Diluant échantillon (16 x 100 mm) L2ZC: 250 Bouchons pour tubes de diluants LPCCM: Contrôle à deux niveaux dans une matrice de sérum non humain. Egalement requis Eau distillée ou désionisée ; tubes à essai ; Contrôles. Protocole de dosage Noter que pour des performances optimales, il est important de réaliser toutes les procédures de maintenance de routine selon les instructions du Manuel d'utilisation de l'immulite Se reporter au manuel d'utilisation de l'immulite 2000 pour : la préparation, le démarrage du système, le dilution, les ajustements, le dosage et les procédures de contrôle de qualité. Intervalle d'ajustement recommandé : 4 semaines. Echantillons pour le contrôle de qualité: Utiliser des contrôles ou des pools d'échantillons avec au moins deux niveaux (bas et haut) de PAPP-A. Valeurs de référence Chaque laboratoire devra établir ses propres valeurs de référence. Limites Les anticorps hétérophiles du sérum humain peuvent réagir avec les immunoglobulines faisant partie des composants du coffret et interférer avec les immunodosages in vitro. [Voir Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Les échantillons provenant de patients fréquemment exposés aux animaux ou aux produits sériques d'origine animale peuvent présenter ce type d'interférence pouvant potentiellement donner un résultat anormal. Ces réactifs ont été mis au point afin de minimiser le risque d'interférence, cependant des interactions potentielles entre des sérums rares et les composants du test peuvent se produire. Dans un but diagnostique, les résultats obtenus avec ce dosage doivent toujours être utilisés en association avec un examen clinique, l'histoire médicale du patient et d'autres résultats. Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les données représentatives des performances de ce test. Les résultats sont donnés en mui/ml. (En l'absence d'indication contraire, tous les résultats ont été obtenus sur des échantillons sériques recueillis en tubes, sans gel ni activateur de la coagulation.) Domaine de mesure : jusqu'à 10 mui/ml Le dosage peut être retracé à un standard interne, manufacturé à l aide de matériaux et procédures de mensuration qualifiées. Sensibilité analytique : 0,025 mui/ml Effet crochet aux doses élevées : aucun jusqu'à 115 mui/ml. Précision : Les échantillons ont été dosés en duplicate pendant plusieurs jours pour un total de 40 séries et 80 réplicates. (Voir le tableau «Precision».) Test de dilution : Des échantillons ont été dosés à différentes concentrations. (Voir le tableau «Linearity» pour des données représentatives.) Test de récupération : Des échantillons chargés dans un rapport de 1 à 19 avec trois solutions de PAPP-A (20, 40 et 80 mui/ml) ont été dosés. (Voir le tableau «Recovery» pour des données représentatives.) Spécificité : L'anticorps utilisé est hautement spécifique de la PAPP-A. (Voir le tableau «Specificity».) Bilirubine : La présence de bilirubine, conjuguée ou non, n'a aucun effet sur le dosage ni sur sa précision si la concentration ne dépasse pas 200 mg/l. Hémolyse : Les effets de la présence d'hémoglobine ont été evalués en chargeant 10, 20, et 30 µl d'hémolysat de globules rouges (correspondant à 157, 314, et 550 mg/dl d'hémoglobine) dans 1 ml d'aliquotes de 5 échantillons de patients. L'Hémoglobine n'a pas d'effet sur les résultats ni sur la précision du dosage 16 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

17 si sa concentration ne dépasse pas 157 mg/dl. Des taux plus élevés d'hémoglobine peuvent causer une légère élévation des résultats (voir le tableau «Hemoglobin»). Lipémie : La présence de triglycérides jusqu'à une concentration de mg/dl n'interfère ni sur la précision du dosage, ni sur les résultats. Autres types d'échantillons: Afin de déterminer l'effet que peuvent avoir d'autres types d'échantillons, du sang a été prélevé chez 20 volontaires sur tubes secs et héparinés. Des volumes égaux des différents échantillons ont été chargés avec diverses concentrations de PAPP-A pour obtenir des valeurs comprises dans le domaine de mesure du dosage, et ont été ensuite dosés avec la procédure IMMULITE 2000 PAPP-A. (Héparine) = 1,08 (Sérum) + 0,08 mui/ml r = 0,996 Moyennes : 4,72 mui/ml (Sérum) 5,18 mui/ml (Héparine) Lors d'une autre étude, du sang a été prélevé chez 24 volontaires sur tubes secs et EDTA. Des volumes égaux des différents échantillons ont été chargés avec diverses concentrations de PAPP-A, pour obtenir des valeurs comprises dans le domaine de mesure du dosage, et ont été ensuite dosés avec la procédure the IMMULITE 2000 PAPP-A. (EDTA) = 1,21 (Sérum) + 0,02mUI/ml r = 0,995 Moyennes : 3,65 mui/ml (Sérum) 4,43 mui/ml (EDTA) Ne pas utiliser de plasma EDTA. Comparaison de méthodes 1: Ce test à été comparé à un autre dosage commercialisé pour la PAPP-A (Kit A) sur 152 échantillons de patients. (intervalle de concentrations : environ de 0,3 à 10 mui/ml. Voir graphique.) Par régression linéaire : (IML 2000) = 0,99 (Kit A) + 0,5 mui/ml r = 0,973 Moyennes : 3,82 mui/ml (IMMULITE 2000) 3,36 mui/ml (Kit A) Comparaison de méthodes 2: Ce test a été comparé au dosage IMMULITE PAPP-A sur 283 échantillons. (intervalle de concentrations : environ de 0,3 à 10 mui/ml. Voir graphique.) Par régression linéaire : (IML 2000) = 1,03 (IML) 0,06 mui/ml r = 0,995 Moyennes : 3,70 mui/ml (IMMULITE 2000) 3,64 mui/ml (IMMULITE) Assistance technique Contacter votre distributeur national. En France distribué par DPC France 90 bd National La Garenne-Colombes. Le Système Qualité de Siemens Medical Solutions Diagnostics Limited est certifié ISO 13485:2003. Italiano IMMULITE 2000 PAPP-A Uso: Ad uso diagnostico in vitro con l'analizzatore IMMULITE 2000 per la determinazione quantitativa della proteina A (PAPP-A) plasmatica associata alla gravidanza nel siero o nel plasma eparinato. Codice: L2KPC2 (200 test), L2KPC6 (600 test) Codice del Test: PAA Colore: marrone Riassunto e Spiegazione del Test La proteina plasmatica associata alla gravidanza (PAPP-A) è una glicoproteina ad elevato peso molecolare derivata dalla placenta 1. Durante la gravidanza viene prodotta ad elevate concentrazioni dal trofoblasto e rilasciata nel circolo materno. I livelli di PAPP-A nel siero materno aumentano costantemente con l'età gestazionale, in maniera più rilevante durante l'ultimo periodo della gravidanza. 2 Il significato funzionale della PAPP-A non è chiaro. Tuttavia, alcuni studi suggeriscono che concentrazioni ridotte di PAPP-A in gravidanza sono associate ad anomalie cromosomiche del feto. 3 Le determinazioni della PAPP-A nel siero materno tra l'11 e la 14 settimana di gravidanza sono utili nella determinazione della Sindrome di Down e di altre anomalie cromosomiche. Una IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 17

18 combinazione di rischio materno legato all'età, β-hcg libero e translucenza nucale (NT) può aumentare l'efficacia dello screening prenatale se comparata allo screening del secondo trimestre; utilizzando questo approccio, vari studiosi hanno notato una percentuale di rilevazione per la Sindrome di Down dell'85 90% con il 5% di falsi positivi. 6,7 Principio del Dosaggio Il dosaggio IMMULITE 2000 PAPP-A è un dosaggio immunometrico, in fase solida, chemiluminescente, marcato con enzima. Cicli d'incubazione: 1 30 minuti. Prelievo dei Campioni Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. Campioni emolizzati possono indicare un trattamento non idoneo del campione prima dell'arrivo al laboratorio; per questo motivo, i risultati devono essere interpretati con prudenza. Non si consiglia l'utilizzo di campioni di plasma EDTA. La centrifugazione dei campioni di siero prima che la coagulazione sia completa può produrre fibrina. Per evitare risultati errati dovuti alla presenza di fibrina, assicurarsi che il processo di coagulazione sia completo prima di centrifugare i campioni. Alcuni campioni, in modo particolare quelli di pazienti sottoposti a terapia con anticoagulanti, possono richiedere tempi di coagulazione più lunghi. Provette per il prelievo di sangue di produttori diversi possono dare valori differenti, a seconda dei materiali e degli additivi usati, incluso gel o barriere fisiche, attivatori di coaguli e/o anticoagulanti. L'IMMULITE 2000 PAPP-A non é stato verificato con tutte le possibili variazioni di tipi di provette. Consultare la sezione riguardante Campioni Alternativi per dettagli sulle provette testate. Volume richiesto: 10 µl di siero o plasma. Conservazione: 24 ore a 2 8 C o 2 mesi a 20 C. Avvertenze e Precauzioni Ad uso diagnostico in vitro. Reagenti: Conservare a 2 8 C. Eliminare secondo le normative di legge vigenti. Seguire le precauzioni universali, e manipolare tutti i componenti come se potessero trasmettere agenti infettivi. Sono stati dosati i materiali di origine umana e sono stati trovati non reattivi per la Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2; per l'antigene di Superficie dell'epatite B; e per gli Anticorpi Anti-Epatite C. Substrato chemiluminescente: Evitare la contaminazione e l'esposizione alla luce solare diretta. (Vedi metodica). Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o deionizzata. Materiali forniti I componenti costituiscono un unico set. Le etichette all'interno della confezione sono necessarie per eseguire i dosaggi. Contenitore di Sferette PAPP-A (L2PC12) Con codice a barre. 200 sferette, coattate con un anticorpo monoclonale murino anti- PAPP-A. Stabile a 2 8 C fino alla data di scadenza. L2KPC2: 1 confezione. L2KPC6: 3 confezioni. Porta Reagente PAPP-A (L2PCA2) Con codice a barre. 11,5 ml di fosfatasi alcalina (intestino bovino) coniugata con un anticorpo monoclonale murino anti- PAPP-A in un tampone. Stabile a 2 8 C fino alla data di scadenza. L2KPC2: 1 porta reagente. L2KPC6: 3 porta reagenti. Prima dell'utilizzo rimuovere la parte superiore dell'etichetta lungo la perforazione senza danneggiare il codice a barre. Togliere il foglio protettivo dalla parte superiore del flacone. Far scattare nella corretta posizione il coperchio scorrevole lungo le guide del coperchio del reagente. Calibratori PAPP-A (LPCL, LPCH) Due flaconi (uno Basso ed uno Alto), contenenti PAPP-A liofilo in una matrice di siero non umano. Ricostituire ogni flacone con 2,0 ml di acqua distillata o deionizzata. Mescolare agitando 18 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )

19 delicatamente o capovolgendo la miscela finchè il materiale liofilo sia completamente dissolto. Stabile a 2 8 C per 30 giorni dopo la ricostituzione, o per 3 mesi (aliquotato) a 20 C. L2KPC2: 1 set. L2KPC6: 2 set. Prima di ricalibrare collocare le etichette giuste (fornite col kit) sulle provette delle aliquote cosicché i codici a barre possano essere registrati dal lettore. Componenti del kit forniti separatamente Multidiluente 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Per la diluizione interna dei campioni dei pazienti. Un flacone, contenente una matrice /tampone proteica non umana concentrata (pronta all'uso), con conservanti. Conservazione: 30 giorni (dopo apertura) a 2-8 C o 6 mesi (aliquotato) a 20 C. L2M2Z: 25 ml L2M2Z4: 55 ml Vengono fornite le provette da utilizzarsi con il diluente. Prima dell'utilizzo, collocare un'etichetta appropriata su una provetta mm cosicchè i codici a barre possano essere letti dal lettore interno. L2M2Z: 3 etichette L2M2Z4: 5 etichette. L2SUBM: Substrato Chemiluminescente L2PWSM: Tampone di Lavaggio dell'ago L2KPM: Kit di Pulizia dell'ago LRXT: Tubi di Reazione (monouso) L2ZT: 250 Provette (16 x 100 mm) per Diluente del Campione L2ZC: 250 Tappini per Provette per Diluente del Campione LPCCM: Modulo di controllo a due livelli in una matrice sierica non umana. Materiali richiesti Acqua distillata o deionizzata; provette; controlli. Procedura del Dosaggio Attenzione: per prestazioni ottimali, è importante effettuare le procedure di manutenzione di routine cosiccome definito nel Manuale dell'operatore IMMULITE Vedi Manuale dell'operatore IMMULITE 2000 per: preparazione, messa a punto, diluizione, calibrazione, dosaggio e procedure di controllo di qualità. Intervallo di Calibrazione Consigliato: 4 settimane. Campioni per il Controllo Qualità: Utilizzare controlli o pool di campioni con almeno due livelli (basso ed alto) di PAPP-A. Valori Attesi Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri range di riferimento. Limiti Gli anticorpi eterofili presenti nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline presenti nelle componenti del dosaggio provocando un'interferenza con i dosaggi in vitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamente esposti agli animali o a prodotti derivati da siero di animali possono presentare questo tipo di interferenza causa potenziale di risultati anomali. Questi reagenti sono stati formulati per minimizzare il rischio di interferenze, tuttavia, possono verificarsi interazioni potenziali tra sieri rari e componenti del test. A scopo diagnostico, i risultati ottenuti con questo dosaggio devono sempre essere utilizzati unitamente all'esame clinico, all'anamnesi del paziente e ad altre indagini di laboratorio. Prestazioni del Dosaggio Vedi tabelle e grafici per dati rappresentativi delle prestazioni del dosaggio. I risultati sono espressi in miu/ml. (Se non diversamente annotato, tutti i risultati sono stati generati da campioni di siero prelevati in tubi senza barriere di gel o additivi che favoriscano la coagulazione.) Range di calibrazione: Fino a 10 miu/ml. Il dosaggio è standardizzato verso uno standard interno preparato usato con materiali e secondo procedure di qualità. Sensibilità analitica: 0,025 miu/ml. Effetto Gancio a Dosi Elevate: Nessun effetto fino a 115 miu/ml. Precisione: I campioni sono stati ripetutamente dosati in duplicato nel corso IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, ) 19

20 di diversi giorni, per un totale di 40 sedute ed 80 replicati. (Vedi tabella "Precision".) Linearità: I campioni sono stati dosati a varie diluizioni. (Vedi tabella Linearity per dati rappresentativi.) Recupero: Sono stati dosati campioni diluiti 1:19 con tre soluzioni di PAPP-A (20, 40 e 80 miu/ml). (Vedi tabella Recovery per dati rappresentativi). Specificità: L'anticorpo è molto specifico per la PAPP-A. (Vedi tabella "Specificity".) Bilirubina: La presenza di bilirubina coniugata e non coniugata in concentrazioni fino a 200 mg/l non ha nessun effetto entro il range di precisione del dosaggio. Emolisi: Gli effetti della presenza di emoglobina sono stati valutati diluendo 10, 20 e 30 µl di emolisato (corrispondenti a 157, 314, e 550 mg/dl di emoglobina) in aliquote da 1 ml di 5 campioni. L'emoglobina in concentrazioni fino a 157 mg/dl non ha effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Livelli più elevati di emoglobina possono provocare lievi aumenti nei risultati (vedi tabella Hemoglobin"). Lipemia: La presenza di trigliceridi in concentrazioni fino a mg/dl non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Tipo di Campione Alternativo: Per determinare l'effetto di Tipi di Campione Alternativi, è stato prelevato del sangue da 20 volontari in provette semplici ed eparinate. Eguali volumi di campioni misti sono stati diluiti con varie concentrazioni di PAPP-A, per ottenere valori lungo il range di calibrazione del dosaggio e quindi dosati con il dosaggio IMMULITE 2000 PAPP-A. (Eparina) = 1,08 (Siero) + 0,08 miu/ml r = 0,996 Valore medio: 4,72 miu/ml (Siero) 5,18 miu/ml (Eparina) In un altro studio, il sangue è stato prelevato da 24 volontari in provette semplici ed EDTA. Eguali volumi di campioni misti sono stati diluiti con varie concentrazioni di PAPP-A, per ottenere valori lungo il range di calibrazione del dosaggio e quindi dosati con il dosaggio IMMULITE 2000 PAPP-A. (EDTA) = 1,21 (Siero) + 0,02 miu/ml r = 0,995 Valore medio: 3,65 miu/ml (Siero) 4,43 miu/ml (EDTA) Non utilizzare campioni di plasma EDTA. Comparazione di Metodi 1: Il dosaggio è stato comparato ad un dosaggio disponibile in commercio per la PAPP-A (Kit A) su 152 campioni. (Range di concentrazione: circa da 0,3 a 10 miu/ml. Vedi grafico.) Mediante regressione lineare: (IML 2000) = 0,99 (Kit A) + 0,5 miu/ml r = 0,973 Valore medio: 3,82 miu/ml (IMMULITE 2000) 3,36 miu/ml (Kit A) Comparazione di Metodi 2: Il dosaggio è stato comparato ad un dosaggio IMMULITE PAPP-A su 283 campioni. (Range di concentrazione: circa da 0,3 a 10 miu/ml. Vedi grafico.) Mediante regressione lineare: (IML 2000) = 1,03 (IML) 0,06 miu/ml r = 0,995 Valore Medio: 3,70 miu/ml (IMMULITE 2000) 3,64 miu/ml (IMMULITE) Assistenza Tecnica All'Estero: Contattare il Proprio Distributore Nazionale. Il Sistema Qualità della Siemens Medical Solutions Diagnostics Limited è certificato ISO 13485:2003. Português IMMULITE 2000 PAPP-A Utilização: Para utilização in vitro com o IMMULITE 2000 para a determinação quantitativa da proteina A do plasma associada à gravidez (PAPP-A) no soro ou plasma heparinizado. Números de catálogo: L2KPC2 (200 testes), L2KPC6 (600 testes) Código do teste: PAA Cor: Castanho 20 IMMULITE 2000 PAPP-A (PIL2KPC-22, )