Microbiologic monitoring program for laboratory animals under controlled and conventional conditions.

Transcripción

1 Microbiologic monitoring program for laboratory animals under controlled and conventional conditions. Programa de monitoreo microbiológico a los animales de laboratorio en condiciones controladas y convencionales. Riera, O. Layna, Lugo M. Sonia, Entrena G. A., García R. CJ., Sosa T. Iliana, Acevedo R. María Caridad, Llanes M. Haydée, González N. Barbará, Tabares B. Tania, Joglar P. Ivania, Otaño D. Ania, Zamora B. Zenilda, González B. Anabel CENPALAB. Finca Tirabeke Km 2 ½ Carretera del Cacahual, Municipio Bejucal, Prov. La Habana. Cuba. Tel: , , (FAX) , E mail: mail@ cenpalab.inf.cu Summary The monitoring program for laboratory animals under controlled -- mice, rats, hamsters, gerbils, guinea pigs and birds -- and conventional rabbits, guinea pigs, dogs, sheep and nonhuman primates -- conditions in Cuba is described, both for production colonies and for experimental laboratories. Resumen Un Programa de Monitoreo Microbiológico (Monitoreo de Salud) a los animales es de gran importancia, ya que con el mismo se disminuye el riesgo de infecciones zoonóticas y se incrementa la calidad, veracidad, confiabilidad y reproducibilidad de las investigaciones. La salud de un animal está siempre en riesgo de una variedad de infecciones, estas pueden manifestarse clínica o subclinicamente, pudiendo cuando los animales son usados en investigaciones biomédicas o ensayos experimentales producir efectos negativos o cambios en los experimentos. Todas las infecciones aparentes o inaparentes, son idóneas para incrementar la variabilidad biológica; además que algunas infecciones de animales son transmisibles al hombre. En este trabajo se describe el programa de monitoreo microbiológico empleado en nuestro país para las diferentes condiciones controladas (aisladores y zonas protegidas) como en condiciones convencionales. En el mismo se describen consideraciones, procedimientos y reportes, entre otros aplicables para las especies de ratones, ratas, hámsters, gerbils, curieles y aves (condiciones controladas) y las especies de conejos, curieles, perros, ovinos y primates no humanos (condiciones convencionales) tanto para colonias de producción y/o para unidades experimentales y que son usados como animales de laboratorio. Introducción La disponibilidad de animales con una alta calidad para la investigación es un importante problema, la carencia de los mismos es una dificultad para la confiabilidad de los resultados de una investigación (Fujikura, 1985). La implantación y diseño de un programa de monitoreo microbiológico para los animales de experimentación, es de gran ayuda para la disminución del riesgo de infecciones zoonóticas, lo cual permite una calidad confiable de los experimentos y una reproducibilidad de los datos de aquellas investigaciones donde se empleen biomodelos experimentales (Kraft, 1994; Rehbinder, 1996; Jensen, 2000). En este trabajo se describe el programa de monitoreo

2 microbiológico (monitoreo de salud) empleado en nuestro país para las diferentes condiciones controladas (ratones, ratas, hámsters, gerbils, curieles y aves) como en condiciones convencionales (conejos, curieles, perros, ovinos y primates no humanos) que son empleados como animales de experimentación. Metodología El Programa de Monitoreo Microbiológico descrito en nuestro país para las diferentes condiciones controladas (ratones, ratas, hámsters, gerbils, curieles y aves) como en condiciones convencionales (conejos, curieles, perros, ovinos y primates no humanos) constituye un documento normativo, en el cual se describen los aspectos a tener en cuenta para la realización del monitoreo de salud de estas especies de animales. En el mismo se describen los siguientes aspectos: Consideraciones Generales, Inspección de las colonias de cría, Procedimientos de monitoreo: frecuencia, condiciones del monitoreo, tamaño de la muestra y muestras a investigar, Lista de microorganismos a monitorear (regular y adicionalmente) por especie animal y métodos de laboratorio empleados: bacteriología, parasitología y virología, Patología, Reporte del monitoreo de salud: información general de cada reporte, modelos de resultados del reporte de salud y un Anexo I: Referencias. A continuación expondremos algunos puntos importantes de este programa: Condiciones para el monitoreo: El monitoreo se realizará a partir de animales vivos o muestras de estos, seleccionados al azar, aparentemente sanos, de todas las edades, de ambos sexos y estarán adecuadamente identificados. Serán procesados individualmente para cada investigación (bacteriología, parasitología, virología y patología), siguiendo la metodología descrita en los Procedimientos Operacionales de Trabajo. Frecuencia de muestreo Dependerá de la especie animal y las entidades microbianas a detectar, y estará acorde al respectivo programa nacional de control de enfermedades, a las regulaciones de exportación e importación y a las condiciones geográficas y ecológicas del país. Los animales en condiciones controladas se monitorean cada 3 meses, excepto para métodos serológicos o algunas entidades específicas que será cada 6 meses o una vez al año. Los animales en condiciones convencionales se monitorean semestral o anual, excepto ciertas entidades que sólo se muestrean para animales en Cuarentena (Expedición o Importación) o Traslado. Tamaño de la muestra Esta en dependencia del tamaño de la población, del conocimiento de la sensibilidad y especificidad de los métodos de ensayos usados y del conocimiento de la prevalencia de los microorganismos a monitorear. Existen fórmulas para determinar el tamaño de la muestra:

3 donde: log 0.05 log 0.05 S: Tamaño de la muestra a) S = b) S = x N N: % animales normales, fórmula (a); Ej: Rango prevalencia log N log P enfermedad es 30%, N= 70% N: # de animales sanos, fórmula (b) P: % de prevalencia de la infección log 0.05: % Confiabilidad (95%) (a): Detectar un caso simple de enfermedad con límite de confiabilidad de un 95% asumiendo un rango de prevalencia conocida a partir de una población mínima de 100 animales. (b): Determinar el número de animales a muestrear en un período determinado, con límite de confiabilidad de un 95% y una prevalencia conocida a partir de una población mayor de 1000 En animales. los animales criados en condiciones controladas el número de la muestra puede hacerse manejable; el conocimiento de la prevalencia de los agentes muestreados y la incidencia de otros, así como las características de estos sistemas de crías donde se combinan factores constructivos, tecnológicos y métodos operacionales que se estabilizan en un ambiente cerrado donde se minimizan la presencia de patógenos o de microorganismos no deseados infestando la población animal, permite muestrear un número fijo de animales, el tamaño de la muestra en estos oscila entre 10 a 40 animales por unidad de cría. En los animales criados en condiciones convencionales se aplicará una de las fórmulas descritas arriba, aunque para monitoreos de rutina se monitoreará entre el 10 al 30% de la masa total o de una categoría determinada o la masa básica (reproductores). Muestras a investigar Esta en dependencia de las entidades que se van a detectar y el propósito por el cual se realizará el monitoreo. Muestras de Sueros (monitoreo serológico), Exudado Nasal o Nasofaríngeo, Tráquea y/o Pulmón, Contenido Fecal (Heces Fecales, Intestino Delgado o Ciego) y Exudados Prepusiales, Rectales o Vaginales (monitoreo bacteriológico), Pelos y/o Piel (determinación de hongos patógenos a la piel) y Contenido Fecal (Heces Fecales o varias secciones del Intestino), Pelaje, Exudados Vaginales y Orina (monitoreo parasitológico) deberán ser examinadas. Ciertos órganos (hígado, riñón, encéfalo/riñón y pulmón) serán además investigados para la detección de ciertas entidades (Clostridium piliformis, Klossiella, Encefalitozoon cuniculi, Pneumonysus simicola respectivamente), empleándose el examen Histopatológico como método de detección. No obstante durante la necropsia todos los órganos serán observados y cualquier alteración o anomalía será examinada. El examen patológico a los animales criados en condiciones convencionales no se realiza como monitoreo de rutina. Métodos de ensayos Esta en dependencia de la entidad a detectar. Los Métodos Específicos son los más empleados, ya que permiten determinar el verdadero status microbiológico de los animales, conociendo de esta forma los microorganismos que se han sido transmitidos verticalmente o los contaminantes que se han escapado de los métofos de rutina. Entre

4 estos empleamos: cultivo (identificación, pruebas bioquímicas, serotipificación), métodos serológicos (ELISA, IFA, HI, HA, MAT), tinciones especiales, concentración y examen directo, inspección clínica e histopatología; de los más avanzados y que se emplean para confirmación los métodos moleculares (PCR, HAN). Microorganismos a monitorear Son listados (bacterias, parásitos y virus) según la especie animal, tanto para monitorearse de forma regular como adicionalmente. La mayoría de estas entidades monitoreadas son consideradas como patógenos específicos para cada especie animal en cuestión. A veces en condiciones normales, las infecciones pueden presentarse de forma latente o inaparente, no siendo posible observar manifestaciones clínicas, de ahí la importancia de su control sanitario. Todas las infecciones (aparentes o inaparentes) son idóneas para incrementar la variabilidad biológica, además de que algunas infecciones de animales son transmisibles al hombre (zoonosis) por eso son incluidas las entidades que la producen en el monitoreo de salud. Reporte del monitoreo Existirá un reporte de salud individual por cada una de las investigaciones o servicios realizados (Bacteriología, Parasitología, Virología y Patología). Cada reporte debe tener: fecha de realizado y concluido, número de animales muestreados, especie y tipo de cría, identificación de la colonia o unidad de cría, lista de microorganismos monitoreados (regular o adicionalmente), métodos de laboratorio empleados y resultados de las investigaciones realizadas durante el monitoreo (por cada microorganismo). (Hansen, 1989; ABTEX biologicals, 1990; Charles River Laboratory, 1990; Kraft, 1994; Rehbinder, 1996; Jensen, 2000, Taconic, 2003) Conclusiones La aplicación del Programa de Monitoreo Microbiológico (Monitoreo de Salud) a los animales de experimentación producidos en nuestro país, constituye un documento normativo de gran importancia, ya que con el mismo se disminuye el riesgo de infecciones zoonóticas y se incrementa la calidad, veracidad, confiabilidad y reproducibilidad de las investigaciones en los cuales estos animales son usados. Referencias 1) ABTEK biologicals. (1990). Animal Health Profiling Map-Tets Resesarch Problems of Viruses. LTD. 2) Charles River Laboratory (1990). A laboratory animal health monitoring program: rationale and development. Technicall Bulletin. Wilmington, Mass. USA. 3) Fujikura, T.; Hovell, G.J.R.; Hanninen, O. (1985). Principles by the manangement and care of laboratory animals. OMS/ICLAS, pp 9. 4) Hansen, AK. (1989). Health Monitoring Mollegaard Breeding Center. Danish SPF quality, Skensved Denmark. 5) Jensen, W.; Larsent, T.; Jorgensen, PH. (2000). Microbiological Monitoring. Report as recomendaded by FELASA. Information. Beeding Center Tornbjerg. Denmark. 6) Kraft, V.; Deeny, A.A.; Blanchet, H.M.; Bo,ot R.; Hansen, A.K.; H,em A.; van Herck, H.; Kunstyr, I.; Milite, G.; Needham, J.R.; Nicklas, W.; Perrot, A.; Rehbinde, C.; Richard, Y.; de Vroey, G. (1994). Report of the FELASA Working Group on

5 Animal Health. Recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guineapig and rabbit breeding colonies. Laboratory Animals, 28, pp ) Rehbinder, C.; Baneux, P.; Forbes, D.; van,herck H.; Nicklas, W.; Rugaya, Z.; Winkler, G. (1996). FELASA recomendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, gerbil, guineapig and rabbit experimental units. Laboratory Animals 30, pp ) TACONIC, Health Reports-Health Monitoring Programa-Isolated Barrier Unit System (I-BUSTM).ht, 2003