Diagnóstico Genético Preimplantacional Indicaciones Actuales. Dr. Joaquín Moreno Valencia Febrero 2009

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Salvador Álvarez Ferreyra
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1 Diagnóstico Genético Preimplantacional Indicaciones Actuales Dr. Joaquín Moreno Valencia Febrero 2009

2 DGP El diagnóstico Genético Preimplantacional(DGP) se presenta como una forma muy precoz de diagnóstico genético que apoyándose en las TRA hacen posible el estudio genético en los embriones antes de ser transferidos al útero materno El DGP se ha desarrollado gracias a los avances producidos en dos campos : -las técnicas de Reproducción Asistida en Embriología (FIV) -las técnicas de Biología Molecular FISH y PCR. Permite la detección de alteraciones cromosómicas y de enfermedades genéticas hereditarias en los embriones obtenidos por FIV. Se benefician las parejas con riesgo de transmitir alguna alteración o enfermedad genética a su descendencia.

técnicas de Reproducción Asistida en Embriología (FIV) -las técnicas de Biología Molecular FISH y PCR.

3 Procedimiento DGP Fase Previa: Consejo genético reproductivo / estudios informatividad. Obtención de los embriones ( FIV ). Biópsia embrionaria y tratamiento blastómeras. Análisis genético diagnóstico ( estudio genético de la célula ). Informe. Transferencia de los embriones sanos.

Biópsia embrionaria y tratamiento blastómeras.

4 Consejo Genético Reproductivo El Consejo Genético es un proceso comunicativo mediante el cual se intentan resolver o aclarar los distintos problemas relacionados con el riesgo de padecer o transmitir una alteración genética en una familia. Desde el punto de vista reproductivo lo más importante es conocer los riesgos reales de transmisión de las enfermedades a la descendencia. Durante la consulta se estudia detenidamente el caso y se plantean las opciones reproductivas más adecuadas de forma personalizada.

Desde el punto de vista reproductivo lo más importante es conocer los riesgos reales de transmisión de las enfermedades a la

5 Estudio de informatividad Para las enfermedades monogenéticases necesario realizar un estudio de informatividadfamiliarcon el fin de poder conocer cuales son los polimorfismos asociados a la enfermedad. Se realiza en sangre periférica de ambos progenitores y familiares. Así, comparando miembros sanos y afectos poder establecer cual es el haplotipo de riesgo en esa familia. Sirve también para confirmar que nuestras técnicas de DGP se pueden aplicar, y, en casos en los que el protocolo no esté diseñado, realizar las pruebas necesarias para llevarlo a cabo.

Así, comparando miembros sanos y afectos poder establecer cual es el haplotipo de riesgo en esa familia.

6 Biópsiaembrionaria La biopsia embrionaria se realiza en un microscopio invertido dotado de un sistema de micromanipulación adecuado. Con una pipeta Holding se sujeta al embrión y luego se realiza un pequeño agujero en la ZP con ácido tyrodeso láser procediéndose inmediatamente al aspirado de 1 ó 2 blastómerassobre las que se realizarán los análisis adecuados. La eliminación de estas células del embrión no influye en su viabilidad y capacidad de supervivencia, ya que las células restantes son todavía totipotentesy capaces de formar un individuo completo y perfectamente normal.

al aspirado de 1 ó 2 blastómerassobre las que se realizarán los análisis adecuados.

7 Tratamiento blastómeras Detección de Anomalías cromosómicas mediante FISH: Fijación Blastómeras. -Fijar el núcleo de cada una de las células -Deben conservar su integridad y morfología -La calidad de las extensiones es importantísimo para la buena hibridación sondas -Método fijación: Tarkowski. Diagnóstico genético de enfermedades monogenéticas mediante PCR: Lisis celular. Hay que garantizar dos aspectos fundamentales: -La ausencia de contaminación con material biológico externo -La lisis completa de la célula que se va a analizar.

importantísimo para la buena hibridación sondas -Método fijación: Tarkowski.

8 Estudios Genéticos A) Estudio de Aneuploidias(anomalía numérica o estructural cromosomas. Para ello se emplea la técnica de la FISH (Hibridación in situ Fluorescente) Esta técnica permite teñir el área centroméricao regiones específicas de diferentes cromosomas con diversos fluorocromoscoloreados que luego se visualizan bajo un microscopio de fluorescencia. Análisis disponibles: Determinaciones del sexo X,Y,18, para enfermedades ligadas al sexo. Aneuploidias: 1) test de 5 cromosomas X,Y, 13,18,21, para pacientes de edad avanzada 2) test de 7 cromosomas X,Y,13,16,18,21,22, fallos de implantación. 3) test de 9 cromosomas X,Y,13,15,16,17,18,21,22, abortos de repetición. TranslocacionesRobertsonianas. Translocacionesrecíprocas Inversiones y otras reorganizaciones cromosómicas.

fluorocromoscoloreados que luego se visualizan bajo un microscopio de fluorescencia. Análisis disponibles: Determinaciones del sexo X,Y,18, para enfermedades ligadas al sexo.

10 Estudios Genéticos B) Estudio de Enfermedades Monogenéticas si la enfermedad que queremos localizar es debida a una o varias mutaciones y queremos saber si el embrión es portador de algunas de ellas se emplea la técnica de la PCR (Reacción en cadena de la Polimerasa) que nos va a permitir amplificar el ADN del embrión y detectar en su genoma la presencia o no de la mutación génica que estamos investigando. Problemas: - ADO: amplificación selectiva de uno solo de los alelos en embriones heterocigóticos. - Contaminación con ADN exógeno. - Reducida o limitada eficacia de la amplificación. La técnica denominada MDA(Multipledisplacementamplification) permite aumentar la cantidad de ADN disponible para realizar el diagnóstico.

la mutación génica que estamos investigando. Problemas: - ADO: amplificación selectiva de uno solo de los alelos en embriones heterocigóticos. - Contaminación con ADN exógeno.

11 Enfermedades monogenéticas Las analizadas con mayor frecuencia en ciclos de DGP distribuidas según su tipo de herencia. AUTOS. RECESIVAS: Fibrosis quística, Atrofia muscular espinal, Talasemias. AUTOS. DOMINANTES: Distrofia miotónica, Huntington, Charcot-Marie-Tooth. LIGADAS AL X: Distrofia Muscular Duchenne, Síndrome de X frágil, Hemofilias.

RECESIVAS: Fibrosis quística, Atrofia muscular espinal, Talasemias. AUTOS.

12 Marco Legal DGP Ley 14/2006 sobre Técnicas de Reproducción Humana Asistida. Articulo 12. 1) La posibilidad de llevar a cabo con autorización de la autoridad autonómica correspondiente, el DGP y la selección embrionaria en casos de enfermedades monogénicasque reúnan de manera simultánea las condiciones de ser graves, de aparición precoz y no susceptibles de tratamiento curativo posnatal con arreglo a los conocimientos científicos actuales. 2) En las mismas condiciones de autorización autonómica, la práctica del DGP para la detección de otras alteraciones que puedan comprometer la viabilidad del preembrión. 3) Para cualquier otra finalidad no comprendida en el(los) apartado(s) anterior(es), o cuando se pretendan practicar en combinación con la determinación de antígenos de histocompatibilidadde los preembrionesin vitro con fines terapéuticos para terceros, requerirá de la autorización expresa, caso a caso, de la autoridad sanitaria (autonómica) correspondiente, previo informe favorable de la Comisión Nacional de RHA, que deberá evaluar las características clínicas, terapéuticas y sociales de cada caso.

las condiciones de ser graves, de aparición precoz y no susceptibles de tratamiento curativo posnatal con arreglo a los conocimientos científicos actuales.

13 Indicaciones Actuales Ciclo FIV-DGP Marco legal DGP es la Ley 14/2006 sobre Técnicas de Reproducción Humana Asistida 1- Alteraciones genéticas maternas / paternas transmisibles - Alteraciones cromosómicas estructurales (translocaciones recíprocas / robertsonianas, inversiones, delecciones) - Enfermedades monogenéticas cuya mutación es conocida 2- Enfermedades ligadas a alteraciones de los cromosomas sexuales. Selección de sexo. 3- Alteraciones numéricas de los cromosomas ( Screenig Aneuploidias) - Abortos de repetición - Fallos repetidos de implantación - Edad materna avanzada 4- Otras - Tipaje HLA (antígenos de histocompatibilidad). Curar hermanos afectos e. genéticas. - Alteraciones cromosómicas en los espermatozoides.

ligadas a alteraciones de los cromosomas sexuales. Selección de sexo.

14 GRUPO DE INTERES DGP DGP: Experiencia recogida en España en los últimos 13 años (2007) Datos recogidos entre Abril 1993 y Septiembre 2005

16 GRUPO DE INTERES DGP Conclusiones: 1.-El DGP aplicado a la detección de enfermedades monogénicas resulta una opción reproductiva válida para las parejas con alteraciones genéticas conocidas. Permite el diagnóstico en el 90% de los embriones biopsiados y evita la transmisión de estas enfermedades a la descendencia. 2.-El DGP en parejas portadoras de alteraciones cromosómicas estructurales que suelen cursar con problemas reproductivos (fallos de implantación y abortos de repetición) permite seleccionar embriones normales y/o equilibrados para los cromosomas implicados, ofreciendo buenas tasas de gestación, y tasas de aborto similares a las observadas en la población general. 3.-El DGP para screening de aneuploidías es una herramienta eficaz para aumentar la tasa de embarazo en pacientes susceptibles de riesgo genético y para mejorar los programas de FIV

-El DGP en parejas portadoras de alteraciones cromosómicas estructurales que suelen cursar con problemas reproductivos (fallos de implantación y abortos de repetición) permite seleccionar embriones

18 Muchas gracias por su atención

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