Libro de resúmenes: Sesiones orales Farmadrid XX

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1 Libro de resúmenes: Sesiones orales Farmadrid XX Comité Organizador: Emilio Ambrosio Flores, Alejandro Higuera Matas, Javier Ibias Martín, Nuria del Olmo Izquierdo, Miguel Miguéns Vázquez, Santiago Morales Coria, Mª Amparo Assis Duart, David Roura Martínez, Gonzalo López Montoya, Departamento de Psicobiología. Facultad de Psicología. UNED Sesión de Apertura Veinte años de Farmadrid Departamento de Psicobiología. Facultad de Psicología. UNED Lugar Facultad de Psicología Salón de Actos C/ Juan del Rosal, 10 Ciudad Universitaria MADRID Fecha: 4 de Julio de Página web: Antonio G. García y Luis Gandía Instituto Teófilo Hernando, Universidad Autónoma de Madrid En octubre de 1991, un puñado de farmacólogos decidimos iniciar reuniones periódicas para intercambiar puntos de vista sobre las distintas líneas de investigación farmacológica que se desarrollaban en las universidades, hospitales y laboratorios farmacéuticos de la Comunidad de Madrid. La primera tuvo lugar en octubre de 1991, y adoptó el nombre de Reunión de Farmacólogos de la Comunidad de Madrid; en los últimos años, su nombre se cambió a Farmadrid. Las primeras reuniones se basaron en ponencias. Cuando aumentó el número de comunicaciones, la jornada incluyó comunicaciones orales y paneles, cuyo número se refleja en la siguiente figura: Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License 1

2 Las sedes y organizadores de las sucesivas jornadas se resumen en la siguiente tabla: 1. Fac. Medicina, Univ. Complutense de Madrid (Santos Barrigón, 1992) 2. Fac. Medicina, Univ. Autónoma de Madrid (Antonio R. Artalejo, 1993) 3. Fac. Medicina, Univ. Alcalá de Henares (Federico Gago Bádenas, 1994) 4. Laboratorios Glaxo (Federico Gómez de las Heras, 1995) 5. Fac. Farmacia, Univ. Complutense de Madrid (José Angel Fuentes Cubero, 1996) 6. Fac. Medicina, Univ. San Pablo-CEU (Luis Fernando Alguacil Merino, 1997) 7. Instituto Cajal, CSIC (María López de Ceballos, 1998) 8. Fac. Medicina, Univ. Autónoma de Madrid (Luis Gandía Juan, 1999) 9. Fac. Farmacia, Univ. Alcalá de Henares (Enrique Gálvez Ruano, 2000) 10. Escuela de Optica, Univ. Complutense de Madrid (Jesús Pintor Just, 2001) 11. Hospital Univ. La Princesa, Univ. Autónoma de Madrid (Francisco Abad, 2002) 12. Laboratorios Lilly (Luis Emilio García Pérez, 2003) 13. Fac. Medicina. Univ. Alcalá de Henares (Teresa Martín-Lucinda Villaescusa, 2004) 14. Fac. Veterinaria, Univ. Complutense de Madrid (Antonio R. Artalejo, 2005) 15 -Fac. Ciencias de la Salud, Univ. Rey Juan Carlos (Carlos Goicoechea- M. Jesús Alonso, 2006) 16. Fac. Medicina. Univ. Complutense de Madrid (Angela Alsasua- Francisco Pérez Vizcaino, 2007) 17. Instituto de Química Médica, CSIC (José Luis Marco, 2008) 18. Instituto de Investigaciones Biomédicas, CSIC (Carmen Valenzuela, 2009) 19. Facultad de Farmacia, UCM (Marisol Fernández, 2010) 20. Facultad de Psicología, UNED (Emilio Ambrosio, ) En conclusión, durante sus 20 años de vida Farmadrid ha tenido altibajos. Sin embargo, gracias al entusiasmo de los organizadores y al apoyo continuado de la Fundación Teófilo Hernando (FTH, UAM), Farmadrid parece haberse consolidado como un foro de debate de ideas farmacológicas, favoreciendo el establecimiento de colaboraciones científicas entre los distintos grupos de farmacólogos de la Comunidad de Madrid. Además, contribuye también a la formación de los jóvenes investigadores que presentan sus primeras comunicaciones en Farmadrid. Sesión Oral I: Sistema Nervioso Central O.1. La expresión endógena de pleiotrofina modula los efectos reforzadores de la anfetamina y el déficit cognitivo transitorio causado por el tratamiento crónico con anfetamina durante la adolescencia. Esther Gramage, Nuria del Olmo, Alberto Fole, Yasmina B. Martín, Gonzalo Herradón. Universidad San Pablo-CEU. Boadilla del Monte, Madrid. La Pleiotrofina (PTN) es un factor neurotrófico que ejerce importantes funciones en la supervivencia y diferenciación de neuronas dopaminérgicas, así como en la modulación de la potenciación a largo plazo (LTP) hipocampal. La PTN se sobreexpresa en distintas áreas cerebrales en respuesta a distintas drogas de abuso como la anfetamina, lo que sugiere que la PTN podría modular los efectos neuroadaptativos y farmacológicos inducidos por esta droga. Para probar esta hipótesis, estudiamos los efectos de la anfetamina en ratones knockout de PTN (PTN-/-) y en ratones wyld type (PTN+/+). En estos estudios, observamos que una dosis intermedia de anfetamina (3 mg/kg) induce un condicionamiento preferencial al sitio (CPP) similar en ratones PTN-/- y PTN+/+. Además, los ratones PTN- /- mostraron un significativo aumento en el comportamiento de búsqueda de la droga comparado con los PTN+/+ después de 5 días de la última administración de anfetamina. Una dosis menor de esta droga (1 mg/kg) causó un mayor CPP en ratones PTN-/- y, de nuevo, los ratones PTN-/- continuaron mostrando un llamativo comportamiento de búsqueda de la droga comparado con los ratones PTN+/+ 5 días después de la última administración de anfetamina. Por otra parte, se conoce que la administración de anfetamina durante la adolescencia en ratas provoca deficiencias cognitivas en el animal adulto. En este sentido, tratamos de averiguar si la PTN puede ser uno de los factores implicados en los déficits cognitivos observados en el adulto después de la administración de anfetamina durante la adolescencia (3 mg/kg i.p./ día, durante 10 días). Veinticuatro horas después de la última administración de la droga, los ratones PTN+/+ mostraron una retención de memoria significativa en el ensayo de evitación pasiva independientemente del tratamiento recibido. Por el contrario, en los ratones PTN-/- encontramos un déficit significativo en la fase de retención inducido por anfetamina en el test de la evitación pasiva, así como 6 días después de la última administración de la droga en el test del laberinto en Y. Sin embargo, 13 y 26 días después de la última administración de anfetamina, no se encontraron diferencias significativas en el laberinto en Y entre los ratones PTN-/- pretratados con anfetamina y con salino (control). Además, observamos un aumento significativo de la LTP hipocampal en rodajas de ratones PTN- /- pretratados con salino comparados con PTN+/+. Curiosamente, el tratamiento con anfetamina durante la adolescencia aumentó significativamente la LTP en ratones PTN+/+ adultos, pero no produjo ningún efecto en ratones PTN-/-, lo que sugiere mecanismos de saturación de LTP en ratones PTN-/-. Estos datos sugieren que el tratamiento con anfetamina durante la adolescencia provoca un déficit cognitivo transitorio dependiendo de la expresión endógena de PTN, así como una aumento a largo plazo de la LTP en ratones normales (PTN+/+). O.2. Efecto de la metanfetamina en la activación de las metaloproteinasas: Implicación en la neurotoxicidad. A. Urrutia, A. Rubio-Araiz, MD Gutierrez-López; A El Ali, DM Hermann, E. O Shea, MI Colado. Departamento de Farmacología. Facultad de Medicina. UCM 2 Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License

3 (+)-Metanfetamina (METH) induce, inmediatamente después de su administración, una respuesta hipertérmica y un proceso de estrés oxidativo/nitrosativo que están implicados en la neurotoxicidad dopaminérgica inducida por la droga (Krasnova and Cadet, 2009). En diversos modelos experimentales ambos factores aumentan la actividad de las metaloproteinasas (MMPs) (Alam et al, ; Rosenberg, 2009). El objetivo es evaluar el efecto de METH sobre la expresión y actividad de MMPs y su relación con la neurodegeneración dopaminérgica producida por la droga. Ratones C57BL/6J recibieron METH (4mg/kg, i.p cada 3 horas, 3 veces consecutivas) a 22ºC y a 4ºC y se sacrificaron 1h, 3h, 24h y 7 días después. Un grupo de animales fue inyectado con el inhibidor de la actividad de MMPs Batimastat (50mg/kg, i.p. 30 min antes de la primera y última inyección de METH). En estriado se cuantificó la expresión de MMP-9, su actividad (zimografía en gel) y localización (zimografia in situ) así como la fosforilación de JNK1/2. Se cuantificó la concentración de dopamina (HPLC) y la densidad de su transportador (DAT) ([ 3 H]-WIN 35,428). METH aumentó la expresión y actividad estriatal de MMP-9 1h después del tratamiento únicamente. Simultáneamente se observó un aumento en la fosforilación de JNK1/2. Cuando METH se administró a animales mantenidos a 4ºC, el aumento en la actividad de MMPs fue sustancialmente menor. Una semana después de la administración de METH se observó una reducción en la concentración estriatal de dopamina y en la densidad de DAT, efectos que no fueron modificados por la administración de Batimastat. METH induce un incremento en la actividad y expresión de MMP-9 que es parcialmente dependiente de la respuesta hipertérmica que induce la droga pero que parece no estar implicado en la neurotoxicidad dopaminérgica. Referencias: 1. Krasnova I and Cadet J Methamphetamine toxicity and messengers of death. Brain Res Rev, 60, Alam M, Mohammad A, Rahman S, Todd K, Shuaib A.. Hyperthermia up-regulates matrix metalloproteinases and accelerates basement degradation in experimental stroke. Neurosci Lett, 495, Rosemberg GA Matrix metalloproteinases and their multiple roles in neurodegenerative diseases. Lancet Neur, 8, Agradecimientos: MICINN (SAF ; RD06/0001/006), PNSD (PR47/ ), UCM (910258), FEDER y RTA O.3. Posible participación del factor de transcripción Nrf2 en la depresión. María Dolores Martín-de-Saavedra, Josiane Budni, Mauricio P. Cunha, Silvia Lorrio, Isabel Lastres, Laura del Barrio, Vanessa Gómez, Ignacio Melgar, Adriana Morgado, Laura G. Curull, Izaskun Buendía, Esther Parada, Ana Lùcia S. Rodrigues, Antonio Cuadrado/ Manuela G. López. Instituto Teófilo Hernando de I+D del Medicamento y Departamento de Farmacología y Terapéutica. Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid. Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License Existe cada vez mayor evidencia de una relación entre depresión e inflamación. Además, el hecho de que existan entre un % de pacientes que no responden a los tratamientos con antidepresivos hace necesario encontrar una nueva diana terapéutica o un tratamiento farmacológico alternativo. Nrf2 es un factor de transcripción que juega un papel fundamental en defensa celular frente a daño oxidativo y electrofílico. Además se ha descrito que está implicado en la atenuación de procesos patológicos relacionados con inflamación. Con estos antecedentes nos planteamos la hipótesis de si Nrf2 podría estar relacionado con la fisiopatología de la depresión y por lo tanto constituir una diana terapéutica frente a dicha enfermedad. Así, realizamos distintos test predictivos de comportamiento depresivo en ratones salvajes y ratones knock out para Nrf2. Los tres tests realizados mostraron que los ratones Nrf2 (-/-) presentan un fenotipo depresivo por observarse un aumento del tiempo de inmovilidad en el test de natación forzada, en el test de suspensión de la cola y una disminución del tiempo de lamido en el test de sacarosa. No se observaron alteraciones en la actividad motora. Las alteraciones a nivel de comportamiento se vieron acompañadas de alteraciones a nivel de plasticidad sináptica (BDNF, VEGF y sinaptofisina) y otros parámetros alterados en pacientes de depresión mayor como son la fosforilación de GSK3β en la Ser9 o los niveles de receptor glucocorticoide (medidos mediante western blot). Además se observó mediante qrt-pcr que la microglía se encuentra activada en los ratones Nrf2 (-/-). Al administrar rofecoxib, un antiinflamatorio no esteroideo, durante 7 días el fenotipo depresivo de los ratones Nrf2 (-/-) se vio revertido. Con estos resultados podemos concluir que Nrf2 podría estar implicado en la fisiopatología de la depresión por un mecanismo relacionado con la inflamación ya que al eliminar esta proteína los ratones muestran un comportamiento depresivo acompañado de alteraciones a nivel molecular de distintos parámetros relacionados con neuroplasticidad y resistencia a glucocorticoides. O.4. Estimulacion del núcleo medial del rafe (NMR) modula el status epilepticus (se) inducido por pentilentetrazol (PTZ) en ratas jóvenes. Julián. Javela 1, Pablo Bascuñana 1, Eduardo D. Martín 2, Miguel A. Pozo 1 1. Unidad de Cartografía Cerebral, Instituto Pluridisciplinar, Universidad Complutense de Madrid; 2. Grupo de Neurofisiología y Plasticidad Sináptica, Centro Regional de Investigaciones Biomédicas, Universidad Castilla-La Mancha. En los últimos años se ha incrementado la evidencia que vincula la neurotransmisión serotonérgica con la modulación de una gran variedad de modelos experimentales de epilepsia. Si bien esta modulación se ha relacionado con la activación de receptores postsinápticos serotonérgicos tipo 5-HT 1A, los mecanismos circuitales que subyacen a este control no han sido claramente determinados. El objetivo del presente trabajo ha sido investigar los circuitos serotonérgicos implicados en la modulación de las crisis epilépticas del lóbulo temporal, en particular la vía Rafe-Hipocampo, utilizando un modelo de status epilepticus (SE) inducido por pentilentetrazol (PTZ). Ratas 3

4 Sprague Dawley macho (170±30 g) fueron anestesiadas con isoflorano (al 5% para inducción y al 2% para mantenimiento) y el cráneo trepanado para introducir un electrodo bipolar de estimulación en el Núcleo Medial del Rafe (NMR), un electrodo monopolar de estimulación en las colaterales de Schaeffer y un electrodo de registro en la capa piramidal de CA1 de hipocampo de acuerdo con las coordenadas estereotáxicas. Todos los experimentos se llevaron a cabo en animales despiertos. Para la inducción del SE se utilizó PTZ, un antagonista de receptores GABA A, aplicado intraperitonealmente a dosis repetidas de 40, 20, 10 mg/kg cada diez minutos hasta desencadenar el SE. Se registraron los cambios electrofisiológicos y conductuales y finalmente se evaluó la muerte neuronal en cortes histológicos con la tinción de Nissl. Los datos fueron analizados mediante un análisis de varianza de un factor (ANOVA) seguido de un una prueba post-hoc Dunnett. La aplicación de PTZ, según el protocolo establecido, provoca crisis tónico-clónicas (70-80 mg/ kg) que posteriormente desencadena un SE (100 mg/kg). La estimulación repetida del NMR (1 tren de 20Hz, 150 μa durante 1s), en el momento de inicio de los espasmos (estadio 2), fue capaz de disminuir significativamente tanto el número como la duración de las crisis, aumentando el intervalo de tiempo entre crisis. Igualmente, la estimulación del NMR impidió el establecimiento del SE inducido PTZ en el 100% de los animales tratados. Los estudios histológicos mostraron que los animales estimulados no presentaron muerte neuronal. Estos resultados indican La estimulación eléctrica del NMR sincronizada con el inicio de las crisis es capaz de abolir el SE inducido por PTZ en animales jóvenes y de esta manera demostrando la participación del circuito rafe-hipocampo en la modulación del SE. Financiado por SAF O.5. La adquisición de nuevas estrategias de aprendizaje espacial en el laberinto radial de ocho brazos depende de la carga genética de los individuos: efectos de la administración crónica de cocaína. Fole A. 1,2, Miguéns M. 1, Higuera-Matas A. 1, Ambrosio E. 1, Del Olmo N Departamento de Psicobiología. Facultad de Psicología. UNED; 2. Departamento de Ciencias Farmacéuticas y de la Alimentación, Facultad de Farmacia. Universidad San Pablo CEU, Boadilla del Monte, Madrid. Experimentos previos realizados en nuestro laboratorio demostraron la existencia de importantes diferencias en la plasticidad sináptica hipocampal entre las razas de ratas Lewis y Fischer344 razas tras la administración crónica de cocaína. Debido a que los mecanismos fisiológicos que subyacen a los procesos de aprendizaje y memoria parecen estar íntimamente relacionados con los implicados en la adicción a las drogas, nos planteamos conocer si las diferencias encontradas en la plasticidad sináptica en ambas razas se correlacionaban con cambios en los procesos de aprendizaje y memoria espacial. Para ello, hemos realizado experimentos conductuales en el laberinto radial de ocho brazos (RAM) con el fin de evaluar si la administración crónica de cocaína afecta a la adquisición de nuevas estrategias de aprendizaje. Se administró cocaína (15mg/kg) o salino a ratas macho y adultas de las razas Lewis (LEW) y Fischer-344 (F344) desde siete días antes de iniciar los ensayos conductuales hasta la finalización de los mismos. Se utilizó un protocolo del entrenamiento de los animales en la tarea de búsqueda y localización de refuerzos de comida que se dispusieron en cuatro de los ocho brazos del laberinto y una vez que los animales hubieron consolidado esta conducta, se cambió la localización del alimento a cuatro brazos distintos. Los animales F344 presentaron una menor capacidad para la adquisición de nuevas tareas de aprendizaje espacial que pueden relacionarse con su menor plasticidad sináptica hipocampal. Además, la administración crónica de cocaína empeoró la capacidad de los animales para la adquisición de nuevas estrategias espaciales siendo este efecto más significativo en la raza F344. Estos datos revelan que la cocaína influye en el aprendizaje espacial en función de la carga genética de los individuos. Investigación financiada por el Instituto de Salud Carlos III (Red de Trastornos Adictivos, RTA, Proyecto número RD06/001/0029), el Plan Nacional sobre Drogas (Proyecto número 2008-I-070 de ) y el Ministerio de Ciencia e Innovación (Proyectos número SAF y SAF ). O.6. Efectos a largo plazo de la administración de cocaína durante la edad adolescente sobre receptores cannabinoides cb1 y cb2 en un modelo animal de separación materna temprana. dimorfismos sexuales. A. Llorente-Berzal a, M.A. Assis b, T. Rubino c, E. Zamberletti c, E. M. Marco a, D. Parolaro c, E. Ambrosio b and M. P. Viveros a. a Departamento de Fisiología (Fisiología Animal II), Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Complutense de Madrid, Instituto de Investigación Sanitaria del Hospital Clínico San Carlos (IdISSC), Madrid; b Departamento de Psicobiología, Facultad de Psicología, UNED, Madrid; c DBSF y Centro de Neurociencia, Universidad de Insubria (Italia). La cocaína es una de las drogas ilícitas más consumidas en Europa, principalmente en edad juvenil. La exposición a situaciones de estrés en edades tempranas del desarrollo parece contribuir al desarrollo de diversas enfermedades neuropsiquiátricas, que frecuentemente aparecen en la edad adolescente. De hecho, en estudios recientes, hemos descrito importantes alteraciones conductuales, neuroendocrinas, y bioquímicas como consecuencia de la exposición a un episodio prolongado de separación materna temprana (SM, 24h el día 9 de vida postnatal, PN) en ratas. Además, se han observado importantes alteraciones a nivel del sistema cannabinoide endógeno (SCE), que continúa su desarrollo y maduración en la edad adolescente, y que juega un papel crucial en los procesos de adicción y dependencia. Por ello, en el presente estudio investigamos los efectos a largo plazo de la administración crónica de cocaína durante la edad adolescente en nuestro modelo de SM. Analizamos la expresión y funcionalidad de receptores cannabinoides cerebrales de tipo 1 (CB1), así como las variaciones en la expresión de receptores cannabinoides de tipo 2 4 Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License

5 (CB2) en la periferia, bazo y médula ósea, dado el importante papel del SCE en la respuesta inmunitaria y como consecuencia de la comorbilidad observada entre el consumo de drogas de abuso y la aparición de enfermedades infecciosas. Ratas Wistar de ambos sexos sometidas al protocolo de SM o mantenidas en condiciones estándar (control) fueron administradas con cocaína (8 mg/kg/día, i.p.) o salino durante el periodo adolescente (15 días, desde el día 28 al 42 de vida PN). En edad adulta (PN 85), se evaluó la expresión y la funcionalidad de los receptores CB1 en diversas áreas cerebrales mediante técnicas de autorradiografía con [ 3 H]-CP55,940 y [ 35 S]-GTP S γs estimulada con WIN55,212-2, respectivamente. Tanto la administración de cocaína en edad adolescente como la SM provocaron notables cambios sexo-dimórficos a nivel de los receptores CB1, principalmente en relación a la funcionalidad del mismo. Entre los resultados más interesantes cabe destacar que la cocaína produjo, exclusivamente en animales macho control, una disminución significativa en los niveles de expresión de CB1 en la corteza prefrontal, así como un aumento en la actividad del receptor en el caudado-putamen y el área tegmental ventral, no observándose dichos efectos ni en machos SM ni en hembras. Por otro lado, la expresión de receptores CB2, medidos por Western blot, se vio afectada por ambos tratamientos. Tanto en machos como en hembras, la SM aumentó significativamente los niveles de CB2 en bazo, mientras que la administración de cocaína pareció contrarrestar tal efecto. En médula ósea, la expresión de CB2 pareció disminuir como consecuencia de la administración de cocaína en edad adolescente. El consumo de cocaína entre los jóvenes es un grave problema de salud pública que puede ir acompañado de importantes complicaciones neuroinmunológicas y cuya gravedad podría depender de la exposición previa a situaciones de estrés, siendo particularmente relevantes los episodios de estrés sufridos en etapas tempranas del desarrollo. El empleo del presente modelo animal permite analizar en profundidad las consecuencias a largo plazo de estos dos fenómenos (estrés neonatal y consumo adolescente de cocaína), y apunta al SCE como posible diana en la mediación de algunos de sus efectos. Financiado por el Instituto de Salud Carlos III, Redes temáticas de Investigación Cooperativa en salud (ISCIII y FEDER): RD06/0001/1013 y RD06/0001/0029. GRUPOS UCM-BSCH (951579) y Plan Nacional sobre Drogas del Ministerio de Sanidad y Política Social (SAS/125/2009 y 2008-I-070). Sesión Oral II: Mecanismos de señalización 0.7. La mutación P86L-CALHM1, ligada a la enfermedad de Alzheimer, altera la señalización de calcio nuclear. Ana J. Moreno Ortega 1,2,3,4, Javier Egea 1,2, Elba Alonso 1,3,4, Antonio G. García 1,2,3,4, Manuela G. López 1,2, Ana Ruiz Nuño 1,3,4 y María F. Cano Abad 1,2,3,4. 1 Instituto Teófilo Hernando de I+D del Medicamento y 2 Departamento de Farmacología y Terapéutica, Universidad Autónoma de Madrid 3 Instituto de Investigaciones Sanitarias La Princesa y 4 Servicio de Farmacología Clínica, Hospital Universitario La Princesa. Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License La mutación P86L del nuevo canal de calcio (Ca 2+ ) CALHM1 (acrónimo inglés CALcium Homeostasis Modulator 1) parece estar implicada en la progresión de la EA esporádica (Lambert y col., 2010). Se ha visto que este polimorfismo (P86L-CALHM1), además de alterar la homestasia del Ca 2+ citosólico, incrementa la producción del péptido beta-amiloide (βa) (Dreses-Werringloer y col., 2008). Datos de nuestro laboratorio demuestran que P86L-CALHM1 no solo altera la homeostasia de Ca 2+ en el citosol, sino que también lo hace en la mitocondria, lo que podría originar una sobrecarga de Ca 2+ mitocondrial y muerte celular (Moreno-Ortega y col., 2010). Sin embargo poco se sabe de la homeostasia de Ca 2+ en el núcleo, ya que CALHM1 se expresa en el retículo endoplásmico (RE) (y por ende en la envuelta nuclear) y podría influir en la homeostasia del Ca 2+ en este compartimento, clave en el control de la transcripción de genes regulados por Ca 2+. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar la influencia de CALHM1 sobre la concentración de Ca 2+ nuclear ([Ca 2+ ] nu ). Para ello, cotransfectamos en células HeLa: i) un vector vacío (control), ii) el canal nativo (WT- CALHM1), iii) P86L-CALHM1, junto con ecuorina nuclear (una sonda bioluminiscente sensible a Ca 2+, dirigida genéticamente a núcleo). La expresión de CALHM1 y P86L-CALHM1 aumentó la [Ca 2+ ] nu basal y alteró la [Ca 2+ ] nu inducida por un pulso de histamina (100 μm). Estos experimentos sugieren que CALHM1 y P86L-CALHM1 están influyendo en la [Ca 2+ ] nu per se o a través de los receptores de inositol 1,4,5-trisfosfato (InsP 3 Rs). Para confirmar nuestra hipótesis, empleamos el bloqueante de los InsP 3 Rs, 2-aminoetoxidifenil borato (2-APB). Observamos que en presencia de 2-APB no hay una reducción significativa de la [Ca 2+ ] nu basal; sin embargo, se ve parcialmente reducida la [Ca 2+ ] nu mediada por pulsos de histamina. Estos resultados sugieren que CALHM1 podría actuar como una canal tipo goteo (leaky-channel) y que alteraría la [Ca 2+ ] nu con consecuencias en la transcripción de genes regulados por Ca 2+. Referencias: 1. Dreses-Werringloer, y col.., Cell. 133: Lambert y col., J Alzheimers Dis., 22: Moreno-Ortega, y col., Biochem. Biophys. Res. Commun, 391: O.8. Concentraciones nanomolares de ouabaína activan la vía intrínseca de la apoptosis en las células HeLa. Elba Alonso, 1,3 María F. Cano-Abad, 1,3 Ana J. Moreno-Ortega, 1,3 Jesús Novalbos, 1,3 Juan Milla, 1,2,3 Antonio G. García y 1,3 Ana Ruíz-Nuño. 1 Instituto Teófilo Hernando, 2 Departamento de Farmacología y Terapéutica, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid. 3 Servicio de Farmacología Clínica, Instituto de Investigaciones Sanitarias, Hospital Universitario de la Princesa, Universidad Autónoma de Madrid. Concentraciones nanomolares de ouabaína (OUB), no inhibitorias de la Na + K + ATPasa (NKA) de la membrana celular, activan diversas señales intracelulares. Nosotros hemos estudiado algunas de estas señales tras la incubación con concentracio- 5

6 nes nanomolares de OUB durante 24h en células HeLa. Tras la estimulación con histamina, hemos observado una rápida elevación del calcio citosólico ([Ca 2+ ] c ) en células cargadas con fura-2 que se reduce a la mitad tras incubar con 300 nm del digitálico. Además se produce daño y redistribución de las mitocondrias y una disminución de los niveles de ATP del 40% y un 30% de la viabilidad celular. Las caspasas 3/7 y 9 quintuplican su actividad mientras que la caspasa 8 no se ve afectada. Z-LEHD-FMK evita la activación de la caspasa 9 y disminuye a la mitad la apoptosis ouabaínica. Esto podría explicarse del siguiente modo: (i) la unión de la OUB a la NKA produce un daño mitocondrial; (ii) este daño conduce a la despolarización de la mitocondria y a una disminución del ATP; (iii) se produce la activación de la caspasa 9 seguida de la activación de las caspasas 3/7; (iiii) la caspasa 3 daña el receptor de 1, 4, 5-inositoltrifosfato del RE provocando un goteo constante de calcio hacia el citosol. Ya que hay una concentración nanomolar de OUB endógena en mamíferos, nuestros resultados podrían apuntar a un posible papel regulador de la apoptosis de los esteroides cardiotónicos en los procesos fisiológicos. O.9. La liberación de óxido nítrico neuronal disminuye en arteria mesentérica de hembras adultas en periodo de lactancia. Esther Sastre, Javier Blanco-Rivero, Miriam Granado, Gloria Balfagón. Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de Madrid. Ha sido sugerido que la lactancia puede estar contraindicada en algunas mujeres con presión arterial límite, o franca hipertensión, puesto que aumenta la resistencia vascular. El tono vascular de la arteria mesentérica está regulado, entre otros factores, por los distintos tipos de inervación, entre otras, adrenérgica y nitrérgica. Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue analizar si la lactancia afecta la respuesta vasomotora inducida por estimulación eléctrica (EE) en arteria mesentérica de rata, así como la participación de las inervaciones adrenérgica, y nitrérgica en estas posibles modificaciones. Se utilizaron ratas hembra adultas Sprague-Dawley divididas en dos grupos experimentales: 1) en fase estro, y 2) madres tras un periodo de lactancia de 21 días. Se analizaron las variaciones de la respuesta vasoconstrictora a EE (200 ma, 0.3 ms, 1 16 Hz, 30 s) en presencia/ausencia de 1 mmol/l del antagonista de los receptores a-adrenérgicos fentolamina, o de 0.1 mmol/l del inhibidor inespecífico de la óxido nítrico sintasa (NOS) L-NAME. Se analizó la respuesta vasoconstrictora a noradrenalina (NA) y vasodilatadora al donante de óxido nítrico (NO) DEA-NO. Asimismo, se midió la liberación de NA y de NO, y la expresión proteica de la NOS neuronal fosforilada (P-nNOS). La respuesta contráctil inducida por EE fue significativamente mayor en madres lactantes. La fentolamina redujo la respuesta a EE en igual medida en ambos grupos. Tanto la liberación cómo la respuesta vasoconstrictora a NA fueron similares en ambos grupos. L-NAME incrementó la contracción inducida por EE en ambos grupos, pero en mayor medida en hembras en estro. La respuesta a DEA-NO fue similar en ambos grupos experimentales. Tanto la liberación de NO como la expresión de P-nNOS se vieron disminuídas en arterias de madres lactantes. El incremento en la respuesta vasoconstrictora inducida por EE en madres lactantes ha podido ser debido a una disminución en la liberación deno de origen neuronal, lo cual puede contribuir a un aumento en la resistencia vascular periférica. Subvencionado por el Ministerio de Ciencia e Innovación (SAF ) O.10. Función de la mitocondria en la regulación de la homeostasia intracelular del calcio y su papel en la secreción de catecolaminas en las células cromafines bovinas. Juan-Fernando Padín (1,2) ; Afonso Caricati-Neto (4), Edilson-Dantas Silva-Junior (4), Antonio M. G. de Diego (1,2), Aron Jurkiewicz (4), Antonio G. García (1,2,3). 1 Instituto Teófilo Hernando (ITH); 2 Departamento de Farmacología y Terapéutica; 3 Servicio de Farmacología Clínica, Hospital Universitario de la Princesa. Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid. 4 Departamento de Farmacología, Universidad Federal de São Paulo (Brasil). Estudios previos realizados en nuestro laboratorio con células cromafines bovinas (CCBs) han demostrado que la liberación de catecolaminas inducida por acetilcolina (ACh), altas concentraciones de K + o con cafeína, se potencia cuando se bloquea con protonóforos la captación del Ca 2+ mitocondrial (Montero et al, Nature Cell Biology 2000; Cuchillo-Ibáñéz et al., J. Physiol., 2004). Sin embargo, todavía se desconoce si los bloqueantes más selectivos del uniportador mitocondrial (MUP) como el RU360 (RU), o los inhibidores del intercambiador de Na + /Ca 2+ (MNCx) como el CGP37157 (CGP), afectan a estas respuestas secretoras. En el presente estudio mostramos los efectos de los compuestos: RU, CGP, el protonóforo FCCP, y la combinación de oligomicina y rotenona (O/R) (para bloquear la respiración mitocondrial), sobre la respuesta secretora, y también sobre los cambios en la concentración de Ca 2+ citosólico ([Ca 2+ ] c ) inducidos por ACh, en las CCBs. Los resultados que hemos obtenido son que RU aumentó tanto el pico de secreción (PS) (95%) como el tiempo de la constante de aclaramiento de la [Ca 2+ ] c (t i Ca) (49%). En contraste, el CGP redujo el PS (19%) pero aumentó t i Ca (64%). La combinación de RU/CGP aumentó ambos, el PS (71%) y t i Ca 2+ (47%). Por otra parte, el FCCP (110% y 248%) y O/R (148% and 58%) incrementaron tanto el PS como la t i Ca, respectivamente. Por lo tanto, parece que todas las manipulaciones farmacológicas de los movimientos de calcio mitocondrial producen un incremento en la t i Ca, mostrando un enlentecimiento en el aclaramiento del calcio cuando se altera la función mitocondrial. Como consecuencia de esta mayor disponibilidad de Ca 2+ en el citosol, el transporte vesicular, el acoplamiento de las vesículas en la membrana, y la exocitosis también aumentan. Estos resultados confirman y amplían el conocimiento de la gran importancia que tiene la mitocondria en la fina regulación de la homeostasia celular del calcio, y su función en la respuesta secretora de catecolaminas, tras la activación por el neurotransmisor endógeno ACh. 6 Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License

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