Reseña de los Métodos Diagnósticos para Mycobacterium tuberculosis. M.C. Jesús Angel Araujo Glez. U.A.C.J. Abril-2006

Tamaño: px

Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "Reseña de los Métodos Diagnósticos para Mycobacterium tuberculosis. M.C. Jesús Angel Araujo Glez. U.A.C.J. Abril-2006"

Virginia Carrasco Nieto
hace 7 años
Vistas:

1 Reseña de los Métodos Diagnósticos para Mycobacterium tuberculosis. M.C. Jesús Angel Araujo Glez. U.A.C.J. Abril-2006

2 I. TUBERCULOSIS La tuberculosis es una enfermedad infecto-contagiosa que representa un problema importante de salud pública y actualmente, se considera como una emergencia a nivel mundial. La tuberculosis No es aún una enfermedad erradicada. Es una infección que a nivel comunitario es controlable, prevenible y curable. Sin embargo, es un grave problema epidemiológico, terapéutico y de Dx clínico y microbiológico.

La tuberculosis No es aún una enfermedad erradicada.

3 DESCRIPCIÓN El reservorio principal es el hombre enfermo. Se transmite por vía aérea; al toser o expectorar mediante aerosoles que al llegar al pulmón pueden producir la infección. La tuberculosis es una infección crónica cuyo agente etiológico es el Mycobacterium tuberculosis (1882) y, en raras ocasiones por otros agentes microbianos como: Mycobacterium bovis Mycobacterium africanum Mycobacterium microti Bacilo de Calmette y Guérin 2,400 años a.c. La prevención y control de la tuberculosis intenta evitar la infección. Si ésta se produce, se debe evitar su transmisión.

La tuberculosis es una infección crónica cuyo agente etiológico es el Mycobacterium tuberculosis (1882) y, en raras ocasiones por otros agentes

4 Bacilo de Koch. Actinomicetales, Mycobacteriaceae, Mycobacterium tuberculosis. Bacilo aerobio,, de x µm No movil,, sin capsula No forma esporas Parasito intracelular (monocitos/macrófagos) BAAR (Ziehl( Ziehl-Neelsen), lento crecimiento. Lipo-Arabino-galactano Micolato y peptidoglicano. 6,6-dimicolato de trehalosa.

6 x 2-102 µm No movil,, sin capsula No forma esporas Parasito intracelular

5 Diagnóstico stico. Clínico nico. Microbiológico gico. Radiológico gico. Biología Molecular. Inmunológico gico..

6 Dx Clínico nico. Dx Radiológico gico. Perdida de peso. Tos productiva. Fiebre.. Método auxiliar, Radio-opacidad opacidad apical.

7 Inmunológicos. gicos.(ac Ac-AgLAM) PPD (Mantoux) Diferenciar infectados/no infectados. Reacción hipersensibilidad retardada. (previo, natural, Especificidad 95-99% 99%, natural, adquirido) QuantiFERON TB Detecta IFN-γ, mezcla mezcla de péptidosptidos sintéticos ticos (ESAT-6) y (CFP-10). Infección latente-tb. evaluación? Puede usarse en lugar de PPD. Resultado en 24 hr. Antígenos más específicos ficos. Confirmar-excluir Tb./infecci infección latente, requiere la combinación de hallasgos epidemiológicos,rx gicos,rx, clínicos y Dx entre otros hr.

ticos (ESAT-6) y (CFP-10). Infección latente-tb. evaluación? Puede usarse en lugar de PPD. Resultado en 24 hr.

8 Microbiológico gico. Baciloscopía. Técnica basica. Bajo costo, rápida. Sensibilidad (10 4, 10 3 bacilos /ml)

9 Microbiológico gico. Cultivo. ( /ml) Sensibilidad 80 85% Especificidad 98% Carac. Fenotípicas picas: Colonia rugosa, no pigmentada, Niacina+, reduce NO 2, Catalasa+, etc. Cromatografía.

10 Microbiológico gico. BACTEC 460, 9000 Método radiométrico 2-3 semanas. Sondas de DNA (AccuProbe test). MIGIT Sistema para cultivo de micobacterias de detección rápida. (sensor de fluorescencia detecta oxígeno geno)

11 Biología Molecular. Detección de ácidos nucléicos específicos ficos. DNA/RNA DNA Replicación (DNA Polimerasa) Dogma central. Retrotranscripción (Transcriptasa Reversa) Transcripción (RNA Polimerasa) RNA Traducción

12 Diagnóstico Molecular. Detección secuencias de DNA/RNA Diagnóstico stico. Sondas DNA (Especificidad) DNA (oligonucleótido marcado) Ensayos: Acido Nucléico Blanco 1.- Id. en cultivo 2.- Id. directa en especímen 3.- Amplificación (sensibilidad). DNA-Sonda Hibridación Detección

13 Diagnóstico Molecular. Amplificación: 1. Preparación de muestra (DNA/RNA). DNA Blanco 2. Amplificación. PCR, LCR, TMA. 3. Detección. Sistema Roche PCR biotina-avidina/peroxidasa. Sistema Abbott LCR reacción Ag-Ac. Sistema GEN-PROBE-TMA usa protección por hibridación (HPA). Electroforésis. R E P E T I C I O N D E L C I C L O. Denaturalización Hibridización de Primers Extensión por DNA Polimerasa

Sistema Abbott LCR reacción Ag-Ac. Sistema GEN-PROBE-TMA usa protección por hibridación (HPA).

14 Métodos de tipificación molecular de M. tuberculosis complex Junio de 1998 por Cole y cols.

15 Métodos de tipificación molecular de M. tuberculosis complex MÉTODO DE RFLP-IS6110 1º Cultivo de M tb.(~3-6 semanas) 2º Extracción y purificación del DNA 3º Digestión con pvuii y electroforesis 4º Transferencia del DNA (Southern Blot) 5º Hibridación con sonda complementaria a IS6110 y autoradiografia(~1 semana)

(~3-6 semanas) 2º Extracción y purificación del DNA 3º Digestión con pvuii y

16 Discrepancias. Microscopía Cultivo BM - + TB + - Mycobacteria atipica - + TB Tx, paucibacilar, Falso TB, contaminación Evaluar utilidad real del Método en un contexto Clínico adecuado.

17 Métodos de B.M. vs tradicionales. Ventajas Sensibilidad que microscopía. Rapidez que cultivo. Confirmación M.tuberculosis Agilizar la Id. en cultivo. Permite reconocer cepas MDR. Desventajas Rapidez? (Lab.) Costo - Beneficio Reproducibilidad Interpretación.

Confirmación M.tuberculosis Agilizar la Id. en cultivo.

18 Detección TB (Laminillas). Buffer lisis (2%SDS, 5% Triton X-100 (Sigma, St. Louis, Mo.) Tris-EDTA buffer (ph 8.0) Mezcla para PCR (Buffer, dntps, Taq, Mg +2, 5-GAGTCTCCGGACTCACCGG-3) Amplicón 1200 pb

19 U.A.C.J.

Documentos relacionados

El Laboratorio en el diagnóstico de las tuberculosis y Micobacterias atípicas: Herramientas diagnósticas disponibles en Chile

El Laboratorio en el diagnóstico de las tuberculosis y Micobacterias atípicas: Herramientas diagnósticas disponibles en Chile Dra. Patricia González A. Médico Microbiólogo Laboratorio Clínica Alemana Facultad