QUANTA Flash acl IgG Reagents Para uso diagnóstico In Vitro

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1 QUANTA Flash acl IgG Reagents Para uso diagnóstico In Vitro Uso previsto Inmunoensayo por quimioluminiscencia totalmente automatizado para la medición semicuantitativa de anticuerpos IgG anti-cardiolipina (acl) en plasma citratado y suero humano en el instrumento BIO- FLASH como ayuda en el diagnóstico de las enfermedades trombóticas relacionadas con el síndrome antifosfolipídico (SAF) primario y secundario, cuando se utiliza con otros datos clínicos y de laboratorio. Resumen y eplicación de la prueba Los anticuerpos anti-cardiolipina (acl) forman parte de una familia heterogénea de anticuerpos antifosfolipídicos (apl), que son autoanticuerpos dirigidos contra los fosfolípidos aniónicos o los complejos de proteínas y fosfolípidos. Los niveles persistentemente elevados de anticuerpos apl se asocian a un riesgo elevado de trombosis vascular y complicaciones obstétricas. Esta asociación se conoce como síndrome antifosfolipídico (SAF), una clasificación propuesta por Harris en Los ensayos para la determinación de los anticuerpos IgG e IgM acl, los anticuerpos IgG e IgM anti- β2 glicoproteína-1 (β2gp1) y los anticuerpos anticoagulantes lúpicos son los ensayos de apl definidos en los criterios de clasificación revisados determinados por el Comité Internacional para el diagnóstico del SAF, durante la reunión celebrada en 2006 en Sydney (Australia) 2,3. Tanto el ensayo acl y anti-β2gp1 y contienen β2 glicoproteína-1 (β2gp1) humana en la fase sólida. La β2 glicoproteína-1, llamada también apolipoproteína H, es una glicoproteína de 44 kda con 5 dominios que está presente en el plasma. El quinto dominio contiene un grupo de aminoácidos con carga positiva, responsables de la unión de los fosfolípidos aniónicos. No está claro el mecanismo mediante el cual los anticuerpos antifosfolipídicos acl y anti-β2gp1 reconocen la β2gp1. Se han propuesto dos teorías principales; la primera se conoce como "teoría de la dimerización" y considera que un anticuerpo debe unir dos moléculas de β2gp1 para conseguir mayor avidez 4 y la segunda, la teoría de los epítopos crípticos considera que el epítopo de unión de acl y anti-β2gp1 antifosfolipdico solo está expuesto cuando la β2gp1 se une a una superficie cargada negativamente o a moléculas negativas como la cardiolipina 5,6. Este epítopo está localizado en el dominio I 7. Principios del procedimiento El ensayo de IgG QUANTA Flash acl es un inmunoensayo por quimioluminiscencia en dos fases que consta de partículas magnéticas recubiertas con cardiolipina y β2gp1 purificada humana que captura, si existen, los anticuerpos antifosfolipídicos acl de la muestra. Después de la incubación, la separación magnética y de una fase de lavado, se añade una trazadora compuesta por un anticuerpo anti-igg humana marcado con isoluminol que se puede unir a la IgG acl capturada en las partículas. Tras una segunda incubación, separación magnética y fase de lavado, se añaden los reactivos que inician la reacción luminiscente y se mide la luz emitida como unidades relativas de luz (RLU) mediante el sistema óptico del BIO-FLASH. Las RLU son directamente proporcionales a la concentración de IgG acl en la muestra. El ensayo IgG QUANTA Flash acl utiliza un método de reducción de datos de representación en una curva logística de 4 parámetros (4PLC) para generar una curva maestra. La curva maestraestá predefinida y depende del lote y se almacena en el instrumento a través del código de barras del cartucho. Con la medición de los calibradores, la curva maestra predefinida se transforma en una nueva curva de trabajo 4PLC específica del instrumento. Los valores de concentración de los calibradores están incluidos en los códigos de barras del tubo del calibrador. 1

2 Reactivos El kit IgG acl consta de: 1. Cartucho de reactivos del QUANTA Flash IgG acl, que contiene los reactivos siguientes. Los reactivos se encuentran en tampón con fosfato o borato y pueden contener albúmina sérica bovina o suero bovino fetal, cardiolipina bovina, ß2GP1 humana, IgG monoclonal de ratón, estabilizadores y conservante: a. 1 cartucho que contiene 1 vial de una suspensión de partículas magnéticas recubiertas con cardiolipina bovina y ß2GP1 humana purificada. b. 1 vial de tampón de ensayo. c. 1 vial de trazador que consta de anticuerpo anti-igg humana marcado con isoluminol. d. 1 vial de diluyente de muestra utilizado para la predilución periódica de la muestra y la dilución automática al volver a analizarla. 2. Vial de calibrador 1 de IgG acl que contiene: 1 tubo de 1 ml con código de barras de una solución con IgG acl en una solución salina que contiene suero bovino fetal, estabilizantes y conservante. 3. Vial de calibrador 2 de IgG acl que contiene: 1 tubo de 1 ml con código de barras de una solución con IgG acl en una solución salina que contiene suero bovino fetal, estabilizantes y conservante. Los calibradores dependen del lote y no se pueden utilizar con otros lotes de reactivos. Precauciones y advertencias 1. El material de procedencia humana en este producto ha sido analizado con métodos aprobados por la FDA y ha resultado ser no reactivo a los anticuerpos del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), antivhc y VIH 1/2. Debe manipularse como si fuera potencialmente infeccioso Todos los reactivos contienen menos del 0,1% de azida sódica, que puede formar azidas explosivas en las tuberías metálicas. Aplique procedimientos de eliminación adecuados. 3. Evite el contacto con la piel y los ojos. (S 24/25) No vaciar en los desagües (S 29). Utilice ropa protectora decuada (S 36). 4. Este producto está destinado a uso diagnóstico In Vitro. Condiciones de almacenamiento 1. Los reactivos y calibradores no abiertos permanecen estables hasta la fecha de caducidad mostrada en las etiquetas del cartucho y el tubo cuando se almacenan a 2-8 C. No los congele. 2. Los cartuchos de reactivos abiertos deben guardarse cargados en el instrumento. El software BIO-FLASH supervisa la fecha de caducidad del cartucho cargado (en uso) y la del lote de reactivo (periodo de validez) del cartucho de reactivos. El sistema no permitirá utilizar cartuchos que hayan caducado. Calibrador 1 y 2 de IgG acl: la estabilidad después de abrirlo en el instrumento del sistema BIO-FLASH es de 3,5 horas. 3. Para conseguir una estabilidad óptima, retire los calibradores del sistema inmediatamente después de la calibración y almacénelos a 2-8 C en el vial original. Recogida de muestras Plasma: Se recogen nueve partes de sangre venosa recién extraída en una parte de citrato trisódico. Consulte el documento H21-A5 del CLSI para obtener más instrucciones sobre la reogida, manipulación y almacenamiento de las muestras 9. Descongele rápidamente a 37 C las muestras congeladas. Después de descongelarlas, el ensayo se debe realizar en un plazo de 2 horas. Suero: Tras la recogida, el suero debe separarse del coágulo. Siga las recomendaciones del documento H18-A4 del CLSI sobre las condiciones de almacenamiento de las muestras 10. Centrifugue las muestras que contengan partículas visibles antes del análisis. 2

3 Procedimiento Materiales suministrados 1 Cartucho de reactivos del QUANTA Flash acl IgG 1 Calibrador 1 del QUANTA Flash acl IgG 1 Calibrador 2 del QUANTA Flash acl IgG Materiales adicionales necesarios no suministrados Instrumento BIO-FLASH con ordenador para manejarlo Líquido de lavado del sistema BIO-FLASH (número de componente: ) Iniciadores BIO-FLASH (número de componente: ) Cubetas BIO-FLASH (número de componente: ) Controles de IgG QUANTA Flash acl (número de componente: ) Uso del analizador por quimioluminiscencia BIO-FLASH 1. Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO-FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO- FLASH y el software BIO-FLASH. Para obtener más información o solucionar problemas relativos al ensayo, póngase en contacto con el servicio técnico de INOVA Diagnostics, Inc., en la dirección o número de teléfono indicados al final de estas instrucciones de uso. 2. Para vaciar el recipiente de residuos sólidos, abra el cajón de residuos. Retire el recipiente de residuos sólidos y elimínelo de forma adecuada. Vuelva a colocar el recipiente de residuos sólidos en su lugar, cierre el cajón de residuos y haga clic en Sí en la ventana Vaciar cajón de residuos. 3. Para sustituir los iniciadores, haga clic en el botón Inventario de volúmenes F9, situado en la parte superior derecha. a. En la pantalla Inventario Volúmenes, haga clic en el botón Iniciadores situado a la izquierda. Se abrirá la ventana Añadir iniciadores Retirar frascos viejos. b. Abra y retire el cajón de residuos del instrumento BIO-FLASH. Tire todas las cubetas en el cajón de residuos secos. Haga clic en Sí en la ventana Vaciar cajón de residuos. Retire los frascos dl iniciador de sus soportes y haga clic en el botón Siguiente. Desenrosque los frascos viejos del iniciador de sus tapones y sustitúyalos por nuevos iniciadores. Realice la operación frasco a frasco y respete el código de color de los tapones (blanco-blanco, rojorojo). c. Siga las instrucciones de la ventana que se abrirá, Añadir iniciadores Añadir frasco del iniciador 2. Una vez acetado el código de barras, coloque el iniciador 2 en el soporte de color blanco. Haga clic en Siguiente. d. Siga las instrucciones de la ventana Añadir iniciadores Añadir frasco del iniciador 1. Una vez aceptado el código de barras, coloque el iniciador 1 en el soporte de color rojo. Haga clic en Finalizar. Vuelva a colocar el cajón de residuos en su lugar y ciérrelo. 4. Para ustituir el recipiente de líquido de lavado del sistema, haga clic en el botón Inventario de volúmenes F9, en la esquina superior derecha. En la pantalla Inventario Volúmenes, haga clic en el botón Lavado del sistema. En la ventana que se abrirá, Añadir líquido de lavado Retirar frascos, haa clic en Siguiente. Siga las instrucciones de la ventana que aparecerá, Añadir líquido de lavado Añadir frasco. Una vez aceptado el código de barras, haga clic en Finalizar, si es necesario. 5. Para vaciar el recipiente de residuos líquidos, en la pantalla Inventario Volúmenes haga clic en el botón Residuo líquido. Extraiga el residuo líquido y tírelo. Haga clic en Siguiente. Una vez sustituido el frasco vacío, haga clic en Finalizar. 3

4 Método Preparación del cartucho de reactivos La primera vez que se utilice el cartucho de reactivos, se deben seguir los pasos siguientes para instalar el cartucho con precisión en el instrumento BIO-FLASH.Nota: No utilice el cartucho de reactivos si observa algún signo de daño. Cartucho de IgG QUANTA Flash acl: Durante el envío y el almacenamiento, las micropartículas se depositan y es preciso mezclarlas para volver a suspenderlas. 1. La primera vez que se utiliza el cartucho, invierta suavemente el cartucho 30 veces, evitando la formación de espuma. Compruebe la resuspensión completa de las micropartículas. Si las micropartículas no se han resuspendido completamente, siga invirtiendo el cartucho hasta que se termine la resuspensión. Si las micropartículas no se resuspenden, NO UTILICE EL CARTUCHO. 2. Una vez que se han resuspendido las micropartículas, coloque el cartucho de reactivos sobre una superficie sólida para retirar la anilla roja. Con una mano, sostenga el cartucho de reactivos en su lugar. Con la otra mano, agarre con fuerza la anilla roja de la parte posterior del cartucho de reactivos y tire de ella completamente. 3. Pulse las dos pestañas laterales del tapón de perforación (parte gris) y aplique presión a la parte superior del cartucho de reactivos hasta que descienda y alcance untope. Las pestañas deberían quedar ocultas. NO INVIERTA EL CARTUCHO ABIERTO. 4. Coloque con cuidado el cartucho de reactivos en cualquier ranura abierta del carro de reactivos del instrumento BIO-FLASH. Una vez colocado el cartucho en la bandeja de reactivos, el instrumento realiza mezclas periódicas adicionales de las micropartículas. Calibración del ensayo 1. Cada nuevo lote de cartucho de reactivos debe calibrarse antes del primer uso. El software no permitirá usar un lote nuevo hasta que se calibre. Consulte el manual del operador del BIO- FLASH para obtener instrucciones completas sobre el procedimiento del ensayo. 2. Los calibradores de IgG QUANTA Flash acl se deben mezclar invirtiéndolos suavemente varias veces para garantizar la homogeneidad del calibrador. Evite la formación de espuma. 3. Una vez validada la calibración, el lote de cartuchos de reactivos en el que se ha efectuado la calibración estará preparado para utilizarse. 4

5 Programación y análisis de muestras 1. Pulse el botón Lista de trabajo de la parte superior de la pantalla y seleccione la pestaña Gradillas de la parte inferior. 2. Seleccione la gradilla de muestras que se utilizará marcándola en la pantalla o escaneando su código de barras con el lector manual de códigos de barras. Escanee o escriba el nombre de la muestra, seleccione el tipo de muestra y el tipo de recipiente (tubo/copa) y, a continuación, seleccione IgG_aCL en el panel del ensayo. Repita estos pasos para todas las muestras. 3 Cargue las muestras en las posiciones seleccionadas de la gradilla de muestras y coloque la gradilla en el carro de muestras del instrumento. 4. Cuando todos los materiales necesarios estén cargados en el instrumento, el icono de inicio pasará a estar disponible, en color verde, en la parte superior de la pantalla. Pulse el icono de inicio para comenzar la sesiónde análisis. Control de calidad Los controles de IgG QUANTA Flash acl (vendidos por separado; número de producto de INOVA: , contienen los controles de IgG acl bajo y alto. Consulte el documento QUANTA Flash acl IgG Controls para obtener instrucciones de uso detalladas sobre cómo introducir en el software el valor de la unidad y la desviación estándar de cada control y cómo analizar los controles. Cada laboratorio debe determinar su propia media y desviación estándar y establecer un programa de control de calidad para supervisar los análisis de laboratorio. Se recomienda realizar los controles una vez en cada turno de 8 horas en que se utilice el ensayo. Consulte Westgard et al para identificar y solucionar situaciones fuera de control 12. Trazabilidad Los valores notificados se determinaron durante varias sesiones de análisis en el sistema BIO-FLASH utilizando lotes de reactivos específcos y frente a un patrón local interno. De acuerdo con las recomendaciones del Comité Internacional para el diagnóstico del SAF establecidas en la reunión celebrada en Sydney 2, se han correlacionado las unidades del patrón local interno para los anticuerpos IgG acl con el anticuerpo monoclonal de referencia HCAL 13. Matriz de la muestra Se analizaron veintiún muestras de plasma citratado/suero en parejas con el ensayo de IgG acl. Se compararon los valores de concentración mediante regresión de Passing y Bablok utilizando los valores de la muestra de plasma como referencia (eje X) y el coeficiente de correlación calculado con la correlación Pearson. La pendiente y la intersección fueron de 1.04 y respectivamente y la correlación (r) fue de Cálculo de los resultados Se genera una curva maestra de cinco puntos para cada nuevo lote del QUANTA Flash acl IgG. Esta curva logística de cuatro parámetros se codifica mediante el código de barras de cada cartucho de reactivos. Una vez calibrado un cartucho de reactivos, se utilizará una curva de trabajo espcífica del equipo para convertir las unidades relativas de luz (RLU) a unidades de quimioluminiscencia (CU). Interpretación de los resultados El ensayo QUANTA Flash permite detectar pequeñas diferencias en las poblaciones de pacientes. Cada laboratorio debe determinar su propio rango normal basándose en los controles y la población de pacientes que utilice, de acuerdo con los procedimientos específicos que establezca. Los resultados de IgG acl se expresan en CU. Estas unidades se han establecido asignando 20 CU a la respuesta del límite superior del rango de normalidad (ULNR) de 252 plasmas citratados procedentes de un banco de sangre (percentil 99). 1 CU corresponde a 16,3 ng/ml del anticuerpo quimérico HCAL. Tenga en cuenta: El BIO-FLASH tiene en cuenta automáticamente las diferencias de dilución entre las muestras de plasma y suero. No es necesario corregir por un factor los valores notificados de la muestra de suero. Consulte el manual del operador del BIO-FLASH para obtener información adicional. 5

6 Limitaciones del procedimiento No es posible realizar un diagnóstico clínico definitivo basándose en un resultado positivo de IgG acl, por lo que también deben tenerse en cuenta la historia clínica del paciente y los datos clínicos. Cuando se obtiene un resultado negativo de IgG acl en presencia de indicaciones clínicas, deben efectuarse otros ensayos de apl, tal como recomiendan los criterios de clasificación revisados que estableció el Comité Internacional para el diagnóstico de SAF en la reunión celebrada en Los resultados de IgG acl en el BIO-FLASH no se ven afectados por valores de hemoglobina de hasta 500 mg/dl, bilirrubina de hasta 18 mg/dl, triglicéridos de hasta mg/dl, heparina (de bajo peso molecular y no fraccionada) de hasta 2 UI/mL y factor reumatoide (FR) de hasta 500 UI/mL. En un estudio de reactividad cruzada, se analizaron 10 muestras positivas de cada una de las enfermedades siguientes con el ensayo QUANTA Flash IgG acl: factor reumatoide, anticuerpos antinucleares (ANA) y sífilis (positivas para la prueba de la reagina plasmática rápida, RPR). Este ensayo no ha sido validado para poblaciones pediátricas. Grupo de pacientes N n (positivo) % de IgG acl positivo FR % ANA % RPR % Valores esperados Se realizó un estudio de rango normal utilizando muestras de donante de plasma citratado de banco de sangre de adultos sanos con reactivos y calibradores de IgG QUANTA Flash acl. Siguiendo las recomendaciones del Comité internacional de Sydney 2, el umbral para anticuerpos IgG acl positivos se estableció en el percentil 99. Sistema N Límite superior del rango norma (CU) BIO-FLASH Debido a las múltiples variables que pueden afectar a los resultados, cada laboratorio debe determinar su propio rango normal. Comparación de métodos con un ensayo comercializado con el mismo fin Las muestras utilizadas en el estudio de rendimiento clínico que estaban dentro de los rangos de análisis de los métodos comparados se midieron en un estudio de comparación de métodos con un ensayo ELISA autorizado por la FDA disponible en el mercado. El porcentaje de concordancia positiva, negativa y general fue: Comparación de métodos (N = 136) QUANTA Flash acl IgG CIA Ensayo ELISA Concordancia (%) (intervalo de confianza: 95%) Positivo Negativo Total Positivo Conc. pos. = 80.0% (63.1%-91.6%) Negativo Conc. neg. = 75.2% (65.7%-83.3%) Total Conc. total = 76.5% (68.4%-83.3%) Los resultados del estudio de precisión, correlación y clínico se obtuvieron utilizando lotes de reactivos y controles específicos. 6

7 Sensibilidad y especificidad clínicas Se realizó un estudio de los resultados en 321 plasmas citratados congelados. Estos plasmas procedían de 6 grupos diferentes, incluidos individuos seleccionados diagnosticados con SAF primaria (SAFP), SAF secundaria (SAFS), lupus eritematoso sistémico (LES) pero no con SAF y similar a LES según los análisis objetivo estándar. El quinto grupo estaba formado por pacientes con problemas cardiovasculares pero que no estaban clasificados en los cuatro grupos anteriores. Se incluyó también un grupo de personas aparentemente sanas. Los resultados resumidos a continuación se basan en un límite de detección de 20 CU: Grupo de pacientes N n (positivo) % de positivo SAFP % SAFS % LES % Similar a LES % Otros % Normal % Considerando los resultados positivos de los grupos de pacientes con SAFP y SAFS como positivos reales, los porcentajes de concordancia de sensibilidad clínica, de especificidad y general fueron: Sistema N Sensibilidad Especificidad % de concordancia (IC del 95%) (IC del 95%) (IC del 95%) BIO-FLASH % (43.6%-64.8%) 95.6% (92.1%-97.9%) 83.8% (79.3%-87.4%) Precisión y reproducibilidad Todos los datos mostrados se obtuvieron utilizando muestras de plasma citratado. Se evaluó la precisión en el análisis y total (análisis a análisis y día a día) a través de numerosas sesiones de análisis. Media (CU) % de CV % de CV (total) BIO-FLASH (en el análisis) Control de IgG acl bajo % 8.2% Control de IgG acl alto % 6.9% Muestra A de plasma IgG acl % 4.4% Muestra B de plasma IgG acl % 4.2% Muestra C de plasma IgG acl % 7.2% Muestra D de plasma IgG acl % 5.4% Muestra E de plasma IgG acl % 6.7% Límites de detección; rangos lineales y notificables Límite inferior de detección: Sistema BIO-FLASH Linealidad: Sistema 2.6 CU BIO-FLASH CU Cuando se activa la capacidad de reanálisis del instrumento, éste realiza una dilución automática y corrige el resultado final del factor de dilución (20x), ampliando por tanto el rango del análisis a CU. El ensayo no se ve afectado por el efecto prozona. El protocolo del ensayo tiene una fase de lavado después de la incubación de la muestra que impide el efecto prozona. Las muestras por encima de las 2024 CU analizadas durante el estudio de rendimiento clínico iniciaron el reanálisis. 7

8 QUANTA Flash acl IgG Controls Para uso diagnóstico In Vitro Uso previsto Los controles QUANTA Flash acl IgG están destinados al control de calidad de los análisis QUANTA Flash acl IgG efectuados en el instrumento BIO-FLASH. Resumen y principios del procedimiento Los anticuerpos anti-cardiolipina (acl) forman parte de una familia heterogénea de anticuerpos antifosfolipídicos (apl) que son autoanticuerpos dirigidos contra los fosfolípidos aniónicos o los complejos de proteínas y fosfolípidos. Los niveles persistentemente elevados de anticuerpos apl se asocian a un riesgo elevado de trombosis vascular y complicaciones obstétricas. Esta asociación se conoce como síndrome antifosfolipídico (SAF), una clasificación propuesta por Harris en Los ensayos para la determinación de los anticuerpos IgG e IgM acl, os anticuerpos IgG e IgM anti-ß2gp1 y los anticuerpos anticoagulantes lúpicos son los ensayos de apl definidos en los criterios de clasificación revisados determinados por el Comité Internacional para el diagnóstico del SAF, durante la reunión celebrada en 2006 en Sydney (Australia) 2,3. Los controles IgG de acl alto y bajo se preparan mediante un proceso específico y contienen distintas concentraciones de anticuerpos IgG humanos acl. Control de IgG anticardiolipina bajo: control destinado a la evaluación de la precisión y exactitud del ensayo a niveles normales o próximos al corte de IgG acl. Control de IgG anticardiolipina alto: control destinado a la evaluación de la precisión y exactitud del ensayo a niveles anómalos de IgG acl. Se recomienda utilizar ambos controles para llevar a cabo un programa de control de calidad completo. Reactivos 1. 3 tubos de 1 ml con código de barras de control bajo para el QUANTA Flash IgG acl que contienen una solución con IgG acl en una solución salina con suero bovino fetal, estabilizantes y conservante tubos de 1 ml con código de barras de control alto para el QUANTA Flash IgG acl que contienen una solución con IgG acl en una solución salina con suero bovino fetal, estabilizantes y conservante. Advertencias y precauciones El material de procedencia humana en este producto ha sido analizado con métodos aprobados por la FDA y ha resultado ser no reactivo a los anticuerpos del antígeno de superficie de lahepatitis B (HBsAg), anti-vhc y VIH 1/2. Debe manipularse como si fuera potencialmente infeccioso 8. Evite el contacto con la piel y los ojos. (S 24/25) No vaciar en los desagües (S 29). Utilice ropa protectora adecuada (S 36). Este producto está destinado a uso diagnóstico In Vitro. 8

9 Condiciones de almacenamiento 1. Guarde los controles no abiertos a 2-8 C. No los congele. Los reactivos permanecen estables hasta la fecha de caducidad si se almacenan y manipulan como está indicado. 2. Estos controles están diseñados para 15 usos. La etiqueta de cada tubo de control posee una fila de 15 casillas que pueden marcarse para controlar el número de usos. El tiempo máximo durante el que los tubos de control pueden permanecer destapados una vez cargados en el instrumento es de 2,5 horas o 10 minutos por uso. Los controles destapados que permanezcan en el instrumento durante un periodo de tiempo de más de 2 ½ horas en total deben desecharse. Si se utilizan los mismos tubos de control para más de 15 usos y/o durante más de 2,5 horas en total, pueden producirse resultados erróneos. 3. Para conseguir una estabilidad óptima, retire los controles del sistema inmediatamente después de tomar las muestras de control y almacénelos tapados a 2-8 o C en el vial original. Procedimiento Para crear nuevos materiales de control de calidad para el ensayo de IgG acl: 1. Antes de utilizar los controles IgG QUANTA Flash acl por primera vez en el instrumento, introduzca en el software el nombre, el lote, las réplicas, la caducidad, el valor (o dosis) y la DE objetivo. 2. En la pantalla Resumen del instrumento, haga clic en el botón Seleccionar más opciones Ctrl-M ( ), señalado con una flecha. Haga clic en el botón Nuevo material de control de calidad. 3. Cada grupo de control incluye una hoja de datos específica del lote. En primer lugar, introduzca el nombre, el número de lote y la caducidad de esta hoja de datos en el software. A continuación, haga clic en el botón Añadir ensayo. En la ventana que se abrirá, asegúrese de que está marcada la casilla Mostrar todos los ensayos. Seleccione el ensayo IgG acl de la lista y haga clic en Añadir. Por último, introduzca la dosis objetivo y la DE objetivo. Haga clic en Guardar. Realice este proceso para ambos controles. Para crear un nuevo lote para los materiales de control de calidad existentes: 1. Antes de utilizar un nuevo lote de controles QUANTA Flash acl IgG por primera vez, deben introducirse en el software el nombre, el lote, la caducidad, el valor (o dosis) y la DE objetivo. 2. En la pantalla Resumen del instrumento, haga clic en el botón Seleccionar más opciones Ctrl-M ( ), señalado con una flecha. Seleccione QC Ctrl-F2. Marque el ensayo IgG_aCL en la columna de la izquierda. A continuación, marque el material de control adecuado a la derecha (bien aclgl, correspondiente al control bajo, o bien, aclgh, que corresponde al control alto). Haga clic en el botón Nuevo lote de control de calidad. 3. Cada grupo de control incluye una hoja de datos específica del lote. Introduzca la información de esta hoja de datos en el software. Dicha información debe comprender el nombre, el número de lote, la caducidad, la concentración objetivo y la DE objetivo. Si es necesario, haga clic en el botón Añadir ensayo. En la ventana que se abrirá, asegúrese de que está marcada la casilla Mostrar todos los ensayos. Seleccione el ensayo IgG acl de la lista y haga clic en Añadir. Haga clic en Guardar. Realice este proceso para ambos controles. 4. Se recomienda utilizar los controles QUANTA Flash IgG acl una vez cada turno de 8 horas en que se utilice el ensayo. 5. Cada control debe mezclarse suavemente antes de utilizarlo, para garantizar su homogeneidad. Evite la formación de espuma, ya que las burbujas pueden interferir en la detección del nivel de líquido de los instrumentos. Destape los dos tubos del control y colóquelos en una gradilla de muestras, con los códigos de barras orientados hacia delante a través de las aberturas de la gradilla. Coloque la gradillade muestras en la bandeja de muestras del instrumento BIO-FLASH y cierre la puerta. El instrumento leerá los códigos de barras de los tubos del control e identificará el cartucho de reactivos adecuado. Consulte el manual del operador suministrado con el sistema BIO-FLASH para obtener instrucciones de funcionamiento detalladas sobre el analizador por quimioluminiscencia BIO-FLASH y el software BIO-FLASH. 9

10 Trazabilidad Los valores notificados se determinaron durante varias sesiones de análisis en el sistema BIO-FLASH utilizando lotes de reactivos específicos y frente a un patrón local interno. Los resultados de IgG acl se notifican en CU (unidades de quimioluminiscencia). Estas unidades se han establecido asignando 20 CU a la respuesta del límite superior del rango de normalidad (ULNR) de 252 plasmas citratados procedentes de un banco de sangre (percentil 99). De acuerdo con las recomendaciones del Comité Internacional para el diagnóstico del SAF establecidas en la reunión celebrada en Sydney 2, se han correlacionado las unidades del patrón local interno para los anticuerpos IgG acl con el anticuerpo monoclonal de referencia HCAL 13. Limitaciones Estos productos se han diseñado como controles para la monitorización del rendimiento del ensayo QUANTA Flash IgG acl. Estos controles están sujetos a las limitaciones del sistema de ensayos. Las desviaciones pueden indicar posibles problemas con uno o más componentes del sistema de análisis. 10

11 Bibliografía 1. Harris EN: Syndrome in the black swan. Br.J. Rheumatol 1987, 26: Miyakis S, Lockshin MD, Atsumi T, Branch DW, Brey RL, Cervera R, Derksen RH, de Groot PG, Koike T, Meroni PL, Reber G, Shoenfeld Y, Tincani A, Vlachoyiannopoulos PG, Krilis SA : International consensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome (APS). J Thromb Haemost 2006, 4: Swadźba J, Iwaniec T, Szczeklik A, Musiał J: Revised classification criteria for antiphospholipid syndrome and the thrombotic risk in patients with autoimmune diseases. J Thromb Haemost 2007, 5: Lutters BC, Meijers JC, Derksen RH, Arnout J, de Groot PG: Dimers of beta 2-glycoprotein I mimic the in vitro effects of beta 2-glycoprotein-anti-beta 2-glycoprotein antibody complexes. J Biol Chem 2001, 276: Kuwana M, Matsuura E, Kobayashi K, Okazaki Y, Kaburaki J, Ikeda Y, Kawakami Y: Binding of ß2- glycoprotein-i to anionic phospholipids facilitates processing and presentation of a cryptic epitope that activates pathogenic autoreactive T-cells. Blood 2005, 105: Wang SX, Sun YT, Sui SF: Membrane-induced conformational change in human apolipoprotein H. Biochem J 2000, 348: de Laat B, Derksen RHWM, van Lummel M, Pennings MTT, de Groot PG: Pathogenic antiß2- glycoprotein-i antibodies recognize domain I of ß2-glycoprotein-I only after a conformational change. Blood 2006, 107: Richmond JY, McKinney RW eds.: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, 4th Edition; CLSI: Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline-Fifth Edition. CLSI Document H21-A5. Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087, USA, CLSI: Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document H18-A4. Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087, USA, Zucker S, Cathey MH, West B: Preparation of Quality Control Specimens for Coagulation. Am J Clin Pathol 1970, 53: Westgard JO, Barry PL: Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and Productivity of Analytical Process. AACC Press; Ichicawa K, Khamashta MA, Koike T, Matsuura E, Hughes GR: ß2 Glycoprotein-I reactivity of monoclonal anticardiolipin antibodies from patients with the antiphospholipid syndrome. Arthritis and Rheumatism 1994, 37:

12 Símbolos utilizados Dispositivo médico para diagnóstico In Vitro Consulte las instrucciones de uso Límites de temperatura No reutilizar Riesgos biológicos Código del lote Número de catálogo Utilizar antes del tiempo indicado Fabricante Representante autorizado Contenido suficiente para n análisis Control Calibrador 1 Calibrador 2 Caja de cartón reciclable Mantener en esta posición QUANTA Flash es una marca comercial de INOVA Diagnostics Inc. BIO-FLASH es una marca comercial registrada de Biokit SA

13 Fabricado para: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA Estados Unidos de América Servicio técnico (solo para EE. UU. y Canadá): Servicio técnico (fuera de EE. UU.): support@inovadx.com Representante autorizado en la UE: Medical Technology Promedt Consulting GmBH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Alemania Tel.: Fax.: ESP Abril 2014 Revisión 4 13

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