GUIA EXAMENES GENERALES DE LABORATORIO

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1 ESCUELA SALUD GUIA EXAMENES GENERALES DE LABORATORIO DIRIGIDO A ALUMNOS DE: Técnico Superior de Laboratorio Clínico y Banco de Sangre PRE-REQUISITO: Laboratorio Clínico I, LCS 2100.

2 INTRODUCCIÓN En un laboratorio clínico se realizan una innumerable cantidad de exámenes, siendo algunos de ellos de rutina diaria, ampliamente solicitados por los clínicos y que incluso tienen carácter de urgentes. Otros de menor frecuencia en su solicitud, son más específicos y por lo general, los laboratorios les asignan días específicos de proceso, debido principalmente al costo que implicaría hacerlo diariamente. Exámenes frecuentes se consideran los perfiles lipídicos, perfiles bioquímicos, pruebas hepáticas, glicemia, clearence de creatinina, orina completa, urocultivo, cultivos de diferentes zonas del cuerpo, exámenes de coagulación, exámenes de serología (ejemplo, reacción de Widal o pruebas tíficas, VDRL, etc) y hemogramas. Estadísticamente los exámenes de mayor frecuencia, son sin duda, los perfiles lipídicos, glicemias y hemogramas. OBJETIVOS Al finalizar el taller el alumno será capaz de: Realizar la técnica de manejo de un contador hematológico en el proceso de muestras. Realizar la mantención de usuario, indicada diariamente para un contador hematológico. Realizar al menos un ejemplo de examen de serología, como la reacción de Widal. Realizar la simulación de derivación de exámenes al Instituto de Salud Pública. Ejemplo: derivación de muestras para confirmación de HIV. REALIZADO POR Tecnólogo Médico, Bioquímico, Químico Farmacéutico, con experiencia en Laboratorio Clínico. DURACIÓN 90 minutos NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE Maximo 10 alumnos

3 MARCO TEORICO Hemogramas: El hemograma es un examen que consta de varias pruebas que dan cuenta del estado hematológico de un individuo. Se realiza en muestras sanguíneas tomadas en tubos con anticoagulante EDTA, en tubos de tapa lila. Entre las pruebas de un hemograma están: el número de eritrocitos, la cantidad de hemoglobina que contienen los eritrocitos, el número de linfocitos, recuento de reticulocitos (opcional), el hematocrito, las características morfológicas de las células sanguíneas observadas en un extendido celular o frotis al microscopio y las constantes hematológicas, las que resultan de diversos cálculos entre los parámetros anteriores (VCM, CHCM, HCM). Hematocrito: Mide la cantidad de glóbulos rojos de la sangre en porcentaje del total. Se informa en %. En términos generales sus rangos van desde 35%-45%, dependiendo de si se trata de un hombre, una mujer, un niño, una embarazada. Su uso es muy común en toda actividad médica, para valorar globalmente el estado sanguíneo del paciente. Hemoglobina: Es la proteína encargada de transportar el oxígeno en la sangre al interior de los glóbulos rojos. Esta proteína se enlaza al hierro para cumplir con su función. Sus deficiencias, o las deficiencias de hierro, son indicadoras de una anemia. Recuento de reticulocitos: Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes "recién nacidos" que ocupan una posición intermedia entre los eritrocitos maduros anucleados y los precursores eritroides nucleados que se encuentran en la médula ósea. Se consideran como el mejor índice para evaluar cómo está la producción de glóbulos rojos en la médula ósea. Resulta de utilidad en las anemias hemolíticas, o cuando se recibe tratamiento para la anemia bien sea originada por carencia de vitamina B 12 (en la anemia perniciosa) o hierro en la ferropénica (por deficiencia de hierro). Hoy en día la automatización ha permitido realizar este examen en equipos denominados Contadores Hematológicos, los que realizan todos los parámetros necesarios de un hemograma. En Duoc UC se cuenta con un Contador Hematológico Coulter. CONTADORES HEMATOLOGICOS

4 En estos equipos las muestras son puestas en unos dispositivos de muestras en su mismo tubo, denominados racks y son pasadas paulatinamente por el equipo, el que sacará una pequeña porción de sangre, previa agitación de la muestra, para realizar el hemograma. IMÁGENES DE RESULTADOS DE UN CONTADOR HEMATOLÓGICO Serología: Serología se refiere a las pruebas que se realizan en suero, tradicionalmente se agrupan bajo esta denominación pruebas que aún se realizan en forma manual, bien sea por un profesional o por un TSL.

5 Entre estas pruebas se encuentran principalmente las técnicas realizadas por aglutinación en placa o aglutinación en tubo, como: Reacción de Brucellas, se buscan anticuerpos totales contra la bacteria brucella, causante de Brucelosis, de alarma sanitaria en nuestro país). Reacción de Widal o Pruebas tíficas, para determinar si un paciente tiene o no tifus. VDRL, en la que se busca la presencia de anticuerpos totales contra Treponema pallidum microorganismo causante de la sífilis. Derivación de Exámenes a Centros de Referencia: Uno de los procedimientos realizados por el TSL rutinariamente es la derivación de muestras, la que puede ser a otros laboratorios o a Centros de Referencia. En el caso de la derivación a Centros de Referencia, se derivan muestras a laboratorios especializados en los que se confirman los resultados de algunos exámenes. Entre ellos se encuentran: confirmación de resultados de Chagas, Neisseria gonorroeae, resultados de HIV, etc. En Chile, el Centro de Referencia es el Instituto de Salud Pública (ISP). NOTA: Repasar la Ley sobre realización del examen de VIH en Chile Generalmente para la derivación de estas muestras existen formularios tipos entregados por el ISP, los que son completados con todos los datos señalados antes de derivar la muestra. Se debe cuidadosamente corroborar que la identificación de las muestras corresponda a lo que se escribió en el formulario. En algunos casos, se debe tener especial cuidado en el transporte de muestras bacteriológicas, a fin de evitar la muerte de las cepas enviadas. Ejemplo: es muy común que las cepas de gonococo se mueran antes de llegar al ISP, ya que a veces, por ignorancia se envían estas cepas con unidades refrigerantes. Estas cepas deben enviarse a una temperatura lo más cercano posible a 37º C. Uno de los exámenes de derivación para confirmación de resultado es la Serología para HIV. En este caso se envía la muestra con la identificación indicada en el formulario de envío, que en este caso, ha sido completada, por un profesional. La identificación de la muestra debe ir claramente señalada con todos sus números y letras, ya que en este caso una letra o número de más o de menos, implica inmediatamente que puede tratarse de otro paciente. La identificación de las muestras de confirmación de HIV no lleva el nombre del paciente, sino que se les asigna una clave identificatoria: Inicial del primer nombre seguido de inicial del primer apellido y seguido de inicial del segundo apellido. Ej.: José Rojas Poblete: JRP

6 A continuación se escriben en la clave 6 dígitos seguidos, correspondientes a la fecha de nacimiento del paciente. Ej.: Si don José Rojas Poblete nació el , su clave hasta ahora será: JRP Finalmente, la clave al final lleva tres dígitos, que corresponden a los tres últimos dígitos de la Cédula de Identidad del paciente. Ej.: Si nuestro ejemplo (don José Rojas Poblete) tiene como Cédula de Identidad: , su clave identificatoria final será: JRP Podemos observar de la clave anterior que bastaría cambiar un número o letra para que la muestra identificada con esta clave ya no sea de nuestro paciente. NOTA: JRP es un dato ficticio, al igual que los datos de nombre, fecha de nacimiento y rut. Si existe coincidencia de datos con una persona de la vida real es casualidad. INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS Sala de Simulación de Laboratorio Clínico Muestras de suero para derivar Muestras de suero con al menos un antígeno febril positivo para serología (Reacción de Widal). Puede ser un control positivo en vez de muestra. Reactivos para reacción de Widal (Eberth H, Eberth O, Parathypi A, Parathypi B). Placas de vidrio (20 x 20 cm) para reacciones serológicas. Lámpara con ampolleta potente. Micropipetas para volúmenes entre µl Micropipetas para medir desde 5-50 µl Puntas para micropipetas amarillas. Pizetas con agua destilada Muestras con EDTA para contador hematológico Soluciones del contador hematológico, indicadas por el proveedor. Formularios tipos del ISP: para envío de muestras de bacteriología, HIV, etc.

7 DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO Proceso de Hemogramas: 1. Disponer las muestras de hemograma en el equipo Contador hematológico. 2. Poner en funcionamiento el equipo de acuerdo a las instrucciones del fabricante. 3. Una vez procesadas las muestras, rescatar los resultados del equipo. Proceso de reacción de Widal: 1. Disponer en una gradilla las muestras de suero que serán utilizadas en el procedimiento. 2. En la placa de vidrio disponer en cada cuadrado: 80 µl del suero, exactamente medidos con micropipeta. Puede utilizar la misma punta amarilla para disponer la muestra en las cuatro cuadrículas. Nota: por qué puede hacer esto? (Respuesta: se puede usar la misma punta de micropipeta ya que se trata de la misma muestra). 3. Agregar 1 gota de cada antígeno (Eberth H, Eberth O, Paratyphi A, Paratyphi B). NO MEZCLE LOS GOTARIOS DE CADA REACTIVO Y NO TOQUE LA MUESTRA CON LA PUNTA DEL GOTARIO. 4. Mezclar por 2 minutos cada reacción con la parte trasera de una punta amarilla de micropipeta (use una punta por cada cuadrícula). Nota: por qué debe usar puntas diferentes en este caso? (respuesta: ya que se trata de la misma muestra pero cada una con diferentes reactivos). 5. Observar si hay aglutinación con ayuda de la lámpara. Si existe aglutinación se observan minúsculos grumos o partículas, de lo contrario se ve una película homogénea. Cualquier presencia de partículas o grumos se interpretan como positivos. 6. Informar positivo si hay aglutinación o negativo si no hay aglutinación, para cada antígeno. 7. En aquéllas cuadrículas que resulten positivas se debe titular dicha cuadrícula: Titulación: Hacer las siguientes diluciones para una muestra de una cuadrícula: Dilución 1/20, poner 80 µl de muestra con una gota del antígeno Dilución 1/40, poner 40 µl de muestra con una gota del antígeno Dilución 1/80, poner 20 µl de muestra con una gota del antígeno Dilución 1/160, poner 10 µl de muestra con una gota del antígeno Dilución 1/320, poner 5 µl de muestra con una gota del antígeno

8 Cada dilución sucesiva se hace si la anterior resulta positiva. Se realiza este procedimiento hasta la dilución que dé negativo y en ese caso se informa la dilución positiva anterior: positivo hasta dilución x/xxx Derivación de muestras para confirmación de HIV: 1. Lea y reconozca los formularios tipos que se envían al ISP 2. Para las muestras de HIV: rotule el tubo con los datos de identificación del paciente obtenidos del formulario de envío al ISP para muestras de HIV. ( trabaje con el profesional a cargo) 3. Verifique que la muestra sea suero y no sangre total. 4. Verifique que la cantidad de muestra sea suficiente (el ISP exige mínimo 1 ml de suero). 5. Siempre debe dejar una copia del formulario que está enviando. 6. Dejar muestra y formulario juntos, refrigerados hasta su envío al ISP. ACTIVIDAD PARA EL ALUMNO Actividad 1: El docente realiza el procedimiento descrito en su totalidad, explicando en detalle cada etapa. Actividad 2: Cada alumno realiza los procedimientos indicados, supervisado por el docente. BIBLIOGRAFIA - (visita enero 2005) - Insertos de reactivos para reacción de Widal. METODOLOGÍA DE EVALUACIÓN El taller se evalúa a través de una pauta de competencias logradas de acuerdo a los objetivos planteados: El docente además podrá realizar preguntas durante el taller, de temas vistos con anterioridad.

9 Ej.: Temas de pregunta 1.- Ley sobre HIV 2.- Manejo de precauciones estándares 3.-Condiciones pre-analíticas Nombre del alumno:... Fecha:...Nota... Exámenes generales de laboratorio C MC NC 1. Maneja equipo hematológico con destreza 2. Muestra habilidad manual: -pipeteo -reconocimiento de muestras -movimientos de placas de aglutinación 3. Mantiene el orden en su trabajo y desarrollo de procedimiento 4. Es capaz de realizar la correcta identificación de muestras para derivación 5. Es cuidadoso en el manejo de material 6. Deja unidad limpia y ordenada al finalizar taller 7. Respeta normas de Bioseguridad para fluídos biológicos C: competente MC: medianamente competente NC: no competente

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