Biología de Eucariotes. Practica 1 Microscopia

Transcripción

1 Biología de Eucariotes Practica 1 Microscopia

2 Microscopios Partes del microscopio, cuidados y mantenimiento

3 Naturaleza

4 Microscopio Definición: son aparatos que en virtud de las leyes de formación de imágenes ópticas aumentadas a través de lentes convergentes, permiten la observación de pequeños detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibirían. Tipos de microscopio: Simple Electrónico permitían un aumento de Pétrográfico o polarizador De fase De campo ultravioleta De rayos X Interferenciales.

5 Microscopio óptico Tiene un limite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm ). Este limite se debe a la longitud de onda de la luz ( µm ). El aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos.

6 Partes del microscopio

7 Continuación.. Sistema óptico: Tubo de Ocular (monocular o binocular) Objetivo Ocular Sistema de iluminación Condensador Diafragma Foco Sistema mecánico: Soporte Platina Cabezal Revólver Tornillos de enfoque

8 Poder resolutivo esto es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la definición de un objeto Depende de la longitud de onda utilizada y de una propiedad óptica de la lente conocida como apertura numérica. Como los microscopios ópticos utilizan luz visible, la longitud de onda está fijada y es por lo que la resolución de un objeto es función de la apertura numérica; cuanto mayor sea la apertura, el objeto resuelto será más pequeño. Poder de resolución=diámetro de la estructura más pequeño= longitud de onda Apertura numérica

9 Mentenimiento y precauciones 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda 2. Hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes 3. No tocar nunca las lentes 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina cuando no se ésta usando el microscopio 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable).

10 MICROSCOPÍA - Cómo se transmite la luz? - Función del aceite de inmersión. - Cálculo del aumento de la muestra.

11 Cómo se transmite la luz? - FUENTE DE LUZ: es una lámpara que está ubicada en la parte inferior del aparato, en caso de no poseerla debe ubicarse una fuente de luz externa (lámpara incandescente común) aproximadamente a 30 cm. del espejo. - DIAFRAGMA IRIS: se encuentra debajo del condensador y sirve para regular la cantidad de luz que llega al condensador. - CONDENSADOR: concentra el haz de luz sobre el plano del objeto que se encuentra en la platina.

12 Curso de la luz en el microscopio El condensador proyecta un cono de luz sobre las células que están siendo examinadas en el microscopio. Después de atravesar a las células, ese haz luminoso, en forma de cono, penetra en el objetivo; el objetivo proyecta una imagen aumentada en el plano focal del ocular, que nuevamente la amplia. Por fin la imagen provista por el ocular puede ser percibida por la retina del ojo como una imagen situada a 25 cm de la lente ocular.

13 Función del aceite de inmersión El índice de refracción del medio que recorre la luz en el proceso de formación de la imagen primaria puede ser modificado. Por ejemplo, el aceite tiene mayor índice de refracción que el aire. Si se utiliza aceite entre el objetivo y la muestra, la imagen se resolverá mejor y permitirá el empleo de un mayor aumento. Para que exista una imagen clara, los lentes deben estar dispuestos de una manera precisa para que no produzcan efectos de difracción óptica. Se deben utilizar preparaciones teñidas completamente secas. Preferentemente se deben utilizar aceites sintéticos que no se secan, en vez de aceite de madera de cedro que se seca rápidamente.

14 Cálculo del aumento de la muestra Debemos notar que el ocular también tiene un aumento, por lo tanto el aumento total de la imagen que observamos es el producto entre el aumento del objetivo y el del ocular. Aumento = A. del objetivo x A. del ocular Ejemplo: si tenemos colocado el objetivo cuya escala de reproducción es 40:1 y nuestro ocular tiene un aumento de 10x, entonces el aumento total será 40 x 10 = 400.

15 6. Mantener seca y limpia la platina del microscopio 7. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (micrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador). 8. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos 10. Los lentes objetivos no deben tocar nunca los portaobjetos

16 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

17 COMPONENTES FUENTE DE LUZ. FILTRO 1. CONDENSADOR. OBJETIVO. FILTRO 2.

18 COMPUESTOS FLUORESCETES EXTERNOS ANARANJADO DE ACRIDINA QUINACRINA FLUORESCEÍNA

19 CUANDO SE USA LA MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA? VISUALIZAR COMPONENTES DE DIFÍCIL OBSERVACIÓN. LOCALIZAR SUSTANCIAS MEDIANTE ENLACES ESPECÍFICOS.

20 IMÁGENES CON MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA Núcleos y cromosom as

21 Anabaena mirabilis. Fluorescenc ia natural.

22 Fibroblast os humanos.

23 Retículo endoplásmic o rugoso.

24 Distribución de microtúbulo s.

25 MICROSCOPIA ELECTRÓNICA

26

27 GENERALIDADES El microscopio electrónico de barrido (MEB) sirve para examinar la superficie de los objetos. Produce imágenes de gran aumento (más de cien mil veces) y muestra la forma real de los objetos. Además de mostrar increíbles figuras, el microscopio electrónico investigador muestra detalles que pueden ser de vital importancia para científicos en muchas ramas, como la medicina. Trabaja examinando la superficie de un objeto con un delgado haz electrónico.

28 El microscopio electrónico trabaja iluminando, un ejemplar en la platina con un haz de electrones y enfocando y aumentando la imagen con lentes magnéticas. El Microscopio Electrónico de Barrido permite obtener imágenes de gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie. Los electrones secundarios se asocian a una señal de TV.

29 CARACTERÍSTICAS Imágenes digitales hasta 2048 x 2048 pixel. Resolución de 25 nm a 1 kv y de 3,5 nm a 30 kv. Lentes magnéticas y bomba turbo molecular refrigeradas por agua. Detector de centelleo para electrones secundarios, de Si para electrones dispersados y de Si(Li) para rayos X.

30 APLICACIONES HORMIGONES Y ARIDOS: Mineralogía de cementos: clínker, alitas, etc... Mineralogía de áridos: granito, calizas, etc... Crecimientos cristalinos, texturas, fisuraciones, porosidades, fragilidad, etc... Fases reactivas, productos expansivos. Interferencia árida pasta, índice de huecos, etc... Composición microquímica, alteraciones, etc... Cuantificación de parámetros de caracterización.

31 METALES Y ORGANICOS: Análisis morfológico y fractográfico. Análisis de inclusiones. Corrosión de superficies y oxidaciones. Estudio, análisis y evaluación de fases. Cartografía de elementos químicos. Ataques superficiales por alteración. Espesores y distribución de capas.

32 Sin embargo dichas retículas presentan tales inconvenientes que han venido a ser reemplazadas por otros tipos de lentes de forma tubular (figura 23.4) o de diafragma (figura 23.5); en éstas el efecto de convergencia o divergencia de los rayos no desaparece a pesar de la simetría que las líneas de potencial guardan en ellas, porque como los electrones atraviesan la zona divergente a mayor velocidad la dispersión resulta amortiguada. Figura Lente electrónica de diafragma, comparada con un sistema de lentes ópticas análogo

33 En principio, la disposición de un microscopio electrónico ya sea electrostático o magnético- es muy parecida a la de los microscopios ópticos usados para registros fotográficos (figuras 23.7 a 23.7 b ). Los electrones que emite el cátodo de incandescencia son acelerados y reunidos a través del condensador sobre el objeto que se ha de examinar, el cual descansa a su vez sobre una película de colodión sumamente delgada. Al atravesar el objeto -bacteria, virus, huella de carbón (funda de carbón depositada sobre un micro-cristal «opaco» que se extrae después de ella), etc, los rayos electrónicos se debilitan más o menos, de acuerdo con el espesor y la composición que tiene aquél, y a continuación el objetivo los reúne en la imagen intermedia, ya ampliada; a partir de ésta, el sistema óptico de proyección pasa a generar otra más ampliada todavía, que se hace visible sobre una pantalla fluorescente o una placa fotográfica sensible a los rayos electrónicos.

34 Figura 23.7 a) Microscopio óptico. b) Microscopio electrónico electrostático, con lentes de diafragma. c) Microscopio electrónico magnético, con lentes de bobina

35 Tomando como referencia la luz verde, cuya longitud de onda es de unos 1/2000 mm, la longitud de onda correspondiente a electrones que hayan sido acelerados con una tensión de voltios resulta veces menor. La abertura del aparato es desde luego 1000 veces más pequeña que la del microscopio óptico y por lo tanto el índice de difracción es 1000 veces mayor, pero así y todo se tiene un aumento del poder separador de factor igual a 100. Incluida la ampliación que se puede hacer posteriormente de la placa fotográfica, con los microscopios electrónicos se llegan a alcanzar aumentos de 1: hasta 1:500000

36

37 ALGUNAS IMÁGENES MICROFOTOGRAFIA DE UN LINFOCITO T VISTA EN EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO

38 COPO DE NIEVE

39 Nacimiento de una nueva partícula viral en la superficie de una célula (fotografía tomada por un microscopio electrónico).

40 El virus del herpes (que es menos «astuto») se multiplica tan rápidamente que la célula literalmente explota, lo que produce naturalmente síntomas que no pasan desapercibidos

41 Linfocito T auxiliar: las pequeñas bolas de color azul son partículas virales VIH.

42 Cuatro macrófagos

43 MICROSCOPIO OPTICO

44 MICROSCOPIO COMPUESTO

45 PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO 1. Ocular 2. Revólver 3. Objetivo 4. Mecanismo de enfoque 5. Platina 6. Espejo 7. Condensador

46 TORNILLO MICROMÉTRICO: Es el que permite subir o bajar la platina para tener una mejor apreciación de lo que desea ver. TORNILLO MICROMÉTRICO: Da una acercamiento al objeto que se esta observando. REVOLVER: Es el que permite que se muevan los objetivos. PINZAS: Son las que sujetan al portaobjetos. PORTAOBJETOS: Donde se puede colocar algún objeto que desea observar a grandes rasgos. CUBRE OBJETOS: Es el que cubre el objeto para que no dañe los objetivos.

47 PIE: Es el que sostiene a todo el microscopio. ILUMINACIÓN: Es la luz que permite que el objeto se vea con mayor calridad.