INMUNOLOGÍA DEL TRASPLANTE Rol del Sistema HLA Paulina Salas del Campo Hospital Exequiel González Cortés 2013

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1 INMUNOLOGÍA DEL TRASPLANTE Rol del Sistema HLA Paulina Salas del Campo Hospital Exequiel González Cortés 2013

2 Inmunidad La inmunidad es un estado de resistencia frente a agentes extraños al organismo, los cuales por su presencia o por el daño tisular que producen alteran la identidad biológica propia de cada individuo Mecanismos Defensivos Agentes: Físicos traumatismos, radiaciones Químicos contaminantes, tóxicos Biológicos virus, bacterias, trasplantes

3 Tipos de inmunidad Natural Respuesta es similar, independiente de cada exposición con el agente. No tiene memoria inmunológica Adquirida Respuesta va aumentando en la medida que se repita la exposición al agente. Tiene memoria inmunológica

4 Tipos de Inmunidad

5 Respuesta inflamatoria Aguda Inespecífica Delves PJ, Roitt IM. N Engl J Med 2000;343:37-49.

6 Mecanismos defensivos Inespecíficos: Inmunidad natural, innata Barreras físicas: piel Células fagocíticas: macrófagos, PMN Natural Killers Células liberadoras de mediadores inflamatorios: basófilos, mastocitos, eosinófilos Moléculas Proteinas de fase aguda Citoquinas Complemento

7 Complemento Sistema de proteínas plasmáticas que cumplen un rol defensivo inespecífico: Destruye microorganismos Promueve procesos inflamatorios Actúa como opsonina Inhibe la formación de complejos Ag-Ac Participa en la remoción de complejos Ag-Ac

8 Activación complemento

9 Funciones del Complemento

10 Mecanismos defensivos Específicos: Inmunidad adaptativa, adquirida Sistema inmune: Linfocito I- Organos linfoides primarios: producción Ls Timo: LT Médula ósea. LB célula plasmática II- Organos linfoides secundarios: Estimulación Ls Ganglios Bazo Tejido linfoide asociado a mucosas y piel

11 Tipos de células de In. adaptativa Linfocitos Se diferencian por moléculas de superficie Subpoblaciones. CD(cluster of differenciation) CD4: colaboradores CD8: supresores/citotóxicos CD3: Está presente en todas las subpoblaciones y forma parte del receptor para Ag Células accesorias Presentadoras de Ag (APC): dendríticas, macrófagos Eliminadoras de material Ag: macrófagos, PMN, NK

12 Receptor del Linfocito T 2 cadenas polipeptídicas: α, β dominio variable: V. La variabilidad está concentrada en 3 segmentos: CDR1, CDR2, CDR3 Dominio constante

13 Interacción entre TCR y el Complejo Péptido -HLA Klein J, Sato A. N Engl J Med 2000;343:

14 Inmunoglobulinas Glicoproteinas LB: incorporadas a Mb Célula plasmática: secretadas Fragmentos Fab Reconocimiento de Ag Fc Activación de c, fijación a moléculas efectoras (FcγR)

15 Inmunoglobulinas Sitio de unión de Ag V H Fab C 1 C L V L Fc C 2 C 3 Sitio de unión de receptor Fc y complemento American Journal of Transplantation 2006;

16 Sistema HLA El complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en humanos se llama sistema HLA (human leukocyte antigen) Son proteínas que confieren la identidad biológica a cada individuo. Pueden comportarse como Ag Permiten presentar Ag a Linfocitos (complejo péptido- HLA) Están codificados en el brazo corto del cromosoma 6

17 Clasificación sistema HLA Tipos HLA UBICACION Clase I Clase II Clase III A B C DR DP DQ Complemento, C2, C4b, B Citoquinas, TNFα, TNFβ,enzimas Células nucleadas CPA Macrófagos Células dendríticas Linfocitos B Linfocitos T activados Células epiteliales del timo

18 Localización de genes del complejo HLA en Cromosoma 6 Klein J, Sato A. N Engl J Med 2000;343:

19 Moléculas HLA Clase I Cadena polipeptídica α ( 5 dominios) 2 dominios de unión peptídicos α1, α2 1 dominio semejante a Ig α3 Región transmembrana Cola citoplasmática Cadena β β2 microglobulina

20 Moléculas HLA clase II Cadena polipeptídica α (4 dominios) 1 Dominio de unión peptídico α1 Dominio Ig simil α1 Región transmembrana Cola citoplasmática Cadena polipeptídica β (4 dominios) 1 Dominio de unión peptídico β1 Dominio Ig simil β1 Región transmembrana Cola citoplasmática

21 Estructura de moléculas HLA Clase I y Clase II Klein J, Sato A. N Engl J Med 2000;343:

22 Funciones del Sistema HLA Moléculas encargadas de presentar los péptidos antigénicos a linfocito Este proceso es el iniciador de la la respuesta inmune adaptativa. Esta respuesta es la que determina el rechazo en los trasplante de órganos y tejidos

23 Fases de la Respuesta Inmune

24 Fases de la Respuesta Inmune: Reconocimiento Los Ag son procesados por la APC. Esta célula presenta el péptido al linfocito (péptido ubicado en el complejo péptido - HLA de la Mb) LB reconoce el péptido a través de Ig. de membrana LT reconoce el péptido a través del TCR La consecuencia de este reconocimiento es la activación del linfocito

25

26 Procesamiento y Presentación del Antígeno Klein J, Sato A. N Engl J Med 2000;343:

27 Etapas de la Respuesta Inmune: Activación Para completar la activación se requieren dos señales: Específica : MHC+Péptido = TCR Inespecífica coestimulación: B7 1=CD28 Activación secuencial de los promotores de los genes que transcriben citoquinas y receptores de citoquinas Producción de citoquinas estimuladoras de la proliferación y diferenciación celular (IL2)

28 Etapas de la Respuesta Inmune: Activación Consecuencias: Expansión clonal Diferenciación de linfocitos a células efectoras CD4 liberador de citoquinas CD8 citotóxico Célula plasmática Célula de memoria T y B

29 Fases de la Respuesta Inmune: Etapa efectora El objetivo de esta etapa es lograr el reclutamiento de mecanismos inespecíficos que conduzcan a la neutralización o eliminación del material antigénico LTCD4 activado: síntesis citoquinas LTCD8 activado: destruir células por contacto directo Respuesta humoral: Ac destruir el Ag por mecanismo linfocitotoxicidad dependiente de Ac (ADCC).

30 Activación de Linfocito T Nankivell BJ, Alexander SI. N Engl J Med 2010;363:

31 Confundidos?

32 Rechazo del Injerto Allograft Immune Reaction CD40 CD40L T-Lym Helper B-Lym APC B-7 IL-2 2 nd Implant APC IL-1 CD80 CTLA4ig Expansion T-Lym T-Lym Killer Regulatory

33 Inmunosupresores Injerto Reacción Immune CD40 CD40L LT- Helper LB APC Azatioprina MMF, Myforitc APC IL-1 B-7 CD80 IL-2 CTLA4ig IL-2R Expansion 2 nd Implant Timoglobulina LT- Reg LT Killer CD45RB CyA Tacrolimus Sirolimus Everolimus Simulect

34 Rechazo Celular Agudo: Mediado por LT Nankivell BJ, Alexander SI. N Engl J Med 2010;363:

35 Terapia de RAC CORTICOIDES Amplio efecto antiinflamatorio inmunidad celular. Inhibe presentación antigénica Bloquea transcripción de genes CK (IL-1, TNFα) Inhibe activación y proliferación LT Inhiben migración de células al injerto

36 Terapia de RAC AC. POLICLONALES: TIMOGLOBULINA Son producidos inyectando linfocitos humanos a equino (Atgam) o conejos (TG) para generar Ig de gran acción lítica y apoptótica de linfocito T Bloquean proteínas de Mb del Linfocito T: CD2; CD3; CD45 Linfopenia profunda y duradera Aceleran la Apoptosis

37 Rechazo Humoral Agudo: Mediado por Ac Nankivell BJ, Alexander SI. N Engl J Med 2010;363:

38 Criterios diagnóstico para Rechazo Agudo Humoral 1 - Evidencia Serológica de ADE al momento de la biopsia: (HLA, ABO y otros) 2.- Evidencia inmunopatológica de la acción de Allo anticuerpos: C4d(+) tinción intensa y difusa en ptc 3.- Evidencia histológica de daño tisular: Tipo a :NTA Tipo b: Capilaritis Tipo c: Inflamacion transmural o necrosis fibrinoide 4.- Evidencia clínica de disfunción del injerto (aguda y severa) ADE circulantes Depósito C4d Daño tisular Disfunción Injerto

39 Terapias de RAH INHIBICIÓN AC REMOCIÓN AC DEPLECIÓN LB APOPTOSIS CP INHIBICIÓN C IGEV Plasmaféresis Corticoides, ATG rituximab Esplenectomía Belimumab Bortezomib Eculizumab

40 Rituximab Depleción de células B (apoptosis) Inhibe proliferación de células B Impide que linfocito B actúe como CPA

41 Bortezomib

42 Eculizumab

43 Rechazo Crónico mediado por Ac Nankivell BJ, Alexander SI. N Engl J Med 2010;363:

44 Rechazo crónico humoral????? Pediatr Nephrol 2010;25:

45 Para que sirve conocer Sistema HLA?

46 Objetivos Exámenes histocompatibilidad Tipificar D/R Búsqueda Ac (screening) Cross-Match Estimar riesgo inmunológico pre y post TX

47 Tipificación Determinar los alelos del sistema HLA que se expresan en D/R mayor MM mayor riesgo inmunológico Serólogico Moléculas HLA Molecular Nucleótidos que codifican moleculas HLA

48 Tipificación Serológica La prueba de la microlinfotoxicidad de Terasaki es la técnica básica en el estudio inmunológico del trasplante renal.

49 Tipificación Serológica Ventajas Rápida (DC) Discrimina null alelos (sin expresión en superficie celular) Desventajas Nº especificidades limitadas No diferencia alelos con pequeñas variaciones en sus aa Locus A Subtipo 2 Familia ( )

50 Biología Molecular

51 Tipificación Molecular Ventajas Más precisa Mas específica Permite diferenciar alelos a nivel de aa Tipificación de otros locus C, DP, DQ MICA, MICB KIR Desventajas Más compleja de leer Locus A * Tipo 02 Subtipo 01 Supertípicos

52 Tipificación ISP

53 Screening Ac- AntiHLA

54 Screening citotóxico Ventajas Estima riesgo del receptor de presentar un XM + con un potencial donante Desventajas Varía según panel usado F(+) Ac no HLA, AutoAc,IgM F(-) Ac baja densidad, no fija c

55 Screening Fase Sólida Ventajas Ag purificados o recombinantes (sólo HLA) Más sensible Más específico Clase, especificidad Desventajas Detecta Ac de significado clínico dudoso (no fijadores, baja conc.) Nivel de corte varía en cada laboratorio (estandarización) Confirmar que Ag del donante están en presentes en el kit (tipificación del donante)

56 PRA ISP

57 Determinación Ac AntiHLA ISP

58 Especificidad de Ac ISP

59 CROSS MATCH Prueba para determinar si el receptor tiene Ac que reaccionan contra su donante Determinación Ac (+) para ADE XM (+) Inmunológicamente relevante XM (-)???(método, fuerza, )

60 TÉCNICAS DE XM

61 XMCF ISP

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